自体、异体雪旺细胞及其培养液植入羊膜基底膜修复神经缺损的比较研究

目的比较自体雪旺细胞（Ｓｃｈｗａｎｎｃｅｌ,ＳＣ）、异体ＳＣ、ＳＣ培养液对周围神经损伤后的再生作用。方法取４０只ＳＤ大鼠,将其坐骨神经切除１ｃｍ造成神经缺损。用羊膜基底膜桥接后,分成４组,在羊膜基底膜管中分别植入：（１）自体ＳＣ;（２）异体ＳＣ;（３）ＳＣ培养液;（４）生理盐水,为对照组。术后１个月和３个月,各组分别进行神经－肌电图和组织学观察。结果术后３个月,自体ＳＣ组、ＳＣ培养液组的运动神经传导速度比术后１个月增快１２．１％、１１．２％;运动诱发电位波幅比术后１个月增高１４．９％、４．７％;而异体ＳＣ组和对照组则呈下降趋势。组织学发现：术后１个月４组均有神经轴突长过桥接段。术后３个月自体ＳＣ组、ＳＣ培养液组神经纤维数量增多、轴突直径增粗、髓鞘形成较好。结论自体ＳＣ和ＳＣ培养液对周围神经的再生有很好的促进作用。机体对异体ＳＣ会产生排斥反应,暂不宜采用。     

自体,异体雪旺细胞及其培养液植入羊膜基底膜修复神经缺损的？…

目的 比较自体雪旺细胞、异体ＳＣ、ＳＣ培养液对周围神经损伤后的再生作用。方法：取４０只ＳＤ大鼠,将其坐骨神经切除１ｃｍ造成神经缺损。用羊膜基底膜桥接后,分成４组,在间膜基底膜管中分别植入：（１）自体ＳＣ;（２）异体ＳＣ;（３）ＳＣ培养液;（４）生理盐水,为对照组,术后１个月和３个月,各组分别进行神经－肌电图和组织学观察。结果 术后３个月,自体ＳＣ组,ＳＣ培养液组的运动神经传导速度比术后１个月增快１     

陈旧性神经损伤后雪旺细胞的变化实验研究

目的 观察大鼠坐骨神经损伤后雪旺细胞的变化。方法 切断成年SD大鼠右侧坐骨神经，形成10mm缺损。于术后1～12个月不同时间段取材。标本用p75受体（p75 neurotrophin receptor．p75NTR）、S-100免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜观察，另部分标本进行超微结构观察。结果 神经损伤后1个月，损伤远端神经中p75NTR和S-100的表达最多，在损伤后6个月时p75NTR降至正常水平，S-100则在损伤后9个月时消失。电镜下，雪旺细胞出现在神经内膜管内，神经内膜管下及内膜管周围有大量胶原原纤维增生。结论 大鼠坐骨神经损伤后，雪旺细胞中p75NTR的表达增加，但随损伤时间的延长呈进行性下降，伤后6个月时消失。     

雪旺细胞种于医用组织引导再生胶原膜构建自体人工神经的实验研究

目的;设计并构建一种新型的神经引导导管。方法：将兔雪旺细胞种到用成粘蛋白多孔医用组织引导的再生胶原膜支架培养2周后,用倒置显微镜、扫描电镜观察雪旺细胞吸附、生长迁移情况;以雪旺细胞胶原膜管的形式植入体内,观察它诱导神经再生的能力。结果：成年兔雪旺细胞在医用组织引导再生胶原膜上生长良好,并均匀分布于支架表面,且基质分泌旺盛。体内模型发现神经已通过移植物长入远端,胶原膜已吸收。结论：雪旺细胞可以在多聚医用组织引导再生胶原膜上得到扩增,种有雪旺细胞的医用组织引导再生胶原膜导管可以形成一个诱导神经轴突再生的微环境,形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性,为组织工程方法修复长段神经缺损提供了研究基础。     

雌激素替代治疗对去卵巢骨质疏松大鼠腺垂体滤泡星形细胞中S-100、Cx43蛋白表达的影响

目的研究雌激素替代治疗(estrogen replacement therapy,ERT)对去卵巢骨质疏松(ovariectomized osteoporosis,OVX-OP)大鼠腺垂体滤泡星形(folliculo-stellate,FS)细胞中神经组织蛋白S-100、间隙连接蛋白Cx43表达的影响.方法采用10月龄、未孕产SD雌性大鼠60只,随机分为卵巢切除组(OVX)、假性手术对照组(Sham)和卵巢切除+雌激素替代治疗组(OVX+ERT),每组20只.于术后6周末应用双能X线骨吸收测量法(DEXA)检测Sham组和OVX组大鼠L4-6骨密度(bone min-eral density,BMD).OVX+ERT组大鼠于OVX术后第7～12周按照每周1 mg/kg体重的剂量给予尼尔雌醇,于术后12周末检测大鼠L4-6BMD.制备各组大鼠腺垂体标本切片,应用间接免疫荧光法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)定位和定量分析腺垂体FS细胞中S-100、Cx43的表达.结果术后6周末Sham组L4-6BMD(0.211±0.013)g/cm2及术后12周末的OVX+ERT组L4-6 BMD(0.204±0.010)g/cm2均明显高于术后6周末OVX组L4-6 BMD(0.193±0.006)g/cm2(P＜0.01).S-100蛋白定位于FS细胞的胞浆中,Sham组、OVX组和OVX+ERT组中S-100蛋白表达的阳性率分别为80%、85%和85c%,差异无显著性意义(P＞0.05).Cx43蛋白免疫荧光阳性信号定位于相邻的FS细胞以及相邻的FS细胞与内分泌细胞的胞浆中和(或)胞膜上.Sham组、OVX组和OVX+ERT组中Cx43蛋白表达的阳性率分别是90%、25%和75%,Sham组和OVX+ERT组Cx43蛋白表达的阳性率均显著高于OVX组(P＜0.005).结论SD大鼠OVX术后6周出现骨质疏松;尼尔雌醇能早期有效地防止OVX大鼠腰椎骨量的丢失.三组间S-100表达的稳定性证实FS细胞数量与OVX-OP的发生及ERT的治疗效应无明显相关;而OVX组及OVX+ERT组中FS细胞上Cx43蛋白表达的下降和相对增强则分别与雌激素缺乏导致骨质疏松发生及骨质疏松ERT的治疗效应密切相关.     

改良成年SD大鼠雪旺细胞培养的实验研究

目的应用双酶消化法来提取高纯度和高数量的周围神经雪旺细胞。方法对双酶消化周围神经的时间由３０分钟延长至８０～９０分钟;机械分离周围神经束的方法改为在放大１６倍手术显微镜下分离神经束。对培养细胞进行雪旺细胞数量、Ｌｏｗｒｙ蛋白含量的测定;并用同位素标记测定细胞量和免疫组织化学法观察。结果从成年ＳＤ大鼠１ｃｍ长一段上臂尺神经中,用该法可提取１．７２×１０７个雪旺细胞／毫升,雪旺细胞的纯度和数量是以往所有提取方法中最高的,并且这些雪旺细胞的细胞形态和再生功能均正常。结论该改良方法为研究周围神经再生的机理,提供了一个重要的手段。     

神经生长因子和脑源性神经营养因子基因转入雪旺细胞的实验研究

目的 神经生长因子 (nerve growth factor, NGF)和脑源性神经营养因子（ brain－ derived neurotrophic factor, BDNF）是具有感觉和运动神经元营养活性的因子。为提高雪旺细胞 (Schwann cell, SC)分泌 NGF和 BDNF的能力,将 NGF和 BDNF基因转入 SC进行探讨。方法 用消化后的组织块法和差速离心法分离、纯化雪旺细胞。用脂质体转染法将 NGF和 BDNF基因导入雪旺细胞, ELISA双抗体夹心法检测 NGF和 BDNF的表达。结果 经免疫组化 S－ 100法鉴定 SC纯度达 95％以上。 ELISA双抗体夹心法测定转染后不同时期的 NGF和 BDNF的浓度, 2周后表达增加, 4周后明显增加,差异有非常显著性意义 (P     

激活态雪旺细胞生长相关蛋白43 mRNA表达的研究

目的分析激活态雪旺细胞较正常雪旺细胞生长相关蛋白43(growthassociatiopnrotein43,GAP43)的基因表达变化。方法选取10只SD大鼠,将大鼠右上肢正中神经在腋部切断,预变性,1周后取1cm长正中神经采用双酶消化法获取雪旺细胞并进行激活得到激活态雪旺细胞;取左上肢正常正中神经经双酶消化法获取正常态雪旺细胞作为对照。自雪旺细胞提取mRNA,应用rt-PCR的方法扩增GAP43基因,取PCR产物行1%琼脂糖凝胶电泳,用低浓度的绿色荧光核酸胶染剂染色,测量荧光强度,计算目标基因和内标基因(GAPDH)PCR产物的荧光强度比值,以配对t检验比较实验组和对照组结果。结果激活态雪旺细胞GAP43PCR产物荧光强度比值较正常雪旺细胞明显增高,差异有统计学意义(P=0.003)。表明激活态雪旺细胞较对照组正常雪旺细胞GAP43mRNA表达明显增多。结论激活态雪旺细胞GAP43的基因表达较正常雪旺细胞增强,这可能是其促进神经再生的重要机制。     

大鼠臂丛神经慢性卡压后不同时程神经组织的超微结构研究

目的 探讨大鼠臂丛神经慢性卡压后不同时程神经组织的超微结构变化。方法 建立大鼠慢性卡压模型，对卡压后不同时程神经组织的细胞成分进行超微结构的量化分析，有髓神经纤维数目计数，测定髓鞘厚度、脱髓鞘神经纤维、空化神经纤维，以及观察巨噬细胞、新生有髓神经纤维。结果 慢性卡压神经的超微结构较正常神经有明显变化，但又与急性神经损伤有所不同：(1)有髓神经纤维数目在早期无明显减少，在中期明显减少，在后期虽然总数仍减少，但与中期相比却呈上升趋势，这与后期出现的新生有髓神经纤维有关。(2)髓鞘厚度一直呈下降趋势，并与卡压时程呈正相关。(3)巨噬细胞活性在卡压12周时明显增强，内含大量退变髓鞘及坏死神经轴突。(4)在卡压后16周组出现较多新生有髓神经纤维，但髓鞘结构发育不完善，髓鞘厚度较薄。结论 脱髓鞘改变即髓鞘厚度的变化是卡压神经组织的早期变化，神经轴突的变化(空化神经纤维)是卡压神经组织的晚期变化。神经的慢性卡压过程是神经纤维变性、坏死和神经纤维再生的两种相反方向的不平衡的动态变化过程，并以损伤占主导地位。     

Morphological study of Schwann cells remyelination in contused spinal cord of rats

Objective:To study the role and effect of Schwann cells (SCs) remyelination in contused spinal cord.Methods:Green fluorescence protein expressing-SCs were transplanted into the epicenter,rostral and ca...     

转染NGF基因的Schwann细胞对慢性神经根嵌压伤后神经修复的作用

目的观察转染NGF基因的Schwann细胞（SCs）在慢性神经根嵌压伤后神经修复中的作用。方法建立大鼠腰神经根慢性嵌压伤的动物模型,体外培养、纯化SCs并转染NGF基因,检测基因表达后种植于神经根嵌压伤处,术后2周处死动物切取神经根组织,行western blot、组织形态学及免疫组织化学检测。结果转染NGF的SCs可以在体内长期存活并形成新的髓鞘,较生理盐水对照组及单纯SCs组显著促进慢性神经根嵌压伤后的神经修复。结论转染NGF基因的SCs在慢性神经根嵌压伤后的神经修复中具有显著的促进作用,为慢性神经损伤的基因治疗提供了新的方法。     

应用激活态的雪旺细胞填充导管修复周围神经缺损的初步研究

目的　了解激活态的雪旺细胞在修复周围神经缺损中的作用。方法　将具有激活态的雪旺细胞填充硅管后修复大鼠前臂正中神经缺损 (12mm)。并用新鲜神经移植或单纯硅管修复作对照。术后 12周检测大鼠前臂屈肌的肌肉湿重和肌张力 ,用增殖细胞核抗体 (proliferationcellnuclearantigen ,PCNA)免疫组化方法标记。同时用计算机图像分析和S 10 0蛋白及单克隆抗体神经丝荧光免疫组化方法标记再生的神经。结果　激活态组的神经再生和肌张力的恢复明显好于对照组 ,两者差异均有显著性意义(P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。激活态组肌肉湿重的恢复率为 (88.2 3± 6 .0 8) % ;肌肉最大收缩张力的恢复率为 (10 1.34± 47.6 2 ) % ;肌收缩张力的恢复率为 (93 .48± 15 .72 ) % ;PCNA表达再生肌细胞最多。计算机图像分析激活态组神经再生轴突数为 (3 841± 5 2 2 )个 /条 ;再生轴突面积平均值为 2 3 .70 μm2 。S 10 0蛋白及单克隆抗体神经丝荧光免疫组化方法标记 ,证实激活态组再生的神经生长最好。结论　应用激活态的雪旺细胞填充硅管来修复正中神经缺损 ,术后神经再生和肌张力的恢复比自体神经移植和单纯硅管修复效果要好 ,为修复周围神经缺损提供了一个新的好方法     

不同活化状态的巨噬细胞对雪旺细胞增殖、分泌神经生长因子功能的影响

目的 观察不同活化状态的巨噬细胞对雪旺细胞(SCs)生理功能的影响.方法 分离、培养成年SD大鼠巨噬细胞,利用髓鞘组织(20μg/well)使其激活;从新生1d SD大鼠坐骨神经内分离SCs(1×106个/ml)并培养于Transwell下室.共培养组:激活状态的巨噬细胞加入到Transwell上室;对照组1:Transwell上室内加入未激活的巨噬细胞;对照组2:Transwell上室内加入不含细胞的培养基.通过细胞计数、3H-TdR掺入法检测SCs增殖情况,Western blot检测SCs表达神经生长因子(NGF)水平.结果 共培养组从新生大鼠内获取4.16×106个SCs,明显高于对照组1(3.83×106)和对照组2(3.19×106)(P<0.05);3H-TdR结果显示细胞增殖水平(0.2766±0.0079)明显强于对照组1(0.2268±0.0084)和对照组2(0.1929±0.0031)(P<0.05);WB结果显示NGF表达水平明显高于对照组(P<0.05). 结论巨噬细胞对SCs的影响受其活化状态的影响,激活状态的巨噬细胞可以明显促进SCs增殖,增强其表达NGF的能力.     

Study in vitro of populating autogenous Schwann cells into chemical extracted allogenous nerve

Objective:To look for an ideal substance to repair large gap of nerve difect after injury by culture of Schwann cells(Scs)and preparation of acellular allogenous nerve grafts(ANG) with chemical extraction.Methods:The double adhesion culture and Arab-c to prohibit the fibroblast growth were used to achieve high-purified Scs.Triton-x-100 and sodium deoxycholate were used to achieve ANG.Finally the Scs were microinjected into the acellural nerve grafts and cultured in vitro.The consequence was analysed.Results:High purified Scs and ANG were acquired, which could integrate each other well.Scs could survive and transfer to aline in vitro.Conclusions:Populating Scs into chemical extracted ANG may be an ideal substance to repair the large gap of nerve defect after injury.     

不同预变性时间大鼠神经移植的研究

目的 观察大鼠不同预变性时间神经移植性对神经再生的影响。方法 以Ｗｉｓｔａｒ大鼠为实验动物,左侧腓总神经做移植供体,修复右侧腓总神经缺损。预变性时间分别为１、２、３周。术后分别于６、１０周进行检测。通过电生理学,组织学计量,胫前肌指数和电镜超微结构来评价神经再生的结果。结果 预变性组神经移植后神经再生的电生理学,组织学,组织学计量,胫前肌指数优于新鲜神经移植,术后６周电镜可观察到有髓鞘发育良好的轴     

感觉性和运动性神经来源许旺细胞神经生长因子的表达

目的;研究感觉性和运动性许旺细胞神经生长因子的表达是否有区别,进而探讨对神经特异性再生的影响。方法：体外培养高纯度的运动性许旺细胞,每种细胞分别在常规和添加白细胞介素－1培养基中培养,用双抗体夹心ELISA法测量不同时间培养培养基中神经生长因子表达量。结果：两种培养条件一,感觉性许旺细胞的神经生长均呈双峰状,第二峰较第一峰明显增高,运动性许旺细胞的表达在第6、7d达峰值,但总体水平较感觉性许旺细胞为低。结论：两种许旺细胞神经生长因子的表达量和特点具有差别,这种差别可以为解释神经特异性再生提供依据。     

神经生长液含药血清对神经元生长和雪旺细胞增殖的影响

目的 观察神经生长液含药血清对体外培养的背根神经节神经元生长和雪旺细胞增殖的影响,探讨其促损伤神经修复的机制.方法 制备神经生长含药血清;采用新生大鼠背根神经节及雪旺细胞体外培养,通过形态学分析,观察神经生长液含药血清对背根神经节神经元突起生长的影响;采用MTr、BrdU标记和细胞计数法,观察神经生长液含药血清对雪旺细胞活力及其增殖的影响.结果 高剂量的神经生长液含药血清,可有效地促进大鼠背根神经节神经元生长;高、低剂量的神经生长液含药血清均能显著增加大鼠雪旺细胞的活力,促进雪旺细胞增殖.结论 神经生长液含药血清具有促进神经元生长、增强雪旺细胞活力、促进雪旺细胞增殖作用.     

激活态雪旺细胞在细胞培养下的生长规律

目的　了解激活态雪旺细胞在细胞培养下的生长规律。方法　应用改良的雪旺细胞培养法体外培养激活态雪旺细胞 ,通过激活态雪旺细胞在各生长点 (3d ,5d,7d ,9d,1 1d ,1 3d)的计数 ,绘制激活态雪旺细胞的生长曲线。作Lowry蛋白测定 ,H3 胸腺嘧啶核甙测定 ,了解激活态雪旺细胞在细胞培养下的生长情况。结果　每个时间段检测激活态雪旺细胞的生长繁殖能力 ,Lowry蛋白含量 ,H3 胸腺嘧啶核甙的含量 ,均数倍于正常态的雪旺细胞 ;两者差异均有非常显著性意义 (t =2 2 3、67 1、72 4,P <0 .0 0 1 )。结论　激活态雪旺细胞在细胞培养下具有旺盛的生长繁殖能力