基于LC-MS研究痹宁汤对痛风性肾病小鼠肾脏代谢产物的影响

目的：基于代谢组学方法观察痹宁汤对痛风性肾病小鼠肾脏代谢组学的影响，寻找潜在生物标志物及相关代谢通路，探讨痹宁汤改善痛风性肾病的作用机制。方法：基于LC-MS非靶向代谢组学技术，采用主成分(PCA)和正交偏最小二乘—判别分析法(OPLS-DA)分析空白组、模型组、痹宁汤组小鼠肾脏代谢物及其所参与的代谢通路，探讨可作为诊断痛风性肾病的潜在生物标志物及其代谢通路。结果：筛查得到了24个可作为诊断痛风性肾病的生物标志物，以及4条相关代谢通路。结论：痹宁汤可以通过对回调多种代谢产物的含量及调控甘油磷脂代谢、癌症中的胆碱代谢、逆行内源性大麻素信号、嘌呤代谢等代谢途径改善痛风性肾病。     

基于代谢组学技术的黄芩-白芍对2型糖尿病模型小鼠的作用机制

目的：在肾脏代谢组学技术基础上,探讨黄芩-白芍药对对2型糖尿病（T2DM）的防治机制,并通过寻找内源性潜在生物标志物,寻找其相关代谢通路。方法：非糖尿病健康同窝出生仔畜(db/m小鼠）为空白组,同时选择血糖值高于11.1 mol/L的糖尿病瘦素受体基因缺陷（db/db）小鼠进行分组,分为模型组、黄芩-白芍组（5.625 g/kg）、阳性药组（二甲双胍250 mg/kg）,给药体积为7.5 mL/kg,1次/d,连续8周,并采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法进行小鼠肾脏代谢组学分析,探寻潜在的生物标志物,联合人类代谢组学数据库（HMDB）和京都基因与基因组百科全书数据库（KEGG）找出相关代谢通路。结果：黄芩-白芍组可改善T2DM模型小鼠代谢轨迹的偏离,同时,寻找出与DN模型及给予黄芩汤干预后具有共同差异的生物标志物14个,涉及8条相关代谢通路,应用相关代谢通路分析方法发现,影响最为广泛的代谢通路可能是甘油磷脂代谢、嘌呤代谢和嘧啶代谢。结论：黄芩-白芍药对治疗T2DM的作用机制可能与其通过调节脂质代谢、能量代谢等多条代谢通路,改善内源性代谢物的水平,恢复机体正常代谢活动有关。     

真武汤对肾病综合征大鼠肾脏水通道蛋白2的影响

[目的]探讨真武汤对阿霉素肾病大鼠水钠潴留的影响及其可能的作用机制。[方法]40只大鼠随机分成正常对照组(NC组),阿霉素肾病组(NS组),阿霉素肾病+真武汤干预组(A组)和阿霉素肾病+福辛普利干预组(F组),每组10只,分别在第1、2、3、4周末时检测各组大鼠24 h尿蛋白,同时在第4周末检测了大鼠血浆精氨酸血管加压素(AVP)含量和肾脏水通道蛋白2(AQP2)蛋白表达。[结果]1)阿霉素大鼠在1周末尿蛋白明显升高,真武汤能明显减少大鼠尿蛋白。2)真武汤能下调阿霉素肾病大鼠肾脏AQP2蛋白的表达。3)真武汤能下调阿霉素肾病大鼠血浆AVP含量。[结论]真武汤能改善阿霉素肾病大鼠水钠潴留状态,其机制可能与其调节肾脏AQP2和血浆AVP含量有关。     

雷公藤配伍甘草减毒大鼠体内尿液中的小分子代谢物以及相应生物代谢通路

目的:分析雷公藤配伍甘草减毒大鼠体内尿液中的小分子代谢物以及相应生物代谢通路。方法:选取30只SD大鼠正常饲养5 d,随机分为3组,即空白对照组、雷公藤组、雷公藤配伍甘草组,每组10只。应用HPLC-MS/MS-IT-TOF检测各组大鼠的尿液样本,并且按照偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)多元统计学方法以筛选并鉴定潜在的生物标志物;在此基础上推测其可能影响到的生物代谢通路。结果:大鼠尿液代谢组学分析结果显示,雷公藤配伍甘草组、雷公藤组和空百对照组分别聚集在不同的象限区域内;共鉴定出14个潜在的生物标志物,并且推测出嘌呤代谢和硒氨基酸代谢最具显著影响。结论:雷公藤配伍甘草减毒的机制复杂,其中可能通过调控嘌呤代谢和硒氨基酸代谢通路而实现。     

肾苏Ⅱ对局灶节段性肾小球硬化的保护作用

目的:以局灶节段性肾小球硬化为研究对象,观察辛通畅络、益气和血中药复方肾苏Ⅱ对肾脏功能学指标的影响,探讨中医药防治疑难疾病的有效途径。方法:采用阿霉素注射法诱发大鼠局灶节段性肾小球硬化型阿霉素肾病动物模型。将实验动物随机分为对照组、模型组、西药组和中药组。检测尿微量蛋白定量;血清总蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白,观察指标变化。结果:肾苏Ⅱ可减少FSGS大鼠尿蛋白排泄量,改善TP、ALB减低,抑制BUN、Scr升高,调节脂质代谢。其中,在减少蛋白尿排泄方面,肾苏Ⅱ优于贝那普利。结论:肾苏Ⅱ对阿霉素注射法诱发大鼠局灶节段性肾小球硬化型阿霉素肾病模型具有保护作用,通过改善肾脏功能学指标,达到阻抑或减缓局灶节段性肾小球硬化进展的效果。     

基于UPLC-Q-TOF-MS分析雷公藤配伍甘草治疗肾病综合征大鼠的尿液代谢组学

目的:考察雷公藤配伍甘草对肾病综合征大鼠尿液中内源性代谢产物的影响,通过尿液代谢组学技术探讨该药对的作用机制。方法:大鼠随机分为4组,分别为空白组、模型组、雷公藤单独给药组(TPW组)和雷公藤配伍甘草给药组(TPW-GLY组)。采用UPLC-Q-TOF-MS,结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),对尿液样品的代谢物图谱进行模式识别及生物标记物的筛选与鉴定。结果:空白组,模型组,TPW组及TPW-GLY组的代谢轮廓有明显差异,筛选并鉴定出空白组与模型组间具有显著性差异的生物标记物29个,其中受TPW-GLY组回调的生物标记物14个,受TPW组回调的生物标记物11个;TPW-GLY组和TPW组显著差异物7个,分别为N-乙酰谷氨酸,二羟基粪甾烷酸,烟尿酸,12-酮脱氧胆酸,甘油三酯(16∶0/16∶0/20∶4),泛醌Q2和1,3,7-三甲基尿酸。结论:雷公藤与甘草配伍给药后,可能通过改善肾病综合征大鼠体内的氨基酸代谢、胆汁酸代谢、脂肪及脂肪酸代谢、能量代谢及嘌呤代谢等过程,改善了疾病状态,进而起到减毒增效的作用。     

基于代谢组学的痹祺胶囊治疗类风湿性关节炎作用机制研究

目的 利用代谢组学技术探究痹祺胶囊治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法 建立II型胶原蛋白诱导的类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）大鼠模型,并进行痹祺胶囊给药干预,取空白组、模型组、给药组大鼠血清,采用UPLCQ-TOF-MS技术对血清进行代谢组学分析,筛选潜在生物标志物,结合人类代谢组学数据库（human metabolomics database,HMDB）和京都基因与基因组百科全书数据库（Kyoto encyclopedia database of genes and genomes,KEGG）富集相关代谢通路并分析痹祺胶囊对生物标记物的干预作用,进而解析其作用机制。结果 代谢组学分析共筛选到18个潜在生物标志物,涉及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成及苯丙氨酸代谢、醚脂代谢、组氨酸代谢、三羧酸循环、精氨酸生物合成等11条代谢通路;痹祺胶囊可改善模型大鼠代谢轨迹的偏离。结论 痹祺胶囊主要通过调节氨基酸代谢、花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢及能量代谢等多条代谢通路,改善内源性代谢物的水平,在机体供能、抗炎及免疫调节过程中发挥作用。     

青蒿鳖甲汤对肝癌模型小鼠代谢的影响＊

目的 采用代谢组学的方法研究青蒿鳖甲汤对肝细胞癌模型小鼠血浆代谢物的影响，由筛选出的差异代谢物来探究其相关作用机制。方法 注射鼠源肝癌细胞株H22细胞对小鼠进行造模，随机分为正常对照组、模型组和青蒿鳖甲汤组，运用UHPLC-Q-Exactive液质联用技术检测各组小鼠血浆中的代谢物变化并进行多元统计分析研究，筛选出差异性代谢物及对应的相关代谢通路。结果 多元分析结果显示，3组的代谢物存在显著差异，寻找出肝癌模型组及给予青蒿鳖甲汤干预后模型小鼠的差异代谢物15个，涉及31条相关的代谢通路，经通路富集分析发现，重要性得分在前三的代谢通路分别是胆汁分泌、鞘脂代谢、类固醇激素生物合成。结论 青蒿鳖甲汤能有效改善部分紊乱的代谢物水平，为进一步对青蒿鳖甲汤改善肝癌及后期发热的作用机制研究提供理论依据。     

四君子汤干预小鼠肾组织增龄性改变的代谢组学研究

目的:基于代谢组学方法研究四君子汤干预12月龄雄性小鼠肾组织增龄性变化的作用机制。方法:选取自然增龄小鼠,对小鼠肾组织匀浆提取液进行检测,探讨12月龄雄性小鼠肾脏组织增龄性变化的代谢标志物及对应的代谢通路以及四君子汤的干预作用。结果:鉴别出四君子汤对5个代谢标志物(4,5-二氢乳清酸、花生四烯酸、泛酸、焦谷氨酸、二十二碳六烯酸)有明显的回调作用,并对相应5条代谢通路(嘧啶代谢、花生四烯酸代谢、不饱和脂肪酸生物合成、泛酸和辅酶A的生物合成、谷胱甘肽代谢)产生影响。结论:四君子汤可以通过介入脂类代谢、氨基酸代谢、核苷酸代谢等多条代谢途径干预12月龄雄性小鼠增龄性改变。     

基于代谢组学的代谢综合征痰湿证生物标志物研究

目的寻找代谢综合征痰湿证潜在生物标志物及相关的代谢通路,探讨其内在的生物物质基础。方法运用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪(UPLC/Q-TOF-MS)联用技术检测模型组和空白组生物样本血清的代谢轨迹,采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘方判别分析(PLS-DA)寻找各组代谢物差异,筛选潜在内源性标志物。结果发现与疾病相关的代谢物变化涉及氨基酸代谢17条,脂质代谢11条,磷脂代谢7条,碳水化合物代谢6条,氧化应激损伤3条,能量代谢3条,胆汁酸代谢2条。结论代谢综合征痰湿证生物模型存在氨基酸代谢、脂质代谢、胆汁酸代谢、氧化应激、磷脂代谢、碳水化合物代谢以及能量代谢紊乱,代谢组学研究方法有助于揭示代谢综合征中医证候的微观物质基础。     

基于非靶向代谢组学的APP/PS1小鼠与认知功能障碍相关的生物标志物发现及黄连解毒汤干预机制研究北大核心CSCD

该研究旨在通过对APP/PS1转基因小鼠内源性物质进行非靶向代谢组学研究,发现APP/PS1小鼠模型与认知功能障碍相关的生物标志物,寻找黄连解毒汤(Huanglian Jiedu Decoction)治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)的作用靶点并阐明其作用机制。通过超高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Orbitrap MS)技术分析小鼠脑组织和血清代谢质谱,运用偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对比分析正常组、模型组、黄连解毒汤高剂量组、黄连解毒汤低剂量组、小檗碱组的代谢数据,筛选潜在生物标志物,并借助KEGG数据库分析构建相关代谢通路。共筛选鉴定出脑内13种、血清35种,共计45种潜在内源性代谢物,其中白三烯B4、酪氨酸和腺苷有望成为与认知功能关联的差异性代谢物。黄连解毒汤可以回调22种差异性代谢物,涉及的主要代谢通路有氨酰-tRNA生物合成,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,泛酸和辅酶A生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,花生四烯酸代谢。这些通路主要提示了黄连解毒汤干预AD的主要作用机制为抑制中枢和外周炎症,调节能量代谢、脂肪酸代谢和氨基酸代谢。黄连解毒汤对改善认知功能障碍有一定疗效,可通过回调内源性差异代谢物来调控相关通路,这将有助于进一步发现AD的生物标志物和阐明黄连解毒汤治疗AD的干预机制。     

补中益气汤改善脾虚型胃肠动力障碍大鼠代谢组学研究

目的研究采用代谢组学方法,探索补中益气汤改善脾虚型大鼠胃肠动力学障碍的潜在作用机制。方法采用LC-LTQ-OBITRAP高分辨质谱方法检测正常、模型及补中益气汤组血清代谢物变化,分析补中益气汤改善胃肠动力学障碍的血清生物标记物,解析补中益气汤作用的内源性代谢通路。结果研究发现补中益气汤对脾虚胃肠动力障碍大鼠体内的代谢轮廓有显著影响,与正常组相比,脾虚胃肠动力障碍大鼠有24种差异代谢物发生显著变化,而补中益气汤给药后可逆转其中14种差异代谢物,包括色氨酸、谷氨酰胺、磷脂胆碱等,通路分析研究表明,这些差异性代谢物主要与谷氨酰胺代谢、初级胆汁酸生物合成,不饱和脂肪酸生物合成、牛磺酸和亚牛磺酸代谢、丙氨酸和天冬、谷氨酸代谢有关。结论补中益气汤改善脾虚型大鼠胃肠动力学障碍可能与其影响代谢物轮廓,调控谷氨酰胺代谢、初级胆汁酸生物合成、不饱和脂肪酸生物合成、氨基酸代谢等有关。     

黄芪甲苷调控氨基酸代谢抗糖尿病肾损害分子网络机制研究

目的:应用网络药理技术从氨基酸代谢调控角度分析黄芪甲苷抗糖尿病肾损害网络分子机制.方法:基于前期代谢组学筛选出的与糖尿病肾病进展相关的氨基酸.使用KEGG、PubChem、TCMSP数据库,检索并提取氨基酸及黄芪甲苷的有效靶标基因,采用KEGG pathway数据库进行通路分析;应用Cytoscape绘制黄芪甲苷、氨基...     

基于血清代谢组学探究玄参对脾虚水湿不化大鼠的利水作用机制

目的：本实验采用血清代谢组学的方法对玄参在脾虚水湿不化模型大鼠的利水作用机制进行研究,并通过寻找具有生物学意义的内源性潜在生物标志物,以此探寻其相关代谢通路。方法：研究采用高脂饲料饮食诱导的方式对大鼠进行造模并对血清蛋白、胃泌素、胃排空率及水负荷等利水相关药效学指标进行检测,应用UPLC-Q-TOF-MS技术对空白组、模型组与玄参组大鼠血清进行分析,探求其潜在的关键性生物标志物及对应的相关性代谢通路。结果：玄参可改善脾虚水湿不化大鼠相关的药效学指标,同时寻找出与脾虚水湿不化模型及给予玄参干预后具有共同差异的生物标志物29个,涉及13条相关的代谢通路,应用相关代谢通路分析发现,影响最为广泛的4条代谢通路可能是原发性胆汁酸生物合成、鞘脂类代谢、叶酸合成及甘油磷脂代谢。结论：故推测玄参对脾虚水湿不化状态下血清代谢产物具有调节作用,从而为进一步对玄参利水功效的临床安全应用提供理论依据。     

柴芩宁神颗粒改善失眠大鼠睡眠作用的海马代谢组学研究北大核心CSCD

该研究采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Orbitrap-MS)代谢组学技术分析柴芩宁神颗粒对肝郁失眠大鼠内源性代谢物的影响,探讨柴芩宁神颗粒改善睡眠的作用机制。采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)加复合刺激复制肝郁失眠大鼠模型,观察柴芩宁神颗粒对肝郁失眠大鼠宏观体征、血液流变学和海马中神经递质的影响。给药结束取大鼠海马进行LC-MS代谢组学检测,以主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析方法为手段,对各组大鼠海马代谢物进行分析,筛选出潜在生物标志物,并借助MetPA分析构建相关的代谢通路和代谢网络。研究结果表明,在给予药物治疗后,能显著改善大鼠的精神状态和肝郁血瘀现象,可以显著升高海马中除柴芩宁神颗粒低剂量组外其余各组中5-HT、GABA的含量和显著降低Glu的含量,其中艾司唑仑组和柴芩宁神颗粒高剂量组的效果优于其他给药组;代谢组学结果显示,通过代谢分析共筛选鉴定出27种与失眠相关的潜在生物标志物,并通过MetPA分析得到艾司唑仑干预失眠的代谢通路4条,柴芩宁神颗粒高剂量干预失眠的代谢通路3条,涉及嘌呤代谢、甘油磷脂代谢、组氨酸代谢、咖啡因代谢。柴芩宁神颗粒对改善失眠有一定的疗效,其可通过回调内源性差异代谢物来调控相关代谢通路,为进一步阐明柴芩宁神颗粒改善睡眠的作用机制提供依据。     

干寒环境对大鼠尿液与血浆代谢成分的影响

目的:通过核磁共振氢谱(~1H-NMR)分析方法探讨干寒环境及饮食对大鼠尿液和血浆代谢物的影响,寻找可能的生物标记物及其相关代谢途径。方法:利用干寒环境及饮食作为应激源干预大鼠3周,采集其尿液和血浆样本,检测~1H-NMR,结合多变量数据分析方法筛选与鉴定相关代谢标志物,并分析代谢通路。结果:干寒属性环境及饮食导致尿液23种代谢物,血浆中15种代谢物发生了显著变化;这些代谢物与多种代谢通路的变化密切相关,包括三羧酸循环,丙酮酸代谢,糖酵解或糖异生,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,组氨酸代谢,乙醛酸和二羧酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路。结论:干寒环境及饮食条件可导致体内多种代谢通路的变化,基于~1H-NMR的代谢组学研究方法具有解释机体病理生理动态性,整体性变化的优势,对于探索非确定性疾病因素发病机制有着重要的意义。     

基于LC/IT-TOF-MS技术的雷公藤甲素干预溃疡性结肠炎的代谢组学研究

目的通过代谢组学方法分析雷公藤甲素(TP)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠内源性代谢物的影响,探讨TP干预UC的代谢途径和可能的机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、TP组,采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC小鼠模型。采用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)技术检测小鼠血清样本,并结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对各组小鼠血清代谢差异进行表征,筛选出血清中潜在的差异代谢物及可能的代谢通路。结果与对照组比较,模型组小鼠血清中发现并鉴定出胆酸、牛黄胆酸、鹅去氧胆酸、瓜氨酸、胍基丁酸、氨基乙酸、顺乌头酸等15个差异代谢物。与模型组比较,给予TP干预后,上述潜在差异代谢物有向正常水平回调的趋势。结论代谢组学分析揭示TP对UC小鼠具有一定的干预作用,其机制可能与调节初级胆汁酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢等有关。     

糖肾方对糖尿病肾病患者嘌呤及嘧啶代谢的影响

目的:探讨糖肾方(黄芪、生地、三七、鬼箭羽、大黄、山茱萸)对糖尿病肾病患者嘌呤及嘧啶代谢的影响。方法:对临床上确诊的糖尿病肾病患者,使用糖肾方进行治疗,在治疗0、3和6个月分别取血浆样本,使用HPLC-UV-MS/MS对血浆中肌酐、肌氨酸和19种嘌呤嘧啶循环相关代谢物进行定量分析,观察治疗过程中这些代谢物的变化。结果:在治疗过程中,肌酐、尿酸、黄嘌呤、肌苷、胞嘧啶和胸腺嘧啶核苷的含量均有显著性降低。结论:糖肾方对糖尿病肾病患者的嘌呤和嘧啶代谢有重要影响,其治疗糖尿病肾病的机理可能来自它对于体内氧化应激以及肾脏血流动力学的调控。     

基于UPLC-Q-TOF-MS的五味子保肝作用代谢组学研究

该文旨在考察五味子对CCl4致小鼠肝损伤的保护作用,探讨其对血清中代谢产物的影响,寻找五味子保肝功效的潜在生物标志物,以期初步探索五味子保肝作用的科学内涵。采用CCl4建立小鼠肝损伤模型,观察小鼠肝组织病理切片,测定小鼠血清中ALT,AST等生化指标的含量,采用基于UPLC-Q-TOF-MS的代谢组学技术,并结合主成分分析(PCA)和正交校正的偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等方法筛选、鉴定肝损伤相关的生物标志物。结果表明空白组、模型组以及给药组的代谢物能够显著区分,发现并初步鉴定了50个差异化合物并富集了7条五味子保肝功效可能相关的代谢通路。该实验进一步验证了五味子的保肝功效,并初步探讨了五味子的保肝功效可能与氨基酸代谢,维生素代谢以及甘油磷脂代谢等相关代谢通路有关。     

基于代谢组学分析注射用丹参多酚酸治疗缺血性脑卒中作用机制

[目的] 利用代谢组学方法探究注射用丹参多酚酸治疗缺血性脑卒中恢复期的作用机制。[方法] 采用超高效液相色谱质谱联用仪（UHPLC-Q-Orbitrap MS）对39例符合相应纳入、排除标准的缺血性脑卒中恢复期患者的血液样本进行代谢组学检测,通过无监督的主成分分析（PCA）、有监督模式的正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）对患者用药治疗前后的血浆进行分析。[结果] 代谢组学共筛选出42个与治疗疾病相关的生物标记物,涉及22种代谢通路,其中磷脂生物合成、磷脂酰胆碱生物合成、卟啉代谢、组氨酸代谢、类固醇生成、嘧啶代谢为变化最显著的6条代谢通路。[结论] 通过代谢组学方法证实,注射用丹参多酚酸可能通过调节磷脂代谢、氨基酸代谢、核酸代谢及能量代谢,进而发挥治疗缺血性脑卒中恢复期的作用。表明代谢组学对指导中医临床及机制研究方面的可行性。