MTBDRplus VER 2. 0检测耐药结核病的结果分析

目的 分析分子药敏检测为耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的GenoType MTBDRplus VER 2.0(简称MTBDRplus 2.0)结果,了解MTBDRplus 2.0对耐药MTB的检测效果和本地区耐药MTB的耐药基因特征。 方法 收集在湖南省胸科医院MTBDRplus 2.0检测为耐药, 且相同标本BACTEC MGIT 960液体(简称MGIT 960)培养出MTB的住院患者作为研究对象,收集患者的临床资料、液体药物敏感性试验(简称MGIT 960药敏)和MTBDRplus 2.0检测结果并进行分析。 结果 共收集到分子药敏检测为耐药的结核病患者199例,最终临床诊断为耐药结核病193例,包括耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB)127例,单耐药结核病66例; MTBDRplus 2.0检测为利福平(rifampin, RFP)耐药的171株MTB,MGIT 960检测也耐药的有151株(88.3%),MTBDRplus 2.0检测为异烟肼(isoniazid, INH)耐药的149株MTB,MGIT 960检测也耐药的有145株(97.3%)。单耐药组和耐多药组的基因突变模式不全相同,MTBDRplus 2.0检测RFP和INH耐药基因突变频率最高的位点分别是rpoB S531L和katG S315T。 结论 MTBDRplus 2.0和MGIT 960技术检测耐RFP和(或)INH MTB符合率高,湖南省耐药MTB以rpoB S531L和KatG S315T突变型为主。     

PCR-线性探针杂交酶显色法在结核病诊断与耐药性检测中的应用研究

目的对比PCR-线性探针杂交酶显色法(简称线性探针法)与BACTEC MGIT960液体培养及药敏在结核分枝杆菌检出率的差异,评价两种方法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的应用效果。方法选取医院结核科2013年8月-2015年5月369例确诊及疑似结核病的住院患者送检标本,同时采用线性探针法和BACTEC MGIT960对其进行结核分枝杆菌及利福平和异烟肼耐药性检测,数据采用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果线性探针法检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的灵敏度为90.4%、特异度为97.3%、Kappa值为0.872;对异烟肼耐药性检测的灵敏度为86.6%、特异度为96.3%、Kappa值为0.841,两种方法在利福平和异烟肼耐药性检测中具有较好的一致性。结论 PCR-线性探针杂交酶显色法是一种快速、准确的结核分枝杆菌及其对利福平和异烟肼耐药性的诊断方法,对耐多药结核病的快速诊断具有显著的优点。     

Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌检测和耐多药结核快速筛查的研究

目的探讨Xpert MTB/RIF技术检测涂阳痰标本结核分枝杆菌和利福平耐药性的效能,分析该技术在不同利福平耐药率患者中进行耐多药结核诊断的应用价值。方法连续纳入769例涂阳肺结核患者的痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、分枝杆菌初步菌型鉴定、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测。结果 Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的灵敏度为98.15%,特异度为70.00%。检测利福平耐药性与比例法药敏结果比较,Kappa值为0.859,灵敏度为93.04%,特异度为95.71%,复治涂阳患者特异度低于初治涂阳患者,阳性预测值和阴性预测值分别为85.47%和98.07%。结论 Xpert MTB/RIF技术能够快速检测出涂阳痰标本中结核分枝杆菌和利福平耐药性,具有较高的灵敏度和特异度。在云南省用于耐多药结核病患者快速筛查时,优先用于利福平耐药率较高的定点医院以及罹患耐多药高危人群。     

2种结核分枝杆菌耐多药基因检测方法诊断耐多药结核病的评估研究

目的评价2种结核分枝杆菌耐多药基因检测方法线性探针(MTBDRplus)和探针熔解曲线(Melt Pro),用于临床涂阳痰标本诊断耐多药结核病的检测效能。方法随机收集涂阳结核患者的痰标本,分别进行异烟肼(INH)和利福平(RIF)药物敏感性试验,包括金标准比例法传统药敏试验、MTBDRplus和Melt Pro检测,获得MTBDRplus和Melt Pro的灵敏度、特异度和总符合率。结果共有128例符合标准的痰标本纳入分析,与金标准比例法药敏试验比较诊断耐INH、RIF结核病(TB)和耐多药结核病(MDR-TB),线性探针MTBDRplus和Melt Pro检测MDR的灵敏度、特异度、总符合率分别为71.43%、94.21%、92.97%和71.43%、98.35%、96.88%。结论 MTBDRplus和Melt Pro用于涂阳痰标本中检测耐多药结核病,具有相似的高灵敏度和特异度、检测快速的特性,但2种方法针对不同药物的检测结果稍有差异,在耐多药结核病防治中还需依据检测目的选用适宜的方法。     

Xpert MTB/RIF技术辅助诊断耐多药肺结核的价值分析

目的研究Xpert MTB/RIF检测方法在涂阳痰标本中检测MTB和RIF耐药性,在基层涂阳耐多药肺结核诊断中的应用价值。方法连续纳入203例涂阳患者的痰标本,对同一份痰标本进行涂片抗酸染色、MGIT320液体培养、液体药敏试验、胶体金试验、基因芯片菌种鉴定和Xpert MTB/RIF检测。结果 MGIT320和Xpert MTB/RIF与痰涂片镜检阳性符合率分别为93.60%和94.09%;MGIT320和Xpert MTB/RIF结果符合率为88.67%;以液体培养胶体金法初步菌型鉴定为金标准,Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌灵敏度为98.88%、特异度为81.82%;以MGIT320液体药敏结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的灵敏度为95.65%、特异度为100.00%,2种方法一致性好(kappa=0.975,P0.05)。结论 MGIT320和Xpert MTB/RIF与痰涂片镜检阳性符合率高;Xpert MTB/RIF和MGIT320检测利福平耐药一致性好,在2 h内出结果,硬件设施要求低,有助于基层实验室更快,更有效地辅助诊断涂阳耐多药肺结核。     

浙江省开化县2010—2013年结核分枝杆菌耐药监测结果

目的分析浙江省开化县219例痰涂片阳性(涂阳)肺结核病例结核分枝杆菌的耐药情况,为制订结核病控制对策提供科学依据。方法对2010年1月至2013年12月在开化县人民医院结核门诊诊治的涂阳肺结核病例的痰标本进行结核分枝杆菌培养,菌型鉴定为结核分枝杆菌的菌株采用比例法进行6种抗结核药物异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、左氧氟沙星、卡那霉素耐药性监测。结果 219例培养阳性病例中,总耐药率为21.46%,耐多药率3.20%,初始耐药率为19.69%,初始耐多药率为0.52%,获得性耐药率34.62%,获得性耐多药率23.08%。结论开化县2010至2013年结核分枝杆菌总耐药率、耐多药率、初始耐药率、初始耐多药率、获得性耐药率均低于全国第五次结核病流行病学调查结果,而获得性耐多药率则高于全国第五次结核病流行病学调查结果。     

线性探针技术快速诊断本溪地区耐多药肺结核效果评价

目的 评价线性探针技术(LPA)在本溪地区快速检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的特异性和敏感性。 方法 采用传统罗氏培养法培养2013年3月-2014年6月期间全市县区所有登记的414例涂阳肺结核患者痰标本,获得菌株经比例法药物敏感性试验和线性探针技术检测利福平和异烟肼耐药性,并以比例法药物敏感性试验为金标准分析线性探针方法的特异性和敏感性。 结果 经培养获得394株结核分枝杆菌菌株,与比例法药物敏感性试验相比较,线性探针技术检测利福平和异烟肼的特异性分别为97.9%和96.6%,敏感性分别为91.1%和81.3%;对耐多药检测的特异性和敏感性分别为98.8%和89.9%。 结论 线性探针技术是一快速、敏感、特异的诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼耐药和耐多药(MDR)的有效方法,可在本溪地区推广应用。     

Xpert MTB/RIF检测技术用于耐多药结核分枝杆菌利福平耐药检测分析

目的了解利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)用于福建省耐多药结核病(MDRTB)利福平耐药检测的可行性。方法对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的79株耐多药和40株全敏感结核分枝杆菌分离菌株进行Xpert MTB/RIF检测,同时用PCR测序验证是否存在利福平耐药位点突变。结果119株菌Xpert MTB/RIF检测结果均为结核分枝杆菌。以比例法药物敏感试验结果作为对照,Xpert MTB/RIF检测MDR结核分枝杆菌利福平耐药的敏感度为97.47%(77/79),特异度为100.00%(40/40),Xpert MTB/RIF检测结果与PCR测序结果的一致性达到100%。结论 Xpert MTB/RIF方法用于耐多药结核分枝杆菌利福平耐药检测的意义较大,可用于福建省MDR-TB的快速筛查。     

MTBDR-Plus线性探针技术检测耐多药结核病效果评价

目的评估线性探针技术(MTBDR-Plus)快速筛查耐多药结核病的可靠性和应用价值。方法对230例涂片阳性肺结核患者痰液标本进行线性探针技术检测耐异烟肼、耐利福平菌株,同时进行酸性罗氏培养和比例法药物敏感性试验结果相比较。结果两种方法检测对RFP均敏感者213例,均耐药者12例,二者结果一致率97.8%(225/230);对INH均敏感者205例,均耐药18例,二者结果一致率97.0%(223/230)。MTBDRPlus技术检测耐利福平的灵敏度为80.0%(12/15),耐异烟肼的灵敏度为'78.3%(18/23),耐利福平特异度为99.0%(213/215)、耐异烟肼特异度为99.0%(213/215)。结论线性探针技术检测时间短,敏感度高,特异性强,是快速检测耐多药结核病的有效诊断方法。     

线性探针技术用于临床结核分枝杆菌耐药性的应用

目的通过线性探针方法与传统药敏试验(比例法)在四川省自贡市涂阳肺结核患者中耐药检测相比,评价线性探针方法用于检测临床耐药肺结核患者的可行性。方法收集自贡市涂阳肺结核患者痰标本以及涂阳患者阳性培养物,以传统比例法药敏试验为标准获得探针检测异烟肼(INH)、利福平(RFP)耐药的灵敏度与特异度。结果线性探针检测92份涂阳肺结核患者痰标本异烟肼耐药检测的灵敏度与特异度分别为78.6%、98.8%;利福平耐药检测的灵敏度与特异度分别为88.2%、94.5%,耐多药检测的灵敏度与特异度分别为83.3%、97.4%;202株菌株中异烟肼耐药检测的灵敏度与特异度分别为80.6%、98.8%,利福平耐药检测的灵敏度与特异度分别为82.9%、98.1%,耐多药检测的灵敏度与特异度分别为77.3%、98.9%。结论线性探针方法适用于临床涂阳肺结核患者异烟肼、利福平耐药快速检测。     

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价检测能力及在国境口岸的应用价值。方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离结核分枝杆菌,以传统药物敏感性试验为标准,获得该方法的灵敏性、特异性。结果对347例结核病人临床分离培养样本,传统药物敏感性试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本。荧光PCR熔解曲线法检出269例利福平敏感标本,78例利福平耐药标本,灵敏性为93.42%,特异性为97.42%,符合率为96.54%。结论荧光PCR熔解曲线法检测速度快速、灵敏度高、特异性强,可用于结核分枝杆菌利福平耐药突变的快速检测,适于国境口岸对耐多药结核病的快速筛查。     

铜仁市结核病耐药监测结果分析

目的了解铜仁市结核病耐药流行状况,评价结核病控制效果,为制定结核病防治对策提供依据。方法收集铜仁市2012年-2013年结核病门诊初治涂阳和复治涂阳患者的痰标本进行分离培养,对分离到的491株结核分枝杆菌菌株进行一线抗结核药物的敏感试验。结果铜仁市结核病患者总耐药率为18.7%,其中初治耐药率为17.8%,复治耐药率为24.3%,耐药谱中链霉素耐药率最高;耐多药率为6.1%,其中初治耐多药率为5.2%,复治耐多药率为11.4%,耐药谱中以异烟肼+利福平+链霉素和异烟肼+利福平+链霉素+乙胺丁醇最为常见;单耐药率为9.0%,耐药谱中链霉素耐药率最高。结论铜仁市结核病耐药率低于全国水平,在进一步实施DOTS策略情况下,仍需进一步加强耐药结核病的防治工作。     

广西某医院近十年HIV阴性者结核分枝杆菌耐药检测结果分析

目的探讨广西HIV阴性结核病患者耐药特征和近十年耐药变化趋势,为其防控提供参考。方法对2010年1月—2019年12月广西某医院HIV阴性疑似结核病患者临床标本进行分枝杆菌培养和分离鉴定,对结核分枝杆菌进行常用一线和部分二线抗结核药物敏感性试验。结果全部标本分枝杆菌培养阳性率为24.13%(3872/16049)。十年间共对3202株结核分枝杆菌进行耐药检测,总耐药率为22.86%,不同年份间耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。单耐药率为异烟肼9.96%~20.44%、利福平6.25%~19.57%,此2种药物不同年份间耐药率差异有统计学意义(P值均<0.01),其中异烟肼、利福平耐药率呈逐年下降趋势。多耐药率不同年份间差异无统计学意义;耐多药率不同年份间差异有统计学意义(P<0.01),并呈逐年下降趋势。耐药顺位由高至低分别为异烟肼、利福平、链霉素、氧氟沙星、乙胺丁醇、卡那霉素、对氨基水杨酸钠。结论近年来广西HIV阴性者结核分枝杆菌耐药率和多耐药率、耐多药率、异烟肼和利福平的耐药率等有下降的趋势,显示近年耐药结核病防控工作取得了一定成效。     

矽肺患者结核分枝杆菌临床分离培养与抗结核药物敏感检测

目的分析矽肺患者结核分枝杆菌临床检验结果,并对分离菌株进行药敏检测。方法以2011年10月至2013年10月临床诊断为矽肺合并肺结核的127例患者(矽肺结核组)和53例无合并肺结核矽肺患者(矽肺组)为研究对象,收集患者的痰标本,分别进行结核分枝杆菌痰涂片检查和BACTEC-MGIT 960培养,并对培养阳性的结核分枝杆菌菌株作一线抗结核药物的药敏分析。结果矽肺结核组患者痰涂片检查和BACTEC-MGIT 960培养的阳性率均高于矽肺组(47.2%vs 0.0%,67.7%vs 5.7%,P<0.01);矽肺结核组患者BACTEC-MGIT 960培养的阳性率高于同组患者的痰涂片检查阳性率(67.7%vs 47.2%,P<0.01)。180例患者痰标本经BACTEC-MGIT 960培养检出结核分枝杆菌阳性者共89株,该89株分离株均对一线抗结核药物耐药,总耐药率为100.0%,耐多药率为28.0%。耐药顺序从高到低依次为异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和利福平。结论矽肺患者标本中分离出的结核分枝杆菌对抗结核药物呈现较高的耐药率,对矽肺患者定期进行结核分枝杆菌感染的检查是防治耐药结核分枝杆菌菌株传播的有效措施。     

上海口岸结核分枝杆菌一线抗结核药物耐药情况调查

目的了解上海口岸结核分枝杆菌一线抗结核药物的耐药水平,为制定口岸传染性结核病防治策略提供依据,也为直接督导下的短程化疗(directly observed treatment short course,DOT)提供用药指导。方法针对2009年12月—2011年12月上海口岸出入境人群中胸部影像学诊断疑似肺结核患者,采集其连续3d的晨痰分离培养结核分枝杆菌,用MGIT960培养法检测其一线抗结核药物(链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺)的耐药情况。结果共分离到结核分枝杆菌复合群38株,其中有11株至少对一种一线抗结核药物耐药,总耐药率为29.0%(11/38),接近国内报道数据31.7%,显著高于国际中位数12.2%(χ2=8.777,P=0.003)及香港地区14.4%(χ2=6.433,P=0.011)的耐药水平。单耐一种药物的耐药率为23.7%(9/38),其中单耐异烟肼5.3%(2/38);单耐链霉素5.3%(2/38);单耐吡嗪酰胺13.2%(5/38),未检出单耐利福平和单耐乙胺丁醇耐药株。耐多种药物的耐药率为5.3%(2/38),其中多耐药结核(mulitdrug resistanceTB,MDR-TB)2.6%(1/38),异烟肼合并乙胺丁醇和吡嗪酰胺耐药率2.6%(1/38)。结论上海口岸面临耐药性肺结核病传播风险。其一线抗结核药物总耐药率接近我国国内报道水平,但高于我国香港地区和国际中位数水平。单药物耐药特征为高吡嗪酰胺耐药率、低利福平和乙胺丁醇耐药率。多耐药率接近国内外报道水平。采用目前的DOT方案仍应有效。有必要建立口岸特色的传染性结核病防治措施,有效地维护公共卫生安全。     

基因芯片法检测宁波地区结核分枝杆菌耐药性的研究

目的评价基因芯片法检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平和异烟肼耐药性的效能。方法纳入痰液涂片阳性肺结核病患者278例,采用基因芯片法检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性,对检测效能进行评价。结果基因芯片法检测涂阳肺结核患者利福平耐药性的灵敏度、特异度分别为68.18%、95.73%,与液体培养法差异无统计学意义(P>0.05),检测灵敏度随着涂阳等级差异无统计学意义(χ²_趋势=3.39,P=0.066)。检测异烟肼耐药性的灵敏度、特异度分别为45.45%、99.00%,与液体培养法差异有统计学意义(P<0.05),特别是≤3+涂阳等级的患者。检测耐多药的灵敏度、特异度分别为57.50%、97.48%,与液体培养法差异有统计学意义(χ²=4.35,P=0.035)。结论基因芯片法检测涂阳肺结核患者利福平耐药性的真实性和可靠性较好,但对异烟肼耐药性和耐多药的效果不佳,特别是涂片阳性等级较低者容易发生漏检。     

Gene-Xpert MTB/RiF与熔解曲线法检测结核分枝杆菌利福平耐药分析

目的评价Gene-Xpert MTB/RiF法与熔解曲线法检测结核分枝杆菌利福平耐药的不同应用价值。方法入选235例涂阳结核病患者痰标本分别做传统比例法药敏试验、Gene-Xpert MTB/RiF和熔解曲线法检测结核分枝杆菌的利福平耐药,以传统药敏试验作为金标准进行比较。结果 235例标本中比例法药敏试验利福平耐药12例(5.1%)、Gene-Xpert MTB/RiF利福平耐药例15例(6.4%)、熔解曲线法利福平耐药19例(8.1%),Gene-Xpert MTB/RiF和熔解曲线法敏感度分别为91.7%和100.0%;特异度分别为98.2%和96.7%。结论Gene-Xpert MTB/RiF和熔解曲线法两者均可应用于结核分枝杆菌利福平耐药性的快速检测,Gene-Xpert MTB/RiF法在我国开展结核菌耐多药筛查具更有较强的实用性,有更广的应用前景。     

基因芯片技术在雅安市结核分枝杆菌耐药检测中的应用

目的评价基因芯片技术在雅安市结核分枝杆菌耐药检测工作中的应用价值。方法收集2016-06/2018-11雅安市结核病可疑患者痰培养分离株190株进行基因芯片菌种鉴定、耐药检测和比例法药敏试验。以比例法药物敏感试验为金标准,分析基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼和耐多药诊断的敏感度、特异度、正确指数。采用McNemar检验比较两方法有无差异;采用Kappa检验比较两方法的一致性。两方法有差异的部分样本用基因测序的方法进行比对。结果基因芯片技术进行菌种鉴定,190株分离株中,有186株为结核分枝杆菌,4株为非结核分枝杆菌。以传统比例法药敏试验为金标准,186株结核分枝杆菌对利福平检测的敏感度和特异度为90.0%和96.6%,正确指数为0.866;对异烟肼检测的敏感度和特异度分别为89.5%和99.4%,正确指数为0.889;对耐多药的敏感度和特异度分别75.0%和99.4%,正确指数0.744。两种检测方法比较差异均无统计学意义(McNemar检验,P值分别为0.125、1.000和1.000)。两种检测方法具有较高的一致性(Kappa值分别为0.701、0.910、0.792)。基因芯片技术检测利福平耐药相关rpoB基因突变率最高的位点为531;异烟肼耐药相关katG基因主要突变位点为315。结论基因芯片技术与比例法药敏试验具有较好的一致性,灵敏度高、特异性好,是一种值得推广的耐药结核病诊断方法,在地市级结核病检测中具有重要的应用价值。     

Genotype MTBDRplus快速耐药诊断方法在地市级结核病医院应用的评估研究

目的评价地市级结核病医院线性探针（LPA）快速耐药诊断试剂Genotype MTBDRplus的效能。方法以LPA技术在初诊涂阳肺结核病人中发现耐多药结核病的灵敏度不低于70%估算,大概需要纳入耐多药病例72例。在4个省选4个地市连续纳入1 653例初诊涂阳肺结核病人,收集痰样本,同时采用LPA方法和传统药敏试验方法检测利福平和异烟肼的耐药性,以传统药敏结果为标准,评价GenotypeMTBDRplus的检测效能。结果与传统方法比较,检测结核分枝杆菌利福平耐药的灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.00%,94.69%,76.70%和96.16%,差异有统计学意义（P〈0.05）;检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为70.95%,97.36%,83.24%和94.78%,差异无统计学意义（P〉0.05）;检测耐多药结核病灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为66.39%,97.72%,73.83%和96.78%,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论线性探针技术可以在地市级专科医院应用快速诊断耐多药结核病,但是在开展过程中,必须对人员强化培训,加强督导。     

某院结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因特征

目的了解某院结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpo B及异烟肼耐药相关基因kat G、inh A的突变特征,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。方法收集83例结核病患者痰标本,分离培养MTB,采用BD960液体法检测利福平、异烟肼耐药性,提取菌株DNA,采用聚合酶链反应扩增rpo B、kat G、inh A全基因,对扩增产物进行测序分析。结果 83株样本中,39株对利福平耐药,51株对异烟肼耐药。耐利福平菌株rpo B基因突变率为97.44%(38/39),531位点突变率60.53%(23/38),526位点突变率23.68%(9/38),32株出现多位点联合突变。耐异烟肼菌株kat G基因突变率为98.04%(50/51),共发现16种突变类型,其中以kat G 315位点突变为主,占70.00%(35/50),1株为kat G与inh A联合突变。结论该院耐多药MTB产生耐药性与rpo B和kat G基因突变相关,检测MTB耐多药相关基因突变可为早期快速诊断耐药结核病提供参考依据。