烫伤大鼠肠屏障功能损伤与肠粘膜细胞凋亡的关系

本研究采用大鼠30%烫伤模型,于伤后3、6、12、48h取血和回肠组织检测内毒素浓度,血和肠粘膜二胺氧化酶(DAO)活性,肠粘膜丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平、肠粘膜DNA片段百分率(ap%)、DNA电泳以及凋亡细胞数.观察烫伤大鼠肠粘膜细胞凋亡的规律与肠粘膜屏障功能变化的关系,探讨细胞凋亡在肠屏障损伤中的作用.实验结果显示,血浆DAO活性于伤后6h开始升高,伤后12h和24h为伤前值的2.5倍和3倍;肠粘膜DAO活性则呈反向变化,表现为活性降低,并与肠粘膜ap%呈高度负相关(P＜0.01);伤后3h血浆内毒素、肠粘膜MDA含量、NO活性及肠粘膜ap%均开始升高,其峰值在伤后12h;相关分析表明,各项指标与ap%均呈高度正相关(P＜0.01);肠粘膜DNA电泳和病理学结果显示,伤后12hDNA电泳出现明确的DNA梯度,肠粘膜顶端和肠腺中可见凋亡细胞.研究结果提示,大鼠烫伤后肠屏障功能损伤,肠源性内毒素血症的形成与肠粘膜上皮细胞的病理性凋亡密切相关,而烫伤后氧化应激可能是加速肠粘膜上皮调亡的重要原因.     

血管扩张刺激磷蛋白在失血性休克肠屏障功能障碍中的作用

目的 观察大鼠小肠上皮血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator stimulated phosphoprotein,VASP)在失血性休克肠屏障功能障碍中的作用.方法 实验分为正常组、休克1、2、4 h组及休克2 h+环磷腺苷组,每组8只.测定各组血清二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性、血浆D-乳酸含量,并观察其与VASP表达的关系.结果 VASP磷酸化激动剂环磷腺苷可明显增强失血性休克2 h时VASP表达,降低血清DAO活性和血浆D-乳酸含量,与未加环磷腺苷组比较差异有统计学意义(t=18.62,9.28,2.83,P<0.05).失血性休克后大鼠血清DAO活性显著增高,而VASP表达明显降低,两者旱负相关(r=-0.95,P<0.05).结论 VASP降低是导致失血性休克大鼠肠屏障功能障碍的因素.环磷腺苷能改善肠屏障功能障碍.     

早期肠道喂养可降低严重烫伤大鼠肠淋巴液内毒素水平

目的观察早期肠道喂养对严重烫伤大鼠肠淋巴液中内毒素的影响,探讨严重烫伤大鼠早期肠道喂养在保护肠粘膜屏障中的作用。方法采用大鼠肠淋巴瘘模型,随机分为烫伤早期肠道喂养组,烫伤对照组和单纯手术对照组,致伤前和伤后3,6,12,24小时收集肠淋巴液,测定内毒素清除量,光镜、电镜观察回肠粘膜病理改变。结果烫伤后内毒素清除量明显升高;光镜观察表明,回肠绒毛中央乳糜管明显扩张,肠上皮细胞坏死脱落;电镜观察表明,肠上皮细胞间囊性扩张,微绒毛坏死脱落,线粒体空化、嵴断裂,核周间隙扩张。早期肠道喂养组,肠淋巴液内毒素清除量明显低于烫伤对照组;光镜和电镜观察表明,回肠粘膜病理改变有不同程度的减轻。结论早期肠道喂养对大鼠肠粘膜屏障具有保护作用,从而降低了肠淋巴液中内毒素水平。     

四君子汤加味防治烫伤后大鼠肠道损伤和细菌移位实验研究

目的　研究中药四君子汤加味对减轻烫伤后肠道损伤的影响。　方法　Wistar大鼠随机分为 3组 :烫伤治疗组 (简称治疗组 )管饲党参、茯苓、白术、甘草、大黄中药煎剂 2ml,2次 d ,烫伤对照组 (简称对照组 )和正常组管饲同量蒸馏水。根据指标设定于伤后不同时相点 ,分别处死大鼠检测肠粘膜和血浆中肿瘤坏死因子 (TNF)、一氧化氮 (NO)、丙二醛 (MDA)、ATP酶活性及肠粘液中S IgA含量 ,观察肠粘膜病理变化 ,行脏器组织细菌培养、血培养。　结果　中药四君子汤加味可明显降低烫伤大鼠血浆和肠粘膜TNF、NO和MDA含量 ,维持肠粘膜细胞分泌S IgA的功能 ,恢复T细胞数量 ,减轻肠粘膜屏障损害 ,减少脏器细菌检出率。　结论　中药四君子汤加味能够减轻肠粘膜损伤 ,防止肠道细菌移位     

早期肠道喂养可降低严重烫伤大鼠肠淋巴液内毒素水平

目的观察早期肠道喂养对严重烫伤大鼠肠淋巴液中内毒素的影响，探讨严重烫伤大鼠早期肠道喂养在保护肠粘膜屏障中的作用。方法采用大鼠肠淋巴瘘模型，随机分为烫伤早期肠道喂养组，烫伤对照组和单纯手术对照组，致伤前和伤后３，６，１２，２４小时收集肠淋巴液，测定内毒素清除量，光镜、电镜观察回肠粘膜病理改变。结果烫伤后内毒素清除量明显升高；光镜观察表明，回肠绒毛中央乳糜管明显扩张，肠上皮细胞坏死脱落；电镜观察表明，肠上皮细胞间囊性扩张，微绒毛坏死脱落，线粒体空化、嵴断裂，核周间隙扩张。早期肠道喂养组，肠淋巴液内毒素清除量明显低于烫伤对照组；光镜和电镜观察表明，回肠粘膜病理改变有不同程度的减轻。结论早期肠道喂养对大鼠肠粘膜屏障具有保护作用，从而降低了肠淋巴液中内毒素水平。     

早期肠道喂养可降低严重烫伤大鼠肠淋巴液内毒素水平

目的 观察早期肠道喂养对严重烫伤大鼠肠淋巴液中内毒素的影响，探讨严重烫伤大鼠早期肠道喂养在保护肠粘膜屏障中的作用。方法 采用大鼠肠淋巴瘘模型，随机分为烫伤早期肠道喂养组，烫伤对照组和单纯手术对照组，致伤前和伤后３，６，１２，２４小时收集肠淋巴液，测定内毒素清除量，光镜、电镜观察回肠粘膜病理改变。结果 烫伤后内毒素清除量明显升高；光镜观察表明，回肠绒毛中央乳糜管明显扩张，肠上皮细胞坏死脱落；电镜观察     

严重烫伤后肠源性感染与肠淋巴循环

为了探索严重烫伤后肠腔内的细菌和内毒素能否通过肠淋巴循环向全身播散,我们选用Wistar 大鼠46只,制作大鼠肠淋巴瘘模型,随后分为烫伤组和对照组,分别在烫伤前和烫伤后3、6、12、24小时收集肠淋巴液,动态检测肠淋巴液内毒素清除量,肠道细菌培养阳性率及菌量,以及回肠粘膜病理学检查。结果表明:烫伤后肠淋巴液内毒素清除量和肠道细菌阳性率及菌量明显增加;病理学检查发现:回肠绒毛中央乳糜管明显扩张,肠上皮细胞坏死脱落。提示:肠淋巴循环是严重烫伤后肠源性感染的另一重要途径;肠粘膜屏障受损是发生肠源性感染的重要因素。     

严重烫伤后肠源性感染与肠淋巴循环

为了探索严重烫伤后肠腔内的细菌和内毒素能否通过肠淋巴循环向全身播散，我们选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠４６只，制作大鼠肠淋巴瘘模型，随后分为烫伤组和对照组，分别在烫伤前和烫伤后３、６、１２、２４小时收集肠淋巴液，动态检测肠淋巴液内毒素清除量，肠道细菌培养阳性率及菌量，以及回肠粘膜病理学检查。结果表明：烫伤后肠淋巴液内毒素清除量和肠道细菌阳性率及菌量明显增加；病理学检查发现：回肠绒毛中央乳糜管明显扩张，肠上皮细胞坏死脱落。提示：肠淋巴循环是严重烫伤后肠源性感染的另一重要途径；肠粘膜屏障受损是发生肠源性感染的重要因素。     

ATP-MgCl_2对烫伤大鼠肠粘膜保护作用的实验观察

为研究 ATP-MgCl_2对创伤应激动物肠粘膜的保护作用,采用30%TBSAⅢ度烫伤大鼠模型,观察了腹腔注射 ATP-MgCl_2复合液对回肠粘膜丙二醛(MDA)含量及回肠组织形态学改变的影响。结果显示:烫伤后6～24小时,MDA 含量明显升高,并伴有形态学病理改变。经 ATP-MgCl_2注射治疗的大鼠伤后24小时内 MDA 含量维持于正常对照水平,且回肠粘膜病理改变减轻。提示:ATP-MgCl_2能够保护烫伤大鼠肠粘膜,其作用机理可能与降低肠粘膜的脂质过氧化反应有关。     

"休克心"对严重烫伤大鼠早期肝肾肠损害的启动作用

目的 了解"休克心"对严重烫伤大鼠早期肝、肾、肠损害是否具有启动作用.方法 将56只Wistar大鼠随机分为对照组(8只),不予烫伤;烫伤组(48只),大鼠背部造成30%TBSA Ⅲ度烫伤,设伤后0.5、1.0、3.0、6.0、12.0和24.0 h观察时相点,每时相点8只大鼠.伤后30 min按Park-land公式腹腔注射乳酸林格液(4 mL·kg-1·1%TBSA-1).检测大鼠肝、肾、肠血流量;动脉收缩压(SBP)、动脉舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室压力最大上升/下降速率(±dp/dt max);抽取各组大鼠静脉血检测其血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、总胆汁酸(TBA)、β2微球蛋白(β2-MG)、二胺氧化酶(DAO)含量.结果 伤后1.0 h烫伤组大鼠肝、肾、肠血流量均明显降低.伤后12.0 h内均呈持续下降趋势,至伤后24.0 h仍显著低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).烫伤组大鼠伤后1.0 h,LVSP和±dp/dt max即明显下降;伤后3.0 h,SBP、DBP、MAP明显下降;伤后6.0 h所有心脏功能指标均降低,至伤后24.0 h仍低于对照组(P＜0.01).与对照组[(1.71±0.07)μg/L]比较,伤后0.5 h烫伤组大鼠血清cTnI[(2.22±0.08)μg/L]即明显升高,伤后12.0 h[(7.07±0.44)μg/L]达峰值,伤后24.0 h[(4.57±0.30)μg/L]仍保持在较高水平(P＜0.01);伤后3.0 h血清TBA及伤后1.0 h血清β2-MG、DAO开始明显升高,并超过对照组(P＜0.05或P＜0.01),至伤后12.0 h仍呈上升趋势.结论 严重烫伤后心肌损害在时间上明显早于其他脏器,且与其他脏器损害指标和血流量呈显著相关,提示"休克心"可能是严重烫伤后早期肝、肾、肠血流量减少和损害的启动因素之一,但还需深入研究以进一步证明.     

天然蒙脱石防治烧伤后肠道细菌移位的实验研究

目的　探讨天然蒙脱石对烧伤大鼠肠道细菌移位的防治作用。　方法　SD大鼠54只,分为正常对照组6只、烧伤对照组与烧伤治疗组各24只。后两组大鼠预先喂服转染了质粒pUC19的示踪菌JM109,证实质粒已定植于其肠道后,制成30%TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤)模型。烧伤治疗组大鼠伤后立即喂服天然蒙脱石0. 6g d-1 kg-1,烧伤对照组大鼠不喂服药物。观察正常对照组大鼠以及烧伤对照组、烧伤治疗组大鼠伤后12h和1、3、5d血液、肠系膜淋巴结细菌移位情况,并行酶切鉴定;检测大鼠肠组织丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量;用病理学方法观察整段小肠的损伤情况,测量空肠黏膜绒毛高度并计算基底膜细胞核分裂相。　结果　血液细菌培养:伤后1、5d,烧伤对照组阳性鼠数多于正常对照组,烧伤治疗组阳性鼠数少于烧伤对照组(P<0 05).肠系膜淋巴结细菌定量:烧伤治疗组伤后1、5d为(38±16)、(68±20)集落形成单位(CFU) /g;烧伤对照组伤后1、5d为( 228±67 )、( 183±29 )CFU/g,明显高于前者(P<0. 01 ).MDA、SOD含量:烧伤治疗组与烧伤对照组伤后各时相点比较,差异有统计学意义(P<0. 05).烧伤治疗组大鼠伤后各时相点空肠绒毛高度及基底膜细胞核分裂相明显高于或多于烧伤对照组(P<0. 05或0. 01)。　结论　天然蒙脱石对严重烧伤大鼠肠     

丙酮酸乙酯对脓毒症休克犬肠黏膜屏障功能的保护作用

目的探讨丙酮酸乙酯（EP）对脓毒症休克犬肠黏膜屏障功能的影响。方法健康雄性杂种犬20只，内毒素（LPS）静脉注射复制犬脓毒症休克模型，随机分为对照组（8只）和EP组（12只）。对照组只接受林格液复苏。EP组另外给予丙酮酸乙酯首剂0．05g／kg．然后按0．05g·kg^-1·h^-1持续泵入。脓毒症休克模型建立前及建立后0、8、12和24h取血测定血浆二胺氧化酶（DAO）活性和血浆D-乳酸含量，试验24h处死动物后取小肠标本，进行肠黏膜炎性损伤病理学评分。结果EP组犬的肠黏膜炎性损伤程度病理学评分为2．33±0．25，明显轻于模型组的3．39±0．38，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。两组实验犬在休克后血浆D-乳酸含量和DAO活性逐渐升高，对照组较EP组升高更为明显（P〈0．05）。结论EP能显著改善肠组织灌流及功能指标，减轻肠黏膜的病理损害，对脓毒症休克时小肠有保护作用。     

大鼠烫伤早期肠黏膜组织热休克蛋白HSP70和HSP90的表达

目的 研究烧伤早期肠黏膜组织热休克蛋白HSP70和HSP90的表达、组织含量和分布的变化规律,探讨烧伤早期肠黏膜组织细胞的热休克反应在机体的病理生理反应中的意义。方法 以烫伤大鼠为模型,利用ELISA、免疫印迹分析和免疫组织化学方法,分析和研究肠黏膜组织HSP70和HSP90的表达、组织含量和分布及其功能状态。结果 (1)大鼠烫伤早期肠黏膜游离HSP70的含量有非常显的短暂降低;(2)肠黏膜组织HSP70和HSP90的总体含量在烧伤后有显升高;(3)烧伤早期肠黏膜组织HSP70的分子结构存在显的不均一性。结论 肠黏膜组织细胞中两种热休克蛋白表达、含量和分布的规律性变化,在肠黏膜组织细胞的应激反应、进而在肠道的黏膜屏障机制中,可能有重要的意义。     

休克期切痂对烫伤大鼠全身和肠道局部免疫功能的影响

目的　观察休克期切痂对烫伤大鼠全身和肠道局部免疫功能的影响 ,探讨其可能的机制。　方法　选用 96只Wistar大鼠。取其中 2 4只大鼠的躯干部皮肤冻存于液氮中 ,另取 8只作正常对照组。余下 6 4只造成 30 %TBSAⅢ度烫伤后 ,随机分为A组 2 4只 ,伤后不作任何处理 ;B组 2 4只 ,伤后 2 4h腹腔注射等渗盐水 5 0ml/kg,一次性切痂后用上述冻存异体皮覆盖 ;C组 1 6只 ,伤后 72h进行处理 ,方法同B组。检测A、B组大鼠伤后 2、4、8d和C组伤后 4、8d及正常对照组大鼠的脾淋巴细胞增殖功能、血浆和肠组织白细胞介素 (IL)2水平、肠黏液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)及肠组织中二胺氧化酶 (DAO)含量的变化。　结果　各时相点下A、B、C组大鼠脾淋巴细胞增殖功能、血浆IL 2水平、肠组织IL 2及肠黏液sIgA含量均较正常对照组减少。B组伤后 4、8d和C组伤后 8d的脾淋巴细胞增殖功能接近正常对照组 ,血浆和肠组织IL 2水平明显高于A组 (P <0.0 1)。伤后 4、8d,B组肠黏液sIgA含量分别为 (3.5 1± 2 .1 4 )、(3.0 3± 0 .95 )mg/g,C组分别为 (1 .4 0± 0 .6 4 )、(1 .5 2± 1 .2 6 )mg/g,B组较C组增加近 1倍 (P 0.0 1 )。A组伤后 4、8d肠组织DAO活性低于正常对照组和B组 (P 0.0 5)。结论　休克期切痂有助于烫伤大鼠全身和肠道     

巯基丙酰甘氨酸对严重烫伤延迟复苏大鼠氧自由基作用的观察

目的　观察严重烫伤大鼠延迟复苏后氧自由基的损伤及巯基丙酰甘氨酸 (硫普罗宁 )的保护作用。　方法　制作大鼠 30 %Ⅲ度烫伤模型 ,分为延迟复苏组、巯基丙酰甘氨酸治疗组 ,应用电子自旋共振仪 (ESR)检测技术和传统间接检测手段 ,观察伤后 2 4、4 8h血浆及烧伤水肿液中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)变化 ,同时观察心、肝、肾、小肠的病理形态变化 ,检测血生化指标。设不烫伤大鼠为正常对照组。　结果　延迟复苏组大鼠较正常对照组血浆SOD含量下降 ,血浆及水肿液MDA明显升高 ,各脏器病理形态及血生化指标明显改变。巯基丙酰甘氨酸治疗组大鼠较延迟复苏组SOD增高 (P <0 .0 1) ,血液及痂下水肿液MDA含量下降 (P <0 .0 5 ) ,脏器病理形态及血生化指标有所改善。　结论　严重烫伤大鼠延迟复苏后存在氧化应激损伤 ,应用巯基丙酰甘氨酸治疗有一定保护作用     

烫伤大鼠肠粘膜下调蛋白质组的分离及鉴定

目的 对烫伤后大鼠肠粘膜下调蛋白质组进行分离鉴定，探讨其在严重烫伤后肠粘膜损害发生中的作用。方法 采用大鼠Ⅲ度烫伤模型，利用高分辨双向电泳(2-DE)对肠粘膜组织进行蛋白质分离，用Image Master 2D Elite图像分析软件对差异蛋白质中的下调蛋白质组进行鉴定。结果 烧伤后6、12h两组明确下凋的蛋白质点数为34，进行鉴定及分析的蛋白质22个；与线粒体有关的下调蛋白质有线粒体乌头酸酶、丙酰辅酶A羧化酶、肝脏F-ATP酶重链A、肌钙蛋白-l、短链羟酰基辅酶A脱氢酶、P-电子转移[传递]黄素蛋白α亚基等6种；参与代谢的下调蛋白质有磷酸丙糖异构酶l和细胞溶质环氧化物水解酶；与细胞骨架蛋白及基质蛋白有关的下调蛋白质有纤维单元素、类动力蛋白-5、肌钙蛋白-2和碱性肌浆球蛋白轻链3共4种；参与调控的下调蛋白质有糖皮质激素诱导蛋白、核因子l-B2、BRCAl、雌二醇安息香酸盐转录因子、G-蛋白β-2亚基、N-甲基-D-天门冬氨酸受体l等6种；与免疫调控有关的下调蛋白质有T细胞受体-V-δ6和Ig重链V区蛋白l。结论 在大鼠烫伤后肠粘膜表达下调蛋白质中，以与线粒体有关及参与激素和细胞因子调控的蛋白质数量居多，说明大鼠烫伤后早期损伤发生机制与线粒体功能改变以及激素、细胞因子表达调控紊乱关系密切。     

高氧液对大鼠烫伤后肠黏膜下调蛋白质的影响

目的观察高氧液对烫伤大鼠肠黏膜下调蛋白质的影响,为伤后早期应用高氧液治疗提供理论依据。方法制作大鼠35%TBSAⅢ度烫伤模型,设烫伤后普通补液组(烫伤组)、伤后输入高氧液为干扰因素组(高氧液组)和正常对照组,每组6只。利用高分辨双向电泳(2DE)对肠黏膜组织进行蛋白质分离,采用Imagemaster2DElite图像分析软件进行分析,应用生物质谱、蛋白质库及文献分析等方法研究高氧液对大鼠烫伤后肠黏膜下调蛋白质的影响。结果烫伤组大鼠明确下调的34个蛋白质点中,高氧液组出现明确上调的蛋白质点数为9。它们是线粒体乌头酸酶、丙酰辅酶A羧化酶、短链羟酰基辅酶A脱氢酶、雌二醇安息香酸盐转录因子、磷酸丙糖异构酶1、T淋巴细胞受体Vδ6和类动力蛋白5。结论高氧液可以上调大鼠严重烧伤后早期肠黏膜中的下调蛋白质,进而部分恢复肠黏膜的屏障功能。     

烫伤大鼠肠粘膜前列腺素水平与前列腺素转移因子mRNA表达的变化

目的　探讨烫伤大鼠肠粘膜前列腺素E2 (PGE2 )、前列腺素I2 (PGI2 )、血栓素A2 (TXA2 )水平和前列腺素转移因子 (PGT)mRNA表达变化及其意义。　方法　以 30 %TBSAⅢ度烫伤大鼠为模型 ,以放射免疫法测定肠粘膜中PGE2 、PGI2 、TXA2 的含量 ,用原位杂交检测PGTmRNA表达。　结果　大鼠肠粘膜PGE2 、PGI2 水平在伤后 12h升高 ,随后明显降低 (P <0.0 5～ 0.0 1);TXA2 水平在伤后 2 4、4 8h明显高于正常水平 (P <0.0 5 );PGTmRNA表达在伤后有增加的趋势。　 结论　烫伤后肠粘膜PGE2 水平降低及TXA2 水平升高 ,可能是肠粘膜损伤的机制之一 ;PGT对伤后PGs水平具有调节作用     

烫伤大鼠肠粘膜环氧合酶活性和mRNA表达的变化

目的　探讨烫伤大鼠伤后 72h内肠粘膜环氧合酶 (COXs)活性和mRNA表达的变化及其意义。　方法　采用 30 %TBSAⅢ度烫伤大鼠模型 ,用底物荧光法检测COX 1、COX 2酶活性变化 ,RT PCR法检测COX 1、COX 2mRNA的表达。　结果　烫伤后大鼠肠粘膜内COX 2酶活性和mRNA表达明显升高 ,而COX 1酶活性和mRNA表达变化幅度较小。　结论　COXs参与了烫伤大鼠肠粘膜损伤的病理过程 ,两种异构酶可能发挥不同的作用。