眼镜蛇毒细胞毒素对S180荷瘤小鼠抗肿瘤作用的研究

目的:探讨眼镜蛇毒细胞毒素(Cytotoxin,CTX)对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法:采用昆明小鼠S180实体瘤模型,通过腹腔注射CTX,观察CTX对S180小鼠的肿瘤重量、亚显微结构、凋亡率和pro-caspase-3表达量的变化。结果:CTX对S180肿瘤细胞的生长表现出明显抑制作用。0.2、0.4、0.8mg/kgCTX剂量组的抑瘤率分别为23.8%、54.1%、63.2%;透射电子显微镜和流式细胞仪检测显示S180肿瘤细胞发生凋亡;免疫印迹结果显示pro-caspase-3蛋白表达降低,提示caspase-3被激活。结论:CTX通过诱导细胞凋亡来抑制S180肿瘤细胞的生长。     

眼镜蛇毒细胞毒素在体外对人癌细胞的毒性作用（MTT法）

测定眼镜蛇毒细胞毒素对人癌细胞株的细胞抑制作用，以期能简便准确地反映其抗癌活性。应用溴化二苯四偶氮盐法测定在ＣＶ－ＣＴＸ作用下体外培养的人胃癌细胞株和人肝癌细胞株的存活情况和其量效关系。结果（１）ＳＭＣ，ＳＧＣ－７９－１的活细胞数与其分解ＭＴＴ的量成正线性关系。（２）ＣＶ－ＣＴＸ对ＳＭＣ，ＳＧＣ－７９０１癌细胞株的细胞抑制作用呈良好的量效关系，ＩＣ５０分别为２．４５Ｔ １．２４ｇ／ｍｌ。结论（１）     

中华眼镜蛇毒膜毒素诱导人膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究中华眼镜蛇毒膜毒素12(MT-12诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用.方法 不同浓度的MT作用于体外培养的BIU-87和E-J细胞,分别在12、24和36h用HE染色、透射电镜观察细胞的形态变化,Annexin'V-FITC/PI双染流式细胞术定量榆测凋亡率.结果 倒置显微镜和透射电镜下观察到凋亡细胞的核固缩、染色体边集、核碎裂和凋亡小体等形态学变化.MT-12浓度分别为1、2和3μg/mL时,双染法流式细胞术均检测到2株细胞凋亡率,实验组凋亡率和对照组比较有统计学意义(P<0.05).MT-12剂量和作用时间相同时,BIU-87细胞的凋亡率明显高于E-J细胞(P<0.01.结论 MT-12能诱导体外培养的BIU-87和E-J细胞凋亡,2株细胞凋亡率存在差异,可能与肿瘤细胞的生物学行为、MT-12诱导2株细胞凋亡机制的不同有关.     

活性氧激活线粒体凋亡通路是亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的重要机制

目的 探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,活性氧引起的线粒体膜电位丧失及凋亡作用的相关机制。方法 用活性氧荧光探针DCFH-DA探测经亚硒酸钠诱导的NB4细胞内活性氧的含量。流式细胞术检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化。Westem blot检测胞浆中细胞色素C含量的变化及细胞总蛋白中Bcl-xl、Bax和Bid的含量变化及切割行为。同时应用活性氧清除剂MnTmPy及活性氧激活剂BSO预处理细胞,观察Bid及凋亡的变化。结果 活性氧清除剂MnTmPy可有效抑制亚硒酸钠诱导的NIM细胞凋亡、线粒体膜电位丧失及Bid的切割;而BSO可促进线粒体膜电位丧失。结论 亚硒酸钠诱导NIM细胞凋亡的可能机制是通过刺激细胞产生活性氧,一方面下调抗凋亡蛋白Bcl-xl,另一方面激活线粒体打孔蛋白Bax和Bid,损伤线粒体使膜电位降低,促使线粒体释放细胞色素C。     

中华眼镜蛇毒心脏毒素—13对猪离体冠脉的作用

探讨中华眼镜蛇毒中分离纯化获得的心脏毒素－１３对离体冠脉血管平滑肌的作用和机制。用离子交换和凝胶过滤法从中华眼镜蛇毒中分离纯化出心脏毒素。以不同浓度ＣＴＸ－１３分别作用于猪冠脉环，观察记录其所诱发的血管环收缩。普萘洛尔，哌唑嗪和尼群地平分别与冠脉环预作用５ｍｉｎ，再分别给予不同浓度的ＣＴＸ－３，观察记录其收缩强度的变化。     

三氧化二砷诱导血管平滑肌细胞凋亡机制的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的机制,为其作为药物涂层支架的涂层药物提供理论依据.方法 用改良的植块贴壁法体外培养SD大鼠VSMCs,应用MTT法、酶标仪法、流式细胞术等方法观察不同浓度As2O3诱导VSMCs凋亡时裂解液中线粒体跨膜电位(△Ψm) 及半胱天冬蛋白酶-3(caspse-3)活性的变化.结果 适宜浓度As2O3诱导VSMCs凋亡时△Ψm明显下降,与对照组相比P<0.05;裂解液中caspse-3酶活性明显增高,与对照组相比,P<0 05.结论 适宜浓度的As2O3可明显促进VSMCs凋亡,其可能机制是降低△Ψm和激活caspse-3酶.     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。     

小檗胺诱导白血病细胞株NB4细胞凋亡及其机制的研究

目的：探讨小檗胺对白血病细胞系NB4生长的影响及其机制。方法：体外培养人白血病细胞株NB4细胞，经不同浓度小檗胺处理不同时间后，MTT法检测药物对NB4细胞的抑制作用；细胞形态学观察和DNA琼脂糖电泳检测细胞凋亡；流式细胞仪检测DNA含量及细胞周期；巢式PCR及RT-PCR检测PML／RARα融合基因及Survivin基因表达及流式细胞仪检测Caspase3阳性表达率。结果：经不同浓度小檗胺处理不同时间后，NB4细胞生长出现明显的抑制，并呈现明显的时间剂量依赖性，48h IC50为3．860μg／ml；细胞形态学观察可见细胞凋亡现象，DNA琼脂糖电泳显示典型的凋亡梯形图；流式细胞仪检测发现细胞凋亡率明显增加，经48h作用后，凋亡率从2．83％增至12μg／ml时的58．44％；虽未发现药物作用后PML／RARα基因表达量的改变，但检测到NB4细胞经药物作用后Survivin基因表达量的减少和Caspase3表达的增加，Caspase3阳性率从对照组的2．06％增至12μg／ml时的70．89％。经相关性分析，随着细胞Survivin表达水平的下降和Caspase3表达水平的增高，NB4细胞凋亡率相应地增高。结论：小檗胺对NB4细胞有增殖抑制作用，诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用的重要机制之一，但不是通过作用于NB4细胞特异性融合基因PML／RARα发挥作用的，其抗凋亡的可能分子机制之一是抑制Survivin基因的表达和增加Caspase3的表达。     

中华眼镜蛇毒纤溶组份的纤溶活性及其机制研究

目的：研究中华眼镜蛇（NajaNajaatra）蛇毒中单一纤溶活性组份对人纤维蛋白和纤维蛋白原的降解作用及其机制。方法：使用剩余可凝纤维蛋白原测定法和酶联纤维蛋白原溶解试验研究该纤溶活性组份对人纤维蛋白原的降解作用；使用纤维蛋白平板法和酶联纤维蛋白溶解试验研究它对人纤维蛋白的降解作用；对它的纤溶机制研究使用的是纤维蛋白溶解酶原激活物活性测定法。结果：该活性组分对人纤维蛋白和纤维蛋白原有直接的降解作用。其活性大约是粗毒的10倍。该活性组份仅降解纤维蛋白原的Aa链，对它的印链和了链没有作用。该组分对人纤维蛋白溶解酶原没有激活作用。结论：从中华眼镜蛇毒中提取的单一纤溶活性组分是一种新的能够直接降解人纤维蛋白和纤维蛋白原的酶类。     

眼镜蛇毒组份M对血液流变学的影响

静脉注射眼镜蛇毒M组份（0．07mg／kg和0．1mg／kg）可使家兔和狗的全血粘度和血浆粘度降低，对家兔红细胞压积和红细胞电泳时间无影响。M组份在体内外均能抑制ADP和花生四烯酸所诱导的血小板聚集。     

眼镜蛇毒神经生长因子对成年猫坐骨神经损伤后的作用

目的　探讨从眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子 (nerve growth factor,NGF)对成年猫坐骨神经损伤后的影响。方法　制成成年猫坐骨神经损伤模型 ,损伤局部注射蛇毒 NGF 2μg/ (kg· d) ,分别治疗 10 d和 30d,并与对照组 (损伤坐骨神经 ,不给药物 )比较。结果　术后 10 d,对照组术侧远端神经纤维数量比治疗组明显减少(P<0 .0 1) ,治疗组术侧足底刺激出现早 ,肢体活动恢复快。术后 30 d,治疗组术侧远端神经纤维大量再生 ,再生神经纤维数量已明显超过对照组和术后 10 d组水平 (P<0 .0 1) ,但结构紊乱 ,轴突和郎氏结消失。术侧肢体在连续注射 NGF 16 d左右出现足底刺激反应消失 ,肢体瘫痪等改变。结论　眼镜蛇毒 NGF在神经损伤早期应用能减轻神经纤维发生的溃变 ,促进受损神经的再生与功能恢复 ;而损伤局部长时间注射蛇毒 NGF则会导致神经纤维增生过度 ,丧失传导功能     

眼镜蛇毒M组份对血小板聚集功能的研究

本文用眼镜蛇毒提取的 M 组份,对58例健康人的血小板聚集功能进行研究,发现其能抑制血小板对 ADP 的诱聚,初步认为其作用与其所含之纤溶酶与磷脂酶 A_2有关。     

徐长卿提取液对眼镜蛇蛇毒引起的炎症及毒性的影响

目的　探讨徐长卿提取液对眼镜蛇毒的解毒作用。　方法　 (1)采用眼镜蛇蛇毒对大鼠足跖肿胀的致炎模型 ,观察徐长卿提取液灌胃给药后 ,对大鼠足跖肿胀度的影响 ;(2 )观察徐长卿提取液对大鼠腹股沟植入含眼镜蛇毒棉球形成的肉芽肿的影响 ;(3)观察徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒中毒小鼠的解毒作用。　结果　以 5 ,10 ,15 g/kg徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒引起的大鼠足跖肿胀及棉球肉芽肿均有显著的抑制作用。眼镜蛇毒所致的大鼠足跖肿胀的抑制率用药后 1h分别是 2 5 .1% ,2 9.7% ,36 .6 % ,用药后 3h分别是 2 8.9% ,37.3% ,4 0 .7% ;徐长卿提取液灌胃(1/d× 7)对腹股沟棉球肉芽肿的抑制率分别为 2 8.9% ,39.8% ,2 9.6 % ;徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒中毒小鼠有明显的减毒作用 (P<0 .0 5 )。　结论　徐长卿对眼镜蛇毒引起的炎症及毒性有明显的对抗作用。     

眼镜蛇毒磷脂酶A_2对兔血小板功能和血液凝固的影响

眼镜蛇毒磷脂酶A2在体内外均对ADP、花生四烯酸，钙离子载体A23187、血小板激活因子所诱导的兔血小板聚集有显著的抑制作用，并能明显延长血液凝固时间，这些作用均呈剂量一效应关系。     

眼镜蛇毒对成年大鼠脊神经节BDNF和c-jun表达的影响

目的:探讨眼镜蛇毒对成年大鼠脊神经节脑源性神经营养因子(BDNF)和c-jun表达的影响。方法:大鼠24只随机分为正常对照组、生理盐水组和眼镜蛇毒组,每组8只。用免疫组织化学的方法,观察在各组大鼠脊神经节BDNF和c-jun的表达。结果:大鼠脊神经节BDNF和c-jun眼镜蛇毒组细胞平均灰度值低于正常对照组和生理盐水组(P<0.01),且阳性神经元眼镜蛇毒组多于正常对照组和生理盐水组(P<0.01)。结论:眼镜蛇毒能上调脊神经节BDNF和c-jun的表达,这种表达增加可能与脊神经节损伤的代偿性修复有关。     

淫羊藿苷对NB4白血病细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:选取处于对数生长期的 NB4细胞,随机分为空白对照组和不同浓度(4、8、16、32和64 μmol·L^-1)ICA组,采用MTT法检测作用不同时间(24、48和72h)后各组 NB4细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞24h时细胞周期进程及48h时凋亡情况,采用Western blotting法检测各组NB4细胞48h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果:细胞培养不同时间(24、48和72h)后,各ICA组细胞增殖抑制率高于空白对照组(P<0.05),随ICA浓度增加和作用时间延长,细胞增殖抑制率升高(P<0.05)。各浓度ICA(4、8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞48 h后细胞凋亡率分别为(6.52±4.12)%、(10.07±2.36)%、(15.41±3.64)%、(25.18±1.24)%和(29.41±1.43)%,与空白对照组[(2.39±1.87)%]比较差异均有统计学意义(P< 0.05)。各浓度ICA(8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞24 h后 S期NB4细胞百分率降低,G₁期细胞百分率升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting 检测,与空白对照组比较,各浓度ICA组NB4细胞Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:ICA通过抑制Bcl-2蛋白表达水平和上调Bax蛋白表达水平诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株凋亡。     

中华眼镜蛇毒组分H对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关凋亡基因表达的影响

目的 观察中华眼镜蛇毒组分H预防性给药对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关凋亡基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法 30只SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组、组分H组各10只。采用原位末端标记（TUNEL）法标记凋亡心肌细胞,免疫组化法测缺血再灌注心肌细胞Bcl-2及Bax的表达。结果 心肌TUNEL阳性指数组分H组为（26．2±3．5）％,缺血再灌注组为（34．6±5．3）％,对照组为（3．4±1．8）％,3组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,尤以缺血再灌注组更明显。缺血再灌注组Bcl-2表达降低（0．113±0．02）,与对照组（0．146±0．05）比较差异有统计学意义（P〈0．01）;组分H组Bcl-2表达（0．128±0．03）与缺血再灌注组比较显著提高（P〈0．01）,但仍低于对照组（P〈0．01）。缺血再灌注组Bax表达升高（0．105±0．03）,与对照组（0．070±0．01）比较差异有统计学意义（P〈0．01）;组分H组Bax表达（0．084±0．02）虽比缺血再灌注组降低（P〈0．01）,但仍高于对照组（P〈0．01）。结论 中华眼镜蛇毒组分H有显著抗缺血再灌注心肌细胞凋亡作用,调控心肌细胞凋亡基因Bcl-2及Bax蛋白表达可能是其重要机制之一。