小檗碱对人宫颈癌细胞生物学行为及裸鼠成瘤的影响

目的:研究小檗碱对人宫颈癌细胞生物学行为及裸鼠成瘤的影响。方法:将不同浓度小檗碱(5、20、40mg/L)作用于HeLa及CaSki细胞,MTT法检测HeLa及CaSki细胞的增殖能力;光学显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;侵袭及迁移实验研究细胞侵袭和迁移能力;Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax及MMP-9表达。显微镜下观察HeLa及CaSki细胞中NF-κB p65蛋白阳性表达情况并计算阳性表达率。建立宫颈癌裸鼠模型,腹腔给予不同浓度小檗碱(10、30、50mg/L),观察裸鼠肿瘤体积变化及肿瘤组织中Bcl-2、Bax、MMP-9、NF-κB p65阳性表达情况。结果:小檗碱对HeLa及CaSki细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性,细胞抑制率随着作用时间及作用剂量的增加而升高。小檗碱促进HeLa及CaSki细胞凋亡、降低细胞侵袭迁移能力。随着小檗碱浓度增加,HeLa及CaSki细胞内Bax蛋白表达量增加,而Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65蛋白表达量显著降低。小檗碱能明显降低肿瘤体积,且呈剂量依赖性降低Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65蛋白表达,提高Bax蛋白表达。结论:小檗碱能有效抑制宫颈癌增殖及侵袭转移并诱导其发生凋亡,其作用机制可能与降低Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65表达及提高Bax表达有关。     

一氧化氮与HPV感染的关系及其对子宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨一氧化氮(NO)与HPV感染的关系及其对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响.方法 选择2009年12月1日至2010年8月5日在复旦大学附属妇产科医院宫颈疾病诊疗中心行阴道镜检查的患者115例,应用HPV分型检测试剂盒(可检测21种HPV亚型)进行HPV分型,同时应用Griss法间接检测官颈局部NO含量.在体外培养的宫颈腺癌细胞株HeLa细胞和宫颈鳞癌细胞株Caski细胞中,加入不同浓度(终浓度分别为0.125、0.25、0.5 、1.0及2.0 mmol/L)NO供体--硝普钠(SNP)后培养24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并应用荧光定量逆转录PCR技术及蛋白印迹法检测SNP处理后细胞中HPVE6、E7 mRNA的表达及p53蛋白的表达.结果 (1)115例患者中,宫颈HPV感染93例,其中高危型50例,低危型43例;无HPV感染22例.115例患者的宫颈局部均检测到NO,其中高危型HPV感染患者的宫颈局部NO含量为(47.6±1.4)μmol/L,低危型HPV感染者为(24.1±1.2)μmol/L,无HPV感染者为(22.8±0.3)μmol/L,高危型HPV感染者高于低危型HPV感染者和无HPV感染者,差异有统计学意义(P＜0.05);而低危型HPV感染者与无HPV感染者比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)不同浓度(0.125、0.25、0.5 1.0及2.0 mmol/L)SNP处理HeLa、Caski细胞24 h后,能抑制细胞生长、促进细胞凋亡,当SNP浓度≥1.0 mmol/L时,与SNP处理前比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).1.0 mmol/L的SNP处理24h后,HeLa细胞中HPV18 F6、E7 mRNA的表达水平(分别为19.181±0.360、17.571±0.010)明显低于SNP处理前(分别为27.362±0.191、22.962±0.053;P＜0.05),p53蛋白的表达水平(1.17±0.03)明显高于SNP处理前(0.23±0.05;P＜0.05);但Caski细胞中HPV16E6、E7mRNA和P53蛋白的表达在SNP处理前、后无明显变化(P＞0.05).结论 宫颈局部微环境中NO含量增加与感染高危型HPV有一定的相关性;SNP能抑制宫颈癌细胞的生长,促进其凋亡,降低HPV18 E6、E7 mRNA的表达及活化p53蛋白,其机制可能是宫颈腺癌细胞株HeLa细胞对SNP更敏感.NO释放增加可能是官颈局部微环境清除HPV的免疫机制之一.

Abstract：

Objective To study the relationship between nitric oxide within cervical microenvironment and different HPV types as well as the effect of sodium nitroprusside( SNP), a nitric oxide donor, on the proliferation and apoptosis of cervical cancer cell lines. Methods HPV typing test was assessed from 115 women by using high-risk HPV (HR-HPV) 21 typing test and the release of cervical nitric oxide(NO) was assessed as nitrate, nitrite in cervical fluid. Cervical NO was then compared between women showing different HPV types. Proliferation of Caski and HeLa cervical cells was determined by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay, cell apoptosis was detected by flow cytometry after 24 hours treated by different final concentration of SNP (0. 125,0. 25,0. 5,1.0 and 2. 0 mmol/L, respectively). The expressions of HPV E6,E7 gene mRNA and p53 protein were detected by SYBR Green Ⅰ quantitative real-time PCR and western blot. Results ( 1 ) The cervical NO release of women with HR-HPV was higher compared to that in HPV negative women [ (47. 6 ± 1.4) μmol/L vs ( 22. 8 ± 0. 3 ) μmol/L; P ＜ 0. 05 ]; but there was no statistical difference between low-risk HPV (LR-HPV) group [ (24. 1 ± 1.2 ) μmol/L] and control group (P ＞0. 05 ). (2)After 24 hours treated by different final concentration of SNP, the results shown that SNP could inhibited the proliferation and increased apoptosis rate in Caski and HeLa cells, in which the concentration of SNP ≥ 1.0 mmol/L , there were significantly different ( P ＜ 0. 05 ), while when SNP ≥2. 0mmol/L, the proliferation of cells inhibited seriously. Treated by SNP ( 1.0 mmol/L ) 24 hours, the expressions of HPV18 E6, E7 mRNA in HeLa cells were reduced from 27. 362 ±0. 191,22. 962 ±0. 053 to19. 181 ±0. 360, 17. 571 ±0. 010 and the protein expression of p53 increased from 1. 17 ±0. 03 to 0. 23 ±0. 05, there were statistically significant differences between adding SNP group and the control group ( P ＜0. 05); but there were no statistically significant differences in HPV16 E6, E7 mRNA and that of p53 in Caski cells( P ＞ 0. 05 ). Conclusions The presence of HR-HPV is associated with an increased release of NO in the human uterine cervix; NO could inhibit the growth and proliferation and enhance the apoptosis of cervical cancer cells, inhibit the expression of HPV18 E6, E7 mRNA in HeLa cells and activate the expression of p53 protein, the mechanism may be due to higher sensitivity of HeLa cells (cervical adenocarcinoma cell) to SNP. The increasing release of NO may play a role in regulating the elimination of HPV in cervical microenvironment, which is a part of mucous membrane immunity.     

GPR30在宫颈癌细胞生长中的作用及其机制研究

目的:体外研究雌激素膜受体GPR30对宫颈癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:选择宫颈腺癌HeLa和宫颈鳞癌SiHa细胞株,分别用GPR30特异性激动剂G1和拮抗剂G15处理宫颈癌细胞株。RT-PCR、Western blot法检测处理前后宫颈癌HeLa与SiHa细胞中GPR30、TLR3 mRNA及其蛋白表达变化;MTT法检测G1、G15及Poly I:C处理对宫颈癌细胞生长的影响。结果:(1)HeLa细胞中GPR30表达量高于SiHa细胞。G1处理后HeLa、SiHa细胞中GPR30 mRNA及其蛋白表达水平增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05;P0.05);G15处理后,HeLa、SiHa细胞中GPR30 mRNA及其蛋白表达水平降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05;P0.05)。(2)HeLa、SiHa细胞中TLR3 mRNA表达量分别为(0.5327±0.05373)、(0.3526±0.05774),蛋白表达量分别为(0.3572±0.097039)、(0.5002±0.09718)。G1能降低He La、Si Ha细胞中TLR3mRNA及其蛋白表达水平,G1 10-6mol/L处理组与对照组比较差异有统计学意义(P均0.05)。G15能增高HeLa、SiHa细胞中TLR3 mRNA及其蛋白表达水平,G15 10-5mol/L处理组与对照组比较,差异有统计学意义(P均0.05),与Poly I:C处理组比较差异无统计学意义(P0.05)。(3)10-6mmol/L、10-5mmol/L G1分别处理后,宫颈癌HeLa、SiHa细胞生长增殖率分别为(16.68±5.86)%、(26.67±3.25)%及(14.99±6.43)%、(22.72±1.77)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均0.05)。10-6mmol/L、10-5mmol/L G15分别处理后,宫颈癌HeLa、SiHa细胞的生长抑制率分别为(21.09±2.32)%、(22.99±3.15)%及(15.86±6.49)%、(19.18±2.61)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均0.05)。结论:宫颈癌细胞中存在雌激素膜受体GPR30表达,宫颈腺癌细胞中GPR30表达量高于宫颈鳞癌细胞,体外调节GPR30表达可影响宫颈癌细胞生长。抑制GPR30表达可通过上调TLR3表达而抑制宫颈癌细胞生长,GPR30可能成为宫颈癌治疗的新靶点。     

调节TLR3/PI3K信号转导通路抑制宫颈癌细胞生长的体外研究

目的:探索调节TLR3/PI3K信号转导通路体外抑制宫颈癌细胞生长的作用。方法:成功构建携带HPV18 E6基因siRNA的慢病毒载体用于转染HeLa细胞,以RT-PCR和Western blot法检测宫颈癌HeLa细胞E6、TLR3及PI3K mRNA和蛋白表达水平的改变。MTT法检测宫颈癌细胞生长抑制率。结果:(1)LY294002组肿瘤细胞TLR3、PI3K mRNA表达水平为0.2863±0.0238、0.2269±0.0382,其蛋白表达分别为0.7042±0.0103、0.6326±0.0153,分别低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01;P<0.01),肿瘤细胞生长抑制率为(61.92±5.49)%;(2)慢病毒转染组肿瘤细胞HPV18 E6、TLR3、PI3K的mRNA表达水平分别为0.1360±0.0140、0.2367±0.0321、0.2013±0.0461,均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001;P<0.001;P=0.005);(3)慢病毒转染组肿瘤细胞HPV18 E6、TLR3、PI3K蛋白表达水平分别为0.1670±0.0290、0.6834±0.0173、0.5670±0.0440,均低于对照组,差异有统计学意义(P=0.005;P=0.002;P=0.005);(4)慢病毒转染组肿瘤细胞生长抑制率为(39.6±18.0)%,与对照组相比,转染组细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义(P=0.047)。结论:TLR3/PI3K信号转导通路在HPV18 E6介导的宫颈癌细胞转化及生长中发挥重要作用,抑制HPV18 E6表达能在mRNA和蛋白水平有效下调TLR3/PI3K表达,抑制宫颈癌HeLa细胞生长。TLR3信号转导通路有望成为治疗宫颈癌的新靶点。     

转录因子NF-κB家族、STAT1、ELK1核表达与HPV16阳性宫颈癌发生发展的相关性及其预后意义

目的:探讨转录因子NF-κB家族、STAT1、ELK1在HPV16阳性宫颈癌中的核表达及其与宫颈癌发生、发展的关系,并分析其临床预后意义。方法:免疫组化法检测NF-κB家族、STAT1、ELK1在HPV16阳性的116例宫颈癌、26例HSIL、12例LSIL、24例正常宫颈组织及高危型HPV阴性的10例LSIL、27例正常宫颈组织中的核表达水平,比较不同HPV感染状态、各种类型宫颈组织中各转录因子的核表达差异,分析其与宫颈癌发生发展的相关性及其临床预后意义。结果:NF-κB家族成员c-Rel、p65、p50的核阳性表达率与宫颈病变程度呈正相关,STAT1的核阳性表达率与宫颈病变程度呈负相关,差异均有统计学意义(P0.05)。ELK1在正常宫颈组织中表达较低,在各组宫颈病变组织中表达无统计学差异(P=0.210)。HPV16早期感染组的c-Rel和p65阳性表达率明显高于正常对照组(P0.05);晚期感染组的NF-κB p50阳性表达率明显高于早期感染组(P0.05),c-Rel在晚期感染组也有显著升高(P0.05);晚期感染组的STAT1阳性表达率明显低于早期感染组(P0.05)。Logistic回归分析示,c-Rel、p65核表达与宫颈癌发生相关(P0.05),而c-Rel、p50、STAT1核表达则与宫颈癌发展相关(P0.05)。宫颈癌中NF-κB家族各成员核表达呈正相关(P0.05),而p65、p50与STAT1核表达呈负相关(P0.05)。c-Rel、p65分别与宫颈癌患者脉管浸润、宫旁浸润有关(P0.05)。生存分析示,p65、STAT1与宫颈癌患者生存预后相关,高p65核表达、无STAT1核表达者总体生存率较低(P0.05)。结论:各转录因子分别在宫颈癌发生发展的不同时期参与下游基因的调控,c-Rel、p65与宫颈癌发生相关,而c-Rel、p50、STAT1与宫颈癌发展相关。p65、STAT1可作为HPV16阳性宫颈癌预后预测因子。     

β-D-葡聚糖通过下调HPV16 E6和重新激活p53调节HPV16阳性宫颈癌细胞的生物学行为

目的:研究β-D-葡聚糖在宫颈癌细胞中的作用及可能机制。方法:CCK-8法检测β-D-葡聚糖对宫颈癌细胞CaSki、HeLa和SiHa细胞增殖的影响，伤口愈合试验检测细胞迁移情况，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中HPV16 E6/E7、HPV18 E6/E7、p53和p21 mRNA表达水平，Western blot检测N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、p53、波形蛋白、p21蛋白表达水平。以宫颈癌CaSki细胞为研究对象，在雌性BALB/c小鼠皮下注射成瘤，验证β-D-葡聚糖在体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:β-D-葡聚糖对不同宫颈癌细胞增殖的影响不同，对CaSki细胞增殖有显著的时间依赖性抑制作用，对HeLa细胞增殖无显著影响，对SiHa细胞作用72h后表现为促进增殖作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、HeLa和SiHa细胞的迁移都有抑制作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、SiHa的细胞周期有调节作用并能促进其凋亡(P<0.05),但对HeLa细胞无显著影响。与对照组相比，β-D...     

FANCF在宫颈癌的表达缺陷与其临床特征关系的研究

目的:研究FANCF基因在宫颈癌的表达缺陷与高危型HPV感染及宫颈癌临床特征的关系.方法:逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)及Western Blot分析检测60例宫颈癌组织标本及60例正常宫颈组织中FANCF mRNA及蛋白的表达,并检测高危型HPV感染情况.结果:49例(81.7％)宫颈癌组织中FANCF mRNA和蛋白表达缺陷(下降或缺失).宫颈癌组织与正常宫颈组织相比,FANCF mRNA、蛋白相对表达值均下降(0.56±0.12 vs 1.48±0.09和0.16±0.03 vs0.98±0.04),差异均有统计学意义(P＜0.05).FANCF表达缺陷与宫颈癌患者FIGO临床分期、WHO分级、肿瘤大小及脉管转移、高危型HPV感染有关.结论:宫颈癌患者FANCF表达缺陷.FANCF表达缺陷对宫颈癌发生、进展有一定的作用.FANCF表达缺陷与高危型HPV感染可能在宫颈癌的发生中起协同作用.     

TLR3、NF-κB和IL-1β在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及意义

目的:检测TLR3、NF-κB及IL-1β在宫颈上皮内瘤变(CIN)与宫颈癌中的表达,探讨3者的相关性及其与临床病理参数的关系。方法:收集中国医科大学附属盛京医院2014年1月至2014年12月妇科手术标本共120例,其中宫颈鳞癌60例,CIN 40例,正常宫颈20例。采用免疫组化法检测TLR3、NF-κB及IL-1β表达。结果:正常宫颈、CIN、宫颈癌中TLR3阳性表达率分别为100%、75%、23.23%,NF-κB阳性表达率为0%、60%、90%,IL-1β阳性表达率为0%、70%、90%,各组间差异均有统计学意义(P0.005)。TLR3表达与宫颈癌临床分期相关(P0.05);NF-κB及IL-1β与临床分期、病理分级及淋巴结转移相关(P0.05)。TLR3与NF-κB、IL-1β表达均呈显著负相关(rs=-0.478,P0.01;rs=-0.45,P0.01);NF-κB与IL-1β表达呈显著正相关(rs=0.589,P0.01)。结论:宫颈癌中TLR3呈低表达,NF-κB与IL-1β均呈高表达,可为TLR激动剂治疗宫颈癌提供一定的理论依据。     

HPV16 E6小干扰RNA与宫颈癌细胞中E6 p53 p21关系的研究

目的 探讨HPV16E6小干扰RNA（siRNA）与宫颈癌CaSki细胞中E6、p53、p21之间的关系。方法 2004年9月至2005年3月于四川大学华西第二医院,应用化学合成针对HPV16E6的siRNA借脂质体转染CaSki细胞,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术检测E6siRNA转染前后细胞中HPV16E6、p53、p21mRNA及其蛋白表达的变化。结果 转染24h,E6mRNA的表达显著低于空白组（P〈0.05）。各时间点p53、p21mRNA的表达差异无显著性意义（P〉0.05）。转染48h,E6蛋白表达明显下调,p53、p21蛋白表达相应升高。结论 HPV16E6siRNA能特异、高效地沉默宫颈癌细胞E6mRNA的表达,减少对野生型p53的降解,恢复p53蛋白的功能活性。RNA干扰（RNAi）技术可为HPV感染相关性疾病提供一种新的特异性基因治疗方法。     

MTA1基因表达与子宫颈癌细胞侵袭转移的关系

目的：探讨MTA1基因表达与宫颈癌细胞侵袭转移的关系。方法将真核细胞表达载体pcDNA3质粒、MTA1基因表达载体pcDNA3-MTA1质粒、MTA1基因RNA干扰载体pSilencer3.1-MTA1-siRNA质粒稳定转染宫颈癌细胞株CaSki细胞（分别命名为对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组）,逆转录(RT) -PCR技术和蛋白印迹法检测CaSki细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及平板集落形成实验检测CaSki细胞的增殖情况,划痕实验、穿膜实验检测CaSki细胞的迁移能力,基质黏附实验检测CaSki细胞的黏附能力,细胞侵袭实验检测CaSki细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测CaSki细胞的细胞周期比例。将3组CaSki细胞接种于裸鼠腋下,观察其在裸鼠体内的生长情况。结果 MTA1组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显高于对照组,而MTA1 -siRNA组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显低于对照组。MTT比色法检测显示,与对照组比较,自第2天起,MTA1组细胞的生长速度加快,而MTA1-siRNA组细胞的生长速度减慢,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);平板集落形成实验显示,对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组的克隆数分别为( 133±6)、(169±10)和(57±5)个,MTA1组明显多于对照组（P＜0.05）,而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。划痕实验显示,MTA1组细胞的迁移能力明显增强,而MTA1 -siRNA组细胞的迁移能力明显减弱;穿膜实验显示,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组穿膜细胞数分别为( 153±17)、( 247±38)和(82±10)个,MTA1组明显多于对照组(P＜0.05),而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。基质黏附实验显示,孵育90 min时,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的黏附率分别为(69.3±3.6)％、(80.4±5.6)％、(39.2±7.4)％,MTA1组明显高于对照组(P＜0.05),而MTA1 -siRNA组明显低于对照组（P＜0.05）。细胞侵袭实验显示,对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组穿膜细胞数分别为(231±19)、(354±36)和(76±7)个,MTA1组明显多于对照组(P＜0.05),而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。流式细胞仪检测显示,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的G1、S、G2期细胞比例分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。裸鼠接种CaSki细胞30d后,对照组、MTA1组、MTA 1-siRNA组裸鼠肿瘤体积分别为(519 ±236)、(2245±780)、(111±65) mm3,肿瘤质量分别为(0.41 ±0.19)、(2.10±0.39)、(0.11±0.08)g,MTA1组均明显高于对照组(P＜0.05),而MTA1 -siRNA组均明显低于对照组(P＜0.05)。结论MTA1基因促进宫颈癌细胞的侵袭转移,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞生长减慢,细胞侵袭及转移能力下降,从而逆转宫颈癌细胞的恶性表型,为进一步研究MTA1基因的作用机制以及应用RNA干扰技术进行以MTA1基因为靶点的治疗打下了一定的基础。     

一氧化氮及一氧化氮合酶与卵巢肿瘤凋亡的关系

目的探讨卵巢良、恶性肿瘤患者血清、肿瘤组织、腹水中一氧化氮(nitricoxide,NO)及其合酶(nitricoxidesynthase,NOS)含量与肿瘤凋亡的关系。方法用分光光度计测定NO、NOS、iNOS活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果恶性卵巢肿瘤患者血清、肿瘤组织中NO、NOS、iNOS高于良性肿瘤患者(P<0.05);腹水或腹腔冲洗液中iNOS亦高于良性(P<0.05),但腹水中NO、NOS与良性无差异(P>0.05)。恶性肿瘤细胞凋亡率高于良性(P<0.05)。结论NO、NOS、iNOS与卵巢肿瘤的恶性行为及凋亡有关,检测患者血清、组织、腹水中的NO、NOS、iNOS对鉴别良、恶性肿瘤有一定参考价值,可作为观测卵巢癌疗效及预后的指标。     

尿皮素对体外培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的:通过检测尿皮素(UCN)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一氧化氮(NO)生成及一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,探讨UCN调节胎儿-胎盘血管张力的分子机制。方法:在离体培养的HUVEC中加入不同浓度的UCN(0、0.1、1、10nmol/L)、10nmol/L促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)及向以上各组UCN/CRH同时加α-helical-CRH进行体外培养,用硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO的水平,蛋白印迹法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平的变化。结果:在与UCN共同培养4~8h后,HUVEC细胞上清液中NO水平呈时间和剂量依赖性变化,随着培养时间的延长,UCN浓度增加,NO水平逐渐升高;UCN组HUVEC iNOS表达水平比对照组明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性升高。而各组eNOS表达水平与对照组比较无明显变化(P>0.05)。UCN/CRH α-helical-CRH组HUVEC上清液中NO水平和HU-VEC iNOS表达水平与对照组比较无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05),与相同浓度UCN/CRH组比较NO水平和iNOS蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:UCN可促HUVEC合成及释放NO,NO生成增多与UCN通过促进肾上腺皮质激素释放激素2β受体(CRH-R2β)正相调节iNOS蛋白表达有关,这可能是UCN调节胎儿-胎盘血管张力的分子机制之一。     

子宫颈组织中一氧化氮合酶的表达及其临床意义的研究

目的：研究正常宫颈组织、子宫颈糜烂组织及子宫颈癌组织中iNOS、eNOS表达,分析它们与病理、临床表现之间的关系,探讨NO在正常子宫颈、宫颈炎症和肿瘤中的作用。方法：对31例行病理及iNOS、eNOS检测,病理检查采用HE染色法;iNOS、eNOS检测采用免疫组化法,NOS阳性表现为黄褐色染色。结果：①宫颈糜烂在切片中表现为上皮细胞水肿,上皮下免疫细胞浸润,上皮缺损,柱状上皮化生等,宫颈腺体间质及腺腔内可见白细胞及淋巴细胞浸润、渗出,子宫颈癌表现为癌细胞失去极性,核异型、大小不一,癌巢间质有免疫细胞浸润;②iNOS与eNOS均呈颗粒状,黄褐色杂色。在宫颈分布较广泛,主要分布于宫颈鳞状上皮、腺体上皮、柱状上皮、血管内皮等处。在宫颈鳞状上皮中,iNOS、eNOS并非均匀分布于上皮中,中间层细胞染色较强。eNOS染色弱于iNOS;宫颈糜烂者巨噬细胞及肥大细胞、中性粒细胞等免疫细胞iNOS呈阳性染色,均为胞浆着色;宫颈癌者癌细胞iNOS胞浆着色,部分核呈弱阳性杂色,癌巢间质免疫细胞iNOS阳性染色,而eNOS仅可见于血管内皮。结论：NOS在宫颈分布较为广泛,在细胞分泌、炎症反应、抗肿瘤免疫过程中发挥着重要作用。     

不同海拔地区健康儿童气体信号因子一氧化氮及硫化氢的变化

目的探讨气体信号因子一氧化氮(NO)及硫化氢(H2S)在不同海拔地区健康儿童中的含量差异。 方法2005-06—2006-02，将随机选取的北京市和青海省海北州体检时的健康儿童青少年，按照不同海拔分组：北京地区(平均海拔43.5m)17名， 男11名，女6名，年龄(7.28±4.79)岁；青海省海北州地区(平均海拔3200m以上)25名，男12名，女13名，年龄(10.42±0.49)岁。均空腹取肘静 脉血，采用Griess法测定血清NO浓度，敏感硫电极法测定血清H2S的浓度。 结果北京地区健康儿童血清中NO浓度(60.58±16.85)μmol/L，低于青海省海北州地区健康儿童血清中NO浓度(73.88±18.97)μmol/L；北京地 区健康儿童血清中H2S浓度(65.55±9.07)μmol/L，高于青海省海北州地区健康儿童血清中H2S浓度(46.92±6.46)μmol/L。 结论高海拔地区健康儿童血清中NO浓度明显高于低海拔地区，而H2S浓度则明显低于低海拔地区。     

一氧化氮与妊娠早期人巨细胞病毒宫内活动性感染的关系

目的　探讨一氧化氮与妊娠早期人巨细胞病毒 (HCMV)宫内活动性感染的关系。方法　选取既往有自然流产、死胎、胎儿畸形、胎儿生长受限等异常妊娠史并行人工流产术的早孕妇女 81例 ,应用逆转录 聚合酶链反应技术检测其胎盘绒毛组织HCMV mRNA的表达 ;酶联免疫吸附试验法测定其血清HCMV IgM ;原位杂交法检测其蜕膜巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶 (iNOS) mRNA的表达并行定量分析。结果　 (1) 81例孕妇中有 6例胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性 ,14例血清HCMV IgM阳性 ,阳性率为 17 3 % (14/ 81)。依据HCMV mRNA与HCMV IgM检测结果 ,81例孕妇分为 3组 :Ⅰ组 :HCMV mRNA与HCMV IgM均阳性 5例 ,其宫内传播率为 3 5 7% (5 / 14) ;Ⅱ组 :HCMV mRNA阴性而HCMV IgM阳性 9例 ;Ⅲ组 :HCMV mRNA与HCMV IgM均阴性 66例。另有 1例HCMV IgM阴性者其胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性。 (2 )Ⅰ组患者蜕膜iNOS mRNA呈强表达 ,其吸光度值为 0 412±0 0 19,明显高于Ⅱ组的 0 172± 0 0 3 3与Ⅲ组的 0 167± 0 0 3 3 ,Ⅰ组与Ⅱ组及Ⅲ组比较 ,差异有显著性(P <0 0 5 ) ;Ⅱ组与Ⅲ组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。 1例HCMV IgM阴性而胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性者 ,蜕膜iNOS mRNA也呈强表达 ,其吸光度值为 0 40 3。结论　一氧化氮可     

早产妇女血清一氧化氮水平测定及研究

目的 探讨一氧化氮（ＮＯ）水平与妊娠及早产的关系。方法 采用Ｇｒｅｉｓｓ法分别测定３５例早产妇女（早产组），６６例妊娠妇女（妊娠组），２５例非妊娠妇女（非妊娠组）静脉血中ＮＯ的含量。早产妇女血清ＮＯ深度显著低于同孕龄及足月妊娠妇女（Ｐ〈０．０１），低于足月妊娠临产妇女，但无显著差异（Ｐ〉０．０５）。足月妊娠临产妇女血清ＮＯ浓度显著低于妊娠期妇女（Ｐ〈０．０１）。非妊娠组血清ＮＯ浓度显著低于早产组及     

卵巢癌细胞诱导T淋巴细胞凋亡的实验研究

目的　探讨卵巢癌细胞诱导T淋巴细胞凋亡及一氧化氮与细胞内游离钙离子在T淋巴细胞凋亡过程中的作用。方法　分别采用电子显微镜、流式细胞仪观察 3个卵巢癌细胞株 (OVCAR3、CAOV3和SKOV3 )的培养上清液诱导的CD+ 8T淋巴细胞的凋亡 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)mRNA的表达 ;Fura 2荧光负荷技术和酶联免疫 (EIA)法分别检测细胞内游离钙离子浓度 ( [Ca2 + ]i)和环鸟苷酸 (cGMP)浓度。结果　 ( 1)分别经卵巢癌细胞株OVCAR3、CAOV3和SKOV3细胞培养的上清液作用后 ,CD+ 8T淋巴细胞出现典型的凋亡改变 ,即染色质固缩和片段化 ;流式细胞仪上见凋亡峰 ;细胞凋亡率 [分别为 ( 2 3 8± 3 5) % ,( 2 3 1± 2 9) %、( 2 4 2± 4 9) % ]较对照 [( 4 6± 0 5) % ]明显增高 (P <0 0 1) ;( 2 )CD+ 8T淋巴细胞凋亡过程中iNOSmRNA的表达 (分别为 1 14± 0 0 3 ,1 0 5± 0 0 4,1 16± 0 0 2 )较对照 ( 0 60± 0 0 3 )显著增高 (P <0 0 1) ;细胞内游离 [Ca2 + ]i[分别为 ( 3 80± 3 8)、( 3 66± 13 )、( 3 56± 2 0 )nmol L]和cGMP浓度 [分别为 ( 0 65± 0 0 9)、( 0 62± 0 16)、( 0 57± 0 12 )pmol ml]均较对照 [分别为 ( 184± 11)nmol L、( 0 2 9± 0 0 4     

妊高征患者外周静脉及胎盘血循环中血管舒、缩物质水平的比较及意义

目的通过对比妊高征患者外周及胎盘部位子宫静脉血中一氧化氮(Nitric Oxide,NO)及内皮素(Endothelin,ET)的浓度,了解妊高征时血中血管活性物质浓度发生改变是否与胎盘血管的病变有关.方法分别于剖宫产手术前及手术中抽取外周静脉血和胎盘部位子宫静脉血,应用硝酸根还原酶与Griess反应相结合的方法测定NO;应用放射免疫分析法测定ET.结果妊高征组外周血清NO2-/NO3-为65.52±14.88μmol/L,胎盘部位予宫静脉血中NO2-/NO3-为70.26士12.60μmol/L,二者之间无显著差异.妊高征组外周血浆ET水平为53.72士15.28 ng/L,胎盘部位子宫静脉血浆ET水平为52.80±14.19 ng/L,两者之间无显著性差异(P＞0.05).类似结果亦见于正常晚孕组.与正常晚孕组比较,妊高征组血中ET、NO2-/NO3-水平均显著增高(P＜0.01).结论①妊高征患者外周血中ET、NO水平高于正常孕妇,但与本身胎盘血循环ET、NO的升高无关.②妊高征患者的子宫、胎盘血管系统的功能亦遭到破坏.     

Nitric oxide production is not altered in preeclampsia

Background Preeclampsia remains a disease of theories as the real aetiology has remained elusive. Altered nitric oxide production has been associated with preeclampsia although conflicting results showing elevation, decrease or no change in nitric oxide levels have emerged from previous studies. Objective The aim of the study was to measure the serum levels of nitrate and nitrite in normal pregnancies and pregnancies complicated by pre-eclampsia. Materials and methods Venous blood was extracted from 39 normal pregnant women (control) and 34 women with preeclampsia (study group). Serum concentrations of nitrate and nitrite were determined using the HPLC method. Other special investigations including renal function tests were performed. The patients were managed according to protocol and the outcome of the pregnancies evaluated. Results There was no significant difference in the mean maternal age and gestational age at delivery between the groups. However the mean systolic and diastolic blood pressure of the study group (150.5 mmHg and 98.8 mmHg) were significantly higher than the levels in the control group, (110.86 and 85.5), p<0.0001. There was no significant difference in the mean serum nitrate levels (19.157±13.407 vs. 19.189±16.805) p=0.993. The fetal and maternal outcomes were comparable. Conclusion Our study has demonstrated that there was no alteration in nitric oxide production in preeclampsia, thus contributing to the existing unresolved role of nitric oxide in the pathogenesis of preeclampsia. Further research is called for.     

Sildenafil citrate improves fetal outcomes in pregnant, l-NAME treated,Sprague–Dawley rats

Objectives

This study aimed to investigate the effects of sildenafil citrate on various fetal and physiological parameters, including fetal mortality, number of pups, placental weights and micro-albuminuria in pregnant, l-NAME treated Sprague–Dawley rats.

Study design

Twenty-four pregnant female Sprague–Dawley rats were divided into 3 groups (n = 8). In the l-NAME treated group (PRE), l-NAME (0.3 g/l, drinking water) was used to induce pre-eclampsia-like symptoms on day 1 of the experiment. The experimental group (SCT) also received l-NAME (0.3 g/l, drinking water) on day 1 of the experiment. However, sildenafil citrate (10 mg/kg, s.c., daily) was administered as the test compound from day 7 until day 19. The experimental control (CON) did not receive either l-NAME or sildenafil citrate. l-NAME administration was discontinued in both the PRE and the SCT groups on day 19 of the experiment and the animals were given access to normal drinking water ad libitum. All the animals were sacrificed on day 20, at which time a laparotomy was performed and the various fetal parameters measured. On day 0 and day 20, blood pressure measurements were recorded non-invasively and protein estimations in 24 h urine samples were conducted.

Results

Sildenafil citrate decreased fetal mortality and protein excretion and further demonstrated a trend toward increasing birth and placental weights in pregnant, l-NAME treated, Sprague–Dawley rats. In addition, sildenafil citrate administration ameliorated the amplification of the l-NAME induced hypertension in the SCT group.

Conclusion

We speculate that sildenafil citrate by potentiating the effects of nitric oxide in vivo improves uterine artery blood flow resulting in improved fetal outcomes in pregnant, l-NAME treated, Sprague–Dawley rats.