鸡胴体中空肠弯曲菌的分离鉴定及分子分型研究北大核心CSCD

目的对5省份屠宰场鸡胴体中分离的空肠弯曲菌进行鉴定和分子分型,为建立空肠弯曲菌食物中毒的追踪溯源数据库提供科学数据。方法采用生化和分子生物学方法筛检和鉴定鸡专项监测网报送的鸡胴体中分离株。利用属特异16S rRNA基因和种特异的MapA、CeuE基因引物,建立多重PCR反应,鉴定空肠弯曲菌;参照国际认可的PFGE方法,选用内切酶SmaⅠ和KpnⅠ分别进行单酶切,并利用BioNumerics软件对分离株的电泳指纹图谱进行聚类分析,所得结果收入溯源数据库。结果对81株屠宰场鸡胴体分离株进行生化和PCR鉴定,确证72株为空肠弯曲菌,9株为结肠弯曲菌;脉冲场凝胶电泳分子分型结果表明,这72株空肠弯曲菌共产生48种带型。通过聚类分析,按照63.9%相似度将这些菌株分为A^M共13个群。每群包含1~11个带型,72株菌的带型分布具有完全地域同源性,即同一带型的菌株均来自同一省份。结论采用SmaⅠ和KpnⅠ单酶切进行PFGE分型,结合聚类分析,可提高PFGE分型的分辨率,增加菌株分型的准确性和溯源的可信性。     

采用FAFLP对屠宰场鸡胴体分离的空肠弯曲菌的分子分型和溯源分析

目的对中国部分省份屠宰场鸡胴体分离的空肠弯曲菌进行分子分型和溯源分析。方法采用荧光标记扩增片段长度多态性技术(FAFLP),对72株空肠弯曲菌分离株进行分子分型,选用HindⅢ和HhaⅠ限制性内切酶进行双酶切,电泳结果经Gene Marker V1.80处理后,导入Bio Numerics软件进行聚类分析,所得结果收入溯源分析数据库。结果 72株空肠弯曲菌分离株共产生241条多态性片段,多数在80~100条;72株菌共产生72种带型,分辨率为100%;以70%相似度为界,可以分为11个群,群间最低相似度为56.9%,群内最高相似度为94.9%。以80%相似度为界,可将A群分为5个亚群,B群分为15个亚群,多个亚群所包含菌株显示有完全地域同源性。结论 FAFLP方法分辨率高,聚类分析显示有一定同源性,适用于空肠弯曲菌的分子分型和溯源分析。     

深圳市罗湖区禽畜肉中空肠弯曲菌的流行状况及分子分型

目的 了解深圳罗湖区市售不同肉类来源的空肠弯曲菌流行分布状况及分子分型结果。方法 采集2016年—2021年4月、6月、10月深圳市罗湖区各大超市、农贸市场生禽肉及生畜肉样品共280份作为研究对象,采用双孔滤膜法对空肠弯曲菌进行分离培养及荧光PCR法鉴定,通过脉冲场凝胶电泳对目标菌进行分子分型。结果 2016年—2021年280份食品样本共有52份样本中检出空肠弯曲菌,阳性率为18.57%,其中136份生禽肉类样本中有49份检出空肠弯曲菌,阳性率为36.03%;144份生畜肉类样本中有3份检出空肠弯曲菌,阳性率为2.08%,生禽肉类的阳性率高于生畜肉类（χ2=53.30,P<0.01）。62株菌株PFGE分子分型得到57种带型。结论 罗湖区生禽肉和生畜肉均存在空肠弯曲菌污染的风险,其中禽肉类污染高于畜肉类,PFGE分子分型溯源结果显示菌株污染来源呈现多态性。     

一起空肠弯曲菌食源性疾病突发事件的流行病学和病原学研究

对空肠弯曲菌所致的食源性疾病事件进行病原学研究及溯源分析,为突发食源性疾病事件的应急处置提供依据.方法 采用现场流行病学调查方法对疫情实施调查,可疑样本先用多重巢式PCR快速筛查22种常见胃肠道病原,锁定目标病原后,将病原菌分离鉴定与实时荧光定量PCR同步检测.对检出的空肠弯曲菌进行PFGE分子分型,用BioNumeries软件进行同源性分析.结果 共有病例91例,采集样本49件.从27件病例样本中分离出15株空肠弯曲菌,PFGE分为2种带型,其中14株带型完全一致,另1株为另一带型,2种带型相似性为66.7%.结合流行病学调查、实验室病原学检测和PFGE分析,判定此次事件为一起空肠弯曲菌引起的食源性疾病暴发事件.结论 传统分离培养检测方法结合FilmArray多重PCR系统、实时荧光定量PCR、PFGE分型技术可快速、准确确定和追溯病原.     

161株人、动物空肠/大肠弯曲菌的生物学分型

关于空肠弯曲菌的生物学分型,国外尚未统一,国内未见报道。我们根据Butzler教授的方法,对1984年6—8月在广州市海珠区分离到161株人和动物的空肠/大肠弯曲菌进行生物学分型,并比较人和动物的菌型分布,结果报告如下。材料与方法1.菌株来源及鉴定:来自病人7株、健康人47株、猪52株、鸡55株空肠/大肠弯曲菌,     

乳酸杆菌及嗜热链球菌脉冲场凝胶电泳分子分型方法建立及应用

目的 建立乳酸杆菌及嗜热链球菌的PFGE分子分型方法,并对北京市售酸奶中分离的乳酸杆菌及嗜热链球菌进行分子分型.方法 选取ApaⅠ、NotⅠ、sfiⅠ、XbaⅠ和SmaⅠ共5种PFGE分析中常用的限制性内切酶,对从北京市售酸奶中分离到的52株乳酸杆菌、嗜热链球菌以及相应的标准菌株进行酶切,优化PFGE限制性内切酶种类及电泳条件,并用优化出的实验条件对菌株进行分子分型,同时进行聚类分析,与生化鉴定及16s rRNA基因鉴定结果进行对比分析.结果 限制性内切酶NotⅠ对保加利亚乳酸杆菌、发酵乳酸杆菌和德氏乳酸杆菌的酶切效果较好,而限制性内切酶Apa Ⅰ对嗜热链球菌、嗜酸乳酸杆菌及干酪乳酸杆菌的酶切效果较好.24株保加利亚乳酸杆菌被分为8个PFGE型,15株嗜热链球菌被分为8个PFGE型,7株嗜酸乳酸杆菌被分为3个PFGE型,2株德氏乳酸杆菌分属于2个不同的PFGE型.结论 建立的PFGE方法分析结果与生化鉴定及16s rRNA基因鉴定结果高度符合,所建方法适用于乳酸杆菌及嗜热链球菌的分子分型.     

脉冲场凝胶电泳技术对成都市两起细菌性痢疾暴发的分型研究

目的 运用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)和聚合酶链反应(PCR)技术对成都市两起细菌性痢疾暴发分离株进行分析.方法 利用PCR检测志贺菌分离株ipaH基因和ial基因.用PFGE对菌株进行分型,所得结果用BioNumeries V 4.0软件UPGMA方法进行聚类分析.结果 所试54株分离菌ipaH基因均为阳性,48株为ial阳性.以Xba Ⅰ酶切后PFGE分型,崇州可分为4个带型,有26株型别一致,占实验菌株(36株)的72%,为优势菌株.自凉拌白肉中分离的菌株带型与优势菌株相同.大邑县可分为8个带型,有10株型别一致,占实验菌株(18株)的56%.崇州和大邑县的优势菌株带型差异较大.结论 利用PFGE能够有效地鉴别细菌性痢疾的暴发和传播来源.     

脉冲场凝胶电泳技术对一起聚集事件病原学回顾性分析

目的对一起多因素引起腹痛、腹泻聚集事件调查中采集的样本进行致病菌检验,利用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)从分子水平对该起事件的病原学进行回顾性分析。方法依据相关标准对采集的样品进行病原菌分离、鉴定,选用SmaⅠ酶切事件中分离的可疑致病菌株,对菌株进行聚类分析。结果从44件可疑样品中检出蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus,Bc)17株,对可疑食品中分离的10株蜡样芽胞杆菌进行PFGE分子分型检测,其中7株为相同带型。结论 PFGE图谱佐证了Bc作为本次聚集事件病原的新证据,采集的食品并非被一个单克隆蜡样芽胞杆菌污染,而是存在多种Bc克隆,PFGE可有效应用于暴发事件溯源分析及分子流行病学研究。     

阪崎肠杆菌脉冲场凝胶电泳分型的研究

目的对29株阪崎肠杆菌分离株和2株阪崎肠杆菌模式株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型研究。方法分别利用限制性内切酶XbaⅠ和SpeⅠ酶切阪崎肠杆菌染色体DNA进行PFGE分析,利用BioNumerics软件进行聚类分析。结果31株阪崎肠杆菌使用XbaⅠ和SpeⅠ酶切分别有30种PFGE带型。除ES004和ES005外,其他29株阪崎肠杆菌经XbaⅠ或SpeⅠ酶切后的PFGE条带之间均存在不同程度的差异。来源于同品牌同批次中不同包装的产品中的ES004和ES005分离株XbaⅠ和SpeⅠ酶切图谱完全一致(相似度为100%)。根据BioNumerics软件分析结果可知,除分离株ES004和ES005外,其他分离株的带型和样品来源之间无显著相关性。结论虽然XbaⅠ酶切的PFGE带型平均条带少于SpeⅠ,但对阪崎肠杆菌具有足够的分辨率。两种PFGE分型方法都可应用于阪崎肠杆菌的分子分型和溯源。     

广西南宁市腹泻人群空肠弯曲菌流行状况调查

目的了解南宁市腹泻人群中空肠弯曲菌的感染流行状况。方法在南宁市对腹泻病例进行流行病学调查并采集粪便标本,进行实验室空弯菌的分离培养、PCR鉴定以及脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）分析。结果在775份粪便样品中,3份空肠弯曲菌阳性,平均阳性率0.39%。所有生化结果阳性的菌株其PCR复核鉴定结果均为阳性。3株空肠弯曲菌经Cluster分析后得到3个PFGE带型。结论南宁市存在空肠弯曲菌感染病例,本研究结果为正确评价南宁市腹泻人群弯曲菌的流行状况和制定防控措施提供了科学依据。