HPLC法测定蒜酶催化蒜氨酸生成大蒜辣素的配比及稳定性研究

目的：研究蒜氨酸与蒜酶的最适配比及体外大蒜辣素稳定性，为新药设计提供依据。方法：蒜酶催化裂解蒜氨酸产生大蒜辣素和丙酮酸。采用HPLC方法考察5min～13h底物蒜氨酸、裂解产物大蒜辣素和丙酮酸的含量与变化。结果：蒜氨酸与蒜酶配比为2：1时，15min蒜氨酸转化为大蒜辣素的转化率为92.8％。25min～13h内水溶液中大蒜辣素含量基本稳定。结论：蒜氨酸 蒜酶水溶制剂中大蒜辣素在体外13h可起稳定作用。     

鲜蒜杀酶方法的比较

大蒜为百合科(Liliaceae)葱属植物蒜(Allium Sativum L.)的地下鳞茎。大蒜是历史悠久的药食两用植物。蒜氨酸为鲜蒜的原始功效成分，在蒜酶的作用下产生大蒜辣素、丙酮酸和氨。本文通过测定杀酶后蒜浆中蒜氨酸的含量来比较水煮、甲醇、微波3种杀酶方法的杀酶效果。     

大蒜及黑蒜功能的研究进展

大蒜具有较高的药用价值和食用价值,由其发酵而得的黑蒜又增添了其他功效.本文通过查阅国内外资料,阐述大蒜及黑蒜的活性功能,为今后的开发利用提供理论基础.     

多聚乙二醇化蒜酶的特性研究

采用酶活性测定及双扩散法研究了蒜酶及修饰度为53％的多聚乙二醇（PEG）化蒜酶的某些理化性质、抗原性和免疫原性及体外和小鼠体内的活性半衰期。结果显示：在75％的乙醇中，蒜酶完全失活，而PEG化蒜酶仍保持了50％的活性。蒜酶和PEG化蒜酶最适温度均为40℃，与蒜酶相比，PEG化蒜酶在更宽的pH范围内具有催化活性，蒜酶的最适pH为7，而PEG化蒜酶在pH为6－7范围内均具有最强的催化活性。蒜酶与其抗血清形成明显沉淀线，而PEG化蒜酶既不与蒜酶的抗血清也不与自身的抗血清形成沉淀。在血清中PEG化蒜酶的半衰期为90h，是蒜酶的45倍。PEG化蒜酶的小鼠体内半衰期达2．58d，而蒜酶在小鼠体内30min后，已测不出催化活性。多次应用PEG化蒜酶的小鼠体内，相邻两次应用的PEG化蒜酶半衰期无显著性差异。     

多聚乙二醇化f蒜酶的特性研究

采用酶活性测定及双扩散法研究了蒜酶及修饰度为53%的多聚乙二醇(PEG)化蒜酶的某些理化性质、抗原性和免疫原性及在体外和小鼠体内的活性半衰期.结果显示在75%的乙醇中,蒜酶完全失活,而PEG化蒜酶仍保持了50%的活性.蒜酶和PEG化蒜酶最适温度均为40C.与蒜酶相比,PEG化蒜酶在更宽的pH范围内具有催化活性,蒜酶的最适pH为7,而PEG化蒜酶在pH为6～7范围内均具有最强的催化活性.蒜酶与其抗血清形成明显沉淀线,而PEG化蒜酶既不与蒜酶的抗血清也不与自身的抗血清形成沉淀.在血清中PEG化蒜酶的半衰期为90 h,是蒜酶的45倍.PEG化蒜酶的小鼠体内半衰期达2.58 d,而蒜酶在小鼠体内30 min后,已测不出催化活性.多次应用PEG化蒜酶的小鼠体内,相邻两次应用的PEG化蒜酶半衰期无显著性差异.     

蒜酶催化蒜氨酸动力学研究

目的:研究酶促反应的动力学参数,为新药设计提供依据。方法:采用HPLC方法测定酶促反应的动力学参数及蒜酶的最适pH和最适温度。结果:蒜酶以蒜氮酸为底物,最大反应速度Vmax=27.9 μnml·min-1·mg-1,米氏常数Km=3.6 mmol/L,其最适pH为6.6,最适温度为35℃。结论:酶促反应的动力学参数为蒜酶寻求有利的反应条件、更大限度地提高酶反应的效率提供了参考数据。     

蒜氨酸/蒜酶二元催化体系配比研究

为确定蒜氨酸/蒜酶二元释药体系的配比以便在体内产生大蒜辣素,考察天然来源大蒜中提取的高含量蒜氨酸和蒜酶催化裂解反应的比例关系。分别采用蒜氨酸含量测定(外标法)和大蒜辣素含量测定(内标法)方法,通过HPLC测定反应体系中蒜氨酸的转化率以及大蒜辣素生成率。当蒜氨酸(含量≥90%)与蒜酶质量比为1∶1且蒜酶活力≥1 000 U/g时,蒜氨酸转化率为(95.7±1.2)%,大蒜辣素生成率为(87.4±1.3)%。研发蒜氨酸/蒜酶二元释药制剂时,可采用蒜氨酸(≥90%)与蒜酶(≥1 000 U/g)质量比为1∶1的配比。对于不同活力的蒜酶可采用蒜氨酸与蒜酶1 mg∶1.3 U的配比。     

γ-谷氨酰转肽酶酶学性质的研究

目的了解地衣芽孢杆菌菌体细胞中γ-谷氨酰转肽酶的一些基础酶学性质。方法采用溶菌酶法破碎细胞壁,经硫酸铵沉淀后透析得到粗酶后,采用紫外分光光度法测定该酶的酶活力。结果该酶在25～35℃的温度范围有很好的耐受性,在碱性条件下保持一定的活性,最适反应温度为45℃,最适反应pH值为8.0,Ca2＋、Mg2＋等金属离子在适当浓度时对酶活性有促进作用。结论本实验为利用该酶转化生产茶氨酸提供了依据。     

短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的酶学性质研究

目的:研究短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白(Phospholipid-binding anticoagulation protein,PBAP)的酶学性质.方法:通过对短尾蝮蛇毒PBAP精氨酸脂酶活性的测定,研究丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)、胰蛋白酶、抑肽酶、二价金属离子(Ca2+、Mg2+、Co2+、Mn2+、Zn2+)、温度、pH、金属络合剂乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)对PBAP的影响.结果:丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF、胰蛋白酶对PBAP精氨酸酯酶有抑制作用.抑肽酶、Ca2+、M2+、Co2+、Mn2+、Zn2+、二胺四乙酸对PBAP精氨酸酯酶活性无明显影响,温度在20℃～90℃,pH在4.0～11.0的条件下,PBAP的精氨酸酯酶性质稳定.结论:丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF、胰蛋白酶对PBAP精氨酸酯酶有抑制作用,温度在20℃～90℃,pH在4.0～11.0的条件下,PBAP的精氨酸酯酶性质稳定.     

大蒜超氧化物歧化酶的纯化

采用二次丙酮沉淀法和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶柱及ＤＥＡＥ－５２离子交换柱分离工艺纯化了大蒜铜锌超氧化物歧化酶。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测得其分子量为３２９３４ｕ（３３２００Ｄａｌｔｏｎ），产品达电泳纯。该酶在２５８ｎｍ处呈最大吸收，对氰化物、过氧化氢敏感。     

大蒜鳞茎蒜氨酸酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的 从大蒜鳞茎中克隆蒜氨酸酶基因,构建蒜氨酸酶真核表达载体,并在毕赤酵母系统中表达,进一步探讨重组蒜氨酸酶的生物学活性。方法 利用RT-PCR方法克隆大蒜鳞茎蒜氨酸酶基因,通过pPIczαC载体构建pPIczαC-蒜氨酸酶真核表达质粒,电转化法导入毕赤酵母X-33,筛选阳性克隆,经甲醇诱导后取表达上清进行SDS-PAGE和Western blotting分析。利用丙酮酸法检测重组蒜氨酸酶和提取的天然蒜氨酸酶的活性,Lowry法测2种蒜氨酸酶蛋白质量,通过比活力比较2种酶活性大小。结果 从大蒜内克隆出蒜氨酸酶基因,大小为1 500 bp,重组蒜氨酸酶相对分子质量约为5.5×10⁴,存在于毕赤酵母表达上清液中。重组蒜氨酸酶比活力为（82.09±3.89）U/mg,天然蒜氨酸酶比活力为（176.49±5.06）U/mg。结论 蒜氨酸酶基因可以在毕赤酵母表达系统中获得表达,重组蒜氨酸酶具有酶活性,但是其活性低于提取的天然蒜氨酸酶。     

黑大蒜和鲜大蒜提取物对小鼠细胞免疫功能影响的比较

目的比较黑大蒜提取物和鲜大蒜提取物对细胞免疫功能影响。方法分别连续5 d给予小鼠腹腔注射黑大蒜提取物溶液与鲜大蒜提取物溶液。从第6天开始处死小鼠,分离培养脾细胞,生物学方法检测自然杀伤(NK)细胞杀伤活性,Griess法检测脾细胞培养上清一氧化氮(NO)的分泌水平,ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-17和IL-4的水平。结果黑大蒜提取物较鲜大蒜提取物有更强的NK细胞杀伤活性和促NO、IL-2、IFN-γ、IL-17、TNF-α分泌的刺激作用。二者对IL-4的分泌水平无影响。结论黑大蒜提取物较鲜大蒜提取物有更强的Th1/Th17型细胞免疫应答的诱导作用。     

大蒜油微量元素及抗菌活性测定

目的　探讨河南大蒜油的抗菌活性及测定与药理学作用有关的微量元素的含量。方法　用火焰光度法、原子吸收分光光度法测定１１ 种无机元素含量;用纸片法做抗菌活性试验。结果　大蒜油含（ｐｐｍ）Ｋ２７９０ 、Ｎａ３３７ 、Ｃａ２３４ 、Ｍｇ３１７ 、Ｆｅ６５ 、Ｍｎ１２ ．６ 、Ｚｎ９．３ 、Ｃｕ３ ．３ 、Ｍｏ０ ．７３、Ｇｅ０．７２、Ｓｅ０．０３１;大蒜油对三种革兰阳性球菌、七种革兰阴性杆菌或弧菌有较强的抑菌作用。结论　河南大蒜或大蒜油含有丰富的与诸多功效相关的微量元素和较强的抑菌作用。     

大蒜中总黄酮的提取及其含量测定

目的为充分利用大蒜资源,避免浪费,探讨大蒜总黄酮的提取、鉴别及其含量测定方法。方法采用纯物理的工艺流程过程和分光光度法从大蒜中提取黄酮类物质并进行含量测定。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.59%。回收率为99.4%,其纯度和产率均较高。结论采用全物理过程,无任何化学污染,是提取大蒜黄酮类物质的有效途径。     

大蒜活性成分阿藿烯的抗肿瘤作用研究进展

近年来,鉴于抗肿瘤药物的较大不良反应,中药中活性成分的抗肿瘤作用日益成为研究热点。阿藿烯为大蒜中一种丙烯基硫化物,无辛辣味和蒜臭味,且具化学稳定性,对多种肿瘤细胞尤其是对白血病细胞的生长抑制作用显著,无明显不良反应,极具开发潜力。对其抗肿瘤活性及作用机制进行综述。     

木聚糖酶的纯化与性质研究

木聚糖酶是可将木聚糖降解成为低聚木糖和木糖的复合酶系,在饲料、造纸、食品和酿酒等行业中的应用日益广泛。微生物产生的木聚糖降解酶系较为复杂,在进行酶学性质、分子结构、基因克隆等研究中,分离纯化是研究的前提和基础。作者介绍了色谱法、CBM配基结合法、双水相系统等木聚糖酶纯化技术,并对木聚糖酶的分子量与构成、酶的稳定性和底物特异性等酶学性质进行了综述。     

大蒜精油的主要化学成分及抗血栓功效

食用大蒜的功效有降血脂、抑制血小板聚集、抗茵、抗肿瘤等功效。着重对从大蒜中提取的大蒜精油的成分及其主要功效进行了阐述。