一种天然植物抗菌液PAMs对人白血病K562细胞的促凋亡作用

初步研究一种天然植物抗菌液(PAMs)对白血病K562细胞的杀伤作用及抗肿瘤分子作用机制。MTT法确定PAMs对K562细胞的增殖抑制作用和具有的浓度和时间依赖性;AO-EB双染、Annexin-FITC/PI流式细胞仪染色观察显示PAMs对K562细胞的杀伤作用与细胞凋亡相关,这也被进一步的分子水平与酶活力检测所证实。FQ-PCR基因表达检测发现,PAMs处理后,K562细胞株中caspase-3、caspase-9、bax等促凋亡相关基因有所上升,而抑制凋亡基因bcl-2表达下降,Western blot法检测到PAMs上调caspase-3的表达量,同时下调抑制凋亡蛋白survivin的表达。这也与caspase酶活性测定结果相一致,PAMs处理后的K562,其caspase-3、-9活性均有所上升。所有这些结果一方面揭示PAMs对白血病K562细胞株具有强的杀伤作用,同时在形态和分子水平揭示其抗肿瘤抑制作用途径与诱导细胞凋亡的密切相关性,为PAMs作为抗白血病抗肿瘤中药的研发提供参考。     

Bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡

目的:研究bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应. 方法:合成bcl-2反义核酸(ASON)导入K562细胞,应用Western blot法检测bcl-2蛋白的表达,TUNEL技术、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡. 结果:bcl-2反义核酸(ASON)能明显抑制bcl-2蛋白的表达. 青蒿琥酯在1～7 mg/L浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性, 7 mg/L青蒿琥酯作用72 h的K562细胞株A值最低. 原位细胞凋亡检测可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞株对青蒿琥酯的诱导凋亡作用更加明显;FCM法出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡主要发生在G1/S期,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞凋亡率显著增加. 结论:青蒿琥酯在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,bcl-2反义核酸可增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的作用.     

NS398对白血病细胞K562凋亡的时间和剂量效应机制

目的 探讨非甾体药物选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS398对白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的效应关系和机制.方法 采用噻唑蓝还原法(MTT法)检测NS398对K562细胞增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)和单细胞凝胶电泳技术(comet assay)测定K562细胞的凋亡,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达.结果 NS398抑制K562细胞增殖存在时间和剂量效应关系,各浓度间差异有显著性(P<0.05).NS398激活caspase-3和caspase-9,促进P53蛋白的积聚、Bax蛋白表达的上调和Bcl-xL蛋白表达的下调,进而导致细胞色素C的释放,致使K562细胞凋亡.结论 NS398可抑制K562细胞增殖,其诱导细胞凋亡的途径可能经过P53介导Bax的Caspase-3、Caspase-9的激活,揭示COX-2抑制剂可能存在着一个影响细胞翻译的新机制.     

安迪粉针剂诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的细胞学研究

目的:探讨安迪注射剂(Andi injection,Adi)对慢性粒细胞白血病K562细胞株凋亡的影响。方法:流式细胞仪技术检测细胞凋亡变化;使用荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变;评价Adi对K562细胞株凋亡的影响。结果:流式细胞仪检测结果显示10、20μg/ml Adi处理组K562细胞的凋亡率分别为50%和39%,明显高于对照组的10%(P<0.05);荧光显微镜和电镜下可见K562细胞呈典型凋亡样改变。结论:Adi能明显抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。     

夏枯草注射液诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨夏枯草注射液体外抗白血病作用,为临床应用夏枯草注射液治疗白血病提供实验依据。方法采用M TT法测定夏枯草注射液对K 562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;绘制夏枯草注射液(50、100 m g/mL)作用于K 562细胞的生长曲线。用倒置显微镜、姬姆萨染色法、M TT染色法光镜下观察细胞形态,台盼蓝拒染法、流式细胞仪P I染色观察夏枯草注射液对K 562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响,并用图文分析系统进行定量分析。结果夏枯草注射液对K 562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内抑制作用具有明显的剂量依赖性(r=0.985 0),IC50为0.113 m g/mL。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞后,倒置显微镜、姬姆萨染色、M TT染色光镜下观察,均可见典型的凋亡细胞的形态学特征。流式细胞仪检测结果显示,处理组细胞凋亡率[(37.15±1.46)%]明显高于对照组细胞凋亡率[(5.56±0.68)%](P<0.01)。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞48 h,bcl-2蛋白表达增强,而bax表达减弱,与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论夏枯草注射液可明显抑制K 562细胞增殖,可望成为新的抗白血病药物,诱导K 562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

墓头回提取物诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨墓头回提取物体外抗白血病作用,为墓头回提取物抗肿瘤活性单体的筛选提供理论依据。方法采用MTT法测定墓头回对K562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;台盼蓝拒染法、流式细胞仪PI染色观察墓头回对K562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测墓头回对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果墓头回对K562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内其抑制作用具有明显的剂量依赖性,IC50为36.03 mg/L。墓头回作用于K562细胞后,倒置显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学特征。流式细胞仪检测结果显示,实验组细胞凋亡率明显高于对照组,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论墓头回作用于K562细胞,可以明显抑制K652细胞增殖。此外,诱导K562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

Triad1调节K562细胞增殖、凋亡和耐药研究*

目的：研究Triad1对慢性髓细胞白血病（CML）细胞株K562增殖和凋亡的作用以及与伊马替尼（IM）耐药的关系。方法：将K562细胞进行血清饥饿培养,流式细胞仪检测细胞周期变化,蛋白免疫印迹法检测PCNA等增殖相关蛋白的表达。shRNA干扰K562细胞后细胞周期和凋亡的变化。构建耐药细胞K562R,蛋白免疫印迹法检测K562和K562R细胞中Triad1以及凋亡相关蛋白的表达。结果：（1）血清饥饿培养后K562细胞阻滞在G0/G1期,恢复血清培养后随着K562细胞增殖,Triad1表达减少,而PCNA等蛋白表达增加。（2）干扰Triad1表达后,K562细胞增殖能力增强,G1期细胞减少。（3）K562R细胞Triad1的表达下降,凋亡相关蛋白表达降低。结论：Triad1通过调节细胞周期来调节K562细胞的增殖,干扰Triad1可促进K562细胞增殖,凋亡减少,Triad1表达下降可能与K562细胞耐药相关。     

细胞外信号调节激酶抑制剂协同蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡

目的 观察细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERK )抑制剂PD98059与蟾蜍灵(bufalin)协同诱导K562细胞凋亡作用并探讨其分子机制.方法 采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力;采用形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot方法检测bcl-2蛋白表达.结果 25～100 μmol/L 的PD98059与蟾蜍灵单独或联合应用可抑制K562细胞增殖,并诱导细胞凋亡,在此过程中下调bcl-2蛋白表达,且二者具有协同作用.结论 PD98059协同蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调bcl-2蛋白表达有关.     

桂皮醛影响K562细胞生长的机理研究

目的:探讨桂皮醛对慢性髓细胞白血病细胞株K562生长的影响及其机制.方法:以不同浓度的桂皮醛作用于体外培养的K562细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期、凋亡率和Caspase 3表达.结果:桂皮醛呈时间和剂量依赖性影响K562细胞增殖,使细胞周期受阻于G2/M期,并诱导K562细胞凋亡.K562细胞凋亡过程中,活化的Caspase 3表达明显增加.结论:桂皮醛使K562细胞周期受阻,并使Caspase-3活化诱导细胞凋亡,从而实现对K562细胞的生长抑制.     

苦瓜蛋白诱导K562/A02细胞凋亡

目的：观察苦瓜蛋白对K562/A02细胞凋亡受抑逆转作用及其分子机制。方法：CCK-8法测定苦瓜蛋白对耐药细胞K562/A02的IC50值,细胞形态学和AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,流式细胞法测定P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达及caspase-3和caspase-8活性。结果：苦瓜蛋白显著抑制K562/A02耐药细胞的增殖;经苦瓜蛋白处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,AnnexinV/PI双染法显示凋亡细胞明显增加;P-gp蛋白表达下降,caspase-3和caspase-8活性显著增强。结论：苦瓜蛋白能诱导K562/A02耐药细胞凋亡,逆转耐药白血病细胞P-gp高表达所介导的细胞凋亡抑制。     

三七总皂苷对过氧化氢诱导的骨髓基质细胞凋亡的保护作用

目的：观察三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）对过氧化氢诱导的兔骨髓基质细胞（bone marrow stromal cell,BMSC）凋亡的影响。 方法：从2月龄新西兰兔获得原代BMSC,给予不同浓度PNS处理后,通过检测BMSC增殖能力和碱性磷酸酶活性观察BMSC早期成骨分化能力,筛选出PNS对BMSC作用的最佳浓度。采用过氧化氢（100 μmol/L）诱导BMSC凋亡。PNS对过氧化氢诱导前的BMSC进行预处理后,应用2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐法检测细胞活性氧水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法检测BMSC内Bax蛋白水平,荧光分光光度计检测BMSC内半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）活性。 结果：PNS作用的最佳浓度是0.1 g/L。与单纯过氧化氢处理组相比,0.1 g/L PNS预处理能减少过氧化氢诱导后BMSC内的活性氧含量的升高,降低BMSC凋亡率,减少Bax蛋白表达,并降低caspase-3活性（P〈0.01）。 结论：PNS可能通过减少氧化应激反应、Bax表达及caspase-3活性发挥其对过氧化氢诱导BMSC凋亡的保护作用。     

阿糖胞苷通过自噬途径影响K562细胞增殖凋亡的实验研究

目的 探讨阿糖胞苷(Ara-C)通过自噬途径影响人红白血病K562细胞株增殖、凋亡的作用及可能的机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度的Ara-C作用24 h和48 h后细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测凋亡率和周期;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态,吖啶橙染色观察细胞酸性自噬小泡;Western blot检测p38和p-p38蛋白表达变化;RT-PCR和免疫荧光检测自噬凋亡相关基因和蛋白的表达水平.结果 CCK-8检测发现不同浓度的Ara-C均能抑制K562细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性;FCM检测显示Ara-C能增加细胞的凋亡和将细胞周期阻滞在S期;Hoechest染色发现Ara-C处理K562细胞后呈凋亡形态改变;吖啶橙染色发现Ara-C组细胞绿色荧光增强,细胞出现大量的酸性自噬小泡;RT-PCR检测发现Ara-C上调自噬关键基因Beclin-1、LC3A和LC3B表达;Western blot检测发现Ara-C增加磷酸化p38表达;免疫荧光检测发现Ara-C增加LC3表达.结论 Ara-C能够激活p-p38介导的K562细胞发生自噬,进而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡作用.     

大麻受体激动剂WIN对白血病K562细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨大麻受体激动剂W／N-55,212-2（WIN）对白血病K562细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分成对照组和不同剂量大麻受体激动剂wIN用药组。CCK-8测定WIN对K562细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;JC-1分析线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化;Western印迹法分析Bax、Bcl-2及C-myc蛋白的表达。结果与对照组相比较,5、10、20μmol／L的WIN处理K562细胞24、48h后,增殖抑制作用明显且具有剂量依赖性,差异有统计学意义（P〈0．05）。DAPI染色和线粒体膜电位检测结果显示,K562细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率升高。WIN处理24h后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性均增加（P〈0．05）。Western印迹法显示,Bax蛋白表达增加,C-myc、Bcl-2蛋白表达下降。结论大麻受体激动剂WIN能抑制白血病K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过上调Bax蛋白表达,下调C-myc、Bcl-2蛋白表达,以及促使线粒体跨膜电位下降。激活Caspase．3、Caspase-8、Caspase-9蛋白而实现。     

痰热清注射液抑制白血病细胞体外增殖及其作用机制（英文）

目的：探讨痰热清注射液对人白血病细胞体外增殖的影响及其作用机制。方法：将痰热清注射液以体积比稀释成1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256和1？512,共9个浓度组,分别处理增殖期慢性髓系白血病K562细胞和急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况,应用活细胞计数试剂盒检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）;分别采用碘化丙啶染色法和碘化丙啶/膜联蛋白V双染法,通过流式细胞术检测Molt4细胞周期及凋亡的变化;采用实时定量聚合酶链反应方法分析痰热清注射液处理Molt4细胞后凋亡相关基因caspase-3和bcl-2的表达量变化。结果：痰热清注射液对K562和Molt4细胞增殖具有抑制作用,1？2至1？16稀释浓度组的细胞毒性大,细胞基本死亡;抑制作用呈剂量和时间依赖性,IC50分别为1？333和1？142稀释浓度。痰热清注射液1？32浓度组处理72h后,Molt4细胞处于S期的数量明显减少（P〈0.05）,凋亡细胞比例明显增加（P〈0.05）;同时,caspase-3表达增加,bcl-2表达明显减少（P〈0.05）。结论：痰热清注射液可抑制白血病细胞体外增殖并促进其凋亡,该作用可能是通过减少S期细胞数量,下调bcl-2基因表达和上调caspase-3基因表达而实现的。     

力达霉素抑制K562细胞增殖和诱导凋亡作用及其机制

目的: 研究力达霉素(LDM)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法: 选取处于对数生长期的人CMLK562细胞,采用不同浓度(0.01、0.10和1.00nmol·L^-1)LDM处理48h,作为0.01、0.10和1.00nmol·L^-1LDM组,不加药物的正常细胞为对照组。台盼蓝染色观察各组K562细胞生长抑制率,MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察凋亡细胞的形态表现,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中caspase-3和caspase-8蛋白相对表达量。结果: 台盼蓝染色,LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,各浓度LDM组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);MTT法检测,随LDM作用浓度的升高,细胞存活率下降,LDM对K562细胞作用的半数抑制浓度(IC₅₀)为(0.1±3.2)nmol·L^-1。AO/EB染色,荧光显微镜下观察到LDM能够引起细胞发生凋亡(胞质呈芽状突起,胞核碎裂成点状)。流式细胞术检测,各浓度LDM组K562细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05)。Western blotting法检测,0.10和1.00nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.01)。0.01nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论: LDM能够有效抑制K562细胞增殖,低浓度LDM可能通过上调细胞中caspase-8和caspase-3表达诱导K562细胞发生凋亡。     

原代白血病细胞survivin基因表达与化疗药物诱导凋亡敏感性关系

目的：探讨原代白血病细胞survivin基因表达与化疗药物诱导凋亡的敏感性关系。方法：RT—PCR方法检测初发ANLL细胞suntivin mRNA的表达。DNA片段原位末端标记(TUNEL)方法检测不同化疗药物体外诱导的白血病细胞凋亡。结果：原代ANLL细胞与HHT、AcLa、Ara—C孵育15h后，survivin mRNA阳性表达的ANLL细胞凋亡率低于阴性表达者。联用HHT Ara—C或AcLa Ara—C体外处理原代ANLL细胞15h后．survivin mRNA阳性表达的ANLL细胞凋亡率亦低于阴性表达者。且survivin mRNA阴性的ANLL患者骨髓缓解(BMR)率高于survivin mRNA阳性者((2／2)对(3／11))。结论：sunrvivin基因阳性表达的ANLL细胞对化疗药物诱导凋亡不敏感。     

电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究

目的：探讨电离辐射致骨基质细胞（BMSC）凋亡的规律，方法：采用流式细胞仪，电镜技术观察不同剂量60Coγ射线照射后BMSC的凋亡变化。结果：经50Gy剂量照射后，BMSC未见有明显的形态学改变，而经100和200Gy照射后BMSC出现了明显的凋亡改变，流式细胞检测显示，经50Gy 剂量照射后，BMSC的凋亡率与正常对照组相比变化不明显（P＞0．05），100Gy照射后BMSC的亡率出现了明显改变（P＜0．01），而且这种变化始于照射后4h，至照后24h到达高峰，随后凋亡率慢慢下降，200Gy照射组的凋亡率高于100Gy组，但差异不明显（P＞0．05），结论；体外培养的BMSC受一定剂量的60Coγ射线照射后可发生凋亡，并具有较强的辐射抗性。     

三氧化二砷诱导白血病多药耐药细胞凋亡的形态学改变

目的 系统观察三氧化二砷（As2O3)诱导白血病多药耐药细胞凋亡时的形态学特征。方法 用As2O3诱导白血病多药耐药细胞K562/ADM细胞凋亡，光镜，激光共聚焦显微镜（Confocal)和电子显微镜观察凋亡细胞的形态学变化。结果 As2O3诱导K562/ADM细胞凋亡，形态学上出现典型的凋亡特征性改变。发生凋亡的细胞可被邻近的未凋亡细胞通过吞噬等方式清除，且正常细胞吞噬凋亡细胞后自身出现某些凋亡的形态学改变。结论 体外诱导凋亡的白血病耐药细胞可被邻近的同类细胞吞噬清除。这种行为可能引发同类“吞噬”细胞自身发生继发性凋亡。     

冬凌草甲素诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其机制

目的 研究冬凌草甲素对人脑胶质瘤U251细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对U251细胞的生长抑制作用;倒置显微镜法和荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Realtime PCR法检测冬凌草甲素作用U251细胞后的bcl 2、bax及caspase-3基因表达水平的变化。结果 冬凌草甲素对U251细胞有明显的生长抑制作用（P<0.05）,呈明显的时间和浓度效应关系。冬凌草甲素作用U251细胞24h后出现明显的细胞凋亡形态学改变。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡和坏死细胞数均增加,浓度越高,诱导细胞凋亡的作用越明显（P均 <0.05）。随着冬凌草甲素作用时间延长,U251细胞的bax和caspase-3基因的表达逐渐增强,bcl-2基因的表达逐渐减弱（P均<0.05）。结论 冬凌草甲素能诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,其凋亡机理可能与bax和caspase 3基因表达的上调,bcl-2基因表达的下调相关。