鼻咽癌CNE-2细胞株胰岛素样生长因子-1受体和表皮生长因子受体沉默的放疗增敏机理

目的:评价RNA干扰(RNAi)同时沉默胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)和表皮生长因子受体(EG-FR)后生物学特性变化及对鼻咽癌CNE2细胞株放疗敏感性的改变。方法:构建荧光标记的靶向IGF-1R及EGFR信使RNA真核表达质粒,质粒转染鼻咽癌CNE2细胞株,共聚焦显微镜观察细胞转染结果,行平板克隆实验检测细胞存活分数;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western-blot法检测细胞周期相关蛋白cdk4/6,cyclin D1和c-myc。结果:成功构建真核表达质粒;siRNA-IGF-1R和EGFR组的细胞存活分数显著降低(P<0.05),与对照组相比,凋亡率显著增高(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显增多,而S期和G2/M期细胞比例明显减少,细胞周期相关蛋白cdk4/6,cyclin D1和c-myc蛋白表达降低(P<0.05)。结论:RNA同时干扰沉默IGF-1R和EGFR可以引起鼻咽癌细胞周期蛋白表达降低,细胞周期阻滞,促进细胞凋亡。     

EGF受体和IGF-1受体在人鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)和胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)在人鼻咽癌(NPC)组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测NPC组织及鼻咽非肿瘤组织EGFR和IGF-1R蛋白以及用RT-PCR法检测EGFR和IGF-1R mRNA的表达。结果:EGFR和IGF-1R蛋白在NPC组织的过表达率分别为65.3%(49/75)和56%(42/75),在鼻咽非肿瘤组织中过表达率分别为0%和14.3%(3/21)。鼻咽癌组与对照组相比,EGFR蛋白表达有统计学意义(P<0.01),鼻咽癌组织中EGFR和IGF-1R蛋白的过表达对不同年龄、性别的患者无统计学差异,但与淋巴结转移、远处转移、复发和5年生存率有相关性(P<0.01或P<0.05)。鼻咽癌组与对照组相比,IGF-1R mRNA和EGFR mRNA表达亦有统计学差异(P<0.01或/P<0.05)。EGFR和IGF-1R两者在鼻咽癌中表达呈正相关(r=0.367,P=0.001)。结论:EGFR和IGF-1R mRNA和蛋白过度表达可能与鼻咽癌的复发和转移有关,检测EGFR和IGF-1R mRNA和蛋白过度表达可作为判断鼻咽癌复发和转移的潜在指标之一。     

IGF-1R和EGFR在中晚期胃癌中的表达及其对预后的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）和表皮生长因子受体（EGFR）在胃癌中的表达及其与术后预后的关系。方法采用免疫组化链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物法（SABC）,对84例中晚期胃癌术后患者的标本进行IGF-1R和EGFR检测,并对患者术后生存时间进行统计。结果 67例（79.7%）高表达IGF-1R患者的术后平均生存时间明显低于低表达IGF-1R患者（〈0.01）;52例（61.9%）高表达EGFR患者的术后平均生存时间略低于低表达IGF-1R组,但差异无统计学意义（〉0.05）。结论 IGF-1R可以作为治疗胃癌的靶点之一。     

胰岛素样生长因子1及受体与肿瘤的关系

胰岛素样生长因子1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)是体内重要的生长因子。资料表明IGF-1R介导IGF-1的活性,促进细胞增殖、转化、抑制细胞凋亡与肿瘤的发生、发展关系密切。而肿瘤细胞的凋亡、浸润、转移的生物学特性则是由相关因子作用表现的,如Bcl-2家族、整合素、血管内皮生长因子等。本文就IGF-1和IGF-1R与这些因子的作用机制作一阐述。     

表皮生长因子受体和转化生长因子Ⅱ型受体在胃癌组织中的表达

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)和转化生长因子Ⅱ型受体(TβRⅡ)在胃癌组织中的表达。方法采用SABC法对30例慢性浅表性胃炎、30例胃溃疡、30例胃癌标本进行表皮生长因子受体(GEFR)和转化生长因子Ⅱ型受体(TβRⅡ)检测。结果EGFR和TβRⅡ在慢性浅表性胃炎、胃溃疡、癌胃组织中的表达不同,癌胃组明显高于胃溃疡组和慢性浅表性胃炎组(P<0.01);EGFR和TβRⅡ表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤的部位及大小无明显关系(P>0.05),两者均与临床分期有关,Ⅲ~Ⅳ期明显高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.0 5);同时TβRⅡ与EGFR在胃癌中的表达无显著性差异(P>0.0 5),两者共同表达符合率为93.3%。结论EGFR、TβRⅡ在胃癌中有过度表达,其表达与胃癌的进展、转移有关,与胃癌患者年龄、性别、肿瘤的部位及大小无关;同时二者在胃癌组织中有协同表达。     

IGF-2 IGF-1R在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:检测胰岛素样生长因子-2(IGF-2)及其受体IGF-1R在宫颈癌组织中的表达,评价IGF-2和IGF-IR的临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测15例正常宫颈组织及50例宫颈癌组织中IGF-2、IGF-IR的表达,同时对IGF-2和IGF-IR表达与宫颈癌各临床病理参数之间的关系进行分析。结果:宫颈癌组织中IGF-2和IGF-1R阳性率分别为74%、76%,均显著高于正常宫颈组织的13.33%、26.67%(P<0.001)。宫颈癌组织中IGF-2、IGF-1R两者表达呈明显正相关(P<0.05)。IGF-2的表达在不同临床分期中有显著差别(P<0.05),IGF-2与IGF-1R的表达在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中有显著差别(P<0.05)。结论:IGF-2与IGF-1R的高表达与宫颈癌的发生发展和侵袭转移有关。     

The effect of IGF-IR and erlotinib on the apoptosis of HO-8910 cells

目的 观察单用胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)抑制剂鬼臼苦素(PPP)或联合表皮生长因子受体抑制剂厄洛替尼对卵巢上皮性癌HO-8910细胞的影响.方法 使用PPP处理HO-8910细胞后,采用SRB法检测细胞的增殖情况;PI染色法检测细胞周期;Annexin-V和PI双染检测细胞凋亡;依据中效原理,使用CombiDrug 软件分析PPP与厄洛替尼的协同作用.结果 PPP可抑制HO-8910细胞增殖,呈现时间剂量依赖性,其抑制作用与诱导细胞G2/M期阻滞和凋亡相关;PPP联合厄洛替尼较单用PPP或厄洛替尼能显著抑制HO-8910细胞增殖,两者联合具有协同作用.结论 特异性抑制IGF-1R可以抑制卵巢癌细胞生长,诱导其凋亡;在卵巢癌的治疗中,IGF-1R和EGFR可能具有联合靶向治疗价值.     

新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤ER-α、IGF-1R的表达及双重表达

目的 了解胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R),雌激素受体-α(ER-α)在新生雌性SD大鼠脑中的分布和共表达,以及在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时的变化。方法 采用右侧颈总动脉结扎加缺氧处理的7日龄SD雌性大鼠,建立HIBD模型。用免疫组织化学和免疫组化双重染色法,检测IGF-1R、ER-α在新生雌性大鼠大脑的表达及共表达。结果 ①新生雌性SD大鼠脑中有广泛的ER-α和IGF-1R及IGF-1R、ER-α双阳性细胞分布;②大鼠HIBD急性期大脑皮层IGF-1R、ER-α及IGF-1R、ER-α双阳性细胞的表达无变化,在恢复期表达均增加。结论 IGF-1R、ER-α可能共同参与了HIBD后脑损伤的修复过程。     

IGF-1R抑制剂与厄洛替尼对卵巢上皮性癌HO-8910细胞凋亡的影响

目的观察单用胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)抑制剂鬼臼苦素(PPP)或联合表皮生长因子受体抑制剂厄洛替尼对卵巢上皮性癌HO-8910细胞的影响。方法使用PPP处理HO-8910细胞后,采用SRB法检测细胞的增殖情况;PI染色法检测细胞周期;Annexin-V和PI双染检测细胞凋亡;依据中效原理,使用CombiDrug软件分析PPP与厄洛替尼的协同作用。结果 PPP可抑制HO-8910细胞增殖,呈现时间剂量依赖性,其抑制作用与诱导细胞G2/M期阻滞和凋亡相关;PPP联合厄洛替尼较单用PPP或厄洛替尼能显著抑制HO-8910细胞增殖,两者联合具有协同作用。结论特异性抑制IGF-1R可以抑制卵巢癌细胞生长,诱导其凋亡;在卵巢癌的治疗中,IGF-1R和EGFR可能具有联合靶向治疗价值。     

胎盘中胰岛素样生长因子受体表达水平与巨大儿关系的研究

目的:研究胰岛素样生长因子(IGFs)受体在足月胎盘中的表达水平,为探讨巨大儿的发生机理提供一定的依据。方法:采用RealTim e PCR技术对足月分娩的37例巨大儿和同期37例正常体重儿胎盘组织中胰岛素样生长因子受体的mRNA进行检测,应用Pearson相关和Logistic回归模型分析IGFs受体与发生巨大儿的相关性。结果:单因素分析巨大儿组胎盘中IGF-1R mRNA、IGF-2R mRNA表达水平显著高于对照组。经多因素非条件Logistic回归分析表明胎盘中IGF-1R mRNA表达量增多是巨大儿发生的独立危险因素。结论:IGF-1R mRNA在胎盘组织中表达水平的增加可能与巨大儿的发生有关。     

β-抑制蛋白1在胰岛素样生长因子-l受体的内化和泛素化中的作用

目的:探讨β-抑制蛋白1分子在过度表达胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的肿瘤细胞中IGF-1R膜受体内化和泛素化降解的作用。方法:采用免疫印迹法(WB)、免疫沉淀技术(IP)和FACS技术对鼠胚胎成纤维瘤3种细胞株[P6、β-抑制蛋白1阳性(WT1)和β-抑制蛋白1阴性KO细胞]进行IGF-1R内化检测。结果:在IGF-1R过度表达的P6细胞随配体刺激时间的增加内化IGF-1R明显增加,但非内化IGF-1R的水平明显降低;在β-抑制蛋白1阴性细胞株随配体刺激时间的增加非内化IGF-1R的水平保持不变,而无IGF-1R内化产生,但阳性对照可以看到条带清晰的IGF-1R;使用FACS分析也证实了两个细胞株的WB结果,同时检测在细胞通路中IGF-1R内化的作用在β-抑制蛋白1阴性细胞检测不到磷酸化的pERK。结论:在β-抑制蛋白1缺乏的情况下IGF-1R内化不能发生,β-抑制蛋白1可作为一个调节IGF-1R内化的工具,也表明IGF-1R内化对细胞通路之一的MAPK是必需的。     

EGF和IGF-1受体特异性siRNA真核表达载体的设计、构建及鉴定

目的构建能表达靶向EGF RmRNA和IGF-1 RmRNA的siRNA真核表达质粒。方法从GeneBank中搜索EGFR（NM 000875）和IGF-1 R（NM 201283）基因组标准序列,根椐siRNA设计原理各基因选取两段19bp的碱基序列作为靶目标,并根据其序列构建真核表达质粒。随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列,构建表达siRNA的真核表达质粒作为质粒对照psiPC。转染后分别培养12h、24h、36h、48h、60h、72h,以转染率高的时间点的鼻咽癌细胞做流式细胞仪检测转染率,并采用共聚焦显微镜检测质粒绿色荧光蛋白的表达。结果质粒psiEGFR1、psiEGFR2、psiIGF-1 R1、psiIGF-1 R2和psiPC酶切后均可见400bp小带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;经荧光显微镜下摄片计算转染效率发现：在转染48h达最高（55%～60%之间）;流式细胞仪检测转染后48h的转染率为57.45%,共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达绿色荧光。结论本实验构建了靶向EGFRmRNA和IGF-1 RmRNA、表达短发夹RNA（shRNA）的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞并在其中表达,能下调鼻咽癌细胞EGFR和IGF-1 R的表达。     

IGF-2、IGF-1R在早期宫颈癌中的表达及临床意义

目的检测胰岛素样生长因子-2(IGF-2)及其受体IGF-1R在早期宫颈癌组织中的表达,评价IGF-2和IGF-1R的临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测15例正常宫颈组织及50例Ⅰb-Ⅱa期宫颈癌患者宫颈组织中IGF-2、IGF-1R的表达,同时对IGF-2和IGF-1R表达与宫颈癌各临床病理参数之间的关系进行分析。结果宫颈癌组织中IGF-2和IGF-1R阳性率分别为74%、76%,均显著高于正常宫颈组织的13.33%、26.67%(p<0.001)。宫颈癌组织中IGF-2、IGF-1R两者表达密切相关(P<0.05)。IGF-2的表达在不同肿瘤分期中差异有显著性(P<0.05),IGF-2与IGF-1R的表达在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中差异有显著性(P<0.05)。结论IGF-2与IGF-1R的高表达与宫颈癌的发生、发展及侵袭转移有关     

子宫肌瘤中ER、PR和IGF-1受体表达的研究

目的：探讨人子宫肌瘤及周围正常子宫平滑肌细胞中胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）的变化及其与雌、孕激素受体的关系。方法：免疫组织化学SABC法检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、IGF-1R的表达,并对其进行图像分析。结果：子宫肌瘤细胞中ER、PR、IGF-1R的表达明显高于子宫肌层细胞的表达。结论：子宫肌瘤的生长与子宫肌瘤组织ER、PR、IGF-1R的表达增强有关。     

胰岛素样生长因子1在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药机制中的作用

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株和患者中的表达和临床意义。方法 ELISA法检测PC9、A549、H1975细胞和患者血清IGF-1水平,蛋白质印迹和免疫细胞化学法检测细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的表达;MTT法检测吉非替尼和IGF-1受体拮抗剂BMS536924处理后的细胞增殖;收集84例接受EGFR-TKIs治疗患者的临床资料,分析IGF-1表达与临床病理特征和生存期的相关性。结果同吉非替尼敏感细胞株PC9相比,耐药细胞株H1975和A549中IGF-1表达增加(P<0.05),IGFBP表达降低;加入不同浓度的BMS536924可促进吉非替尼对耐药细胞株的增殖抑制(P<0.05)。在接受EGFR-TKIs治疗的患者中,疾病进展者的IGF-1水平较疾病控制者有所增高(P=0.052);原发性耐药者较获得性耐药者的IGF-1水平升高(P=0.02)。IGF-1表达阴性患者的生存期高于阳性患者(P=0.002)。结论 IGF-1在耐药NSCLC细胞株及患者血清中均有高表达,使用IGF-1R拮抗剂可逆转耐药细胞对EGFR-TKIs的反应;IGF-1表达与患者预后相关。     

表皮生长因子受体在输卵管妊娠蜕膜组织的表达及其意义

目的:检测表皮生长因子受体(EGFR)在输卵管妊娠蜕膜组织的表达,探讨EGFR在输卵管妊娠中的作用。方法:采用免疫组织化学SP法,检测石蜡包埋的输卵管妊娠蜕膜组织中的EGFR的表达,并与正常输卵管黏膜及正常宫内早孕子宫蜕膜组织比较。结果:定性结果表明,在输卵管妊娠蜕膜组织中和正常输卵管组织中EG-FR均主要表达在输卵管上皮细胞及腺上皮细胞的胞膜;而在正常的子宫蜕膜中主要表达在间质细胞;半定量结果表明,EGFR在输卵管妊娠蜕膜组织中的表达强于正常输卵管组织,但弱于正常宫内早孕蜕膜组织,差异均有显著性(均为P<0.05)。结论:输卵管妊娠时,高水平EGFR是使滞留在输卵管的胚泡着床于输卵管的重要因素。     

吉非替尼联合塞来昔布对肺腺癌细胞凋亡和EGFR、COX 2表达的影响

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂吉非替尼联合环氧合酶 2（COX 2）抑制剂塞来昔布对肺腺癌A549细胞株凋亡和EGFR、COX 2表达的影响。方法A549细胞培养于RPMI 1640培养液中,实验分为正常对照组、吉非替尼5?μmol/L组、塞来昔布25?μmol/L组、吉非替尼5?μmol/L联合塞来昔布25?μmol/L组。药物干预细胞48?h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞抑制率、流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡和药物作用周期、免疫荧光检测EGFR和COX 2蛋白的表达情况。结果吉非替尼和塞来昔布对A549细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,两制剂联合作用时抑制作用更强（P<0.01）。吉非替尼和塞来昔布均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞凋亡率更高（P<0.01）;联合用药与单独用药相比,可使细胞发生明显的G1期阻滞（P<0.01）,进一步下调了EGFR和COX 2蛋白的表达（P<0.05）。结论吉非替尼与塞来昔布联合应用具有协同作用,可进一步抑制细胞的生长。     

染料木素促乳癌细胞增生和IGF-1R mRNA表达机制

目的 研究染料木素促人乳癌(MCF-7)细胞增生及IGF-1R mRNA 表达机制.方法 MCF-7细胞常规培养后,用ICI182,780或JB-1与染料木素共同培养,以阻断雌激素受体(ER)或IGF-1R.MTT法观察细胞生长情况,RT-PCR技术观察IGF-1R基因表达情况.结果 染料木素对MCF-7细胞具有增生效应,与对照组相比差异有统计学意义(F=14.627,q=3.76,P＜0.05),此效应可以被ER拮抗剂ICI182,780或IGF-1R拮抗剂JB-1完全阻断(q=3.89、4.25,P＜0.05);染料木素可增加IGF-1R基因表达(F=21.695,q=4.94,P＜0.01),此效应也能够被ICI182,780或JB-1完全阻断(q=5.03、5.89,P＜0.01).结论 染料木素可以促进MCF-7细胞的增生和IGF-1R mRNA的表达,此作用可以被ER 拮抗剂ICI182,780或IGF-1R拮抗剂JB-1完全阻断.     

miR-503通过靶定IGF-1R基因抑制胃癌生长与侵袭

目的探讨miR-503在胃癌细胞生长及侵袭中的作用,并探索其相关分子机制。方法利用Realtime PCR检测人胃癌及癌旁组织miR-503及IGF-1R的mRNA表达情况。在人胃癌细胞系MGC-803和SGC-7901中瞬时转染miR-503模拟物和模拟物对照,运用平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测miR-503的作用。在MGC-803和SGC-7901中转染IGF-1R干扰RNA和对照siRNA,利用Western blot检测IGF-1R蛋白表达情况,并进一步检测IGF-1R对细胞克隆形成和侵袭能力的影响。结果 miR-503在胃癌中呈现低表达（P〈0.01）,IGF-1R的mRNA呈现高表达（P〈0.01）。与对照组细胞相比,转染miR-503模拟物的细胞克隆数目明显减少（P〈0.01）,发生侵袭的细胞也减少（P〈0.01）,IGF-1R蛋白水平降低。转染IGF-1R干扰RNA的细胞中IGF-1R蛋白水平较对照组降低,且克隆形成和侵袭能力较对照组明显降低（P〈0.01）。结论 miR-503可以通过靶定IGF-1R基因调控胃癌细胞的生长和侵袭,发挥抑癌作用,具有作为胃癌分子治疗和预后靶标的潜能。