院内感染嗜麦芽寡养单胞菌耐药性分析

目的 测定26株临床分离院内感染嗜麦芽寡养单胞菌对常用抗菌药物的耐药性，探索产β-内酰胺酶菌株对亚胺培南的耐药机制。方法 采用琼脂二倍稀释法测定19种抗菌药物对26株临床分离的院内感染嗜麦芽寡养单胞菌的体外抗菌活性，并比较产酶株与非产酶株对抗菌药物的敏感性；测定产酶株所产肛内酰胺酶对亚胺培南的稳定性和丝氨酸β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶抑制剂的抑酶保护效应。结果 新型氟喹诺酮类药物司帕沙星、左氧氟沙星、加替沙星和多西环素对26株嗜麦芽寡养单胞菌有较强抗菌活性。抑菌率分别为96．2％、96．2％、92．3％、84．6％，SMZ／TMP和替卡西林／克拉维酸抑菌率分别为65．4％和50％，亚胺培南、头孢他啶、头孢哌酮和氨曲南的敏感性较差，耐药率在80％以上；产酶株与非产酶株药敏结果比较，产酶株对含酶抑制剂β-内酰胺类抗生素的敏感性较非产酶株高，而对其它抗菌药物的敏感性变化不大。酶稳定性试验显示，有4株产酶菌产碳青霉烯水解酶，酶抑制试验表明，克拉维酸对这4株菌所产酶无抑酶保护效应，而金属β-内酰胺酶抑制剂EDTA对4株菌所产酶有抑制作用，且酶活性能被ZnCl2复活。结论 新型氟喹诺酮类药物对嗜麦芽寡养单胞菌院内感染株有较强的抗菌活性；4株产酶菌所产碳青霉烯水解酶可能为金属β-内酰胺酶。     

嗜麦芽寡养单胞菌与金属β-内酰胺酶

嗜麦芽寡养单胞菌耐药性强，产金属β-内酰胺酶是嗜麦芽寡养单胞菌对包括亚胺培南在内的广谱头孢菌素耐药的主要原因，金属酶作用机制复杂，没有相应的抑制剂投入应用，已成为临床抗感染治疗很棘手的问题。本文就嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶种类、特性、作用机制和抑制剂等方面研究作一简要概述。     

临床分离嗜麦芽寡养单胞菌L1、L2酶基因克隆、测序及定位

目的了解临床分离嗜麦芽寡养单胞菌产LI、L2 β-内酰胺酶情况、酶基因定位及核苷酸序列进化和同源关系。方法PCR法扩增两种β-内酰胺酶基因，通过克隆、测序、序列比对确定其亚型、基因进化、同源关系和基因所在位置。结果细菌染色体DNA和质粒DNA扩增L1、L2酶基因阳性，其序列具有明显异质性。两种酶基因位于12kb大小的质粒上。结论嗜麦芽寡养单胞菌绝大多数产生两种β-内酰胺酶，酶基因变异和进化加速的驱动力部分可能与β-内酰胺类抗生素的长期使用有关。     

头孢地尔对产金属β-内酰胺酶革兰阴性菌的作用现状研究

产金属β-内酰胺酶(MBLs)革兰阴性菌是临床常见的感染病原菌,该类菌可引起多种严重感染,其中产金属β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(KP)是世界范围内的重要医院获得性感染菌,对当前抗感染治疗构成严重威胁。头孢地尔作为新型头孢菌素,具有抗菌活性强、作用范围广、组织穿透力强等特点,对产碳青霉烯酶的肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄单胞菌有强大的抗菌活性,其中它对金属β-内酰胺酶也有相当好的活性。本研究针对头孢地尔对产金属β-内酰胺酶革兰阴性菌的作用进行了全面的现况分析研究。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的底物动力学研究

目的:对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌所产β-内酰胺酶进行底物动力学研究。方法:从我院2008年分离并经Nitrocefin鉴定的产β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中各随机挑选4株,以Kirby-Bauer法进行药敏试验检测,采用L-B作图法得出Km和Vmax。结果:8株细菌对β-内酰胺类抗生素均耐药,而对碳青霉烯类抗生素高度敏感;所产β-内酰胺酶对青霉素均有较强的水解作用,对第1代头孢菌素头孢唑林及头孢噻吩也有一定的水解作用,对第2代头孢菌素头孢呋辛和第3代头孢菌素头孢他啶及头孢噻肟的水解活性差异较大。结论:产β-内酰胺酶菌株所致感染首选碳青霉烯类抗生素治疗,不同产酶菌株所产β-内酰胺酶水解底物轮廓有较大差异。     

广谱β-内酰胺酶TEM-141的克隆及特性研究

目的:对临床分离阴沟肠杆菌株EC002所产TEM型β-内酰胺酶进行克隆及原核表达,并了解其相关特性。方法:以琼脂二倍稀释法检测阴沟肠杆菌EC002的耐药情况,以双纸片法筛选及确证试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),以等电聚焦电泳(IEF)法测定酶的等电点(pI),以聚合酶链反应(PCR)扩增酶编码基因并将TEM型β-内酰胺酶基因进行原核表达及表型鉴定。结果:阴沟肠杆菌株EC002对所试多数β-内酰胺类抗菌药物耐药,ESBLs表型鉴定及质粒接合试验结果均为阳性。IEF显示该菌产2种pI分别为8.7及5.4的β-内酰胺酶,测序表明其为CTX-M-22及一种新的TEM亚型,其克隆菌株所表达酶的表型为非ESBLs。该酶的编码基因已被GenBank命名为TEM-141。结论:临床分离阴沟肠杆菌株EC002所产TEM-141为一种新型质粒介导的广谱β-内酰胺酶。     

同时产CTX-M-22及TEM-1型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析

目的 了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β-内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测，酶提取物三维实验检测AmpC酶，双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），等电聚焦（IEF）电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增，将β-内酰胺酶全编码基因克隆、表达，并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药，表型检测AmpC酶为阴性。ESBLs阳性，IEF显示该菌产两种p1分别为8．7及5．4的β-内酰胺酶。PCR扩增产物DNA测序证实为CTX-M-22、TEM-1型β-内酰胺酶全编码基因，产TEM-1的克隆菌株仅对青霉素类耐药，产CTX—M-22的克隆菌株对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药。对头孢噻肟的水解程度明显强于头孢他啶。结论临床分离阴沟肠杆菌株EC003同时产CTX—M-22和TEM-1型两种β-内酰胺酶，可导致对多数β-内酰胺类抗生素耐药。     

CEFTAZIDIME耐药细菌的β-内酰胺酶研究

应用药物梯度琼脂筛选法获得绿脓杆菌和阴沟杆菌的Ceftazidime耐药菌株(MIC≥64μg/ml)。采用紫外分光光度法检测了耐药菌的β-内酰胺酶活性,酶对12种β-内酰胺抗生素水解的“底物轮廓”以及抑酶活性;应用超薄层分析等电聚焦电泳技术检测了β-内酰胺酶的等电点(pI),并与标准产酶菌株的β-内酰胺酶进行了比较。结果提示:细菌对Ceftazidime耐药后,β-内酰胺酶活性增加13～107倍;这类β-内酰胺酶具有如下特点:(1)水解头孢菌素类强于水解青霉素类;(2)舒巴克坦(5μg/ml)对这类酶无抑制作用,而同等剂量的邻氯青霉素却能明显抑制,(3)pI均≥8.0,与标准质粒介导的β-内酰胺酶的性质不同,符合染色体介导的头孢菌素酶的性质。此外,作者发现pI为8.2或8.4的4株耐药菌的β-内酰胺酶尚未见文献报道。     

临床分离耐药摩氏摩根菌的β-内酰胺酶表型和基因型分析

目的探讨临床分离耐药摩氏摩根菌3-87耐药的分子机制。方法采用常规琼脂二倍稀释法对摩氏摩根菌3-87进行15种抗菌药的MIC测定；超声破碎法提取β-内酰胺酶；并用nitrocefin做定性检测，用紫外分光光度计检测酶活性；超薄层等电聚焦测定β-内酰胺酶等电点和酶抑制实验；ESBLs表型鉴定；AmpC酶的检测；纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株；以摩氏摩根菌3—87质粒DNA为模板扩增blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因，以基因组DNA为模板扩增ampC结构基因；ampC结构基因扩增产物的DNA序列测定及同源性分析。结果摩氏摩根菌3—87对10种β-内酰胺类抗生素、2种氟喹诺酮类抗菌药耐药，对哌拉西林／三唑巴坦和头孢哌酮／舒巴坦、氨基糖苷类抗生素阿米卡星敏感。产酶活性为3727．5U的β-内酰胺酶。产生的p17．3、8．2及9．6的三种β-内酰胺酶分别能被氯唑西林、克拉维酸、EDTA部分抑制。β-内酰胺酶表型鉴定试验结果显示菌株产ESBLs、AmpC酶及金属β-内酰胺酶三种β-内酰胺酶。blaCTX-M基因引物扩增出阳性扩增条带。ampC结构基因引物扩增阳性扩增带，对扩增产物进行序列分析与已报道的摩氏摩根菌ampC结构基因的核苷酸序列高度同源，推导的氨基酸序列发生了1个氨基酸残基的变异。结论临床分离耐药摩氏摩根菌3—87呈多重耐药，其对β-内酰胺类抗生素耐药的机制是产生了ESBLs、AmpC酶及金属β-内酰胺酶。     

产ESBLs鲍曼不动杆菌的耐药特性、质粒谱及耐药基因型

目的了解并研究产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）鲍曼不动杆菌的流行、耐药特点及质粒图谱，对产ESBLs菌株进行基因分型。方法先后用nitrocefin纸棒、最低抑菌浓度（MIC）初筛法和纸片扩散确认法从临床分离的鲍曼不动杆菌中检测产ESBLs菌株，用凝胶电泳分析其质粒图谱，并用聚合酶链反应（PCR）对产ESBLs基因进行分型。结果93株鲍曼不动杆菌中，对β-内酰胺酶类抗菌药物耐药47株（79．66％），中度敏感12株（20．34％）；产ESBLs菌株有16株，占17．20％。产ESBLs鲍曼不动杆菌对头孢曲松、头孢他啶、头孢唑肟、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素、妥布霉素、磺胺甲曝唑、环丙沙星和阿米卡星的耐药率均显著高于非产ESBLs菌株（P〈0．05）。保留的15株产ESBLs菌具有4种质粒谱，主要为Ⅰ型和Ⅲ型；它们均携带1～2种TEM型或SHV型或PER型β-内酰胺酶基因，且80％携带OXA-23型碳青霉烯酶基因。结论产ESBLs鲍曼不动杆菌常为多重耐药菌，耐药率与产ESBLs密切相关；同一克隆株在同一病房有流行趋势；本院流行株均携带2—3种耐药基因型，主要为TEM型、PER型β-内酰胺酶基因和OXA-23型碳青霉烯酶基因。     

嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶及喹诺酮类耐药基因检测

目的 检测临床分离嗜麦芽寡养单胞菌耐药基因型并分析其与耐药表型的关系,从而为嗜麦芽寡养单胞菌感染的防治提供理论依据和对策.方法 对2005-2008年收集的102株嗜麦芽寡养单胞菌提取全基因组DNA,采用PCR方法检测β-内酰胺酶L1、L2型耐药基因和喹诺酮耐药基因qnr,分析耐药基因与耐药表型的关系.结果 102株嗜麦芽寡养单胞菌对临床常用抗菌药物耐药率以替卡西林/克拉维酸最高达到42.16％,其次为复方磺胺甲基异噁唑29.41％、氯霉素27.45％、头孢他啶22.55％,对米诺环素的耐药率最低11.76％.102株嗜麦芽寡养单胞菌L1基因阳性率76.47％,L2基因阳性率67.65％;其中L1和L2型基因共同阳性率56.86％;头孢他啶及替卡西林/克拉维酸耐药菌株均检测到L1和L2型基因.102株qnrX、qnrY和qnrZ的阳性率都是100％.结论 本地区嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶L1和L2酶检出率较高,喹诺酮耐药基因qnr阳性率达到100％,染色体上Qnr酶单独存在并不会导致对氟喹诺酮类药物高度耐药.     

阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶的研究进展

阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶是对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制,所产β-内酰胺酶种类较多、特性各异,并在β-内酰胺类抗生素广泛应用的选择压力下,不断有新的β-内酰胺酶产生.文中对阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶(EsBLs、AmpC、碳青霉烯酶)耐药性的研究进展作了简要综述.     

美罗培南的体外抗菌活性研究

目的 评价国产美罗培南对产β-内酰胺酶细菌的体外抗菌活性。方法 琼脂稀释法测定美罗培南对110株产β-内酰胺酶临床分离菌的最低抑菌浓度(MIC)。并与相关抗菌药物进行比较。结果 碳青霉烯类抗生素对产β-内酰胺酶菌株具有高度抗菌活性，国产美罗培南作用略强于亚胺培南。碳青霉烯类抗生素体外抗菌作用优于头霉素、第四代头孢菌素、β-内酰胺类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂合剂、喹诺酮类和氨基糖苷类药物。结论 国产美罗培南是治疗产β-内酰胺酶细菌所致感染的理想药物。     

金属β-内酰胺酶——抗感染治疗面临的新挑战

碳青霉烯类抗生素是当今抗菌谱最广、治疗产β－内酰胺酶革兰氏阴性杆菌感染疗效最好的β－内酰胺类抗生素。某些细菌产生的金属β－内酰胺酶（metallo-β-lactamase，简称金属酶）能水解碳青霉烯，导致产酶菌的耐药谱增宽，已引起临床重视。其中由染色体编码的金属酶多分布于临床较少见的细菌中；而获得性金属酶不仅可分布于铜绿假单胞菌和肠杆菌科细菌中，还能够通过质粒、整合子等水平扩散，大大增强了播散的能力及对临床的威胁程度。     

下呼吸道标本铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨

目的探讨下呼吸道标本铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨。方法选择下呼吸道标本中培养分离的铜绿假单胞菌75株,从金属β-内酰胺酶,超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头胞菌素酶（AmpC酶）的产生状况方面来检测其耐药机制。结果 41株对亚胺培南耐药,34株对亚胺培南敏感。耐亚胺培南铜绿假单胞菌中检出产金属β-内酰胺酯酶6株（14.6%）;检出产ESBLs10株（24.4%）,产AmpC酶6株（14.6%）,其中同时产AmpC酶和ESBLs共3株（7.3%）。结论产生金属β-内酰胺酶、ESBLs和AmpC酶是下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌对亚胺培能抗生素耐药的主要原因。     

粘质沙雷菌中SHV型β-内酰胺酶编码基因的克隆及序列分析

目的研究重庆地区临床分离的粘质沙雷菌E121编码超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因。方法PCR扩增ESBLs编码基因片段，克隆入pUCm—T载体，双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定亚型，等电聚焦测定β-内酰胺酶的等电点（pI）。结果PCR扩增结果显示粘质沙雷菌E121产生的ESBLs为SHV型，其基因片段含756个核苷酸，GenBank查询其核苷酸序列与SHV-28型ESBLs完全相同。该耐药株至少含有等电点pI约为5．4和8．2的两种β-内酰胺酶。结论重庆地区粘质沙雷菌E121所产ESBLs亚型为SHV-28。     

腹腔与胆道感染大肠埃希菌的耐药性分析及产ESBLs和AmpC酶的检测

目的探讨腹腔与胆道感染大肠埃希菌的耐药性分析及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的检测。方法采用标准纸片扩散法检测ESBLs和改良三维试验检测AmpC酶,并采用纸片扩散（K-B）法检测120株大肠埃希菌对15种常用抗生素的耐药率。结果120株分离的大肠埃希菌中检出单产ESBLs46株（38．3％）,单产AmpC酶15株（12．5％）,同时产AmpC酶和ESBLs即超超广谱β-内酰胺酶（SSBLs）8株（6．7％）。单产AmpC酶、ESBLs及SSBLs对15种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株（除哌拉西林／他巴唑）。结论腹腔与胆道感染大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生ESBLs和AmpC酶,临床经验性用药一般可选择β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂和头霉类抗生素,对重症感染首选碳青霉烯类抗生素。     

儿童感染产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌耐药分析

目的:了解我院患儿感染产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的情况并分析其耐药性.方法:标本纯培养后采用法国梅里埃公司的VITEK-2细菌鉴定系统鉴定到种,协同法检测铜绿假单胞菌产生金属β-内酰胺酶的发生率,K-B法测定铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性.结果:分离的198株铜绿假单胞菌检出36株产金属β-内酰胺酶,占18.18%(36/198).产酶株对哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、左氧氟沙星的耐药率较高(远远高于不产酶菌株),对阿米卡星的耐药率相对较低,对头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星部分敏感.结论:产金属β-内酰胺酶是我院患儿感染的铜绿假单胞菌对碳青霉烯孢类抗菌药物耐药的机制之一,实验室重视对金属β-内酰胺酶的检测可帮助临床合理选用抗菌药物并减少细菌耐药性的传播.     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测

目的:了解铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶基因类型,指导临床合理用药。方法:琼脂稀释法测定12种抗生素对临床分离70株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度;筛选出20株多重耐药菌,三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的情况;用聚合酶链反应(PCR)法检测β-内酰胺酶基因并进行测序分析。结果:铜绿假单胞菌对亚胺培南、阿米卡星和环丙沙星的敏感率较高;6株菌产AmpC酶,2株菌产ESBLs;PCR检测出4株菌产TEM酶,经测序2株产TEM-1型,一株产TEM-29型,另一株产酶与TEM-29比较有1处氨基酸的改变,命名为TEM-147;未检出SHV、OXA、PER和VEB型β-内酰胺酶基因。结论:必须重视铜绿假单胞菌ESBLs的检测,对于该菌引起的感染采用碳青霉烯类、阿米卡星或环丙沙星治疗是较好的选择。     

儿童感染产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞茵耐药分析

目的：了解我院患儿感染产金属p内酰胺酶铜绿假单胞菌的情况并分析其耐药性。方法：标本纯培养后采用法国梅里埃公司的VITEK-2细菌鉴定系统鉴定到种，协同法检测铜绿假单胞菌产生金属8内酰胺酶的发生率，KB法测定铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性。结果：分离的198株铜绿假单胞菌检出36株产金属β-内酰胺酶，占18．18％（36／198）。产酶株对哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、左氧氟沙星的耐药率较高（远远高于不产酶菌株），对阿米卡星的耐药率相对较低，对头孢哌酮／舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星部分敏感。结论：产金属β-内酰胺酶是我院患儿感染的铜绿假单胞菌对碳青霉烯孢类抗菌药物耐药的机制之一，实验室重视对金属β-内酰胺酶的检测可帮助临床合理选用抗菌药物并减少细菌耐药性的传播。