三七总皂苷诱导U937细胞凋亡及对Caspase-3表达的影响

目的观察三七总皂苷（PNS）对人急性单核细胞白血病细胞系U937细胞的增殖、凋亡及Caspase-3表达的影响。方法用不同浓度PNS作用于U937细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western-blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 PNS抑制U943细胞生长并呈时间和剂量依赖性;分别予100、200、400、800mg/L处理U937细胞48h,细胞凋亡率分别为（5.93±0.15）%、（7.43±0.70）%、（12.3±0.38）%和（20.4±0.91）%,对照组细胞凋亡率为（1.73±1.50）%（P〈0.01）,并诱导细胞G1期阻滞;Western-blot结果显示,PNS使Caspase-3蛋白表达上调。结论 PNS能抑制U937细胞增殖,并可能通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡

目的 探讨伯舒替尼对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、THP-1和U937细胞分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 伯舒替尼0～20 μmol/L处理HL-60、THP-l和U937细胞48 h,MTT法检测细胞增殖;伯舒替尼0～5 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,流式细胞仪检测细胞CDllb表达;伯舒替尼O～10 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,胱天蛋白酶(caspase)广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone (Z-VAD-FMK)预处理lh后加入伯舒替尼处理U937细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;不同浓度伯舒替尼(0～5 μmol/L)分别处理HL-60和U937细胞24 h后,Western印迹法检测细胞分化相关转录因子C/EBPβ、P21和c-Myc以及凋亡相关分子Mcl-1、Bax和Caspase 3蛋白表达的改变.结果 伯舒替尼剂量依赖性抑制AML细胞增殖.与空白对照组相比,不同浓度伯舒替尼处理AML细胞72 h后,细胞CDllb表达和细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05或P＜0.01).伯舒替尼处理HL-60细胞有效上调C/EBPβ和P21的蛋白表达水平,引起U937细胞Mcl-1表达降低和Bax表达增强,并激活caspase 3,而Z-VAD-FMK预处理U937细胞显著抑制伯舒替尼诱导的细胞凋亡.结论 伯舒替尼可有效抑制AML细胞增殖,诱导细胞分化和促进其凋亡,可作为有效治疗AML的潜在药物.     

中药抗癌灵诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其对Fas和Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨复方中药抗癌灵对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas和Caspase-3表达的影响。方法以10、20和40ml/L抗癌灵提取液处理SGC-7901细胞48h,并以25mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Fas和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,抗癌灵提取液各浓度组细胞抑制率显著升高(P<0.01),细胞凋亡率明显上升(P<0.01),Fas和Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.05或0.01)。结论中药抗癌灵具有诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用,其分子机理可能与上调Fas和Casoase-3蛋白表达有关。     

熊果酸诱导人急性白血病细胞凋亡及其作用机制

目的 探讨熊果酸诱导人急性白血病细胞凋亡的作用机制.方法 将0、5、10、15、20 μmol/L的熊果酸作用于U937细胞6、12 h,观察昔效关系.用20 μmol/L熊果酸作用U937细胞1、3、6、9、12、24 h,观察时效关系.采用AnnexinV/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡.用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-9及Bcl-2家族基因Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bad的表达,用β-actin做内参照.20 μmol/L熊果酸作用于不同类型的急性自血病细胞(U937、Jurkat、HE60)12 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡,并用Western blot方法 检测Caspase-3、Caspase-9、PARP的表达.结果 熊果酸作用于U937细胞引起细胞发生凋亡,并呈明显的量效和时效关系.Western blot结果表明,熊果酸引起凋亡蛋白酶Caspase-3、Caspase-9的降解/活化增加,促进凋亡作用底物PARP的降解增加.熊果酸还可引起抗凋亡蛋白Mcl-1的表达降低,但对Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bad的表达均无明显影响.结论 熊果酸可诱导多种急性白血病U937、Jurkat、HL60细胞发生凋亡.Mcl-1的下调可能在熊果酸诱导急性白血病细胞凋亡中起着重要的作用,其作用机制可能为熊果酸引起Mcl-1的下调,随后引起凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的降解/活化及PARP的降解,最终促进细胞凋亡发生.     

青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株凋亡抑制的实验研究

[目的]观察青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株的增殖抑制作用及凋亡机制探讨。[方法]应用不同浓度青蒿琥酯作用U937、HL60、Jurkat细胞株,MTT法检测抑制率;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡;Western-blot法检测细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase 8和ICAD蛋白表达的变化。[结果]青蒿琥酯能够明显抑制U937、HL60、Jurkat细胞增殖;8μg/ml以上浓度青蒿琥酯作用三种细胞24h、48h、72h抑制率均为Jurkat〉HL60〉U937(均P<0.01);其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase8蛋白出现明显的剪切激活带。[结论]青蒿琥酯既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导急性白血病细胞凋亡,对Jurkat的抑制最强。     

和厚朴酚对人白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响

 【目的】 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响&#65377;【方法】 将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3&#65380;Caspase-7 mRNA水平变化&#65377;【结果】 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48 h半数抑制浓度(IC50)为11.8 μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3 μg/mL,Annexin V/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关&#65377;HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显&#65377;【结论】 HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖&#65380;诱导U937细胞凋亡&#65377;     

模拟的锰超氧化物歧化酶对U937细胞增殖和凋亡的影响

目的研究模拟的锰超氧化物歧化酶(mimic manganese superoxide dismutase,Mn SODm)对急性单核细胞白血病细胞(U937细胞)凋亡和增殖的影响及部分机制。方法以不同剂量的Mn SODm(1、2、3和4mg·L-1)处理U937细胞后,用MTT法检测U937细胞的增殖率,用Annexin V-PE/7-AAD双染法检测U937细胞的凋亡率。用蛋白印迹法测定cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白的表达。结果 Mn SODm处理组U937细胞的增殖率明显低于对照组(P<0.05);Mn SODm能够有效地抑制U937细胞的增殖,这种抑制作用呈现明显的浓度依赖性及时间依赖性(P<0.05)。Mn SODm处理组U937细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05);Mn SODm的凋亡诱导作用具有明显的浓度依赖性(P<0.05)。蛋白印迹法结果显示cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白的表达亦呈现出浓度依赖性上升的趋势。结论 Mn SODm能够有效地抑制U937细胞的增殖,促进U937细胞的凋亡,其作用具有浓度依赖性及时间依赖性。     

氯化锂对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖、凋亡及Fas、Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:研究氯化锂(LiCl)对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:以40、80、150mmol/L的LiCl作用于U2-OS细胞24、48和72h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;作用48h后,流式细胞术法检测细胞凋亡率,并分析细胞周期;RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas、Caspase-3mRNA的表达。结果:随LiCl作用剂量的增加,U2-OS细胞增殖抑制率增加,细胞凋亡率和Fas、Caspase-3mRNA表达量亦增加(F=61157.480,70.828和418.072,P<0.001);细胞周期分析显示细胞被阻滞于S期(P<0.001)。结论:LiCl可能通过促进凋亡基因Fas、Caspase-3的表达,抑制U2-OS细胞增殖并诱导凋亡。     

丹参酮ⅡA对白血病 K562 细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病 K562 细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA (10～50 μmol/L) 作用于体外培养的 K562 细胞 24、48、72 h,应用 MTT 法检测细胞生长抑制率,流式细胞术 (FCM) 检测细胞凋亡率,并对 50 μmol/L 的药物作用不同时间后亚 G1 期细胞进行检测。应用免疫印迹法 (Western blotting) 检测 Caspase-3 及其裂解底物多聚 ADP-核糖聚合酶 (PARP) 的表达水平,并对凋亡调节蛋白 Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid 的表达水平进行检测。结果20 μmol/L 以上的丹参酮ⅡA可显著抑制 K562 细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM 检测结果表明 50 μmol/L 丹参酮ⅡA 作用不同时间后,亚 G1 期细胞 (凋亡细胞) 逐渐增多。20 μmol/L 以上的丹参酮ⅡA 作用 48 h 后 Caspase-3 逐渐被活化出现 17 000 的亚单位,Caspase-3 的作用底物 PARP 被活化裂解出现 89 000 的亚单位片段,而且 Caspase-3 的激活以及 PARP 的裂解可被 Caspase-3 的特异性抑制剂 z-DEVD-FMK 所阻断,促凋亡蛋白 Fas 以及 Bax 的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白 Bcl-2 及其他促凋亡蛋白 Bak 和 Bid 的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病 K562 细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白 Fas 和 Bax 的表达水平及激活 Caspase-3 可能是丹参酮ⅡA诱导白血病 K562 细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

紫檀芪对C6胶质瘤细胞凋亡及Caspase-3活性的影响

目的:研究紫檀芪(pterostilbene,PTE)体外抑制C6胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡的作用,探讨其可能的作用机制。方法:运用MTT法测定细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色观察C6细胞凋亡形态学变化,酶联免疫吸附法(ELISA)测定Caspase-3活性变化,并用Western blot法检测Fas、FasL蛋白的表达水平。结果:由MTT结果知紫檀芪可以显著抑制C6细胞的增殖(P0.01),呈现药物浓度与时间依赖性;AO/EB荧光染色(24 h)可见典型的凋亡形态学特征;酶联免疫吸附(ELISA)检测表现为随PTE浓度升高,Caspase-3活性逐步升高(P0.01);Western blot检测显示PTE可以使Fas、FasL蛋白表达显著增加(P0.01)。结论:PTE可诱导胶质瘤细胞系C6细胞凋亡,其作用机制可能与激活Fas/FasL通路、上调Caspase-3活性有关。     

秦艽总苷对人肝癌细胞等几种肿瘤细胞的体外作用

目的研究秦艽总苷对肝癌细胞SMMC-7721、淋巴癌细胞U937、卵巢癌细胞A2780等3种癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法MTT法检测秦艽总苷对人肝癌SMMC-7721细胞、淋巴癌细胞U937、卵巢癌细胞A2780增殖的影响,流式细胞仪检测细胞调亡率。结果①秦艽总苷在一定浓度时,SMMC-7721细胞和U937细胞的生长受到不同程度的抑制,且有浓度依赖性;而对A2780细胞无抑制增殖作用。②一定浓度的秦艽总苷可诱导SMMC-7721细胞和U937细胞凋亡;对A2780无诱导凋亡作用。结论①秦艽总苷对人肝癌细胞SMMC-7721和淋巴癌细胞U937有抑制增殖和诱导凋亡的作用;②秦艽总苷对卵巢癌细胞A2780无抑制增殖作用;③秦艽总苷对卵巢癌细胞A2780无诱导细胞凋亡作用。     

Role of Extracelluar Regulated Protein Kinases in FTY720-induced Apoptosis of Leukemia Cell Lines HL-60 and U937

The effects of a novel immunosuppressive agent FTY720 on proliferation inhibition and apoptosis of acute leukemia cell lines HL-60 and U937, and the role of extracelluar regulated protein kinase (ERK) in the course of proliferation inhibition and apoptosis induced by FTY720 were studied. The proliferation inhibition rate of HL-60 and U937 cells by various concentrations of FTY720 was detected by MTT assay. Cell apoptosis was detected by DNA fragmem analysis and flow cytometry. The phosphorylated ERK1/2 protein expression was observed by Western blotting. The change of intracellular distribution of ERK1/2 protein was identified by SP immunohistochemical staining. The results showed that FTY720 could inhibit the growth of HL-60 and U937cells effectively in a dose-dependent manner. After incubation with FTY720 for 24 h, apoptosis wasobserved in HL-60 and U937 cells. The intracellular expression of phosphorylated ERK1/2 protein was also down-regulated and the distribution of ERK1/2 protein in cell‘ nuclear was reduced during FTY720-induced apoptosis. So, that FTY720 inhibited ERK1/2 phosphorylation might mediate the role of FTY720-induced apoptosis and proliferation inhibition of leukemia cells.     

丙戊酸钠诱导髓系白血病细胞分化、凋亡作用及其机制研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)诱导髓系白血病细胞体外分化和凋亡作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法增殖抑制实验和锥虫蓝拒染法检测VPA对细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞表面分化抗原的表达和细胞凋亡,Western印迹法检测组蛋白H3的9位赖氨酸残基(H3-Ac-lys9)的乙酰化水平变化。结果VPA抑制U937和K562髓系白血病细胞增殖,并呈时间-剂量依赖效应。在VPA较低浓度下(0.5～1mmol/L)作用6d后,VPA诱导U937细胞分化,其细胞表面髓系分化抗原CD11b表达明显上调,细胞形态呈终末分化改变。VPA与全反式维甲酸和(或)粒细胞集落刺激因子联合应用,诱导分化作用更为显著。在VPA较高浓度下(2mmol/L),VPA诱导U937细胞磷脂结合蛋白结合力明显上升,细胞呈现凋亡状态。而同样条件下VPA不能诱导K562细胞出现显著的分化和凋亡。U937和K562细胞在H3-Ac-lys9的乙酰化水平存在差异。VPA能够上调U937细胞H3-Ac-Lys9乙酰化,而K562细胞未观察到类似调变作用。结论VPA诱导U937细胞分化和凋亡,其作用与U937细胞的H3-Ac-lys9乙酰化水平及其对VPA处理后的上调有关。     

Role of extracellular regulated protein kinases in FTY720-induced apoptosis of leukemia cell lines HL-60 and U937

Summary The effects of a novel immunosuppressive agent FTY720 on proliferation inhibition and apoptosis of acute leukemia cell lines HL-60 and U937, and the role of extracellular regulated protein kinase (ERK) in the course of proliferation inhibition and apoptosis induced by FTY720 were studied. The proliferation inhibition rate of HL-60 and U937 cells by various concentrations of FTY720 was detected by MTT assay. Cell apoptosis was detected by DNA fragment analysis and flow cytometry. The phosphorylated ERK1/2 protein expression was observed by Western blotting. The change of intracellular distribution of ERK1/2 protein was identified by SP immunohistochemical staining. The results showed that FTY720 could inhibit the growth of HL-60 and U937 cells effectively in a dose-dependent manner. After incubation with FTY720 for 24 h, apoptosis was observed in HL-60 and U937 cells. The intracellular expression of phosphorylated ERK1/2 protein was also down-regulated and the distribution of ERK1/2 protein in cell nuclear was reduced during FTY720-induced apoptosis. So, that FTY720 inhibited ERK1/2 phosphorylation might mediate the role of FTY720-induced apoptosis and proliferation inhibition of leukemia cells. LI Dengju, male, born in 1972. Doctor in Charge.     

Resveratrol Inhibits the Secretion of Vascular Endothelial Growth Factor and Subsequent Proliferation in Human Leukemia U937 Cells

This study examined the effect of resveratrol on the secretion of vascular endothelial growth factor(VEGF) and subsequent proliferation of human leukemia U937 cells,and explored the mechanisms involved.Human leukemia U937 cells were treated with resveratrol of different concentrations(12.5-200 μmol/L) for different time lengths(12-48 h).The proliferation of the U937 leukemic cells was determined by MTT assay.Apoptosis was observed by Annexin-Ⅴ-FIFC/PI double staining and flow cytometry(FCM).Cells cycle was analyzed by PI staining and FCM.The content of VEGF was determined by ELISA.Human umbibical vein endothelial cells were examined for vasoformation in vitro after exposures to resveratrol of various concetrations.The results showed that resveratrol inhibited the proliferation of U937 leukemia cells in a dose-and time-dependent manner.Resveratrol induced apoptosis and S-phase cell cycle arrest in human leukemic U937 cells.Resveratrol inhibited the secretion of VEGF in U937 cells.Resveratrol inhibited the vasoformation of human vein endothelial cells in a dose-dependent manner.It was concluded that resveratrol could down-regulate the secretion of VEGF,induce apoptosis and suppress the proliferation of U937 cells.     

C-jun N-terminal Kinase-mediated Signaling Is Essential for Staphylococcus Aureus-induced U937 Apoptosis

Objective To investigate the effect of SP600125, a specific c-jun N-terminal protein kinase （JNK） inhibitor, on Staphylococcus aureus （S. aureus）-induced U937 cell death and the underlying mechanism. Methods The human monocytic U937 cells were treated with S. aureus at different time with or without SP600125. Cell apoptosis was analyzed by flow cytometry. JNK, Bax, and caspase-3 activities were detected by Western blotting. Results S. aureus induced apoptosis in cultured U937 cells in a time-dependent manner. Expression of Bax and phospho-JNK significantly increased in S. aureus-treated U937 cells, and the level of activated caspase-3 also increased in a time-dependent manner. Inhibition of JNK with SP600125 significantly inhibited S. aureus-induced apoptosis in U937 cells. Conclusions S. aureus can induce apoptosis in U937 cells by phosphorylation of JNK and activation of Bax and caspase-3. SP600125 protects U937 cells from apoptosis induced by S. aureus via inhibiting the activity of JNK.     

抑制 PKD2介导8-硝基白杨素诱导 U937细胞凋亡

目的：研究8-硝基白杨素（ NOC）诱导单核细胞白血病U937细胞凋亡作用是否涉及调控蛋白激酶D2（ PKD2）活性。方法体外培养U937细胞系细胞。碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率。 DNA琼脂糖凝胶电泳检定细胞DNA梯形条带图谱。 Western blot分析PDK2磷酸化蛋白表达。结果 NOC（2.5、5.0、10.0μmol/L）增高U937细胞凋亡率,呈浓度依赖性（ P ＜0.05）。 NOC（5.0和10.0μmol/L）处理24 h,U937细胞呈现典型DNA梯形条带图谱。同时,NOC有效下调磷酸化PDK2蛋白表达;并与PKD2特异性抑制剂Goe6976协同增高U937细胞凋亡率。结论 NOC诱导U937细胞凋亡作用与其抑制PKD2激酶活性相关。     

INVOLVEMENT OF p38 MITOGEN-ACTIVATED PROTEIN KINASE IN E.Coli-INDUCED U937 APOPTOSIS

APOPTOSIS is a highly regulated and orderedprocess that plays a central role in elim inatingunnecessary cells in normal development andhomeostasis·1Increasing numbers of pathogens, includingE·coli, have been found to modulate host cell apoptosisand ther…