胆红素诱导原代培养神经细胞内Ca2+含量的变化及MgSO4的拮抗作用

目的　探讨胆红素诱导原代培养神经细胞内Ca2 + 含量的变化 ,以及MgSO4 的拮抗作用。方法　采用胎鼠大脑皮层细胞作原代神经细胞培养 ,观察 10 0 μmol/L胆红素对不同成熟程度神经细胞内Ca2 + 含量的影响。原代培养神经细胞经Fura- 2 /AM负载 ,荧光图像分析测定细胞内Ca2 + 含量。结果　未成熟神经细胞 (培养2天 )暴露于 10 0 μmol/L胆红素 4h ,细胞内Ca2 + 从 75 .3nmol增加到 32 0 .8nmol;继续暴露 4h ,细胞内Ca2 + 增加到 40 0 .7nmol;去除胆红素暴露 ,细胞内Ca2 + 不能逆转。成熟神经细胞 (培养 8天 )暴露于 10 0 μmol/L胆红素 4h ,细胞内Ca2 + 从 70 .6nmol增加到 15 0 .8nmol;继续暴露 4h ,细胞内Ca2 + 不再增加 ;去除胆红素暴露 ,细胞内Ca2 + 浓度可显著降低。培养液中Mg2 + 加至 2mmol/L可减轻胆红素诱导的神经细胞内Ca2 + 含量变化。结论　胆红素可诱导原代培养的、未成熟的神经细胞Ca2 + 超载 ,MgSO4 可拮抗胆红素诱导的神经细胞Ca2 + 超载。     

钙敏感受体参与乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

目的 观察钙敏感受体(CaSR)对缺氧/复氧(A/R)乳鼠心肌细胞内钙的影响,探讨CaSR参与缺氧/复氧乳鼠心肌细胞损伤的机制及信号传导途径.方法 原代培养乳鼠的心肌细胞,建立A/R乳鼠心肌细胞模型(采用95%N2+5%CO2饱和2 h的低糖、无血清DMEM液孵育60 min,再更换成正常氧合细胞培养液孵育30 min的方法).心肌细胞随机分为6组:(1)正常对照组;(2)A/R组;(3)A/R+GdCl3组:在复氧开始时给予GdCl3(CaSR激动剂)300 μmol/L;(4)A/R+NiCl2+CdCl2+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10 mmol/L NiCl2(Na+-Ca2+交换阻断剂)和200 μmol/L CaCl2(L-Ca2+阻断剂)孵育10min,再加入300/μmol/L GdCl3;(5)A/R+U73122+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10μmol/L磷脂酶C(PLC)阻断剂U73122孵育10 min,再加入300μmol/L GdCl3;(6)A/R+thapsigargin+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10μmol/L肌浆网三磷酸肌醇(IP3)敏感Ca2+泵阻断剂thapsigargin孵育10 min,再加入300μmol/L GdCl3.应用Fluo-3/AM荧光指示剂负载心肌细胞,激光共聚焦显微镜连续观察细胞内钙荧光强度的动态变化.结果 A/R使心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+];)增加,GdCl3使A/R乳鼠心肌细胞[Ca2+]?I进一步增加;NiCl2和CdCl2对GdCl3引起的心肌细胞[Cd2+]I增加无影响;而U73122和thapsigargin则抑制了GdCl3引起的心肌细胞[Ca2+]I增加.结论 CaSR通过磷脂酶C-三磷酸肌醇途径参与了A/R所致心肌细胞钙超载.     

柯萨奇病毒B_3感染小鼠脑组织的钙超载及N-甲基-D-天冬氨酸受体I型mRNA高表达

目的　为探索肠道病毒性脑炎的发病机制 ,以柯萨奇病毒 (CV)B3 感染小鼠 ,观察其神经细胞内钙离子 [Ca2 ]i及脑组织N 甲基 D 天冬氨酸受体I型 (NMDAR1)mRNA表达的变化。方法(1)取新生Balb/c小鼠大脑皮质神经细胞 ,培养 12d后 ,于CVB3 感染 12h(12份 )用流式细胞仪检测细胞内 [Ca2 ]i,并用原子吸收光谱法检测神经细胞培养上清液中游离钙Ca2 含量 ;(2 )以CVB3 颅内接种小鼠 ,用NMDAR1的cDNA地高辛标记探针对感染 3d后处死的石蜡包埋脑组织切片作原位杂交检测。结果　 (1)感染 12h小鼠脑神经细胞内 [Ca2 ]i值较对照组明显增高 (P <0 0 1)。感染组神经细胞培养上清液中Ca2 含量低于对照组 (P <0 0 1)。 (2 )感染组脑组织中NMDAR1mRNA表达明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论　CVB3 感染小鼠脑神经细胞可导致细胞内 [Ca2 ]i超载 ,且与Ca2 内流有关。CVB3 感染又可引起小鼠脑组织NMDAR1mRNA表达增高 ,其结果可能进一步引起Ca2 内流和神经兴奋性毒性作用损伤脑组织     

细胞焦亡在胆红素诱导小胶质细胞损伤中的作用研究

目的 探讨细胞焦亡是否参与胆红素诱导原代培养大鼠大脑皮质小胶质细胞的损伤。方法 原代培养大鼠大脑皮质小胶质细胞,随机分为胆红素组（30 μmol/L胆红素刺激）、VX-765+胆红素组（30 μmol/L VX-765预处理1 h,再用30 μmol/L胆红素刺激）、对照组（等体积二甲基亚砜处理）。改良MTT法检测小胶质细胞存活率;Western blot法检测焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、gasdermin D（GSDMD）表达;乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞毒性作用;不同分子量染料EtBr/EthD2（分子量394 Da/1 293 Da）染色检测细胞膜孔大小;ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-1β水平。结果 胆红素刺激后,小胶质细胞存活率随时间依赖性下降;LDH释放呈时间依赖性增加;胆红素组小分子染料EtBr通过细胞膜阳性率明显高于对照组（P < 0.001）,但各组大分子染料EthD2通过率比较差异无统计学意义（P > 0.05）;胆红素刺激后0.5 h活化型Caspase-1、6 h活化型GSDMD表达增加（P < 0.05）;IL-1β水平在胆红素刺激后6 h明显增加,24 h达高峰（P < 0.001）。与胆红素组相比,VX-765+胆红素组细胞存活率升高（P < 0.05）,活化型GSDMD表达、EtBr通过率、LDH及IL-1β释放均减少（P < 0.05）。结论 细胞焦亡参与胆红素诱导的原代培养小胶质细胞损伤。     

细胞焦亡在胆红素诱导小胶质细胞损伤中的作用研究

目的 探讨细胞焦亡是否参与胆红素诱导原代培养大鼠大脑皮质小胶质细胞的损伤。方法 原代培养大鼠大脑皮质小胶质细胞,随机分为胆红素组（30 μmol/L胆红素刺激）、VX-765+胆红素组（30 μmol/L VX-765预处理1 h,再用30 μmol/L胆红素刺激）、对照组（等体积二甲基亚砜处理）。改良MTT法检测小胶质细胞存活率;Western blot法检测焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、gasdermin D（GSDMD）表达;乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞毒性作用;不同分子量染料EtBr/EthD2（分子量394 Da/1 293 Da）染色检测细胞膜孔大小;ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-1β水平。结果 胆红素刺激后,小胶质细胞存活率随时间依赖性下降;LDH释放呈时间依赖性增加;胆红素组小分子染料EtBr通过细胞膜阳性率明显高于对照组（P < 0.001）,但各组大分子染料EthD2通过率比较差异无统计学意义（P > 0.05）;胆红素刺激后0.5 h活化型Caspase-1、6 h活化型GSDMD表达增加（P < 0.05）;IL-1β水平在胆红素刺激后6 h明显增加,24 h达高峰（P < 0.001）。与胆红素组相比,VX-765+胆红素组细胞存活率升高（P < 0.05）,活化型GSDMD表达、EtBr通过率、LDH及IL-1β释放均减少（P < 0.05）。结论 细胞焦亡参与胆红素诱导的原代培养小胶质细胞损伤。     

激活Gs蛋白对胆红素诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡影响的研究

目的　研究激活Gs蛋白对胆红素诱导的小脑颗粒神经元凋亡的影响及作用机制。方法　采用原代培养的新生大鼠小脑颗粒神经元 ,用霍乱毒素 (CT)激活Gs蛋白 ,用二乙酸荧光素(FDA)染色及四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定胆红素诱导的小脑神经元存活率 ,12 5I放射免疫法测定细胞内环磷酸腺苷 (cAMP) ,Fura 2 /AM荧光比值成像技术测定细胞内钙浓度 ([Ca2 ]i)。结果　CT诱导细胞内cAMP升高并呈剂量依赖性地保护胆红素诱导的小脑颗粒神经元凋亡。当加入腺苷环化酶(AC)刺激剂 (Forskolin)及cAMP类似物 (8 溴 环磷酸腺苷 )后 ,虽导致细胞内cAMP升高 ,但不能阻断或减弱胆红素诱导的神经元凋亡。另发现胆红素浓度依赖性触发细胞内钙升高 ,而CT可降低胆红素导致的细胞内钙的升高。结论　Gs蛋白可能参与了小脑颗粒神经元凋亡的调控 ,激活Gs蛋白拮抗胆红素诱导的神经元凋亡的机制是通过降低细胞内钙而不依赖于cAMP的途径     

兴奋性氨基酸受体拮抗剂对胆红素神经毒性的影响

目的　探讨兴奋性氨基酸受体拮抗剂磷酸甲基谷氨酰氨酸 (GAPA)对胆红素神经毒性的影响。方法　在制作胆红素脑病动物模型基础上予GAPA干预 ,观察对照组、模型组、模型干预组新生豚鼠 (每组 10只 )干预后 4、8h脑组织超微结构、脑组织ATP含量与含水量。结果　模型组脑组织ATP含量在 4、8h分别为 (2 .7± 0 .7) μmol/g与 (2 3± 0 7) μmol/g,显著低于对照组 (4 3± 0 6 )μmol/g与 (4 1± 0 6 ) μmol/g ;GAPA干预组脑组织ATP含量在干预后 4、8h分别为 (2 6± 0 9) μmol/g与 (2 5± 0 8) μmol/g,显著低于对昭组 ,但与模型组比较 ,差异无显著性。胆红素脑病脑组织含水量显著增高 ,GAPA显著减轻胆红素毒性脑水肿 ,脑组织超微结构变化亦与此相符。结论　沉积于脑组织胆红素可抑制神经元能量代谢 ,致脑细胞水肿 ;兴奋性氨基酸受体拮抗剂GAPA可减轻脑水肿 ,但不影响能量代谢变化 ,其作用环节介于能量代谢变化与脑水肿之间。     

铁剥夺对白血病细胞凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨去铁胺 (DFO)对白血病细胞K562凋亡相关基因表达的影响及其可能分子机制。方法　采用RT PCR法分析Rb及c myc基因在RNA水平变化。结果　DFO 50 μmol/L及 1 0 0 μmol/L作用于K562细胞 2 4h及 48h ,Rb及c mycmRNA水平较空白对照组增加 (P <0 .0 5) ,且以 1 0 0 μmol/L组增加明显。 结论　铁剥夺剂使K562细胞Rb及c mycmRNA表达增加可能是其诱导白血病细胞凋亡的机制之一。     

Lipoxin A4受体样蛋白基因转染增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子诱导的人肺成纤维细胞增殖

目的克隆Lipoxin A4受体样蛋白(LRLP)基因,并转染人肺成纤维细胞(HLF).观察其增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子(CTGF)诱导的细胞增殖作用.方法构建LRLP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的真核表达载体pEGFP/LRLP,并转染HLF,用G418筛选稳定表达融合基因的细胞克隆株HLF/LRLP.用10 nmol/L Lipoxin A4预处理HLF和HLF/LRLP细胞30 min后,加入1 μg/mlCTGF诱导细胞增殖.MTT法检测细胞增殖抑制率.流式细胞术检测细胞周期.Western blot检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达量.凝胶迁移率改变试验检测信号转导子和转录激活子3(STAT3)的DNA结合力.结果 (1)成功建立稳定表达LRLP和GFP融合基因的HLF/LRLP细胞株.(2) 1 μg/ml CTGF刺激24 h,可显著诱导HLF增殖.Lipoxin A4预处理对其有抑制作用,10 nmol/L Lipoxin A4对HLF/LRLP的细胞增殖抑制率显著高于对HLF细胞的增殖抑制率(P<0.05).(3)与未转染和空载体转染的HLF相比,10 nmol/L Lipoxin A4诱导更多的HLF/LRLP细胞生长停滞在G0/G1期(P<0.05).(4) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的细胞周期蛋白D1表达上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).(5) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的STAT3 DNA结合力上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).结论 LRLP基因转染,增强Lipoxin A4 拮抗CTGF诱导的人肺成纤维细胞增殖.     

思密达治疗新生儿高胆红素血症45例

新生儿高胆红素血症是新生儿常见疾病 ,在医院设备所限无法用光疗的情况下 ,给予茵栀黄退黄及保肝等综合治疗 ,但疗效不十分满意。思密达用于治疗新生儿母乳性黄疸文献中已有报道[1] 。我们用思密达口服辅助治疗新生儿高胆红素血症 ,疗效满意 ,现报告如下。资料与方法一、对象　 1999年 3月～ 2 0 0 2年 12月我院收治的 4 5例新生儿高胆红素血症 ,日龄均 <2 8d ,均符合病理性黄疸诊断标准[2 ] 。总胆红素 <342 .0 μmol/L(2 0mg/dl) ,未成熟儿总胆红素 <2 5 6 .5 μmol/L(15mg/dl)。感染性黄疸 14例 ,头颅血肿 8例 ,母乳性黄疸 13例 ,溶血…     

NMDA受体拮抗剂MK-801对缺氧缺血性脑损伤保护作用的机制探讨(英文)

目的　NMDA型谷氨酸受体的激活在缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的病理生理过程中具有重要的作用。该研究探讨NMDA型谷氨酸受体拮抗剂MK 80 1对HIBD的保护机制。方法　 30只 7日龄SD大鼠随机分为正常对照组、HIBD组和HIBD +MK 80 1组 ,每组 1 0只 ,后两组大鼠结扎右颈总动脉后暴露于低氧环境制备HIBD模型 ,HIBD +MK 80 1组大鼠于低氧处理前腹腔注射MK 80 1 0 .3mg/kg。所有大鼠于HI后立即断头处死 ,制备脑单细胞悬液 ,以流式细胞仪测定脑细胞线粒体跨膜电势 (△Ψm)、以荧光扫描仪测定脑细胞内游离钙([Ca2 + ]i)水平。结果　与正常对照组相比 ,HIBD组大鼠双侧脑细胞△Ψm值及右 :左△Ψm比值均显著降低 ,[Ca2 + ]i显著升高 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;MK 80 1 +HIBD组大鼠脑细胞右 :左侧△Ψm比值较HIBD组升高 ,其差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,但两组间脑细胞右 :左 [Ca2 + ]i的比值无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　MK 80 1对缺氧缺血性脑损伤的保护作用与其改善脑细胞线粒体功能有关 ,而与其对 [Ca2 + ]i水平的影响关系不大 ,其保护机制可能不是经过“NMDA受体 [Ca2 + ]i △Ψm”途径、而是通过“NMDA受体 其它 △Ψm”途经发挥作用。     

清开灵对大鼠谷氨酸神经毒性脑水肿时突触体游离钙的影响

目的 探讨清开灵注射液对谷氨酸(Glu)神经毒性脑水肿时突触体内游离钙(［Ca2+］i)的影响。方法 30只大鼠分成正常对照组、模型组、治疗组3组,右侧脑室注射Glu制作大鼠神经毒性脑水肿模型,4 h后处死大鼠测定其脑皮质含水量、钠、钾、钙和突触体［Ca2+］i含量。结果 模型组脑含水量(82.04±0.8)%,钠含量(244.4±29.3) mmol/kg,［Ca2+］i (327.9±33.2) nmol/L分别较正常对照组(79.93±0.59)%,(213.8±13.0) mmol/kg,(159.6±18.6) nmol/L显著升高(P<0.01,P<0.05,P<0.01),模型组钙(4.76±0.74) mmol/kg较正常对照组(5.21±0.81) mmol/kg显著降低(P<0.05)。治疗组脑含水量(80.13±0.72)%,钠含量(209.4±14.7) mmol/kg,［Ca2+］i (162.5±17.6) nmol/L较模型组显著降低(P均<0.01),钙(5.44±0.76 mmol/kg.干重)却增高(P<0.05)。结论 清开灵对大鼠谷氨酸神经毒性脑水肿有保护作用,其机制可能与拮抗突触体钙离子内流有关。     

Acute effects of two different doses of magnesium sulphate in infants with birth asphyxia.

The effects of two different doses of magnesium sulphate (MgSO4) were evaluated in a group of 15 full term infants with Apgar scores of < 6 at 10 minutes, studied within 12 hours of delivery. Seven infants received 400 mg/kg MgSO4 and eight received 250 mg/kg. After the larger dose, mean arterial pressure (MAP) fell by a mean of 6 mm Hg (13%) at one hour but was not significantly reduced thereafter. Respiratory depression lasted three to six hours. EEG readings and heart rate were not significantly different. Mean serum Mg2+ increased from 0.79 to 3.6 mmol/l at one hour. After 250 mg/kg MgSO4, MAP, EEG, tone and heart rate were unchanged. One infant developed transient respiratory depression. Mean serum Mg2+ rose from 0.71 to 2.42 mmol/l at one hour. MgSO4 (400 mg/kg) has an unacceptable risk of hypotension; 250 mg/kg MgSO4 was not associated with hypotension although respiratory depression can occur.     

新生鼠缺氧缺血脑损伤脑细胞凋亡与钙超载的研究

目的　研究在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑细胞凋亡的规律;探讨细胞凋亡与钙超载的关系及钙离子通道拮抗剂对细胞凋亡的干预作用。方法　用流式细胞仪测定缺氧缺血（HI）后1h～10d内不同时间点脑细胞凋亡比例,并通过激光共聚焦扫描显微镜,观察硫酸镁和川芎嗪对由谷氨酸刺激造成的神经元细胞内Ca     

N-甲基-D-天门冬氨酸受体及其调控的钙内流在大鼠感染性脑损伤中的变化

为探讨Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体及其调控的钙内流在感染性脑损伤发病机制中的作用，采用Ｆｕｒａ－２／Ａｍ荧光法检测大鼠大脑皮质突触体内游离钙浓度（［Ｃａ＋＋］ｉ）。结果表明，注射百日咳杆菌组的［Ｃａ＋＋］ｉ较对照组显著增加（Ｐ均＜０．０１），并与注菌时间呈正相关关系（４小时ｖｓ０．５小时和２４小时ｖｓ４小时，Ｐ＜０．０５和＜０．０１）。ＮＭＤＡ受体的非竞争性拮抗剂ＭＫ－８０１预处理组（ＭＢＰ）的［Ｃａ＋＋］ｉ、脑含水量和伊文思蓝含量均较注菌组显著减少（Ｆ值分别为７２．２５、１６．８９、１４．３６，Ｐ＜０．０１和＜０．０５），并以２４小时［Ｃａ＋＋］ｉ减少最为明显（Ｐ＜０．０１）。提示ＮＭＤＡ受体调控的神经元内钙超载在感染性脑损伤、尤其在迟发性脑损伤的发病机制中起着重要作用。     

三七皂甙治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床研究

目的：探讨三七皂甙对脑细胞的保护作用。方法：用新型钙染色剂Indo-1/Am检测缺氧缺血性脑病(HIE)患儿三七皂甙治疗前后细胞内钙变化,观察三七皂甙对细胞内钙超载的拮抗作用。将HIE患儿分为治疗组24例,对照组18例,同时设正常对照10例。在传统治疗的基础上,治疗组加用三七皂甙5～8 d,分别于入院时、治疗后24 h、72 h检测各组红细胞内游离钙(RBC[Ca2+]i)的浓度变化。结果：HIE治疗组及对照组RBC[Ca2+]i较正常足月儿升高,差异有非常显著性意义(P<0.01),HIE治疗组与HIE对照组比较,RBC[Ca2+]i在治疗前无明显差异(P>0.05),治疗后随着缺氧缺血状态的改善,检测48 h、72 h RBC[Ca2+]i,治疗组RBC[Ca2+]i明显下降,差异有显著性意义(P<0.01),HIE治疗组自身比较,RBC[Ca2+]i在治疗72 h后明显下降,差异有显著性意义[(2.619±0.175)vs(2.358±0.280);P<0.01]。治疗组中枢性呼吸衰竭、循环不良、胃肠功能紊乱治疗的有效率分别为100.0％(5/5)、83.3％(20/24)、91.7％(22/24),对照组有效率分别为20.0％(1/5)、33.3％(6/18)、16.7％(3/18),(P<0.01)。结论：三七皂甙能缓解细胞内钙超载,保护脑组织,改善临床症状。     

缺氧缺血性脑病患儿红细胞胞浆游离钙水平变化的临床意义

目的 探讨红细胞胞浆游离钙(RBC[Ca2+]i)在缺氧缺血性脑病(HIE)发病机制中的作用及其应用价值.方法 选择2002年6月至2006年3月我科收治的28例中、重度HIE患儿作为研究对象,HIE患儿入院后在常规治疗的基础上给予尼莫地平治疗,疗程7～10 d.于治疗前、治疗72 h和7～10 d各采集静脉血1次,采用Fura-2/AM法检测RBC[Ca2+]i水平.以我院产科同期收住的20例正常新生儿作为对照组.结果 (1)中、重度HIE组治疗前后各时间点RBC[Ca2+]i水平均明显高于对照组,差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01),中、重度HIE组间差异元显著性(P＞0.05).(2)HIE息儿RBC[Ca2+]i水平于治疗后72h达到高峰,然后逐渐恢复,至治疗7～10 d仍高于对照组(P＜0.05).(3)RBC[Ca2+]i水平与HIE程度存在明显正相关(r=0.447,P＜0.05).结论 RBC[Ca2+]i参与了HIE的病理生理过程,在HIE发病机制中可能起重要作用,动态监测RBC[Ca2+]i水平可能有助于HIE的早期诊断和预后判断.