甲基化在肺癌中的意义

目的探讨基因T-钙黏蛋白(CDH13)在40例癌组织,40例的癌旁组织标本和非肺癌良性肺切除组织标本15例作为对照的表达的临床意义,进一步研究其基因异常甲基化与肺癌的相关性。方法采用特异性甲基化PCR(MSP)检测该基因在肺癌组织中异常甲基化的水平。结果 1.在肺癌组织中CDH13基因甲基化率明显高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,甲基化率分别为32.5%、7.5%、6.7%,有统计学意义(P<0.05)。2.CDH13基因异常甲基化和CDH13的表达水平呈负相关性(r=-0.520).3.CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化阳性率在肺癌组织中显著高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化导致了CDH13的表达下调。结论在肺癌组织中CDH13基因异常甲基化率明显升高且有临床诊断意义,CDH13基因在癌组织中的异常甲基化水平将有望成为肺癌新的治疗靶点。     

上皮钙黏着蛋白mRNA表达与肺癌的相关性研究

目的 探讨E-cadherin(上皮钙黏着蛋白,E-cad)mRNA与肺癌及其病理类型之间的相关性.方法 用巢式RT-PCR检测50例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中的E-cad mRNA的相对表达量.结果 癌组织1.33±0.53、癌旁组织1.65±0.60、远癌组织2.01±0.46、非肺癌对照肺组织2.09±0.09,经方差分析癌、癌旁和远癌组织差异有统计学意义(F=18.810,P<0.01),但远癌组织与非肺癌对照肺组织之间的差异无统计学意义(P>0.05).肺鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织、癌旁组织和远癌组织中E-cad mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 E-cad mRNA表达减少或缺失与肺癌的发生和发展有相关性,与肺癌的组织类型无关.     

蛋白质免疫印迹技术检测肺癌组织上皮钙粘蛋白的表达

目的探讨上皮钙粘蛋白(E-cad)与肺癌及其病理类型之间的相关性。方法应用蛋白质免疫印迹技术(W estern b lot)检测30例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中E-cad的表达,并对部分表达阴性的标本用免疫组化方法进行验证。结果癌组织、癌旁组织、远癌组织E-cad的阳性率分别为36.7%、70.0%、96.7%。癌组织E-cad阳性率明显低于癌旁组织(P<0.017),也明显低于远癌组织(P<0.017);癌旁组织E-cad阳性率明显低于远癌组织(P<0.017)。在30例肺癌患者鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织中E-cad阳性率分别为33.3%、40.0%、33.3%;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌旁组织中的阳性率分别66.7%、73.3%、66.7%;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的远癌组织中的阳性率分别为91.7%、100.0%、100.0%。癌、癌旁和远癌组织中E-cad的表达与肺癌组织学类型无关(P>0.05)。结论E-cad蛋白表达减少或缺失与肺癌有相关性,与肺癌的组织类型无相关性。     

CDH1基因甲基化与食管鳞癌的关系

目的 探对食管鳞癌组织中CDH1基因启动子区甲基化的表达状况及其与烟酒史、肿瘤家族史的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测食管鳞癌中CDH1基因启动子区甲基化情况.结果 食管鳞癌、癌旁及正常组织CDH1基因的甲基化阳性率分别为51.6％(32/62)、22.6％(14/62)和0(0/18).癌与癌旁组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.01);癌和正常组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=15.484,P＜0.01);癌旁与正常组织间差异无统计学意义(x2 =3.487,P＞0.05).食管鳞癌CDH1基因甲基化情况与其性别、年龄、烟酒史和上消化道肿瘤家族史比较差异均无统计学意义(均P ＞0.05).结论 CDH1基因启动子区甲基化与食管鳞癌发生关系密切,在食管鳞癌中是一常见的表观遗传学事件.CDH1基因甲基化可能是一个独立的危险因素.     

人原发性肺癌组织中TSLC1基因甲基化检测及意义

目的探讨TSLC1基因启动子区甲基化状态与人原发性肺癌发生发展之间的关系方法采用甲基化特异性聚合酶链技术(MSP),对53例人原发性肺癌组织(肺癌组)、24例肺良性病变组织(良性病变组)、15例癌旁组织(癌旁组)及11例支气管鳞状化生组织进行TSLC1基因5’-CpG岛甲基化状态检测。结果肺癌组、癌旁组和肺良性病变组的TSLC1基因甲基化率分别为35.8%(19/53)、13.3%(2/15)、0.0%(0/24),三组相比差异有统计学意义(P<0.05);支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18.2%(2/11)。TSLC1基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSLC1基因启动子区甲基化与肺癌的发生关系密切,可能出现在肺癌发生的早期阶段。     

单发及双原发癌食管鳞癌CDH1基因甲基化的研究

目的:研究单发及双原发癌食管鳞癌组织CDH1基因甲基化变化特征及其与性别、年龄、烟酒史和肿瘤家族史的关系。方法:应用甲基化特异性PCR法,检测62例单发食管鳞癌(esophageal squamouscell carcinoma,ESCC)、18例双原发癌食管鳞癌患者癌及癌旁组织CDH1基因甲基化的表达。结果:单发及双原发癌食管鳞癌,CDH1基因甲基化阳性率在癌组织中为51.6%和66.7%,癌旁组织为22.6%和22.2%,正常组织为0%。癌与癌旁组织相比差异均有统计学意义(均P<0.05),癌与正常组织差异均有统计学意义(均P<0.05),癌旁与正常组织间差异均无统计学意义(均P>0.05)。单发和双原发癌食管鳞癌组织CDH1基因甲基化阳性率比较无统计学差异(P>0.05)。CDH1基因甲基化与性别、年龄、烟酒史及上消化道肿瘤家族史均无关。结论:CDH1基因甲基化在单发及双原发癌食管鳞癌中是一常见的表观遗传学事件;CDH1基因甲基化可能是一个独立的危险因素。     

非小细胞肺癌p16基因甲基化及其临床诊断意义

目的 研究非小细胞肺癌癌组织p16基因甲基化及其临床诊断意义.方法 选择47例非小细胞肺癌患者,用MSP技术检测肺癌组织和癌旁正常组织p16基因甲基化.结果 肺癌组织p16基因甲基化率44.7%,高于癌旁组织的17.0%(P＜0.01);肺癌组织甲基化检出率与临床分期、临床病理分型和临床分类之间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 提示肺癌有关组织或样本的p16基因甲基化,可能成为各种临床类型的非小细胞肺癌早期诊断的一个有效指标.但特异性、灵敏性和可行性等有待进一步研究.     

E—cad、CD44v6在肺癌中的表达及意义

目的研究E-cad、CD44v6在肺癌中的表达,探讨其与肺癌临床病理特征、淋巴结转移的关系.方法利用免疫组化S-P法检测65例肺癌、13例支气管黏膜不典型增生和8例正常肺组织的E-cad、CD44v6蛋白表达.结果肺癌组织的E-cad阳性率(46.2%)显著低于支气管黏膜不典型增生(84.5%)和正常肺组织(100%)(P＜0.05,P＜0.01);肺癌阳性率与淋巴结转移、临床分期呈负相关(P＜0.01,P＜0.05).在肺癌的阳性率(83.1%)显著高于不典型增生(38.5%)和正常肺组织(25%)(P＜0.01);CD44v6阳性表达与肺癌淋巴结转移、临床分期、病理分级呈正相关(P＜0.05).肺癌组织的E-cad阴性与CD44v6阳性表达有显著的相关性(P＜0.01).结论肺癌组织中的E-cad失表达、CD44v6高表达与肺癌的发生发展、淋巴结转移及预后有一定关系.     

肾细胞癌患者组织中RASSF1A、hMLH1及ALU甲基化水平的分析

目的探讨错配修复基因(h MLH1)、RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)启动子区甲基化以及ALU基因甲基化水平与肾细胞癌(肾癌)的关系。方法巢式甲基化特异性PCR(n MSP)检测15例肾癌组织及其相应癌旁组织中h MLH1、RASSF1A基因启动子区的甲基化状态,联合亚硫酸氢钠限制酶分析方法(COBRA)分析ALU基因甲基化水平。结果 h MLH1基因在肾癌组织中的甲基化率(0.41±0.18)%高于癌旁组织(0.32±0.13)%,差异有统计学意义(t=2.52,P0.05);ALU基因在癌组织中的甲基化率(0.11±0.04)%低于癌旁组织(0.12±0.03)%,差异有统计学意义(t=3.82,P0.05)。而RASSF1A基因在肾癌组织和癌旁组织中的甲基化率分别为(0.75±0.11)%和(0.69±0.12)%,差异无统计学意义(t=1.35,P0.05)。结论 h MLH1基因启动子区甲基化以及ALU基因甲基化可能与肾癌的发病有关,RASSF1A基因启动子区甲基化与肾癌发病无关。     

蛋白质免疫印迹技术检测肺癌组织上皮钙粘蛋白的表达

目的探讨上皮钙粘蛋白（E—cad）与肺癌及其病理类型之间的相关性。方法应用蛋白质免疫印迹技术（Westernblot）检测30例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中E—cad的表达,并对部分表达阴性的标本用免疫组化方法进行验证。结果癌组织、癌旁组织、远癌组织E-cad的阳性率分别为36．7％、70．0％、96．7％。癌组织E—cad阳性率明显低于癌旁组织（P〈0．017）,也明显低于远癌组织（P〈0．017）;癌旁组织E—cad阳性率明显低于远癌组织（P〈0．017）。在30例肺癌患者鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织中E—cad阳性率分别为33．3％、40．0％、33．3％;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌旁组织中的阳性率分别66．7％、73．3％、66．7％;鳞癌、腺癌及腺鳞癌的远癌组织中的阳性率分别为91．7％、100．0％、100．0％。癌、癌旁和远癌组织中E—cad的表达与肺癌组织学类型无关（P〉0．05）。结论E—cad蛋白表达减少或缺失与肺癌有相关性,与肺癌的组织类型无相关性。     

肺癌组织中Survivin和Caspase-3基因的表达

目的探讨survivin和caspase-3基因在肺癌中的表达及其意义。方法应用原位杂交法检测47例肺癌及相应癌旁肺组织survivin mRNA的表达,采用免疫组化SP法测定上述组织标本中caspase-3蛋白表达。结果Survivin-mRNA在肺癌组织中阳性表达率为78.7%,明显高于相应癌旁组织(P<0.01),caspase-3蛋白在肺癌组织中阳性表达率为59.6%,显著高于癌旁肺组织(P<0.01),caspase-3蛋白表达与survivin mRNA表达呈显著正相关(r=0.702,P<0.01)。结论Survivin mRNA和caspase-3蛋白表达上调与肺癌的发生密切相关。     

胸腔积液中粘蛋白1表达的临床意义

目的:评价MUC1mRNA在非小细胞肺癌患者和非肿瘤患者胸腔积液中表达的临床意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对30例肺癌患者、20例非肿瘤患者的胸腔积液中的MUC1mRNA表达进行检测。结果:非肿瘤患者的胸腔积液中未检测到MUC1mRNA的表达。肺癌患者胸腔积液中MUC1mRNA的敏感性为30%(9/30),特异性为100%。胸腔积液中MUC1mRNA的表达与肺癌组织类型密切相关,P<0.05;与患者年龄、性别、吸烟与否,肿瘤生长部位无明显相关,P>0.05。结论:应用RT-PCR法检测肺癌患者胸腔积液中MUC1mRNA的表达,具有一定的临床参考价值。     

皮肤鳞癌组织中p14ARF、E-cad、FOS和JUN基因甲基化状态的分析

目的通过检测皮肤鳞癌及正常皮肤组织中p14ARF、E-cad、FOS、JUN基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,探讨p14ARF、E-cad、FOS、JUN在皮肤鳞癌发生过程中的作用及诊断意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测30例皮肤鳞癌组织和20例正常皮肤组织基因启动子区附近CpG岛的甲基化情况。结果 30例皮肤鳞癌组织中发现p14ARF、E-cad基因高甲基化例数分别为18例(60.0%)和11例(37.6%),而20例正常组织分别为1例(5.0%)和2例(10.0%);30例皮肤鳞癌FOS、JUN基因非甲基化分别为22例(73.3%)和25例(83.3%);20例正常组织非甲基化分别为6例(30.0%)和1例(5%)。采用χ2检验进行统计分析,存在统计学差异(P<0.05)。结论 p14ARF、E-cad、FOS、JUN基因启动子区域异常甲基化状态与皮肤鳞癌发病联系紧密。     

PRAME mRNA在初诊急性髓系白血病患者中的表达及微量残留病监测中的应用

目的 了解黑色素瘤优先表达的抗原(PRAME)mRNA在初诊急性髓系白血病(AML)患者中的表达,评估其在微量残留病(MRD)监测中的作用.方法 采用基于TaqMan探针的实时定量RT-PCR技术检测142例初诊AML患者(其中72例不具有特异融合基因)骨髓单个核细胞PRAMEmRNA水平,动态观察3例持续缓解及6例血液学复发患者(2例不具有特异融合基因)治疗前后共60份骨髓标本PRAME mRNA水平,以22份异基因骨髓移植供者的骨髓标本作为健康对照.随访的7例AML1-ETO(+)M2患者同时检测AML1-ETO mRNA水平.以abl作为内参基因.结果 健康对照骨髓标本均表达PRAME mRNA,表达水平最高为0.28%.全部初诊AML患者骨髓中位PRAME mRNA水平为3.97%(0.00%～714.97%).无特异融合基因的AML患者骨髓中位PRAME mRNA水平为0.60%(0.00%～408.72%).PRAME mRNA水平在AML各亚型之间差异有统计学意义(P＜0.01),AML1-ETO(+)M2患者PRAME mRNA水平高于其他亚型(P值均＜0.01),S型PML-RARa(+)急性早幼粒细胞白血病患者次之.随访的AML1-ETO(+)M2患者PRAME mRNA与AML1-ETO mRNA呈现同样的变化趋势,二者呈明显正相关(r=0.88,P＜0.01).血液学复发患者中3例复发前PRAMEmRNA水平逐步升高,分别在复发前1～4个月超过正常上限,另3例患者在血液学缓解状态时PRAME mRNA水平始终未降至正常.结论 PRAME mRNA可以用于监测AML患者MRD,其水平持续升高或始终异常预示血液学复发.     

肺癌细胞钙黏蛋白E及连环蛋白的差异表达

目的测定不同转移能力肺癌细胞上皮型钙黏蛋白（E-cad）,α,β-连环蛋白（α-catenin、β-catenin）的差异表达,探讨它们在肺癌侵袭、转移机制中的作用。方法将高侵袭的肺腺癌细胞（A549）、高转移的肺癌细胞（95-D）、低转移的肺腺癌细胞（SPC-A-1）作常规细胞培养,采用Westen-blot免疫印迹法和逆转录-聚合酶链反应分别从蛋白质和mRNA水平上检测上皮型E-cad及α、β-catenin的表达情况。结果A549与95-D细胞株的E-cad及α、β-catenin表达量较低,95-D表达最弱,二者之间差异无统计学意义（P〉0．05）;SPC—A-1细胞株除E-cad弱表达外,α、β-catenin与95-D和A549比较呈明显强表达,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高转移能力的肺癌细胞E-cad和α、β-catenin表达低,低转移的肺癌细胞E-cad和α、β-catenin表达高,表明E-cad及cateinis在肺癌细胞侵袭和转移中起重要作用。     

nm23 mRNA表达与肺癌的分化转移及病理之间的相关性研究

目的研究肺癌中nm23 mRNA表达水平与肺癌病理分级和临床分期之间的关系.方法53例肺癌标本,46例(癌旁)正常肺组织,5例肺部良性结节性病变组织,用RT-PCR方法检测标本中nm23 mRNA的表达水平,根据手术、病理和影像学结果判断有无转移并确定分期,就nm23 mRNA表达水平与临床变量之间进行分析.结果nm23 mRNA在肺癌和(癌旁)正常肺组织中的阳性率分别为43.4%(23/53)和39.1%(18/46),P＞0.05;低分化、晚期、肺门纵隔淋巴结转移的非小细胞肺癌,其nm23 mRNA的表达量显著降低(P＜0.05).结论nm23 mRNA与肺癌的分化、转移及病理分期有关,检测nm23 mRNA水平有可能推测肺癌的预后.