切值重设定在串联质谱法筛查新生儿高苯丙氨酸血症中的临床价值

目的对中山市85 323例新生儿行串联质谱法筛查高苯丙氨酸血症(HPA)的结果进行回顾性分析,评价重设定苯丙氨酸(Phe)、Phe/酪氨酸(Tyr)切值在新生儿HPA筛查中的临床价值。方法选取2014年2月至2018年9月行串联质谱法筛查HPA的新生儿为研究对象,分析切值重设定前后的初筛和确诊情况,了解切值重设定的临床意义。结果切值重设定前后新生儿HPA的筛查阳性率分别为4.57%(1 716/37 527)、0.47%(223/47 796),分别确诊HPA 2、3例,该市新生儿HPA发病率约为1/17 064(5/85 323)。Phe与Phe/Tyr新切值联用对全部新筛结果、切值设定前后及男女新筛结果进行分析,筛查阳性率分别为0.02%、0.01%、0.02%、0.02%、0.02%,均明显低于分别使用Phe原新切值、Phe与Phe/Tyr原切值及HPA诊断"金标准"(120μmol/L)对其进行新筛的阳性率,进一步验证新切值筛查性能结果显示无漏筛,且随访未发现假阴性案例,表明Phe、Phe/Tyr新切值联用在保持筛查敏感性的同时,可提高新生儿HPA的筛查特异度;新生儿性别对Phe、Phe/Tyr切值的影响差异无统计学意义(P0.05)。结论串联质谱法筛查新生儿HPA在实验室积累一定样本量情况下,应重设定本实验室的参考值,以获得更高的筛查特异性,指导临床早期确诊和治疗新生儿HPA。     

PHE/TYR比值在新生儿苯丙酮尿症筛查中的应用

目的 分析Phe/Tyr比值在新生儿苯丙酮尿症筛查中的作用.方法 采用API-300 SPOTCHECK连续流动荧光分析系统检测1103例正常新生儿的筛查血片和27例已经确诊的PKU阳性患儿血片的Phe和Tyr值,并进行分析.结果 API-300 SPOTCHECK连续流动荧光分析法的阳性复合率为103.7%,阴性复合率为99.9%.结论 Phe/Tyr 比值是提高PKU筛查准确度的重要参数.     

高效液相色谱法及串联质谱法在苯丙酮尿症筛查诊断中的应用

目的考查了高效液相色谱(HPLC)法和串联质谱(MS/MS)法在遗传代谢性疾病苯丙酮尿症(PKU)筛查中的应用及意义。方法利用MS/MS法和HPLC法分别分析了1 860例出生3d至11岁儿童的干血滤纸片及全血标本中苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)浓度及其比值。结果 MS/MS法和HPLC法Phe线性范围为26.02~101.11μmol/L和32.04~132.50μmol/L,Tyr线性范围为41.50~253.07μmol/L和32.85~111.50μmol/L,平均回收率Phe为97.36%和98.43%,Tyr为96.71%和98.99%,批内CV Phe为4.31%和3.97%,Tyr为4.09%和4.01%,批间CV Phe为5.73%和4.58%,Tyr为6.01%和5.24%。结论两种方法均能灵敏,特异的测定血中Phe和Tyr浓度,满足对PKU筛查及诊断的需要。     

利用质谱仪测苯丙氨酸和酪氨酸的比值鉴别诊断新生儿高苯丙氨酸血症的灵敏度

为探索电射流串联质谱法测氨基酸用于鉴别诊断不同类型的高苯丙氨酸血症(HPA)的敏感性,对78例苯丙氨酸浓度大于150umol/L新生儿的干血标本进行研究,用电射流串联质谱仪(ESI-TMS)定量分析苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr),并借助于两者的比值区分苯丙酮尿症(PKUn=23)和无PKU的HPA病人(nonpku-HDAn=35;P＜0.001),灵敏度达100%.一过性HPA新生儿(n=9)的苯丙氨酸和酪氨酸比值,低于nonpku-HPA(P＜0.001).以ESI-TMS测氨基酸,提供一个鉴别诊断HPA的有效诊断工具,也是用干血斑进行新生儿筛选的适宜方法.     

滤纸干血片打孔部位对新生儿筛查实验检测结果的影响

明确新生儿疾病筛查滤纸干血片打孔部位对切值附近实验检测结果的影响。分别收集促甲状腺激素(TSH)、17α-羟孕酮(17α-OHP)、苯丙氨酸(Phe)及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)浓度在切值附近的假阳性血片各32例,分别行中央、中央至边缘1/2处及边缘打孔。采用时间分辨荧光免疫分析法和荧光法检测血斑中TSH、17α-OHP、Phe和G6PD含量。结果采用SPSS 22.0软件进行分析。血斑中央、中央至边缘1/2处TSH和17α-OHP浓度显著低于边缘(P0.05);Phe检测结果无显著影响(P0.05);血斑中央、中央至边缘1/2处G6PD活性显著高于边缘(P0.05)。滤纸干血片同一血斑不同打孔部位会对被检项目浓度在切值附近检测结果产生影响,应规范日常打孔操作以提高新生儿筛查的工作质量。     

HPLC法测定末梢血中苯丙氨酸与酪氨酸及在苯丙酮尿症中的应用

目的 建立一种简单、快速的反相高效液相色谱法测定末梢血液中的苯丙氨酸(Phe)与酪氨酸(Tyr)并用于苯丙酮尿症(PKU)的筛查.方法 末梢血标本与等量5%(v/v)高氯酸溶液混合处理去除蛋白后离心取上清液20 μl直接进样分析.用Hypersil C8色谱柱(6.0mm×300mm,10μm)分离,流动相为乙腈-水(体积比5:95),流速1.5 ml/min,紫外检测波长210 nm,室温下测定.结果 末梢血中Tyr和Phe均分离良好,保留时间分别为5.88 min和8.43 min.102例健康儿童指血Phe浓度67.7±15.4/μmol/L,Tyr浓度为62.2±13.9μmol/L,Phe/Tyr比值为1.15±0.27.32例正常新生儿足跟血Phe浓度为66.2±20.5 μmol/L,Tyr浓度为59.5±18.8/μmol/L,Phe/Tyr比值为1.12±0.24.结论 该法灵敏度高,特异性好,方法 简便快速,成本低康,适合于末梢血中Phe和Tyr的同时测定及PKU的筛查与监控.     

干滤纸血片制备环境的理化因素对实验结果的影响

目的观察新生儿疾病筛查干滤纸血片(dried blood spots)制备环境中显著影响实验结果的理化因素。方法研究组1:收集正常标本60例、阳性标本120例,于对照条件及10种特定环境下制备干滤纸血片。研究组2:另收集正常标本30例、阳性标本80例,于对照条件及7种甲醛浓度环境下制备干滤纸血片。用荧光法或时间分辨荧光免疫分析法检测标本中苯丙氨酸(Phe)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、促甲状腺激素(TSH)、17α-羟孕酮(17α-OHP)水平。用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果 10种环境下制备的干滤纸血片Phe检测结果与对照组差异无统计学意义(P0.05),甲醛敏感阈为4.62~6.95 ppm/18 h;37℃烘箱、潮湿、紫外线照射、新装修环境、乙醇、冰醋酸、甲醛等环境下制备的干滤纸血片G6PD检测结果低于对照组(P0.05),甲醛敏感阈为0.30~0.38 ppm/4 h及0.21~0.24 ppm/18 h;潮湿、紫外线照射、甲醛环境下制备的干滤纸血片TSH检测结果低于对照组(P0.05),甲醛敏感阈为0.32~0.52 ppm/4 h及0.38~0.45 ppm/18 h;潮湿、紫外线照射、甲醛环境下制备的干滤纸血片17α-OHP检测结果低于对照组(P0.05),甲醛敏感阈为4.37~4.62 ppm/4 h及0.38~0.45 ppm/18 h。冷风快速吹干与2~8℃冷库环境下制备干滤纸血片4项检测结果与对照组差异均无统计学意义(P均0.05)。结论干滤纸血片制备环境的理化因素与新生儿疾病筛查的准确性密切相关,甲醛、乙醇、冰醋酸、紫外线照射、高温、潮湿及装修污染等是干滤纸血片制备环境的必要管控因素;冷风快速吹干与2~8℃冷库过夜可作为新生儿筛查干滤纸血片制备的备选方法。     

高苯丙氨酸血症检测技术联合应用及家系基因研究

目的 通过分析该院近3年新生儿高苯丙氨酸血症(HPA)筛查结果,了解该地区HPA筛查技术应用及家系基因变异情况,可进一步提高筛查、诊治、产前诊断的能力.方法 采用荧光法和串联质谱法检测2018年1月至2020年12月自愿接受筛查的128997例新生儿足跟血苯丙氨酸(Phe)浓度,对筛查阳性者进行血串联质谱、生化、尿气相...     

北京地区新生儿全血10种氨基酸含量参考值范围的调查研究

目的 建立北京地区新生儿全血10种氨基酸含量的正常参考值范围,为临床诊治新生儿氨基酸代谢异常性疾病提供依据.方法 采用串联质谱法检测北京地区313例正常新生儿的10种氨基酸水平,其中包括有苯丙氨酸(Phe),蛋氨酸(Met),异亮-亮氨酸(Leu-Ile),缬氨酸(Val),精氨酸(Arg),瓜氨酸(Cit),半胱氨酸(Cys),组氨酸(His),鸟氨酸(Orn),酪氨酸(Tyr).将所有新生儿根据性别不同分成男、女两组;根据胎龄分为足月儿组、早产儿组.分析比较不同性别和胎龄组之间的氨基酸水平是否存在差异,进而得到串联质谱检测新生儿干血滤纸片氨基酸参考范围.结果 经过正态性检验,新生儿氨基酸水平呈偏态分布,因此,所有数据均经过对数转换后进行统计分析.经统计后发现不同性别新生儿组的氨基酸水平之间差异无统计学意义(P>0.05).不同胎龄的新生儿组部分氨基酸(Met,Phe,Tyr)水平差异有统计学意义(P<0.05).计算新生儿各种氨基酸的正常参考值范围.结论 建立串联质谱法检测新生儿的各种氨基酸的正常参考值范围对于临床诊治和筛查氨基酸代谢异常性疾病十分重要.     

新生儿先天性甲状腺功能低下TSH初筛和确诊数据分析

目的探讨新生儿疾病筛查中心新生儿先天性甲状腺功能低下促甲状腺激素(TSH)初筛和确诊阳性结果的符合率。方法用时间分辨荧光分析法(DELFIA)初筛测定干血片TSH值阳性结果的患儿,采集静脉血运用电化学发光分析法确诊复查TSH值,统计分析两者之间的关系。结果 125例DELFIA法测定干血片TSH值阳性结果与电化学发光分析法的总符合率达88.8%,其中86例筛查TSH>20μU/mL阳性结果的符合率达到了98.8%。结论 DELFIA法是新生儿先天性甲状腺功能低下筛查的可靠方法。     

应用荧光法筛查吉林地区新生儿苯丙酮尿症

目的了解吉林地区新生儿苯丙酮尿症（phenylketonuria,PKU）的发病情况。方法本地区出生的新生儿27509例,取出生48～72h充分哺乳后的足跟血滤纸片标本,以荧光法测定新生儿滤纸干血斑苯丙氨酸（Phe）含量,凡苯丙氨酸≥120μmol／L者为实验阳性,则召回婴儿取第二张血纸片标本进行复查。结果27509例标本中,初次筛查检出7例阳性结果,其浓度在121～1740μmol／L之间,7例已复查,3例结果仍为阳性,其余均正常,吉林地区苯丙酮尿症发生率为1／917。结论吉林地区苯丙酮尿症发生率为1／917。     

流式荧光法与时间分辨法在新生儿PKU筛查中的比较研究

目的比较Astoria-Pacific流式荧光分析法与Perking-Elmer时间分辨荧光分析法在新生儿苯丙酮尿症(PKU)筛查工作中的应用价值。方法分别采用Astoria-Pacific流式荧光法(AP流式荧光法)和WALLAC的Perking-Elmer时间分辨荧光分析法(PE荧光法)同时对1 103例健康新生儿的筛查血片和27例已经确诊的PKU阳性患儿血片进行筛查。收集试验数据分析比较两种方法的相关性及有效性。同时应用AP流式荧光法对不同浓度的已知样本进行检测,统计分析这些检测数据后对AP流式荧光法进行方法学的评价。结果两种方法有很好的相关性(r=0.975),同时,AP流式荧光法的阳性复合率(103.7%)和阴性复合率(99.9%)均较PE荧光法高。AP流式荧光法的准确度、精密度、携带率及最低检测限均能胜任PKU的筛查工作,其中AP流式荧光法的Phe/Tyr比值是提高PKU筛查准确度的重要参数。结论 AP流式荧光法优于PE荧光法,完全适合新生儿PKU的筛查工作,值得推广应用。     

新生儿先天性肾上腺皮质增生症筛查的初步报告

目的开展新生儿先天性肾上腺皮质增生症(CAH)筛查,降低残疾儿童的发生率,提高人口素质。方法采用时间分辨荧光免疫分析法检测新生儿滤纸干血片上的17-羟孕酮(17-OHP)浓度。结果筛查93 971例新生儿,确诊5例,CAH发生率为1/18 795;98.7%的新生儿17-OHP<40 nmol/L。结论开展新生儿CAH筛查可以早期诊断和治疗CAH,值得在我国推广。17-OHP的阳性临界值取40 nmol/L是可行的。     

新生黄疸患儿与早产低体质量儿体内氨基酸水平变化原因分析

目的：探讨新生黄疸患儿与早产低体质量儿体内氨基酸水平变化并分析其原因。方法利用串联质谱技术（TMS）采用衍生法检测干血滤纸片中18种氨基酸水平。通过t检验统计比较原血片、召回血片两次氨基酸的水平,分析新生儿干血滤纸片中氨基酸水平变化的原因。结果（1）新生黄疸患儿共38例,除天冬氨酸（Asp）、瓜氨酸（Cit）两种氨基酸外,共有丙氨酸（Ala）、谷氨酸（Glu）、蛋氨酸（Met）、苯丙氨酸（Phe）、酪氨酸（Tyr）、亮氨酸（Leu）、色氨酸（Trp）、缬氨酸（Val）、甘氨酸（Gly）、鸟氨酸（Orn）、组氨酸（His）、丝氨酸（Sern）、苏氨酸（Thr）、脯氨酸（Pro）14种氨基酸检测结果,召回血片较原血片明显降低（P＜0．05）;谷氨酰胺（Gln）、精氨酸（Arg）共2种氨基酸检测结果,召回血片较原血片明显升高（P＜0．05）。（2）早产低体质量儿共46例,除Glu、Cit、Gln、His4种氨基酸外,Ala、Asp、Met、Phe、Tyr、Leu、Trp、Val、Arg、Gly、Orn、Sern、Thr、Pro共14种氨基酸检测结果,召回血片较原血片明显降低（P＜0．05）。结论新生儿黄疸及早产低体质量时期严重影响了干血滤纸片多种氨基酸水平的变化,故实验室对氨基酸遗传代谢病筛查结果的判断应结合新生儿病史,排除假阳性,从而减轻新生儿筛查工作者的压力及家长的精神负担。     

时间分辨荧光免疫分析法检测干血滤纸片17α-羟孕酮的影响因素分析

目的分析时间分辨荧光免疫分析法(TrFIA)检测干血滤纸片17α-羟孕酮(17α-OHP)的影响因素并提出对策,以提高新生儿先天性肾上腺皮质增生症(CAH)的筛查质量。方法将干血滤纸片标本分别按抗血清和铕示踪剂的加样量(150μL、110μL、100μL、90μL、50μL)分5组,采用TrFIA法测定干血滤纸片17α-OHP的浓度;比较58孔微孔板底部去除水汽前、后的17α-OHP浓度;比较30例干血斑不同取样部位(中央和边缘)的17α-OHP浓度。结果抗血清和铕示踪剂的加样量对测定结果的影响与100μL组比较,差异有统计学意义(P<0.01);微孔板底部水汽存在与否对检测结果的影响有统计学意义(P<0.01);取样部位(中央和边缘)对测定结果影响不大,差异无统计学意义(P>0.05)。结论新生儿CAH筛查试验时应保证试剂加样量准确,微孔板底部干燥。     

22种氨基酸衍生化串联质谱高通量检测方法的建立及其在遗传代谢病中的应用

目的 建立高通量快速检测全血中22种氨基酸的衍生化串联质谱法,考察该方法的影响因素及其在遗传代谢病筛查中的应用和意义.方法 新生儿采足后跟血、儿童采末梢血于空白采血滤纸上,完全渗透,晾干.用已知浓度的氨基酸同位素内标液萃取干血滤纸片中的22种氨基酸,衍生化20 min,建立衍生化串联质谱法,高通量快速检测全血中22种氨基酸,采用方差分析优化其影响因素,分析2869例2014年5月至2018年1月西部5省部队在空军军医大学第一附属医院自愿选择衍生化串联质谱法筛查遗传代谢病的3 d至1岁新生儿及儿童的干血滤纸片.结果 建立衍生化串联质谱法高通量快速检测全血中22种氨基酸并优化了该方法的影响因素:使用新鲜末稍血,标本4℃保存不超过2周,内标液4℃保存有效期为1个月左右,氮气最佳吹干时间为20 min.衍生化串联质谱法定量检出限为0.3～10.0μmol/L.批内变异系数为5.3％～7.9％,批间变异系数为7.1％～8.6％.经统计学分析男、女氨基酸浓度差异无统计学意义(P>0.5).加标回收率为96.1％～98.1％,偏倚<10.0％.结论 衍生化串联质谱法高通量快速检测全血中22种氨基酸有较高的回收率、精确性和准确性,可以灵敏、特异地检测全血中22种氨基酸,满足临床对遗传代谢病筛查及诊断的需要.     

苯丙酮尿症筛查实验与鉴别诊断实验结果分析

目的 分析新生儿苯丙酮尿症（phenylktonuria,PKU）筛查实验结果与鉴别诊断实验结果的关系与差异,为PKU临床分型和治疗提供依据。方法 865 572例新生儿,采用荧光分析法测定血苯丙氨酸（phenylalanine,phe）水平,原始标本连续2次phe≥120μmol/L可疑阳性者进行复查,phe仍≥120μmol/L者诊断为高苯丙氨酸血症（hyperphenylalaninemia,HPA）。对初筛实验确诊HPA患儿采用基因突变分析法、四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin,BH4）负荷试验及尿蝶呤谱分析法等进行鉴别诊断。结果 初筛可疑阳性438例,复查诊断为HPA 131例;131例HPA患儿中120例行鉴别诊断,确诊经典型PKU 111例,BH4D缺乏症7例,致病基因携带者（杂合子）2例。结论 初筛可疑阳性PKU患儿必须进行复查,确诊HPA者需尽早行鉴别诊断实验,以明确分型,尽早采取治疗措施。     

滤纸干血片毛细管电泳技术在新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用

目的探讨干血片毛细管电泳技术在新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血(以下简称α-地贫)筛查中的应用价值。方法使用干血片毛细管电泳仪对46 718例新生儿足跟血滤纸干血片标本进行血红蛋白(Hb)电泳分析,检测HbA、HbF、HbA2和异常Hb的水平,对筛查表型阳性的病例召回进行基因分析。结果 46 718例新生儿足跟血滤纸干血片标本中检测出巴特血红蛋白(Hb Bart′s)阳性者2 598例,筛查阳性率5.56%(2 598/46 718);召回544例经基因分析确诊477例α-地贫基因携带者,故Hb Bart′s带筛查与基因确诊的符合率为87.68%(477/544)。进一步分析其临床表型与Hb Bart′s水平的关系可见,随着临床表型的加重,Hb Bart′s水平逐渐增加,且差异有统计学意义(P=0.000)。结论滤纸干血片毛细管电泳分析技术与基因分析有较好的一致性,可根据Hb Bart′s水平的多少初步判断α-地贫的临床分型。     

应用荧光法筛查葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏

目的建立适于葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏筛查的检测方法。方法用荧光法对新生儿筛查滤纸干血片标本进行检测,对阳性者召回抽静脉血以G6PD/6PGD比值法进行确诊。结果用荧光法测定7780份新生儿筛查滤纸血片标本的G6PD活性,阳性358例,阳性率为4.6%(358/7780),对召回的358例阳性以比值法进行确诊试验,阳性315例,阳性率为4.0%,两者符合率为87.9%(315/358)。结论荧光法是一种半定量的方法,具有较高的特异性和准确性,且操作简便、检测快速、成本低廉,适合用滤纸干血片标本进行大规模的新生儿筛查。     

威海市新生儿苯丙酮尿症筛查结果分析

目的了解威海市新生儿苯丙酮尿症发病率及其诊治情况。方法采用Guthrie’s细菌抑制法(BIA)测定新生儿滤纸干血片中的苯丙氨酸(Phe)含量,筛查切值为120umol/L。对血Phe浓度高于切值者,实施BH4负荷试验或Phe BH4联合负荷试验及尿蝶呤谱分析,进行鉴别诊断。结果威海市新生儿苯丙酮尿症发病率为1/9639:经典型PKU经低Phe饮食治疗后,其体格和智能发育良好,智商(IQ)>85,BH4D经BH4和左旋多巴(L-DOPA),5-羟色氨酸(5-HTP)联合治疗,临床症状明显缓解。结论威海市新生儿PKU发病率,略高于全国的平均水平,符合全国发病率北高南低的特点。对初筛为可疑阳性新生儿尽早实施鉴别诊断试验,有助于恰当治疗措施的选择,改善预后。