益气养阴方影响Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的实验研究

目的 通过对Lewis肺癌移植鼠肿瘤生长及肿瘤组织中Notch信号表达、CD4+CD25+ Treg细胞变化的观察,探讨益气养阴方干预肺癌的量效关系及机制。 方法 将肺癌移植小鼠随机分为4组,模型组只行造模;中药组按小鼠体重按不同剂量灌胃给药分为等效剂量组、大剂量组;化疗组以CTX腹腔注射化疗。记录各组小鼠瘤体大小,观察期满后留取标本行Notch信号表达检测。 结果 ①肿瘤相对体积(RTV)及肿瘤相对抑制率:大剂量组RTV低于其他3组(P＜0.01),化疗组RTV低于等效剂量组(P＜0.05);大剂量组肿瘤抑制率较其他3组高(P＜0.05)。②肿瘤组织中Notch信号通路表达及CD4+CD25+ Treg细胞:等效剂量组Notch1 mRNA表达及CD4+CD25+ Treg细胞高于化疗组(P＜0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组低(P＜0.05);等效剂量组Notch3 mRNA表达与化疗组比较差异无统计学意义(P＞0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Notch3 mRNA表达量降低(P＜0.05);等效剂量组、高剂量组、化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达均较模型组降低(P＜0.05),等效剂量组与化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达量降低(P＞0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达量降低(P＜0.05)。 结论 益气养阴方剂有抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,此种作用与益气养阴方剂的药物用量之间存在量效关系,且此种关系提示较大剂量的益气养阴方用量可能更有利于抑制Lewis肺癌细胞生长,而这种抑制作用与益气养阴方剂调控肿瘤组织中Notch1信号通路及CD4+CD25+ Treg细胞有关。      

益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长影响的实验研究

目的:通过不同剂量益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长及肿瘤组织中Notch信号表达、CD4~+CD25~+Treg细胞比例及细胞因子IL-10、TNF-β表达影响的观察,探讨益气养阴方干预肺癌的量效关系及机制。方法:将60只近交系C57BL/6纯系小鼠行Lewis肺癌细胞移植造模后随机分为4组:模型组、化疗组、益气养阴方等效剂量组、益气养阴方大剂量组。模型组仅行造模;等效剂量组、大剂量组按小鼠体质量灌胃给药,每天3次;化疗组以CTX腹腔注射化疗,每周一次。记录各组小鼠瘤体大小,观察期满后留取标本行HE染色及Notch信号表达检测。结果:(1)肿瘤相对体积(RTV)及肿瘤相对抑制率:药物干预组RTV值均较模型组缩小(P0.01),组间比较大剂量组RTV均低于其他三组(P0.01),而化疗组RTV低于等效剂量组(P0.05);大剂量组肿瘤抑制率高于其他三组(P0.05);(2)肿瘤组织中Notch信号通路表达及CD4~+CD25~+Treg细胞:等效剂量组、高剂量组、化疗组Notch1mRNA表达、CD4~+CD25~+Treg均较模型组降低(P0.05),等效剂量组Notch1mRNA表达高于化疗组(P0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Notch1mRNA表达量低(P0.05);等效剂量组、益气养阴高剂量组、化疗组Notch3mRNA表达均较模型组降低(P0.05),但等效剂量组Notch3mRNA表达与化疗组比较差异无统计学意义(P0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Notch3mRNA表达量降低(P0.05);等效剂量组、高剂量组、化疗组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达均较模型组降低(P0.05),等效剂量组与化疗组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达量降低,差异具有统计学意义(P0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达量降低(P0.05);(3)肿瘤组织中IL-10、TNF-β表达:药物干预各组肿瘤组织中IL-10、TNF-β表达均较模型组降低(P0.05)。药物干预组间比较:化疗组IL-10、TNF-β表达降低最明显,其次为高剂量组。结论:益气养阴方有抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,且作用存在量效关系,提示较大剂量的益气养阴方可能更有利于抑制Lewis肺癌细胞生长,而这种抑制作用与调控肿瘤组织中Notch1信号通路及CD4~+CD25~+Treg细胞有关。     

肺积方调节CD4+CD25+Treg 细胞及T 淋巴细胞增殖与抗Lewis 肺癌移植鼠肿瘤生长作用研究

目的:观察肺积方联合化疗对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长情况及脾脏CD4+CD25+Treg细胞、胸腺T淋巴细胞增殖变化的影响,探讨肺积方联合化疗抗肺癌免疫逃逸的作用机制。方法:采用随机对照研究方法,将64只Lewis肺癌移植小鼠随机分为对照组、肺积方组、综合组(肺积方联合顺铂)、顺铂(DDP)组,每组16只,并分别以生理盐水、肺积方、肺积方联合DDP、DDP药物干预,观察小鼠瘤体变化,流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞含量,MTT法检测小鼠胸腺和脾脏T淋巴细胞增殖情况。结果:DDP组、肺积方组、综合组小鼠瘤体、瘤重均小于对照组(P<0.05),综合组瘤体、瘤重均小于DDP组和肺积方组(P<0.01);第10、21天DDP组、肺积方组、综合组小鼠胸腺、脾脏T淋巴细胞增殖指数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中肺积方组、综合组T淋巴细胞增殖指数增高,而DDP组T淋巴细胞增殖指数降低;DDP组干预后T淋巴细胞增殖指数明显低于干预前(P<0.05);而肺积方组、综合组第21天与第10天T淋巴细胞增殖指数组内比较无明显变化(P>0.05)。第10、21天DDP组、肺积方组、综合组荷瘤小鼠胸腺CD4+CD25+Treg细胞比例均较对照组降低(P<0.05);DDP组第21天胸腺CD4+CD25+Treg细胞比例较第10天明显升高(P<0.05);综合组脾脏CD4+CD25+Treg细胞比例较低,与肺积方组、DDP组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺积方联合化疗具有抗Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,该作用可能与其下调CD4+CD25+Treg细胞含量相关。     

益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠免疫重塑相关因子表达的影响

目的 观察益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠免疫重塑相关因子IL-10、TGF-β表达的影响。方法 30只近交系C57BL/6纯系小鼠行Lewis肺癌细胞移植造模后随机分为3组：模型组、中药组及西药组,每组10只。模型组只行造模,中药组给予灌胃益气养阴方悬液,1次/d,0.4 ml/次。西药组将Nivolumab按照0.273 mg/10g溶于0.2 mL生理盐水中腹腔注射,每2周1次;各组均常规喂食。接种后第2 d开始给药,给药3周。第7d开始观察记录各组小鼠瘤体大小(每3 d测1次瘤体大小)。观察期满后各组小鼠断颈处死,留取各组肿瘤组织,ELISA法测定肿瘤组织匀浆IL-10、TGF-β、Foxp3含量,流式细胞仪检测小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例。结果 中药组及西药组肿瘤体积增长均减慢,两组抑瘤率比较无统计学差异(p>0.05);与模型组相比,中药组及西药组肿瘤组织IL-10、TGF-?表达及Foxp3表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与中药组比较,西药组肿瘤组织IL-10、TGF-?、Foxp3表达降低更明显,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,两组药物干预组小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例降低(P<0.05),西药组小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例降低较中药干预组降低更明显(P<0.05)。结论 益气养阴方可抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长,其机制可能与降低肿瘤组织Foxp3表达,减少CD4+CD25+Treg细胞分化,降低IL-10、TGF-β表达,改善细胞免疫抑制状态,进而发挥调节免疫重塑作用有相关性。     

益肺逐积方联合环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠模型肿瘤体积及免疫功能的影响

目的　观察益肺逐积方联合环磷酰胺（CTX）对Lewis肺癌小鼠模型肿瘤体积、胸腺指数及淋巴细胞百分比的影响,以探讨益肺逐积方对肺癌的治疗及免疫调节作用。方法　2016年4—5月,选取SPF级C57BL/6雄性小鼠55只,其中5只接种小鼠Lewis肺癌细胞制备Lewis瘤细胞悬液,另50只采用随机数字表法分为模型小鼠（40只）和正常小鼠作为正常组（10只）,模型小鼠右前肢腋窝皮下接种Lewis瘤细胞悬液,建立Lewis肺癌小鼠模型。造模成功后模型小鼠采用随机数字表法分为益肺逐积方组（10只）、CTX组（10只）、联合用药组（10只）、模型对照组（10只）。益肺逐积方组中药液灌胃14.95 g/kg,CTX组在接种后72 h和10 d腹腔注射CTX 40 mg/kg,联合用药组在CTX组用药基础上中药液灌胃14.95 g/kg,模型对照组和正常组给予与中药液等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,各组均于造模第2天起开始用药,皆1次/d,连续14 d。用药14 d后测量各组小鼠瘤体直径,计算肿瘤体积;称量小鼠体质量、胸腺质量、计算胸腺指数;流式细胞术检测脾细胞CD4+ T、CD8+T、B淋巴细胞百分比。结果　益肺逐积方组、联合用药组小鼠肿瘤体积小于模型对照组（P<0.05）,联合用药组小鼠肿瘤体积小于CTX组（P<0.05）;模型对照组、益肺逐积方组、CTX组及联合用药组体质量小于正常组（P<0.05）,益肺逐积方组胸腺质量及胸腺指数大于正常组及CTX组（P<0.05）;模型对照组小鼠CD4+T、CD8+T淋巴细胞百分比小于正常组（P<0.05）,益肺逐积方组、CTX组、联合用药组小鼠CD4+T、CD8+T淋巴细胞百分比大于模型对照组（P<0.05）,联合用药组CD4+T、CD8+T细胞百分比大于CTX组（P<0.05）;模型对照组B淋巴细胞百分比大于正常组（P<0.05）,益肺逐积方组、CTX组、联合用药组B淋巴细胞百分比低于模型对照组（P<0.05）,益肺逐积方组B淋巴细胞百分比大于CTX组（P<0.05）。结论　益肺逐积方联合CTX可有效抑制Lewis肺癌肿瘤生长,并通过上调胸腺指数以及CD4+T、CD8+T、B淋巴细胞百分比,改善CTX的免疫抑制作用。     

低剂量环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞功能的影响

目的：研究低剂量环磷酰胺（CTX）单次注射对Lewis肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞功能的影响,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型,随机分成3组：CTX组、肿瘤组、单纯对照组。采用CTX单次注射,观测各组肿瘤体积动态变化;采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测各组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平;采用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖功能;采用LDH释放法检测脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)细胞的杀伤活性。结果：与未治疗肿瘤组相比,CTX治疗可延缓荷19 d Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长;CTX组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞功能明显高于肿瘤组（P<0. 05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞杀伤活性比肿瘤组略高,但变化不显著（P>0.05）。结论：CTX单次注射可降低Lewis肺癌小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞的数量及Foxp3 mRNA表达,使T淋巴细胞增殖功能及脾细胞中CTLs杀伤功能增强。     

肺岩宁方对肺癌小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞比例及Foxp3表达的影响

目的：研究肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞（T regulatory cell,Treg）比例及转录因子Foxp3表达的影响。方法：建立小鼠Lewis肺癌细胞移植瘤模型后,将32只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组、中药组、化疗组和综合治疗组。给予相应药物干预14d后,观察小鼠的一般状况、饲料消耗量、体质量、去瘤体质量、移植瘤质量、肺脏指数、脾脏指数和胸腺指数,并检测各组小鼠胸腺、脾脏和移植瘤CD4＋CD25＋Treg细胞的比例及Foxp3mRNA的表达。结果：肺岩宁方可降低肺癌小鼠脾脏和胸腺指数,增加去瘤体质量,减少移植瘤质量,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。肺岩宁方可显著降低Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中的CD4＋CD25＋Treg细胞比例,并抑制Foxp3mRNA的表达,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：肺岩宁方通过降低CD4＋CD25＋Treg细胞比例、下调Foxp3 mRNA表达而增强机体的抗肿瘤免疫应答发挥抑瘤作用。     

益气补肾活血方对活动性类风湿关节炎患者CD4+CD25+Tr的影响

目的:观察益气补肾活血方对活动性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Tr)的影响。方法:纳入60例活动性RA患者,随机分为治疗组和对照组,每组30例。两组患者均给予雷公藤多苷片治疗,治疗组患者在此基础上给予益气补肾活血方治疗,疗程为3个月。评价两组患者的中医证候疗效、中医证候评分,检测患者的CD4~+CD25~+Tr水平的变化。结果:治疗后,治疗组的中医证候疗效总有效率为93.33%,对照组为86.67%,治疗组疗效优于对照组(P0.05)。治疗后,两组患者的中医证候评分较治疗前均明显降低(P0.05),而两组间中医证候评分比较差异无统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者的CD4~+CD25~+Tr水平较治疗前均明显升高(P0.05),且治疗组患者的CD4~+CD25~+Tr水平高于对照组(P0.05)。结论:益气补肾活血方能明显缓解活动性RA患者的临床症状,上调患者体内的CD4~+CD25~+Tr水平,从而调节机体的免疫功能。     

益气养阴方对Lewis肺癌移植模型小鼠免疫重塑相关因子表达的影响

目的观察益气养阴方对Lewis肺癌移植模型小鼠免疫重塑相关因子表达的影响。方法30只近交系C57BL/6纯系小鼠行Lewis肺癌细胞移植造模后随机分为三组:模型组、中药组及西药组,每组10只。模型组仅造模;中药组造模后予灌胃益气养阴方悬液(含生药2g/mL),1天1次,每次0.4mL;西药组将Nivolumab按照0.273mg/10g溶于0.2mL生理盐水中腹腔注射,每2周1次;各组均常规喂食。造模后第2天开始给药,给药3周。第7天开始观察记录各组小鼠瘤体大小(每3天测1次瘤体大小)。观察期满后各组小鼠断颈处死,留取各组小鼠肿瘤组织,ELISA法测定肿瘤组织匀浆白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)、转录因子p3(Foxp3)含量,流式细胞仪检测小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例。结果中药组及西药组肿瘤体积增长均减慢,两组抑瘤率比较(23.07%比37.55%),差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,中药组及西药组肿瘤组织IL-10含量(1915.79±114.13)pg/mL、(1712.71±157.25)pg/mL比(2257.78±63.00)pg/mL;TGF-β含量(99.59±18.64)pg/mL、(66.83±9.75)pg/mL比(142.33±8.16)pg/mL;Foxp3表达(0.83±0.11)、(0.35±0.09)比(0.98±0.08),均明显下降(P均0.05);与中药组比较,西药组肿瘤组织IL-10含量(1712.71±157.25)pg/mL比(1915.79±114.13)pg/mL,TGF-β含量(66.83±9.75)pg/mL比(99.59±18.64)pg/mL,Foxp3表达(0.35±0.09)比(0.83±0.11),均明显降低(P均0.05);与模型组比较,中药组及西药组小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例(1.07±0.12)%、(0.50±0.26)%比(1.17±0.38)%,明显降低(P0.05),西药组小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例(0.50±0.26)%较中药组(1.07±0.12)%降低更明显(P0.05)。结论益气养阴方可抑制Lewis肺癌移植模型小鼠肿瘤生长,其机制可能与降低肿瘤组织Foxp3表达,减少CD4+CD25+Treg细胞分化,降低IL-10、TGF-β表达,改善细胞免疫抑制状态相关。     

血管活性肠肽调控CD4~+CD25~+Treg/Th17平衡对实验性自身免疫性脑脊髓炎防治作用的影响

目的探讨血管活性肠肽(vocative intestinal peptide,VIP)调控CD4~+CD25~+Treg/Th17平衡对防治实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的影响。方法 60只健康雌性wistar大鼠随机分成正常对照组、EAE对照组、VIP低剂量防治组和VIP高剂量防治组。利用髓鞘碱性蛋白(MBP)~+完全福氏佐剂(CFA)诱导建立EAE模型。自造模当日起,每隔一日分别对VIP低、高剂量防治组大鼠腹腔注射VIP 4nmol/kg(0.2 m L)、16 nmol/kg(0.8 m L),正常对照组及EAE对照组注射0.8 m L生理盐水,连续10 d。观察大鼠发病情况;HE染色观察脑组织基本病理改变;流式细胞仪检测脾组织CD4~+CD25~+Treg、Th17细胞比例;ELISA法检测脑组织中TGF-β1、IL-17A因子含量变化。结果与EAE对照组比较,VIP各剂量防治组大鼠发病潜伏期延长、进展期缩短、发病高峰期神经功能障碍评分(NDS)降低;HE染色显示正常对照组大鼠脑组织中未见炎细胞浸润,VIP各剂量防治组大鼠脑组织中炎细胞浸润程度较EAE组明显下降;与EAE对照组比较,VIP各剂量组大鼠脾组织中CD4~+CD25~+Treg细胞亚群比例升高,Th17细胞亚群比例降低,且各组间存一定的量效关系;VIP各剂量组大鼠脑组织中TGF-β1含量较EAE组明显升高,IL-17A含量较EAE组明显降低,且各组间存在一定剂量依赖关系。结论 VIP通过上调CD4~+CD25~+Treg细胞比例,促进TGF-β1因子分泌,同时下调Th17细胞比例,抑制IL-17A因子表达,从而减轻脑组织炎症细胞的浸润程度,发挥对EAE的防治作用。     

Shkbp1缺失对小鼠T淋巴细胞系亚群的影响

目的探讨Shkbp1缺失小鼠(Shkbp-1~(-/-))的血液、骨髓、脾脏中血液细胞分类和T细胞亚群的变化。方法采用Shkbp-1~(-/-)转基因小鼠,经PCR鉴定基因型;利用全自动血液检测仪测定血液细胞分类;采用流式细胞仪检测Shkbp-1~(-/-)和对照组小鼠血液、骨髓、和脾脏中T淋巴细胞亚群。结果血常规结果:中性粒细胞和嗜酸性粒细胞有增高趋势,且有显著差异。淋巴细胞未见显著差异。流式结果显示:对照组血液中CD4~+CD8~+双阳性细胞降低,骨髓中CD3~+、CD4~+升高。但脾脏组织中,其CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+CD8~+双阳性细胞均呈下降趋势。结论 Shkbp1参与血液细胞的成熟分化,影响了免疫细胞数量,本研究为探索Shkbp1如何参与血液细胞的分化奠定了研究基础。     

甲状腺乳头状癌中肿瘤相关巨噬细胞浸润及CD47表达的意义

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞浸润及CD47蛋白表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征间的关系及意义.方法 收集大连市友谊医院2015—2019年间甲状腺乳头状癌手术切除标本65例,应用免疫组织化学方法检测所有标本中CD68+和CD163+肿瘤相关巨噬细胞浸润和CD47蛋白表达情况,分析肿瘤相关巨噬细胞浸润、CD47蛋白表达...     

健脾清化方对阿霉素肾病大鼠免疫炎症损伤的作用机制

目的 从细胞免疫介导的炎症损伤角度,探讨健脾清化方对阿霉素致局灶节段硬化（focal segmental glomurular sclerosis,FSGS）模型大鼠FSGS的影响。方法 左侧肾切除加尾静脉注射阿霉素致大鼠肾脏FSGS,观察健脾清化方对模型大鼠脾淋巴细胞CD4+/CD8+比值,肾小管间质纤维连接蛋白（FN）mRNA、Ⅲ型胶原（Col Ⅲ）mRNA、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）6表达的影响。结果 健脾清化方能明显降低模型鼠脾淋巴细胞CD4+/CD8+比值,肾小管间质FN mRNA、Col Ⅲ mRNA、TNF-α、IL6水平。结论 健脾清化方对阿霉素肾病模型大鼠肾脏FSGS有一定的改善作用,该机制可能与健脾清化方抑制细胞免疫介导的炎症损伤有关。     

CD4+CD25+调节性T细胞在类风湿关节炎患者免疫耐受失衡中的变化

目的 检测CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ 调节性T细胞（Treg）在类风湿关节炎（RA）患者外周血和关节液中的变化,探讨该细胞亚群在RA免疫耐受失衡中的作用。方法 采用流式细胞术检测活动期RA患者关节液、外周血和健康对照外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测外周血和关节液单个核细胞FoxP3基因的表达。分析外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞比例与病情活动指标的相关性。结果 活动期RA患者关节液CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例（7.56%±2.89%）高于外周血（1.84%±0.97%）和健康对照外周血（2.19%±0.54%）,差异均有统计学意义（P<0.01）;RA患者抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体（ACPA）阴性组外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞水平（2.85%±0.87%）高于ACPA阳性组（1.40%±0.63%,P<0.01）。活动期RA患者关节液单个核细胞FoxP3基因表达水平高于RA患者外周血和健康对照外周血（P<0.01）;活动期RA患者外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例与疾病活动指标无相关性（P>0. 05）。结论 RA患者关节液CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞的变化更能反映RA炎症部位免疫耐受失衡机制。     

CD19+ CD24high CD27+调节性B细胞在儿童传染性单核细胞增多症中的表达及意义

目的 探讨调节性B细胞（Breg）在儿童传染性单核细胞增多症（IM）中的作用。方法 应用流式细胞术检测53例IM患儿外周血T淋巴细胞亚群,CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达情况。用荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA。同时用ELISA方法分析血清IL-10、TGF-β分泌水平。以50例健康儿童为对照。结果 IM急性期组与对照组比较CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显降低（t=19.99,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显增高（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值降低（t=16.79,P<0.01）。IM恢复期组与急性期组比较,CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显增高（t=21.54,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显降低（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值增高（t=16.68,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平13.4%±1.87%,与对照组比较显著降低,差异有统计学意义（t=14.61,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平与EBV-DNA病毒载量呈负相关（r=-0.52,P<0.01）。经治疗后IM恢复期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平18.3%±2.11%与IM急性期组比较显著增高,差异有统计学意义（t=12.61,P<0.01）。IM急性期组血清IL-10较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=11.50,P<0.01）。治疗后IM恢复期组IL-10较IM急性期组明显增高,差异有统计学意义（t=9.40,P<0.01）。结论 IM急性期存在明显免疫失衡,即CD3⁺ CD8⁺ T细胞增多,CD4/CD8比值降低,可能与Breg细胞表达减低导致的免疫抑制功能不足有关。     

CD4+、CD8+T细胞监测在ICU重症患者并发获得性真菌感染临床评估中的价值分析

目的:探讨重症监护室(intensive care unit,ICU)内的重症患者获得性真菌感染的特点,以及分化簇(cluster of differen-tiation,CD)4+、CD8+T细胞免疫功能对获得性真菌感染临床评估中的价值.方法:纳入2017年1月至2019年12月入住重庆医科大学附属第一医院重症医学科并送检标本培养出真菌阳性的患者.根据诊断标准分为真菌感染组(49例)与定植组(37例).记录并分析急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分,ICU住院时间,是否合并脓毒症、进行深静脉置管、机械通气、使用激素及广谱抗生素.收集标本取样48 h内患者体温、呼吸频率、脉率等生命体征,CD4+T细胞百分比、CD8+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值等T细胞检测值.采用二元logistic回归进行感染危险因素分析并建立预测模型,同时获得预测概率.运用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析上述指标对诊断真菌感染价值进行评价.结果:感染组中,APACHEⅡ评分(P=0.045)、合并脓毒症例数(P=0.049)、机械通气例数(P=0.011)、体温(P=0.049)明显高于定植组,差异具有统计学意义(P＜0.05).其余指标在评估真菌感染与定植的比较中没有统计学意义(P＞0.05).对首次培养结果不同的菌株种类进行亚组分析,发现各组别间T细胞检测值无统计学差异(P＞0.05).进行logistic回归分析感染组与定植组中T细胞检测值建立预测模型一,对其预测概率进行分析(P=-0.013);再对合并脓毒症例数与T细胞检测值分析所得的预测概率(预测模型二)进行分析(P=0.024);对ICU入住时间、APACHEⅡ评分、合并脓毒症、进行深静脉置管、机械通气、使用激素、使用广谱抗生素、T细胞检测值分析所得预测概率(预测模型三)进行分析(P=0.025).根据ROC曲线分析APACHEⅡ评分[曲线下面积(area under curve,AUC)=0.577]、体温(AUC=0.487)、CD4+T细胞(AUC=0.515)、CD8+T细胞(AUC=0.565)及CD4+/CD8+比值(AUC=0.438).预测模型一(AUC-0.611)及预测模型二(AUC=0.653)对评估获得性真菌感染的诊断价值较低.预测模型三(AUC-0.757)对评估获得性真菌感染的诊断价值更高.结论:ICU重症患者中合并脓毒症、机械通气者更易感染真菌;合并脓毒症的患者结合CD4+T细胞、CD8+T细胞检测值,对获得性真菌感染的诊断具有提示性作用;且当脓毒症患者入住ICU时存在诸如侵入性操作、激素及广谱抗生素使用等危险因素后,更容易发生获得性真菌感染.     

非小细胞肺癌患者外周血CD8+CD39+T细胞水平及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CD8⁺CD39⁺T细胞水平及临床意义。方法选取60例NSCLC患者为NSCLC组,60例健康人群为对照组。检测两组外周血CD8⁺CD39⁺T细胞水平,分析NSCLC患者外周血CD8⁺CD39⁺T细胞水平与其临床特征和预后的关系。结果NSCLC组外周血CD8⁺CD39⁺T细胞水平显著高于对照组(P＜0.05)。肿瘤直径＞3 cm、低分化、TNMⅢ期的NSCLC患者外周血CD8⁺CD39⁺T细胞水平高于肿瘤直径≤3 cm、中高分化、TNMⅠ~Ⅱ期的患者(P＜0.05)。CD8⁺CD39⁺T细胞高水平组术后1年肿瘤无进展生存率及无进展生存期均低于低水平组(P＜0.05)。TNM分期、外周血CD8⁺CD39⁺T细胞水平是NSCLC患者预后的影响因素(P＜0.05)。结论CD8⁺CD39⁺T细胞在NSCLC患者外周血中呈高水平,且与临床病理特征及预后关系密切,可作为患者病情和预后的评估指标。     

人结肠癌细胞株CW-2干细胞生物学特性研究

 目的从人结肠癌细胞株CW-2中分离癌干细胞,并观察其生物学特性。方法采用多重联合法分离人结肠癌干细胞,
应用流式细胞仪检测分离后细胞中CD44⁺EpCAM⁺癌干细胞含量;细胞周期检测、体外侵袭实验、体内成瘤实验对癌干细胞进行
生物学特性研究。结果分离后细胞中CD44⁺EpCAM⁺癌干细胞含量为89.57%;CD44⁺EpCAM⁺癌干细胞的增殖能力、侵袭能力、
致瘤能力均强于非癌干细胞,各组间差异有统计学意义（p <0.05）。结论CD44⁺EpCAM⁺癌干细胞具有低增殖性、高侵袭性、高
致瘤性,并可通过多重联合分离获得。     

哮喘伴抑郁患者CD4+ T淋巴细胞五羟色胺受体及转运体基因的表达

目的 探索哮喘和抑郁二者共病的可能机制。 方法 使用自制量表、哮喘控制测试表（ACT）、哮喘生存质量问卷（AQLQ）、汉密尔顿抑郁量表（HRSD）对受试者（分为哮喘组、哮喘伴抑郁组、正常对照组）的一般情况及哮喘严重程度、哮喘控制情况、哮喘生活质量、心理卫生情况进行评估。对哮喘及哮喘伴抑郁组受试者测定肺功能及血中嗜酸性粒细胞及IgE水平。所有受试者的血样提取分选CD4⁺ T细胞,行实时荧光定量聚合酶链式反应（real time-PCR）检测SLC6A4、HTR7、HTR1A、HTR2A基因的表达水平。 结果 哮喘组及哮喘伴抑郁组SLC6A4基因的相对表达量低于正常对照组( P=0.000);哮喘组HTR2A基因的表达量低于正常对照组( P=0.021),哮喘组HTR2A基因表达有低于哮喘伴抑郁组的趋势( P=0.077);哮喘伴抑郁组较哮喘组有更低的哮喘生活质量评分( P=0.004)。结论 支气管哮喘及抑郁可能存在基因水平的联系,SLC6A4基因的表达水平下降可能是二者共病的机制之一。     

Apoptosis of Leukemia Cells Induced by CD34^＋ Cells Transferred Exogenous Fas Ligand

Summary To assess the value of CD34⁺ cells transferred exogenous Fas ligand (FasL) in inducing apoptosis of human leukemic cells, the CD34⁺ cells transfected with FasL or without, pretreated with mitomycin C, was mixed with leukemic cell line U937 cells in presence or absence of daunorubicin (DNR) or cytosine arabinoside (Ara-C). After 18 h, apoptosis of cells was detected by FCM and TUNEL. Induced for 18 h by CD34⁺ cells transfected with FasL or without, the ratio of apoptosis of U937 cells was (5.0±1.3)%, (10.8±0.6)% (P<0.01), respectively. Induced by FasL⁺CD34⁺+DNR, FasL⁺CD34⁺+Ara-C, the ratio was (13.4±1.0) % (P<0.05), (17.9±1.3)% (P<0.01), respectively. The result demonstrated that CD34⁺ cells transfected with exogenous FasL could induce apoptosis of human leukemic cells and showed a cytotoxic synergistic effect when used in combination with chemotherapeutic drugs, suggesting that it was possible to develop a new method in treatment of leukemia. XIAO Juan, Female, born in 1974, Doctor in Charge This project was supported by the grant of National Nature Science Foundation of China (Serial No. 39770767).