镁对人脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响

目的 :　观察 Mg2 + 对 H2 O2 诱导的人脐静脉内皮细胞 DNA氧化损伤的影响。方法 :　取新生儿脐带内皮细胞进行细胞培养。实验分四组 :1 .阴性对照。 2 .阳性对照 ,培养液中加H2 O2 。 3 .补镁组 ,培养液中加不同浓度的 Mg SO4 。 4.补 H2 O2 与镁组 :培养液中加 H2 O2 与镁。用单细胞凝胶电泳技术检测各组拖尾细胞率与拖尾细胞长。结果 :　与 H2 O2 组相比 ,H2 O2 +Mg2 + 各剂量组拖尾细胞率下降、拖尾细胞尾长减小。结论 :　 Mg2 + 对 H2 O2 诱导的 DNA氧化损伤有明显的拮抗作用。     

降血压肽对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究降血压肽ACEIP对脐静脉内皮细胞释放内皮素(ET)、一氧化氮(NO)的影响。方法按150，300，600μg／ml不同剂量的降血压肽作用于脐静脉内皮细胞，进行细胞生长试验及细胞培养液中NO、ET含量的检测。结果与空白对照组比较，不同剂量的降血压肽可升高培养液中NO含量。降低ET含量；去甲肾上腺素的促进脐静脉内皮细胞的生长以及其促进脐静脉内皮细胞分泌ET、降低培养液中NO含量的作用可被降血压肽拮抗。结论降血压肽对血管内皮细胞功能具有保护作用。     

镁对入脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响

目的观察Mg2+对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响.方法取新生儿脐带内皮细胞进行细胞培养.实验分四组1.阴性对照.2.阳性对照,培养液中加H2O2.3.补镁组,培养液中加不同浓度的MgSO4.4.补H2O2与镁组培养液中加H2O2与镁.用单细胞凝胶电泳技术检测各组拖尾细胞率与拖尾细胞长.结果与H2O2组相比,H2O2+Mg2+各剂量组拖尾细胞率下降、拖尾细胞尾长减小.结论Mg2+对H2O2诱导的DNA氧化损伤有明显的拮抗作用.     

芍药苷对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的 保护作用

摘要:目的　探讨芍药苷对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法　体外培养HUVEC,以200 μmol/L H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤建立模型,同时以100、200、400 μmol/L的芍药苷分别干预,显微镜下观察细胞形态,用噻唑蓝（MTT）法检测HUVEC活力,微板法检测上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性及一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）法检测内皮素-1（ET-1）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）、纤溶酶原激活物抑制因子（PAI-1）的含量。结果　与模型组比较,芍药苷中、高剂量组细胞活力显著升高,LDH活性显著减低、ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和tPA显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论　芍药苷对H2O2诱导的HUVEC损伤具有明显的保护作用。     

γ-分泌酶抑制剂对人脐静脉内皮细胞系增殖凋亡的影响

目的探讨Notch信号特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对正常人脐静脉内皮细胞系增殖凋亡的影响。方法分别用不同浓度DAPT（15、30、45、60μM/L）处理体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）12h、24h和48h,MTT法测定内皮细胞活力;粘附实验测定处理24h后细胞粘附率;TUNEL法检测处理24h后细胞凋亡率;Western法检测Notch信号通路受体Notch1的表达。结果 MTT检测显示DAPT显著抑制HUVECs存活（P〈0.01）,并呈浓度时间依赖性;粘附实验结果显示DAPT（24h）可以显著减弱HUVECs粘附能力（P〈0.01）;TUNEL检测显示DAPT（24h）可以显著增加HUVECs凋亡率（P〈0.01）;Westernblot结果显示DAPT使HUVECs中Notch1表达显著下降（P〈0.01）。结论 DAPT可阻断Notch信号通路,抑制正常人脐静脉内皮细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

人脐静脉内皮细胞的培养与鉴定

人脐静脉（Human Umbilical Vein,HUV）是培养血管内皮细胞的常用来源之一,与动物血管内皮细胞相比,人脐静脉内皮细胞（HUVEC）可使实验条件更符合人体情况,结果更具有意义;而与人动脉内皮细胞相比,其取材方便,操作简单,混有杂细胞少,因此,HUVEC的培养日益为广大研究所重视.本在诸多研究HUVEC培养经验的基础上,改进并建立了一套操作性强、成功率高、细胞获得多的人脐静脉内皮细胞培养方法.报告如下.     

茶多酚对氧化应激状态下人脐静脉内皮细胞凋亡蛋白的调节作用

血管内皮细胞对于维持血管结构和功能完整具有重要意义，研究显示低密度脂蛋白经酶性和非酶性途径氧化修饰成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），引起血管内皮细胞损伤和功能改变，是动脉粥样硬化发生的始动因素。本实验以抗氧化剂茶多酚作为受试物，从凋亡角度观察了茶多酚抑制ox-LDL对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的毒性作用，旨在为茶多酚的进一步广泛应用提供科学依据。     

镁对人脐静脉内皮细胞增殖活力的影响

目的：探讨镁对人脐静脉内皮细胞增殖活力的影响及对心血管系统的保护作用。方法：在改进人脐静脉内皮细胞培养方法的基础上,用MTT法检测Mg^2对传统2－3代人脐静脉曲皮细胞增殖活力的影响,实验分为空白对照组LH2O2组;补镁组;H2O2 Mg^2组,结果：补镁各剂量组OD值高于空白对照组,H2O2＋Mg^2各剂量组OD值高于H2O2组,均具有显著性差异。结论：提示镁对内皮细胞增殖有明显的促进作用。     

茶多酚对甲醛致人脐静脉内皮细胞损伤保护作用

目的观察茶多酚对甲醛致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响。方法体外常规培养内皮细胞,实验设正常对照组、甲醛损伤组(0.1 mmol/L)、茶多酚组(2.5、5、10、20 mg/L)。其中茶多酚先与细胞预孵12 h后加入甲醛,置CO₂培养箱培养4 h,检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活力及乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮和细胞中谷胱甘肽含量,免疫细胞化学法检测核转录因子(NF-κB)。结果2.5、5、10、20 mg/L茶多酚组LDH、MDA含量分别为2 021.02、1 878.17、1 748.56、1 625.72 U/L和3.50、3.30、2.99、2.68 nmol/mL,均分别低于甲醛损伤组,差异有统计学意义(P<0.01);SOD与GSH活力分别为24.16、24.67、25.56、26.02 U/mL和0.334、0.364、0.445、0.449μmol/mg prot均高于甲醛损伤组(P<0.01);茶多酚各组NF-κB活力与甲醛组比较明显下降(P<0.01)。结论茶多酚可提高内皮细胞抗氧化酶活性,减轻甲醛所致氧化损伤。     

丹参酮ⅡA对经子痫前期患者血清刺激的人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察丹参酮(Tan)ⅡA对经子痫前期患者血清刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响.方法选取2010年12月至2011年4月于哈尔滨医科大学附属第一医院住院分娩的20例子痫前期患者的60份血清标本(每例患者采集3份)为研究对象.根据是否采用TanⅡA对HUVEC进行预处理,将其分为子痫前期组(n=20)、1.0mg/L TanⅡA处理组(n=20)和2.0 mg/LTanⅡA处理组(n=20).选取同期在相同医院就诊的20例正常晚孕期妇女的血清标本(每例孕妇采集1份)作为空白对照组(n=20)(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书).20例子痫前期患者与20例正常晚孕期妇女的年龄、孕龄等比较,差异无统计学意义(P＞0.05).倒置显微镜下观察4组HUVEC形态.采用CCK-8法测定4组HUVEC光密度(OD)值(HUVEC活力),并对结果进行统计学分析.结果 倒置显微镜下见:子痫前期组HUVEC呈损伤改变,细胞稀疏,细胞质与细胞核界限模糊,细胞质中有暗色颗粒;1.0 mg/LTanⅡA处理组和2.0 mg/L TanⅡA处理组HUVEC细胞形态呈多角形、椭圆形,排列紧密,细胞边界清楚.对4组血清标本继续培养24 h和48 h所测OD值,子痫前期组与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);1.0 mg/L TanⅡA处理组、2.0 mg/L TanⅡA处理组分别与子痫前期组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05):1.0mg/1TanⅡA处理组与2.0 mg/LTanⅡA处理组比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 子痫前期患者血管内皮细胞受损,导致内皮细胞活力下降,而Tan ⅡA可减轻该损伤作用.     

黄芪甲苷对高糖受损人脐静脉内皮细胞分泌SDF-1α和CXCR4的影响

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对高糖受损人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、CXC趋化生长因子受体4(CXCR4)的影响,为进一步研究AS-IV通过内皮细胞调节SDF-1α/CXCR4轴改善血管新生奠定基础。方法:从足月健康新生儿脐静脉中分离、培养出HUVECs,采用血管性假性...     

甘草素对人脐静脉内皮细胞血管生成的作用及其机制探讨

目的研究甘草素(liquirigenin,LQ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成的作用及其分子机制。方法采用四甲基氮唑兰MTT比色法检测甘草素对HUVEC细胞增殖的影响;划痕试验观察甘草素对细胞迁移的影响;蛋白质印迹法分析甘草素对血管生成相关蛋白和通路的影响。结果甘草素可抑制HUVEC细胞增殖,75μmol/L时,存活率为76.8%;甘草素可降低HUVEC细胞的迁移能力,随剂量浓度增加,细胞迁移能力减弱;甘草素可阻断磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/p70S6激酶(PI3K/AKT/p70S6K)信号通路,并下调血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白的表达。结论甘草素抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移,并可经PI3K/AKT/p70S6K信号通路介导抑制血管生成靶向因子VEGF和HIF-1α的表达。     

茶多酚对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨茶多酚(teapolyphenols,TP)对氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)凋亡的抑制作用及其机制。方法:实验分为四组:TP(25μg/ml)组、ox-LDL(200μg/ml)+TP(25μg/ml)组、ox-LDL(200μg/ml)组、对照组(等体积溶剂)。采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活性、吖啶橙荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,Westernblotting分析Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达。结果:ox-LDL可明显抑制HUVEC细胞增殖,TP与ox-LDL共同加入后,细胞增殖率明显上升,与ox-LDL组相比差异显著(P<0.05)。ox-LDL可诱导细胞发生凋亡,而TP能减弱其作用。Westernblotting结果:ox-LDL下调HUVEC细胞Bcl-2表达、上调Bax和caspase-3表达,TP与ox-LDL共同加入后,Bcl-2表达升高,Bax和caspase-3表达下降。结论:茶多酚对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡具有抑制作用,且与上调Bcl-2蛋白和下调Bax和caspase-3蛋白表达有关。     

降血压肽对人脐静脉内皮细胞eNOS、iNOS、ET-1mRNA表达的影响

目的和方法:采用RT-PCR技术分析降血压肽(ACEIP)对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮素-1(ET-1)mRNA表达水平的影响,从而探讨降血压肽降血压的部分作用机制。结果:与对照组比较,不同剂量的降血压肽可降低ET-1、iNOSmRNA的表达;升高eNOSmRNA的表达,均以ACEIP中剂量组效果最明显(P<0.01)。结论:降血压肽降低血压的机制可能与其降低人脐静脉内皮细胞ET-1、iNOS的基因表达;诱导eNOS基因表达有关。     

3-去氮腺苷对脐静脉内皮细胞超氧化物歧化酶表达及甲基化的影响

<正>既往研究显示,高蛋氨酸摄入和B族维生素缺乏等膳食因素、以及先天性蛋氨酸代谢酶缺失等均可导致血浆中总同型半胱氨酸     

降血压肽对人脐静脉内皮细胞eNOS、iNOS 、ET-1 mRNA表达的影响

目的和方法:采用RT-PCR技术分析降血压肽(ACEIP)对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮素-1(ET-1)mRNA表达水平的影响,从而探讨降血压肽降血压的部分作用机制。结果:与对照组比较,不同剂量的降血压肽可降低ET-1、iNOSmRNA的表达;升高eNOSmRNA的表达,均以ACEIP中剂量组效果最明显(P<0.01)。结论:降血压肽降低血压的机制可能与其降低人脐静脉内皮细胞ET-1、iNOS的基因表达;诱导eNOS基因表达有关。     

硒对体外培养血管内皮细胞的影响

目的 研究不同浓度的硒对体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC-304)的影响.方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞株,在培养液中加入不同浓度的亚硒酸钠(50、100、500、1 000、2000 nmoL/L),连续培养48 h后,以瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,以四唑氮蓝(MTT)比色法检测细胞活性,并检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活力,丙二醛(MDA)、NO的含量.结果 硒浓度为1 000、2000nmoL/L时,细胞出现损伤样改变.硒浓度为100nmol/L时,细胞活性高于正常对照组(P＜0.05);硒浓度为1 000、2000 nmol/L时,细胞活性降低.与对照组比较,硒浓度为50～500 nmol/L时,培养液中的SOD、GSH-Px活力升高,差异有统计学意义(P＜0.05);硒浓度达2000nmoL/L时,SOD、GSH-Px活力明显降低(P＜0.01).与对照组比较,MDA在硒低浓度时无显著变化,当硒浓度升高至1 000、2 000 nmol/L时显著增高(P＜0.05,P＜0.01).低浓度的硒增强eNOS活力,降低iNOS活力,降低NO浓度;高浓度的硒降低eNOS活力,增强iNOS活力,升高NO浓度.结论 低浓度的硒对脐静脉血管内皮细胞有促进增生作用,高浓度的硒有损伤作用,并随剂量的增高而加重.     

S-腺苷同型半胱氨酸升高与人脐静脉内皮细胞损伤及整体基因组甲基化的关系分析

目的:探讨S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)升高对血管内皮细胞的损伤效应与整体基因组甲基化的关系。方法:以永生化的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)为研究对象,用不同浓度的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosylhomocysteine hydrolase,SAHH)抑制剂3-deazaadenosine(DZA)处理24、48、72h,使用光学显微镜观察细胞形态学变化,电子显微镜观察细胞器超微结构变化,反相高效液相色谱法(reversed phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定胞内SAH浓度,荧光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)测定Hcy的浓度,MTT法检测细胞生长增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,胞嘧啶延伸法检测整体基因组DNA甲基化水平。结果:HUVEC经DZA处理后,形态学上出现凋亡或坏死特征,培养基中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)浓度下降,胞内SAH含量升高,细胞的生长增殖能力降低并出现凋亡现象,整体基因组的甲基化水平降低。结论:SAH升高能导致血管内皮细胞的损伤,且这种作用与整体基因组甲基化水平有关,SAH可能是动脉粥样硬化形成过程中的潜在生物标志分子。     

铅诱导人脐静脉内皮细胞损伤及机制研究

目的探讨铅诱导人脐静脉内皮细胞损伤效应及机制。方法用不同浓度的铅染毒人脐静脉内皮细胞,观察细胞形态和活性,通过检测细胞上清液丙二醛(MDA)、非对称性二甲基精氨酸(ADMA)、一氧化氮(NO)的含量和一氧化氮合酶(NOS)的活性等指标,观察铅对人脐静脉内皮细胞损伤的量-效关系(终浓度分别为1、2、4、8mg/L的铅处理细胞24h)和时-效关系(终浓度为4mg/L的铅分别于处理0、3、6、12、24、48h后观察检测指标)。实验分为正常对照组(加入与处理组等体积的D-Hank’s液,铅浓度为0mg/L)、铅处理组(加终浓度分别为1、2、4、8mg/L的铅)、铅VitC组(铅终浓度为4mg/L,VitC终浓度为100mg/L)和阳性对照组(加终浓度为500μg/L的过氧化氢)。结果 2～8mg/L的铅能显著改变细胞形态、降低细胞活性;能显著性诱导内皮细胞MDA升高。2～8mg/L的铅还能显著性诱导内皮细胞NO含量降低,具有显著的时间依赖性,各处理组间两两比较差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。4mg/L铅处理时细胞ADMA含量最高,且分别在处理后24h到达最高峰。结论 2～8mg/L铅能显著诱导人脐静脉内皮细胞损伤;ADMA在铅诱导人脐静脉内皮细胞损伤中有着重要作用。     

低剂量X射线对脐静脉内皮细胞分泌vWF的影响

目的 探讨低剂量X射线（0.1 Gy）照射对脐静脉内皮细胞分泌vWF的影响。方法 采用医用直线加速器对脐静脉内皮细胞进行0、0.1 Gy（剂量率为200 cGy/min）的X射线照射,然后采用MTT法、台盼蓝染色和细胞凋亡实验检测细胞增殖、细胞活力及细胞凋亡。此外,采用ELISA和Westernblot方法检测受X射线照射后的细胞培养液中vWF的表达。结果 以0.1 Gy的低剂量X射线照射脐静脉内皮细胞后,细胞增殖、细胞活力以及细胞凋亡的结果与对照组相比无统计学差异,但照射后的脐静脉内皮细胞培养基中vWF水平明显升高。结论 低剂量（0.1 Gy）的X射线剂量照射不会导致脐静脉内皮细胞增殖、凋亡或细胞活性的显著改变,但是促使其分泌vWF的量增多。