糖尿病肾病患者外周血单个核细胞TGF—β1基因表达的临床研究

为探讨外周血单个核细胞转化生长因子（TGF－β1）在糖尿病肾病（DN）发生，发展中的作用，采用逆转录聚从事 酶链反应（RT－PCR）技术半定量方法，对糖尿病（DM）及DN肾功能衰竭（DRF）患者外周血单个核细胞（PBMC）TGF－β1mRNA的表达水平进行测定，并与健康人（对照组）比较，结果显示：DRF组TGF－β1的表达最强，其次为DN，DM组，对照组表达最弱，三者间两两比较P均＜0．01，认为TGF－β1参与了DN病理变化的全过程，测定PBMC中TGF－β1mRNA的表达，是判断DN患者DRF进展程度的较好方法。     

糖尿病肾病患者外周血单个核细胞中TGF-β1mRNA表达及意义

糖尿病肾病 ( DN)是糖尿病 ( DM)的全身微血管合并症之一 ,肾脏典型的病理改变为渐进性肾小球硬化 ,主要为肾小球基底膜 ( GBM)增厚和系膜基质增生。TGF- β1具有多种生物学作用 ,在外周血中对多种细胞的增殖、趋化、粘附起作用 ,通过加重全身微血管动脉粥样硬化而加剧肾小球硬化的进程[1] 。我们检测了 62例 DN患者外周血单个核细胞( PBMC)中转化生长因子 ( TGF-β1) m RNA的表达及其与尿白蛋白排泄率 ( UAE)的关系 ,旨在探讨 TGF-β1在肾小球硬化早期进程中的作用。1　资料与方法1 .1　临床资料　对照组为 1 7例健康自愿献血…     

2型糖尿病肾病患者外周血单个核细胞TGF-β1 mRNA转录的定量研究

目的探讨2型糖尿病患者外周血单个核细胞(PBMC)中TGF-β1 mRNA的转录量及其临床意义.方法 RT-PCR和Dot-Blot法定量检测93例2型糖尿病患者和35例健康对照者PBMC中TGF-β1 mRNA的转录量,并分析其与24小时尿白蛋白排泄量(UAER)的相关性.结果 2型糖尿病患者PBMC中TGF-β1 mRNA量显著高于正常对照者(P＜0.01),伴临床糖尿病肾病者明显高于早期糖尿病肾病和无糖尿病肾病者(P＜0.01).2型糖尿病患者PBMC中TGF-β1 mRNA的量与UAER呈正相关(r=0.48,P＜0.05).结论 2型糖尿病患者PBMC中TGF-β1 mRNA表达量高于正常对照者.糖尿病患者PBMC中TGF-β1 mRNA表达量可以作为DN进展的标志之一.     

前列腺癌PC3细胞TGF-β1mRNA表达的变化

目的　观察人前列腺癌细胞株 (PC- 3) TGF-β1 m RNA表达变化特点。方法　采用 RT- PCR方法检测 TGF-β1 在 m RNA水平的表达。结果　体外培养的前列腺癌 PC- 3细胞 TGF- β1 在 m RNA水平表达量明显增强 (P<0 .0 0 1 )。结论　提示前列腺癌 PC- 3细胞 TGF- β1 在 m RNA水平表达增强可能在前列腺癌的病理过程中起促进作用     

趋化因子受体CCR5、CCR3在1型糖尿病患者中的表达

目的　研究Th1和Th2 细胞表面特征性的趋化因子受体CCR5、CCR3在 1型糖尿病发病机制中的作用。方法　对 15例新诊断的 1型糖尿病患者、10例 2型糖尿病患者以及 10例非糖尿病患者分离外周血单个核细胞 (PBMC)在体外培养 ,用流式细胞仪检测CD 4CCR5 及CD 4CCR3 淋巴细胞 ,并用酶联免疫吸附技术检测细胞培养上清中细胞因子IL 4、IFN γ的水平。结果　 1型糖尿病患者外周血中CD 4CCR5 淋巴细胞数显著高于 2型糖尿病患者和对照组 ,CD 4CCR3 显著低于其它两组 (均P <0 .0 5 )。 1型糖尿病患者和 2型糖尿病患者PBMC细胞上清液中的IFN γ水平高于对照组 (均P <0 .0 5 ) ,1型糖尿病患者IL 4水平低于其它两组 (P <0 .0 1)。结论　检测PBMC的CCR5、CCR3表达可以作为反映人类 1型糖尿病免疫活动的标志 ,从而为 1型DM的早期诊断和预防提供线索     

糖尿病和糖尿病肾病患者循环lncRNA表达谱的分析

目的分析健康对照组、糖尿病患者、糖尿病肾病患者循环lnc RNA及m RNA表达谱的差异,探讨糖尿病和糖尿病肾病的表观遗传学发病机制,为糖尿病肾病寻找新的治疗靶点提供依据。方法采集2015年1月至3月中国医科大学附属第一医院肾内科收治的肾活检病理明确为结节性糖尿病肾小球硬化症患者21例(DN组)、2型糖尿病患者9例(DM组)及19名正常健康人(N组)的血清。采用Arraystar Human lnc RNA/m RNA V3.0芯片进行lnc RNA和m RNA表达谱检测,使用Agilent Feature Extraction软件对获得的微阵列图像包含的讯息进行提取,采用Gene Spring GX软件包对获得lnc RNA及m RNA原始表达讯息进行标准化。结果与糖尿病组及正常对照组相比,糖尿病肾病组患者尿白蛋白/肌酐比值和血清肌酐显著升高,估计肾小球滤过率(estimated glomeruar filtration rate,e GFR)显著下降(P0.05)。与健康对照组相比,糖尿病组血清中有245个lnc RNA表达上调和680个lnc RNA表达下调。与糖尿病组相比,糖尿病肾病组血清中有45个lnc RNA表达上调和813个lnc RNA表达下调。自正常组到糖尿病组,再到糖尿病肾病组,lnc RNA-ARAP1-AS2表达逐渐上调(DM/N 2.82倍,DN/DM 2.47倍),lnc RNAARAP1-AS1表达逐渐下调(DM/N 2.24倍,DN/DM 4.79倍),其靶基因ARAP1(Arf GAP with Rho GAP domain,ankyrin repeat and PH domaim 1)m RNA的表达逐渐上调(DM/N 2.25倍,DN/DM 2.45倍)。结论表达下调的lnc RNA-ARAP1-AS1和表达上调的lnc RNA-ARAP1-AS2作用于靶基因m RNA-ARAP1,使m RNA-ARAP1在糖尿病和糖尿病肾病中表达上调,可能通过调控Rho激酶和EGF受体途径,参与了糖尿病和糖尿病肾病的发生,其有望成为糖尿病和糖尿病肾病新的生物标志物。     

G6PC基因在糖尿病患者中的表达及其与糖尿病肾病发生的相关性

目的探讨糖尿病(DM)患者外周血白细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PC)基因的表达变化及其与糖尿病肾病(DN)发生的相关性。方法选取30例DM患者作为实验组(其中10例DN患者),20例健康体检者为对照组,采用RT-PCR法检测DM患者外周血白细胞G6PC mRNA表达水平(以β-actin为内参),同时比较DN患者与肾功能正常DM患者之间G6PC mRNA表达差异。结果与对照组比较,DM组患者G6PC的mRNA表达明显降低(0.65±0.19 vs 1.54±0.32,P<0.05)。DN组G6PC mRNA表达量显著低于肾功能正常DM组患者(P<0.05)。结论 DM患者外周血白细胞G6PC基因表达下降,其可能在DN发生及进展中具有重要作用。     

系统性红斑狼疮患者程序性死亡配体-1表达的初步研究

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)程序性死亡配体-1(PD-L1)的表达水平,探讨其在系统性红斑狼疮发病过程中的作用。方法密度梯度离心法分离系统性红斑狼疮患者和正常人PBMC,采用半定量RT-PCR检测PBMC的PD-L1mRNA表达。结果系统性红斑狼疮患者活动期组和稳定期组的PD-L1mRNA表达与对照组比较明显增高,差异有显著性(P均<0.05);但PD-L1mRNA表达在系统性红斑狼疮活动期组与稳定期组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞PD-L1mRNA表达水平增加,程序性死亡配体-1可能在系统性红斑狼疮的发病机制中有一定的作用。     

血清转化生长因子β1检测对血吸虫病肝纤维化的诊断和疗效评估的价值

转化生长因子β1(TGFβ1)是肝纤维化形成过程中重要的细胞因子之一。TGFβ1主要存在于炎症和纤维化部位，在不同肝病患者肝脏中的表达均显著增高^[1]。由于肝活检具有一定的创伤性，不利于动态观察和疗效考核，陈峰等^[2]曾应用RT-PCR和dot blot法检测外周血单个核细胞(PBMC)中TGF β1 mRNA，并认为PBMC中TGF β1 mRNA水平与肝纤维化的     

老年糖尿病肾病患者牙周现况及外周血、龈沟液炎性因子的表达

目的调查老年糖尿病肾病(DN)患者的牙周现况及外周血、龈沟液炎性因子的表达。方法连续选择近期就诊的老年DN患者35例及老年2型糖尿病(T2DM)患者31例,对照组选择同期来院参加体检健康老年人30例。三组入选对象均接受了口腔牙周检查及外周血、龈沟液炎性细胞因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤细胞坏死因子(TNF)-α检测。结果老年DN组牙周炎患病率为94.29%,明显高于老年T2DM组(58.06%)及对照组(30.0%)(χ2=10.14,P0.01)。老年DN组的牙周探诊深度(PD)、临床附着丧失(CAL)、牙齿松动度(M)、龈沟出血指数(SBI)、牙齿填充指数(DMFT)及简化口腔卫生指数(OHI-S)均明显差于老年T2DM组及对照组(P均0.05,P0.01);老年DN组的外周血及龈沟液IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平均显著高于老年T2DM组及对照组(P0.05,P0.01)。结论老年DN患者存在着外周血、龈沟液炎性因子异常表达,口腔卫生状况差及牙周病患病率高。     

TGF-β1与糖尿病肾病

糖尿病肾病 (DN)是直接危害糖尿病患者生命的慢性并发症之一。迄今为止其发病机制尚未完全明了。目前 ,越来越多的研究表明 :转化生长因子 -β1 (TGF-β1 )可能在 DN的发病机制中占有重要地位 ,因此 ,对 TGF- β1 与 DN关系的研究有可能为诊治 DN提供新思路。一、TGF- β1 及其受体的生物学特征TGF- β在哺乳动物体内主要存在着 TGF- β1 、β2 、β3三种同分异构体。TGF- β1 的基因为 10 0 kb。内源性蛋白酶如呋林蛋白酶(furin)调控产生的 12 .5 KDa的 TGF- β单体以二硫键形成有功能的同源二聚体。各异构体的生物学特性基本…     

脊柱关节病患者外周血和关节液单个核细胞基因谱的研究

目的：了解脊柱关节病（SpA）患者外周血和关节液单个核细胞（SFMC）基因的变化及其特点，探讨与SpA关节炎相关的基因及可能的意义。方法：采用含1176个基因的cDNA微阵列，检测6名健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC），5例SpA和5例类风湿关节炎（RA）病人PBMC和关节液SFMC的基因表达，挑选SpA SFMC表达异常的9个致炎、抗炎、信号传导基因或受体和粘附分子，扩大病例数以半定量PCR再验证微阵列检测结果。结果：cDNA微阵列和PCR结果显示，1176cDNA微阵列基因图谱和阳性基因数量在RA和SpA病人SFMC组无明显区别，比较SpA或RA病人的SFMC和PBMC，发现SpA和RA的SFMC中的阳性基因均少于各自的PBMC。在RA的PBMC有53个基因明显高于RA SFM（P＜0．05），但在SpA PBMC仅有5个基因明显高于SpA SFMC(P＜0．05）。SpA病人SFMC的IL－1β、TNF-α、TGF-β、TGF-β2、c-jun、JAK-显著高于健康人PBMC（P＜0．05）。结论：SpA患者的SFMC基因表达谱异常，但与RA的SFM未见明显特征型区别，IL－1β、TNF-α、TGF-β、TGF-β2、c-jun、JAK-3与SpA关节炎的发生和发展相关。     

慢性心力衰竭患者外周血单核细胞TNF-α mRNA转录和蛋白质表达的改变及开博通的干预作用

目的　通过测定慢性充血性心力衰竭 (CHF)患者外周血单核细胞肿瘤坏死因子 - α(TNF- α) m RNA转录和蛋白质表达的改变 ,及血管紧张素转换酶抑制剂开博通对其的影响 ,探讨 TNF- α在 CHF发病中的作用、可能来源及与肾素 -血管紧张素系统的关系。方法　收集 2 0例 CHF患者及 10例健康人外周血单核细胞 (PBMC) ,应用 RPMI16 4 0培养基进行培养 ,并加入开博通 ,使开博通终浓度分别为 0 m mol/ L ,10 - 8mmol/ L。 2 4 h后 ,取培养 PBMC,应用 RT- PCR和Western blot技术测定 CHF患者和正常对照组外周血单核细胞 TNF-α m RNA转录和蛋白质表达的变化。结果　与正常对照组相比 ,CHF患者外周血单核细胞 TNF-α m RNA转录水平、TNF-α蛋白的相对含量高于对照组。开博通对CHF组 PBMC TNF- α m RNA转录和蛋白质表达有抑制作用。结论　 (1) CHF患者 TNF- α m RNA及蛋白质表达增加 ,提示 TNF- α可能参与了心力衰竭的发生发展过程。 PBMC可能是心力衰竭时 TNF- α表达增加的一个来源。 (2 )TNF- α m RNA及蛋白质表达增加可能与心力衰竭时肾素 -血管紧张素系统被激活有关     

实验性血吸虫病肝纤维化中TGF-β1 Smad3 Smad7的表达变化及意义

目的　研究 TGF-β1、Sm ad3、Smad7在血吸虫病肝纤维化家兔肝脏中的表达变化规律 ,为逆转血吸虫病肝纤维化寻找新的途径。方法　日本血吸虫尾蚴腹贴法制备家兔肝纤维化模型 (n=4 0 ) ,按诱导时间将动物随机分为 4、8、12、16周及正常对照共 5组 ,采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)检测肝组织中转化生长因子 TGF-β1m RNA表达水平 ,免疫组织化学检测肝组织中 、 型胶原的表达 ,且同时分别以 RT- PCR、Western blot检测原代分离肝星状细胞 (HSC)的 Sm ad3、Sm ad7m RNA和蛋白表达。结果　肝纤维化形成过程中 TGF- β1m RNA表达进行性增强 ,伴有肝组织 、 型胶原含量的明显增高 ,且分别与 、 型胶原呈显著正相关 (r1 =0 .5 36 ,P<0 .0 1;r2 =0 .5 4 4 ,P<0 .0 1) ; 、 型胶原表达在肝窦壁、中央静脉壁、Disse腔、虫卵肉芽肿内及其周围 ,呈弥漫状分布 ,伴有门管区胶原纤维隔形成和窦壁完整的基膜形成 ;与正常对照组相比 ,各期肝纤维化家兔 HSC中 Smad3m RNA表达增加 ,与 TGF- β1m RNA表达趋势基本一致。而 Sm ad7m RNA较正常对照组一过性升高 (P<0 .0 5 ) ,第 8～ 16周表达水平则持续下降 (P<0 .0 1)。 Smad蛋白表达与其m RNA改变基本一致。结论　 TGF- β1/ Smad信号通路参与了血吸虫病肝纤维化进程     

苦参碱对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的 探讨苦参碱对糖尿病(DM)大鼠肾脏的保护作用及机制.方法 采用单侧肾切除、腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病肾病(DN)大鼠模型,并设立正常对照(NC)组;DN对照(DN)组,苦参碱治疗组(MT)(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),腹腔给药8 w后处死所有大鼠,检测苦参碱对DM大鼠肾功能的影响,病理切片HE染色,观察肾脏病理改变,免疫组化检测肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平.结果 与NC组大鼠比较,DN组大鼠尿蛋白排泄量增多,肾小球体积增加,血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)升高,肾组织TGF-β1表达上调(P<0.01).苦参碱明显减少DN大鼠尿蛋白排泄量,降低血清BUN、Cr水平(P<0.05,P<0.01),肾小球体积明显改善,肾组织TGF-β1表达明显下调(P<0.05,P<0.01).结论 苦参碱显著改善抑制肾脏TGF-β1表达,改善肾小球肥大,减轻蛋白尿,对DM大鼠肾损害具有保护作用.     

血清TGF-β1和Ⅳ型胶原与糖尿病肾损害

目的通过观察比较糖尿病肾病（DN组）患者血清转化生长因子β1（TGF-β1-）和Ⅳ型胶原（ST4C）水平变化及与单纯糖尿病（DM组）和正常人（NG组）血清水平差异，探讨TGF-β1和ST4C水平变化与DN损害的关系。方法TGF-β1和ST4C：ELISA法；尿白蛋白排泄率（UAER）：散射比浊法。结果DN组TGF-β1和ST4C水平明显高于DM组和NG组，差异有非常显著性（P〈0．01）；DN组TGF-β1、ST4C与UAER存在较高的正相关性（r=0．4882、0．7414，P均〈0、01）；DN组TGF-β1与ST4C有高度正相关性（r=0．6560，P〈0．01）；而DM组TGF-β1与ST4C相关性无显著意义（r=0．3419，P〉0．01）。结论血清TGF-β1、ST4C与DN肾损害高度相关，TGF-β1是DN的重要发病机制。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞环氧合酶同工酶mRNA的表达

目的　探讨原生型环氧合酶 (COX 1)和诱生型环氧合酶 (COX 2 )在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)中的表达水平及其在SLE发病机制中的作用及其意义。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 34例活动期SLE患者和 30名正常人PBMC中COX 1和COX 2mRNA的表达水平。结果　活动期SLE患者COX 1和COX 2的阳性表达率与正常对照组相比差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;活动期SLE患者PBMC中COX 2mRNA的平均表达水平 (0 6 6±0 2 7)明显高于正常对照组 (0 43± 0 16 ) ,差异有非常显著性 (P <0 0 1) ;活动期SLE组COX 1的平均表达水平与正常对照组处于同一表达水平 ,差异性无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　活动期SLE患者外周血单个核细胞中COX 2mRNA的表达增加 ,通过诱导前列腺素 (PGs)的产生参与SLE的发病过程。为特异性COX 2抑制剂应用于SLE的治疗提供了理论依据。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体4的表达及其与TGF-β的关系

目的了解慢性乙型肝炎、肝硬化患者外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样受体4（TLR4）的表达变化及其意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法分别检测28例慢性乙型肝炎、25例肝硬化及10例健康对照者PBMC中TLR4mRNA的表达;ELISA法检测上述患者血清转化生长因子p（TGF-β）;放射免疫法检测血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原蛋白（PCIH）及Ⅳ型胶原（CIV）的水平。结果各实验组TLR4mRNA的表达均明显高于健康对照组（P〈0．01）,且与患者血清TGF-β表达水平呈显著正相关（r值=0．875,P〈0．01）,与HA、LN、PCIn、CIV表达水平之间呈正相关（r值分别为0．647、0．525、0．556、0．682）。结论慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞TLR4的表达增高可能与肝纤维化的形成密切相关。     

囊型包虫病患者外周血单核细胞诱导的树突状细胞形态及表型特点

目的研究囊型包虫病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)的形态及其细胞表型特点。方法囊型包虫病患者组(cystic echinococcosis,CE)15例,健康志愿者对照组(healthy donor,HD)15例,采外周血(肝素抗凝)分离单个核细胞后贴壁培养,施加重组细胞因子培养6d,诱导成DC,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态,流式细胞术检测CD86、HLA-DR、CD1a、CD80的表达情况。结果与HD组比较,CE组PBMC诱导的DC表面的树突状突起较少,且细胞表面的CD86、HLA-DR、CD1a、CD80表达降低(P0.05)。结论CE组患者PBMC诱导的DC形态不典型,表面分子的表达降低,细胞活力降低,对T细胞的刺激能力减弱。     

沉默转化生长因子β1表达与抑制肾小管上皮细胞(HK-2)Notch信号通路的相关性研究

目的探讨沉默转化生长因子β1(TGF-β1)表达与抑制肾小管上皮(HK-2)细胞Notch信号通路的相关性。方法检测TGF-β1在DN的表达;TGF-β1小干扰RNA(TGF-β1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染HK-2,空脂质体转染细胞为对照,检测各组TGF-β1;将HK-2分为低糖、高糖、siRNA-NC+高糖和TGF-β1-siRNA组+高糖组,检测细胞存活,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达。结果 TGF-β1在DN表达高于正常肾组织(P0.05);TGF-β1-siRNA组TGF-β1表达低于对照组(P0.05);高糖组细胞存活低于低糖组,凋亡率、Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1高于低糖组(P0.05),siRNA-NC+高糖组细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与高糖组相当(P0.05);TGF-β1-siRNA+高糖组细胞存活高于高糖组,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1低于高糖组(P0.05)。加入GSI细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与沉默TGF-β1一致。结论 TGF-β1在DN高表达,高糖能抑制HK-2的存活,促进凋亡,沉默TGF-β1能减弱这种效果,可能与Notch信号通路调控有关。