脑得生丸中红花提取物纯化工艺研究

目的：研究大孔吸附树脂分离纯化脑得生丸中红花的工艺,确定最佳工艺条件和参数。方法：红花水提取液浓缩后过大孔吸附树脂柱,以羟基红花黄色素A的含量为考察指标,对影响羟基红花黄色素A分离纯化的工艺参数进行考察。结果：HPD-100型树脂为红花最佳分离纯化树脂,其分离纯化红花的最佳工艺条件：吸附流速1mL·min-1,最大上样量为5倍树脂柱体积,洗脱剂为30%乙醇,洗脱流速为3mL·min-1等。结论：HPD-100型树脂在所确定的工艺条件下能很好地分离纯化羟基红花黄色素A,为纯化红花的最佳工艺。     

正交试验法优选红花的提取纯化工艺

目的:优选红花的最佳提取纯化工艺。方法:以总黄色素和总黄色素占固形物的百分比为评价指标,采用正交实验法筛选红花的最佳工艺条件。结果:红花的最佳提取工艺为加水量20倍,提取3次,提取时间为1.5 h,温度80℃;最佳纯化工艺为浓缩液初始质量浓度1.05,加入90%的乙醇,pH为6,转速700 r/min。结论:红花的提取纯化工艺科学、合理,可作为红花的最佳提取纯化工艺。     

红花中羟基红花黄色素A含量测定方法的改进

目的改进现有红花质量标准中羟基红花黄色素A含量测定色谱系统中色谱峰易变形的缺陷,并建立一个新的高效液相色谱方法。方法采用HPLC法,Diamonsil（钻石）C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,甲醇-乙腈-0.4%的磷酸溶液（30：2：68）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为403 nm。结果羟基红花黄色素A在0.03264～0.1984 mg/ml范围内呈良好的线性关系（R2=1）,回收率为100.37%（n=5）,RSD为0.9%。结论本法准确,专属性好,可用作控制红花的质量。     

红花有效成分提取工艺研究

目的: 筛选红花有效成分的提取工艺。方法: 以 RP HPLC法测定红花提取物中羟基红花黄色素 A为定量指标,应用单因素及均匀实验设计,筛选红花有效成分的提取工艺。结果: 以水为提取溶媒,回流 2 次,每次20 min,每次加水量为药材量的13倍。每克红花药材中提取的羟基红花黄色素A含量最高。结论: 提取工艺稳定、可行。     

羟基红花黄色素A的提取及含量测定

目的:对羟基红花黄色素A进行提取工艺改进。方法:采用ZTC-Ⅱ型澄清剂甲、D-4020型大孔吸附树脂和Sephadex LH-20柱层析法,从红花中提取分离羟基红花黄色素A单体,采用高效液相色谱法(HPLC)测定羟基红花黄色素A的含量。结果:采用HPLC法测定羟基红花黄色素A的平均含量为97.3%。结论:此工艺具有成本低、纯度较高的优点,可以作为羟基红花黄色素A的提取工艺使用。     

红花中羟基红花黄色素A的提取工艺及其热稳定性研究

目的:优化红花中羟基红花黄色素A的提取工艺条件及其的热稳定性.方法:以羟基红花黄色素A的含量为指标,采用单因素和正交实验方法,对提取温度、浸取时间、溶剂用量进行考察;通过测量于不同温度下保温不同时间的该成分的吸光度,考察其的热稳定性.结果:最佳提取工艺为:分别加20倍量的水提取2次,在40℃下,2次浸取时间分别为12 h和4 h,过滤,合并滤液;且羟基红花黄色素A不易在高温条件下提取或保存,在低温下具有一定的稳定性.结论:该研究方法合理方便,并可为羟基红花黄色素A提取及保存提供实验依据.     

大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A

目的 建立简便有效的制备红花有效部位红花黄色素(safflor yellow，SY)及有效成分羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)的方法。方法 室温水提减压浓缩所得红花水提液上D-4020型非极性大孔树脂柱，水洗脱糖类等杂质，以30％和10％乙醇洗脱分别得SY和HSYA；采用分光光度法和HPLC法分析水洗脱除糖过程中SY和HSYA的损失率及醇洗脱SY和HSYA的回收率。结果 聚酰胺薄膜色谱结果显示SY和HSYA洗脱液分别可见4～5个和1个黄色荧光斑点。HPLC分析结果表明，两洗脱液中所含SY和HSYA纯度分别为92．4％和83．0％。在水洗除杂质和稀醇洗脱过程中，损失率和回收率分别为SY：7．5％和80．6％，HSYA：1．64％和77．3％。结论 本法适于大规模制备SY和HSYA。     

红花提取工艺筛选考察

目的 采用不同方式对红花药材进行提取,得出最佳提取工艺,并对药液进行纯化考察,得出最佳参数.方法 采用水提取,乙醇提取,醇提水沉等方式对红花进行提取,以羟基红花黄色素A提取率作为指标,比较不同提取方式的抗凝血作用,得出最佳提取方式.并对药液进行浓缩条件和醇沉条件考察,得出最佳工艺参数.结果 对红花有效成分提取时采用水提取效果最佳,羟基红花黄色素A提取率可以达到86.11％,可明显延长大鼠血浆凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间,得出当加水8倍量,每次煎煮0.5h,煎煮2次,红花提取液中有效成分提取最好.同时红花药液采用醇沉处理时,70％乙醇进行沉淀,除杂率最佳,成分保留率最好,采用减压浓缩时,温度控制为65℃,压力在-0.07 MPa时,浓缩效果最佳.有效成分破坏率最小.结论 红花采用水作为溶剂进行提取,方法简便易行,适合大生产操作.     

HPLC法测定七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立HPLC法测定七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用Inertsil OPS-SP(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26:2:72),流速1mL·min-1,柱温25℃;进样量:10μL,检测波长为403nm。结果:羟基红花黄色素A在进样量范围为(0.0265～0.132)μg时,与峰面积线性关系良好;回收率为99.7%,RSD为0.7%。在选定的条件下,羟基红花黄色素A获得较好分离。结论:该方法简便可行、灵敏准确、能用于七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的测定。     

大孔吸附树脂纯化红花提取物的研究

目的探讨大孔吸附树脂对红花提取物的纯化条件及纯化效果。方法通过红花黄色素(SY)在树脂上的吸附量和解吸率筛选树脂的种类;以SY的保留率和转移率为指标考察药液的pH值、上柱吸附体积流量、树脂药材比、树脂柱径高比、清洗液的pH值及体积流量、洗脱液的种类及体积流量等纯化条件。与乙醇沉淀法进行纯化效果的比较。结果优化后的纯化条件为采用HPD 400A作为吸附树脂,树脂药材比为4∶1,树脂柱径高比为1∶6,上柱药液和清洗液pH值为2.0,50%乙醇作为洗脱液,上柱吸附体积流量为4 BV/h,清洗和洗脱体积流量为10BV/h。在该纯化条件下,SY的转移率为88.8%,与乙醇沉淀法相当,固形物中SY的质量分数约为乙醇沉淀法的2.6倍,固形物的质量(固形物得率)仅为乙醇沉淀法的38.5%。结论通过纯化条件的优化大大提高了SY的转移率,大孔吸附树脂法对红花提取物的纯化效果优于乙醇沉淀法。     

红花黄色素提取工艺的研究

目的对红花黄色素的提取工艺进行优化。方法采用单因素试验法和正交试验法,以红花黄色素的提取率为主要考察指标,以红花黄色素在固形物中的质量分数及总出膏率为参考指标,对提取工艺进行考察。结果红花黄色素的最佳提取工艺:以12倍量水浸泡30min,70℃下动态提取2次,每次20min。结论该工艺可提高红花中红花黄色素的提取率。     

红花cDNA-AFLP反应体系的优化研究

目的为构建红花的遗传连锁图谱和功能基因的研究,探讨影响红花cDNA扩增片段长度多态性(cDNA amplified fragment length polymorphism,cDNA-AFLP)的各种因素,建立并优化红花cDNA-AFLP反应体系。方法以红花新鲜花瓣为材料,针对其内含物特殊性对Trizol法加以改进提取RNA,采用无RNase H活性的鼠源反转录酶(M-MLV RTase)结合置换合成法反转录双链cDNA;两步法酶切与连接,优化酶切时间;连接产物和预扩产物分别设置不同稀释倍数扩增并对选扩反应体系略微调整后,用6%的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离,银染检测。结果改进Trizol法得到的红花总RNA样品较为完整,纯度较高,可直接用于双链的合成;经无RNase H活性反转录酶结合置换合成法得到高质量的cDNA模板。建立优化后的红花cDNA-AFLP体系为:250ng cDNA 37℃6 h经限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,16℃连接12 h;连接产物最佳稀释倍数为10倍;预扩产物稀释为150倍;PAGE电泳得到清晰、稳定、分辨率较高的多态性条带。结论本研究建立的反应体系适用于红花功能基因的cDNA-AFLP研究。     

澄清剂对红花水提液的除杂研究

目的：考察澄清剂对红花中羟基红花黄色素A含量的影响。方法：以反相高效液相色谱法（RPHPLC）测定红花提取物中羟基红花黄色素A含量，应用正交实验设计，考察澄清剂对红花中羟基红花黄色素A含量的影响。结果：水提液浓缩比例为1：2，加入ZTC8％澄清剂甲，羟基红花黄色素A含量为1．62％。结论：澄清剂对红花中羟基红花黄色素A含量的影响小。     

红花中核黄素及其降解产物

目的 为进一步揭示红花生理活性的化学物质基础，开发其活性成分。方法 对其水溶性部分进行了系统的研究。经过大孔树脂、硅胶、聚酰胺和Sephadex LH-20反复柱色谱分得了3个化合物。结果 通过1D，2D NMR，ESIMS等波谱测定结合文献调查，确定了结构。结论 核苷、核黄素及其降解产物首次从该植物中分得。核黄素是人体内黄酶的一种辅酶，在人体内有着重要的生理功能；化合物Ⅰ具有很好的降压活性。     

红花抗衰老作用的实验研究

目的:研究红花的抗衰老作用,方法:采用小鼠游泳实验,耐常压氧实验和耐寒实验等方法观察了红花对小鼠抗疲劳,抗缺氧和抗寒能力的影响,并采用ＴＢＡ显色法观察了红花对中老龄大鼠体内的过氧化脂质生成的影响.结果:红花可著处宅小鼠旅游时间(ts)及在常压缺氧和寒冷条件下的存活时间(tI),增强小鼠在各种不利环境下的生存能力,并明显抑制中老龄大鼠体内过氧化脂质(ＬＰＯ)的生成.结论:结果表明红花有抗衰老作用.     

红花化学成分的研究

目的：为进一步揭示红花Carthamus tinctorius L.药理活性的化学物质基础,开发其活性成分,我们对其进行了较为深入系统的化学成分研究。方法;经大孔树脂,硅胶和Sephadex LH-20反复柱层分得并通过波波谱分析鉴定了12个化合物。结果：它们分别为2,3,4,9－tetrahydro-1-methyl-1-H-pyrido[3,4-b]indole-3-carboxylicacid(Ⅰ）;thymine-2-desoxyribofuranoside(Ⅱ）;ethyl-α-D-lyxofuranoside(Ⅲ）;kaempferol-3-O-rutinoside(Ⅳ）;syringin(Ⅴ）;quercetin-3-O-β-D-galactoside(Ⅵ）;safflor yellow-A(Ⅶ）;carthamin(Ⅷ）和阿魏酸,对羟基玻酸,胡萝卜苷,β－谷甾醇。结论：化合物Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ为首次从该植物中分得。化合物Ⅶ对ADP诱导的大鼠血小板聚集有较好的抑制活性。     

多指标综合评分法优选红花提取液醇沉工艺

目的:研究并确定红花提取液的最佳醇沉工艺。方法:以羟基红花黄色素A(HSYA)转移率为评价指标进行单因素试验,分别考察终点乙醇质量分数、搅拌速度、药液初始质量浓度、醇沉温度和药液pH等因素的影响。选取对单因素试验结果影响较大的4个因素,采用L9(34)正交试验法,以HSYA转移率、浸出物得率和纯度为指标进行综合评分,确定红花提取液醇沉的最佳工艺条件。结果:红花提取液的最佳醇沉工艺条件为终点乙醇质量分数50%,药液初始质量浓度1.15 g/ml,搅拌速度500 r/min,药液pH5.0。结论:优选的工艺操作简便、稳定,HSYA转移率、浸出物得率和纯度较高。