莱菔硫烷抑制人胃癌SGC7901细胞增殖及其诱导凋亡分子流行病学研究

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）在体外对人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用,探讨SFN诱导细胞凋亡的分子机理。方法以SFN和人胃癌细胞SGC7901为研究对象。采用四甲基偶氮唑盐比色法观察不同浓度SFN对细胞增殖的抑制影响,AO/EB双重染色法与透射电镜进行形态学变化观察,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡状态下的DNA变化,RT-PCR检测细胞p21基因mRNA表达。结果 50～150μmol/L浓度范围的SFN对SGC7901细胞的增殖有明显的抑制作用。AO/EB染色结果显示SFN诱导SGC7901细胞凋亡发生形态学上改变。DNA琼脂糖凝胶电泳显示细胞经SFN（100μmol/L、150μmol/L）处理24 h后可见＂梯形＂DNA碎片条带。RT-PCR结果显示50μmol/L SFN能够诱导p21基因mRNA的表达增强。透射电镜观察到SFN作用SGC7901细胞48 h后出现核固缩等早期凋亡镜下改变。结论 SFN能抑制SGC7901细胞的增殖并诱导SGC7901细胞凋亡,可在翻译和转录水平上调p21的表达,其分子机理可能与调控p21基因存在关系。     

苦参碱诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的 研究苦参碱对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡机制.结果 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的抑制作用,荧光显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪技术(FCM)观察细胞周期及凋亡.结果 不同浓度苦参碱对Hep-2细胞有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性;FCM检测结果 显示:S期细胞比例及凋亡率增高,G2/M期细胞比例下降,且呈剂量依赖性;形态学发现Hep-2细胞染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体形成;DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带.结论 苦参碱可能是通过将人喉癌细胞周期阻滞在S期,诱导喉癌细胞凋亡,抑制其增殖,发挥其抗癌功能.     

抗菌肽17BIPHE2通过阻滞肺腺癌A549细胞周期促进其凋亡

目的探讨抗菌肽17BIPHE2抑制人肺腺癌A549细胞增殖机制。方法 MTT比色法检测0~40μmol·L-1的抗菌肽17BIPHE2对A549细胞和正常肺上皮BEAS-2B细胞增殖的影响;流式细胞仪检测17BIPHE2对A549细胞细胞周期、线粒体膜电位、细胞内钙离子的影响;TUNEL染色和流式细胞仪检测17BIPHE2诱导的A549细胞凋亡。结果抗菌肽17BIPHE2可选择性抑制肺腺癌A549细胞增殖(P0.05),对正常肺上皮BEAS-2B细胞无明显抑制作用;A549细胞经不同浓度抗菌肽17BIPHE2处理24 h后,细胞周期阻滞于S期(P0.05);同时抗菌肽17BIPHE2能够明显降低A549细胞中线粒体膜电位(P0.05),随着17BIPHE2浓度不断增加,A549细胞内钙离子浓度也明显升高(P0.05);结论抗菌肽17BIPHE2可能通过阻滞A549细胞细胞周期,降低线粒体膜电位、升高细胞内钙离子浓度从而诱导A549细胞凋亡。     

植酸对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的了解植酸对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法MTT法检测植酸在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;AO/EB荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;免疫组化法检测凋亡调控基因P53蛋白的表达。结果植酸在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡。免疫组化实验结果表明,植酸可以抑制SGC-7901细胞中凋亡相关P53蛋白的表达。结论植酸在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于P53蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

甘草提取物(GL-1)对Hela细胞增殖抑制及促凋亡作用

目的提取甘草抗肿瘤成份(GL-1),探讨其对人宫颈癌He La细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法通过水提法、丙酮萃取、甲醇分离提取得到甘草提取物GL-1,并通过液质连用技术分析其主要成分,通过MTT比色法观察GL-1对He La细胞增殖抑制作用;AO(吖啶橙)/EB(溴化乙锭)双荧光染色法检测He La凋亡情况;透射电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果 GL-1含有9种主要组成成份。GL-1对He La细胞的生长增殖有抑制作用,其作用于Hela细胞12、24、48 h的半数抑制浓度分别为51.90、22.30、16.10μg/m L(P0.05);AO/EB染色观察到25、50μg/m L剂量组He La细胞均有不同程度的凋亡作用;透射电镜观察可见典型细胞凋亡形态。结论GL-1具有抑制He La细胞生长增殖作用,并可诱导He La细胞凋亡。     

甘草提取物(GL-1)对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制及促凋亡作用

目的提取中药甘草提取物(GL-1),研究其对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法将甘草粉末溶于水后取沉淀部分、经丙酮萃取、甲醇分离处理,得到甘草提取物GL-1。通过MTT比色法观察不同浓度的GL-1对SGC-7901细胞增殖抑制情况;AO(吖啶橙)/EB(溴化乙锭)双荧光染色法检测SGC-7901细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪测定各浓度组细胞凋亡率。结果 GL-1对SGC-7901细胞的生长增殖有抑制作用,在12、24、48 h作用于SGC-7901细胞的半数抑制浓度分别为24.18、20.03、15.60μg/m L(P0.05);AO/EB染色结果表明12.5、25、50μg/m L剂量组SGC-7901细胞均有不同程度的凋亡作用;流式细胞仪检测结果表明,GL-1对SGC-7901细胞的诱导凋亡作用具有浓度依赖性。结论 GL-1具有抑制SGC-7901细胞生长增殖作用,并能诱导SGC-7901细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞(BEL-7402)凋亡研究

目的探寻三氧化二砷对人肝癌细胞株（BEL-7402）的增殖抑制作用及诱导其凋亡的作用效果.方法采用噻唑蓝（MTT）法判定As2O3对BEL-7402细胞的细胞毒作用;用AO/EB荧光染色观察细胞的形态学变化;采用单细胞电泳和流式细胞光度术研究细胞凋亡和细胞周期的变化.结果三氧化二砷能显著抑制BEL-7402细胞的生长,10,20μg/ml可出现较为典型的细胞凋亡的形态变化,细胞发生彗星样电泳图像,并且出现典型的亚二倍体凋亡峰,其作用表现为细胞周期特异性,主要作用于细胞周期的S期.结论三氧化二砷对肝癌BEL-7402细胞具有很强的细胞毒作用,诱导细胞凋亡是其主要作用机制之一.     

二甲双胍对肺癌细胞A549放疗增敏作用及机制研究

目的探讨二甲双胍对肺癌A549细胞的放射增敏作用及其潜在的机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度二甲双胍对A549细胞的抑制作用,计算IC_(50)值;细胞克隆形成实验检测二甲双胍联合放疗的增敏作用;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;免疫印迹法检测DNA损伤蛋白γ-H2AX,DNA修复蛋白DNA-PK,Ku80,Ku70的表达。结果我们发现5mM浓度的二甲双胍增强了A549细胞的放射敏感性。克隆形成实验结果显示放疗联合5mM二甲双胍24小时后细胞存活分数(SF值)为1.39,单纯放疗组SF值为0.1;流式细胞技术结果显示6 Gy放疗联合5mM二甲双胍组24小时后G2/M期比例为8%,早期凋亡率为34.9%,而单纯放疗组G2/M期比例为26%,早期凋亡率为10.6%。免疫印迹结果显示5mM二甲双胍与6 Gy放射联合作用于A549细胞24小时,二甲双胍能够上调DNA损伤蛋白γ-H2AX表达,下调DNA修复蛋白DNA-PK,Ku70及Ku80表达(P0.01)。结论体外实验中,我们发现二甲双胍增敏放疗的机制是降低放疗相关的G2检查点及抑制DNA损伤修复。     

MMP-9ASODN对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制初步探讨

目的 探讨基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸(MMP-9ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN转染对A549细胞周期和凋亡比率的影响;RT-PCR法与Western blot法分别检测MMP-9ASODN转染对A549细胞内MMP-9mRNA及蛋白表达的影响.结果 在一定范围内,MMP-9ASODN对A549细胞生长抑制呈浓度和时间依赖性,反叉寡核苷酸浓度为600 nmo/L作用48 h时其抑制作用最明显;MMP-9ASODN转染A549细胞48 h后G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少,G2期细胞数则无明显变化,其凋亡百分比明显升高;与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);细胞内MMP-9mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于对照组(P＜0.01).结论 MMP-9ASODN转染能够有效能够抑制肺腺癌A549细胞的增殖同时诱导其凋亡,其机制可能是通过下调MMP-9mRNA及蛋白的表达.     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

甘草提取物(Gc34)对MDA-MB-231乳腺癌细胞体外促凋亡作用研究

目的观察甘草提取物Gc34对MDA-MB-231细胞的体外促凋亡作用。方法 MTT法检测不同时间(24、48、72h),不同浓度(25、50、75、100μg/ml)Gc34对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;采用AO/EB染色、透射电镜实验判断凋亡;流式细胞仪检测其凋亡率。结果 MTT结果显示,随着Gc34作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降,Gc34对MDA-MB-231细胞体外增殖抑制呈明显的剂量-时间依赖性,72h半数抑制浓度(IC50)为65.38μg/ml;AO/EB染色表明药物组细胞出现明显凋亡迹象,而阴性对照组中细胞形态完好;透射电镜结果显示,75μg/ml Gc34处理72h后细胞出现典型凋亡形态学改变;流式细胞仪分析结果显示,随Gc34剂量增加细胞凋亡率逐渐上升,呈明显的剂量依赖性。结论甘草提取物Gc34在体外能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡。     

越橘提取物花色苷对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:研究越橘提取物花色苷对宫颈癌Hela细胞的影响作用。方法:以不同浓度的越橘提取物花色苷作用于宫颈癌Hela细胞48h,采用MTT法观察越橘花色苷对Hela细胞的生长抑制作用,荧光染色观察细胞形态学改变,以流式细胞术观察DNA含量和细胞凋亡的变化情况,同时检测细胞培养上清液中IL-10、IFN-γ、TNF-α的变化。结果:Hela细胞用10、20、30、40mg/ml的越橘提取物花色苷处理48h后,随越橘花色苷浓度加大,细胞抑制率显著升高;荧光染色可见,浓染致密的颗粒状荧光,并呈现凋亡核固缩形态;流式细胞仪检测,细胞周期改变明显;IFN-γ和IL-10高于对照组,但IFN-γ与对照组有显著差别(P0.05);各组之间TNF-α变化不明显(P0.05)。结论:越橘提取物花色苷在体外对宫颈癌Hela细胞的生长有明显地抑制作用,可能与其改变细胞DNA周期、促进调亡有关。     

曲古抑菌素A对鼻咽癌CNE3细胞增殖抑制作用

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)对鼻咽癌CNE3细胞周期阻滞与凋亡影响及作用机制.方法 以不同浓度TSA作用鼻咽癌CNE3细胞株,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率;流式细胞术测定TSA作用前后鼻咽癌细胞调亡情况及细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析鼻咽癌细胞中细胞周期素依赖性蛋白激酶相互作用蛋白1(p21)mRNA表达的变化.结果 100～500 nmol/L TSA对CNE3细胞生长有明显抑制作用,呈剂量依赖性,抑制率为17.74%～44.33%;400,500 nmol/L TSA可在DNA合成期(S)、DNA合成后期/有丝分裂期(G2/M)诱导CNE3细胞周期阻滞,并诱导细胞凋亡,24 h凋亡率为(14.67±0.21)%,(18.73±1.80)%,48 h凋亡率分别为(16.3±0.96)%,(39.17±1.27)%,与对照组(9.16±1.05)%比较差异均有统计学意义(P<0.05);TSA可诱导CNE3细胞内p21基因表达.结论 TSA可明显抑制CNE3细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与p21基因异常表达有关.     

香加皮水提取物诱导人食管癌细胞TE-13凋亡的实验研究

[目的]运用多种技术手段研究香加皮水提取物诱导人食管癌细胞TE-13凋亡.[方法]利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测药物对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人食管癌TE-13细胞凋亡率、细胞周期变化;DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测肿瘤细胞凋亡的DNA水平变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内钙离子浓度变化.[结果]经香加皮水提取物处理的人食管癌细胞TE-13出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量药物处理组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性,250μg/ml香加皮水提取物处理组的抑制率达91.02%.DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的梯形电泳条带.药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达20.3%.各剂量药物处理组的肿瘤细胞内的Ca2 浓度明显高于对照组(P<0.01).[结论]香加皮水提取物可明显抑制人食管癌细胞TE-13的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布,阻止细胞周期于G2/M期.     

玉米紫色植株色素体外诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的初步研究

[目的]研究玉米紫色植株色素(PMPP)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。[方法]MTT法比较不同浓度的PMPP对体外培养的肺癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,同时应用倒置显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。[结果]不同浓度PMPP溶液对A549细胞的增殖均有抑制作用,浓度为50mg/ml时的抑制率最大,约为85.35%。形态学表现为单位视野内细胞数量明显减少,细胞间隙增大,细胞体积明显缩小,细胞失去原有的形态,胞体皱缩变圆,出现膜发泡现象。流式细胞术结果表明,当PMPP浓度为40mg/ml时,处于S期的肿瘤细胞增多,凋亡率为41.52%。[结论]玉米紫色植株色素可通过诱导部分细胞凋亡抑制人肺腺癌A549细胞增殖。     

澳洲茄胺盐酸盐对体外HeLa细胞培养生长抑制作用的研究

[目的]探索SBHL对体外培养HeLa细胞生长抑制影响,了解SBHL抗肿瘤活性. [方法]用细胞生长计数法观察SBHL对HeLa细胞生长抑制作用;MTT法测定SBHL抗肿瘤活性;流武细胞仪检测HeLa细胞DNA合成率和凋亡率. [结果]细胞生长计数法证实SBHL对HeLa细胞生长有抑制作用,且随药物浓度增加给药时间延长,其抑制作用增强;MTT法证实SBHL对HeLa细胞集落形成有抑制作用,并随SBHL浓度增加其抑制率也随之增强;流式细胞仪检测证实不同浓度SBHL对HeLa细胞DNA合成抑制率和凋亡率产生不同影响,且随药物浓度增加和给药时间延长,其抑制作用增强. [结论]SBHL能抑制HeLa细胞生长增殖作用,能抑制HeLa细胞DNA合成和诱导HeLa细胞凋亡.     

大豆异黄酮联合顺铂对A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨大豆异黄酮(ISF)联合顺铂(DDP)化疗对A549肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察ISF和DDP联用对A549肺癌细胞增殖的影响,并计算联合指数(Q值)判定联合用药的相互作用,同时采用TUNEL染色法检测二者对A549细胞凋亡的影响。结果 ISF和DDP单独使用均可时间和浓度依赖性地抑制肺癌A549细胞的增殖。DDP浓度在3 mg/L时,ISF和DDP联用后抗细胞增殖作用增强,二者有相加或协同作用,且在一定浓度范围内,联合用药对细胞生长的抑制作用呈量效关系。ISF单用或和DDP联用均可浓度依赖性地诱导肺癌细胞凋亡。结论 ISF可通过诱导A549细胞凋亡而发挥抗肺癌作用;ISF和DDP联用可增强对肺癌A549细胞增殖的抑制和凋亡的诱导,二者具有协同抗肿瘤作用。     

榄香烯对肺癌A549细胞凋亡影响及分子机制研究

目的研究榄香烯对肺癌A549细胞的抑制作用及分子机制。方法取肺腺癌细胞株A549,分别以10μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、80μg/m L、160μg/m L榄香烯处理,标记为观察组1~5,并设空白对照组6。于处理24 h、48 h、72 h后,以流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,以Wsetern Bolt法检测真核起始因子4E(e IF4E)蛋白水平。结果 1处理24 h后,各组细胞周期无明显变化,G2/M期、sub-G1期细胞比例差异无统计学意义(P0.05);处理48 h、72 h后,观察组G2/M期细胞比率较对照组显著性下降,差异有统计学意义(P0.05),但观察组组内时点比较,差异无统计学意义(P0.05);榄香烯浓度越高,抑制作用越明显。2随药物浓度增长,细胞凋亡率显著性提升。3相较对照组,处理24 h后,观察组e IF4E表达呈下降趋势,且浓度越高,表达越低。结论榄香烯对肺癌A549细胞抑制作用强,其对细胞周期的影响存在剂量与时间依耐性;细胞凋亡率随药物浓度增加而增加,但过高剂量可能导致毒副作用,降低凋亡率;对A549细胞增殖抑制的生理机制可能与抑制e IF4E表达有关。     

1，25-二羟基维生素D3对K562细胞周期及凋亡的影响

目的观察1，25-二羟基维生素D3[1，25（OH）2D3]对白血病细胞株K562细胞周期及细胞凋亡的作用。方法Western印迹检测维生素D受体（VDR）在K562细胞的表达；四噻唑蓝法（MTT）、AO／EB、流式细胞仪分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期。结果（1）K562细胞核阳性表达VDR；（2）0-10^-6mol／L浓度的1，25（OH）2D3呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖，10^-8mol／L 1，25（OH）2D3明显抑制K562细胞增殖，促进凋亡，细胞周期阻滞主要发生在G2期或M早期，凋亡率从4．1％（对照组）增至26．5％（P〈0．01）。结论1，25（OH）2D3可明显抑制K562细胞增殖，促进细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子诱导凋亡配体诱导胃癌细胞株MKN28细胞凋亡及机制探讨

目的探讨肿瘤坏死因子诱导凋亡配体(TRAIL)对胃癌细胞株MKN28细胞体外诱导凋亡的作用及机制。方法采用MTT法培养、分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,AO/EB染色观察凋亡细胞。结果 TRAIL可明显抑制MKN28细胞的增殖,并可诱导细胞的凋亡。结论 TRAIL可诱导MKN28细胞株的凋亡,并呈剂量依赖性。