建立同种异体骨库与骨制备的临床应用

为探讨同种异体骨库的建立及骨的制备的有关问题，提高临床应用效果，作者总结分析了本院异体骨科的有关问题。西京于１９９１年建立了大型专业性骨库。本骨库制定了供骨者标准及取骨、移植物处理与保存全过程中的质量监测标准，以保证临床应用的安全性。在无菌或清洁条件下取骨与关节，依据临床需要对移植物分割切取，去除移植物的骨髓并适当脱钙处理，对有细菌污染的移植物进行环氧乙烷或辐照消毒，采用深低温冷冻和冷冻干燥方法储存。１９９２年１０月至１９９４年２月，骨库共向临床供应同种异体骨移植物２１０份，其中本院用于临床各类植骨８４例，近期效果满意。     

带血管同种异体骨关节移植研究进展

带血管的同种异体骨关节移植可以引起类似于器官移植的免疫排斥反应,组织配型、冷冻保存及免疫抑制剂的应用对移植骨关节的免疫排斥反应及愈合可产生一定的影响。初步的解剖学研究和临床应用尝试为带血管同种异体骨关节移植的进一步研究和实践提供基础和借鉴。     

异体半月板库的建立及临床初步应用

[目的]建立同种异体半月板库，为半月板移植的临床应用研究打下基础。[方法]作者利用组织库供体来源的优势，结合低温冷冻技术保存半月板，初步建立了异体半月板库。临床进行半月板移植时，根据患者的需要和半月板库的记录资料合理选择，并注名有关操作规程。[结果]从2005-2006年底，作者已经建立了大约有300个不同大小半月板的半月板库，为临床提供了14个同种异体半月板。[结论]半月板库的建立为临床半月板移植的开展打下了基础；异体半月板移植手术的近期疗效是令人满意的，远期疗效尚需更进一步观察和更多病例的积累。     

同种异体肌腱移植与肌腱库的建立

目的：为临床应用异体肌腱移植提供实验依据以及介绍肌腱库的建立。方法：用经深低温冷冻、冷冻干燥、不加处理的同种异体肌腱和自体肌健移植，修复ＳＤ大鼠跟腱缺损。术后３、８周行免疫原性和生物力学测定、形态学组织学观察。结果：经深低温冷冻与冷冻干燥处理的异体肌腱，有明显降低组织抗原性的作用，并保留了腱组织的生物学特性。结论：深低温冷冻保存的异体肌腱可应用于临床，近期疗效较为满意［１］。     

肢体大块骨缺损的大段同种异体骨关节移植

作者为３５例四肢恶性肿瘤切除后的骨缺损患者进行了大段同种异体骨移植重建，其中男性２３例，女性１２例。股骨下端和胫骨上端占６８．５％。骨肉瘤占４０％。所有病例均经术前、术后化疗。植骨材料来源于该院综合骨库。作者强调充分的术前准备，仔细选择匹配移植骨段，手术中注意设计骨膜袖套和软组织袖套以利于骨愈合。本组病例随访５个月～１０年，平均３年，其中无病存活者２５例，死亡６例，带病存活４例。部分患者于术后２年、４年进行移植骨段活检及９９ｍＴｅＳＰＥＣＴ骨扫描，显示骨段大部完成爬行替代。本组１０例出现１８个合并症，占２８．６％。骨接触端的紧密结合，坚强可靠的内固定或带锁髓内钉固定是有效减少骨不愈合的方法。作者认为，复合同种大段骨移植将成为今后发展的方向。     

大块冷冻同种异体骨移植后免疫学改变

目的 探讨大块冷冻同种异体骨移植后免疫功能改变。方法 本组 21例,男 9例,女 12例;年龄 19～ 59岁,平均 30.5岁。 15例分别于术前 4 d及术后 14、 28 d检测其空腹外周血各项免疫学指标,其中 7例及另外 3例分别于术后 3、 6、 9、 12、 24、 36、 48个月进行同位素骨扫描检查,结合 3例组织学检查综合观察 21例大块冷冻同种异体骨移植后的免疫反应。结果 (1)外周血 T淋巴细胞亚群 (OKT3＋ ,OKT4＋ ,OKT8＋ )及血清补体 (C3,C4)和循环免疫复合物 (CiC)手术前后比较,差异无显著性意义 (P > 0.05)。 (2)同位素骨扫描显示 :术后 3～ 6个月移植的异体骨两端及髓腔内同位素浓集明显低于正常骨,而异体骨两端所对应的自体骨端同位素浓集明显于高于正常骨,此过程于植入后 9个月开始减弱,可达数年。以宿主受区大量 T淋巴细胞为主的炎性细胞浸润为其组织学特征。结论 (1)大段冷冻异体骨移植后宿主全身免疫机能改变不明显,其反应是以局部炎症为主的细胞免疫过程。 (2)异体骨可作为修复大块骨缺损的良好材料。     

深低温冷冻同种异体骨修复骨缺损的临床应用

采用－８０℃深低温冷冻同种异体骨植骨治疗缺损３２例。四肢良性肿瘤１７例，恶性肿瘤２例，创伤性骨缺损６例，重建椎体６例，重建跟重１例，异体骨加自体骨移植１８例，单纯异体骨１４例，大块异体骨移植１４例。Ｘ线片显示移植骨与宿主骨愈合良好，认为深低温冷冻同种异体骨是一种较理想的骨缺损修复材料。     

深低温冷冻同种异体骨修复骨缺损的临床应用

采用—80℃深低温冷冻同种异体骨植骨治疗缺损32例。四肢良性肿瘤17例,恶性肿瘤2例,创伤性骨缺损6例,重建椎体6例,重建跟骨1例,异体骨加自体骨移植18例,单纯异体骨14例,大块异体骨移植14例。本组除1例感染失败,1例异体骨与宿主骨皮质端不愈合外其余30例切口Ⅰ期愈合,无排斥反应。X线片显示移植骨与宿主骨愈合良好,认为深低温冷冻同种异体骨是一种较理想的骨缺损修复材料。     

同种异体指关节移植的基础研究与临床应用

目的 探讨同种异体关节移植在手外科应用的可行性,为该项技术的研究与应用提供相关的实验基础与临床经验.方法 参考国内外相关资料,结合我们在异体关节移植方面的基础与临床研究,就关节移植的免疫学、组织学、低温生物学、骨端的固定与骨愈合、关节软骨的保护与再生进行实验研究与临床探讨.结果 实验研究证实骨组织、骨膜组织、骨髓组织均有免疫原性,其中以骨髓组织为主.经低温冷冻处理后可以降低组织的免疫原性,移植后供体与自体骨可很好愈合.移植术后早期关节活动影响关节的营养与再生.在临床应用9例,中早期的结果是理性的,但一年以上的病例随访发现关节软骨发生退变,远期结果不甚理想.结论 实验研究与临床探索证实了在不用免疫抑制剂的情况下采用深低温冷冻处理异体关节移植,解决了关节骨移植免疫排斥的问题,骨端的可靠的内固定可以加速骨愈合并利于软骨的演变与再生,但随后软骨的退变与调控仍存在问题,需要进一步研究.     

同种异体骨移植研究进展

同种异体骨移植作为将同种异体骨组织移植到体内骨骼缺损处的一种技术,在骨与关节损伤修复、人工关节置换后翻修、骨肿瘤病灶清除、脊柱融合术等许多骨科手术中,有极其广泛的应用。该文从同种异体骨移植的历史、植入材料的采集和处理、手术方式选择、愈合方式及机制、手术后免疫反应等方面进行综述,以加深对同种异体骨移植的认识。     

冷冻干燥同种骨临床应用的初步报告

目的：建立现代骨组织库，观察系列冷冻干燥同种骨移植的临床效果。方法：采用深度冷冻、真空冷冻干燥和辐照灭菌等现代技术处理人类骨组织，临床应用系列冻干骨94例，包括骨缺损填充、骨不连植骨、脊柱和关节融合、人工关节翻修、髋臼造盖等，观察近期临床结果。结果：冻干同种骨的理化性能、无菌检测和生物性能完全符合体内植入物的相关国家标准，常温下可保存2年。94例中的90例无明显的免疫排斥反应，优良率为95．76％，成功率为97．87％。结论：冷冻干燥同种骨使用安全，保存和运输方便，可替代临床自体骨移植。     

深度冷冻大段同种骨的制备及应用

目的：建立现代骨组织库，观察深度冷冻大段同种骨移植的临床效果。方法：采用深度冷冻、物理脱脂、真空包装和辐照灭菌等现代技术处理人类大段骨组织，临床应用24例，包括创伤性肢体骨重建、半侧骨盆重建、半侧骶骨移植、四肢大段骨或骨关节移植等，观察近期临床结果。结果：骨移植材料的无菌检测合格，生物力学强度无明显下降，可远程运输和短期保存．全部病例无明显的免疫排斥反应，成功率为100％.结论：深度冷冻大段同种骨临床使用安全可靠，保存和运输方便.     

大段异体骨移植治疗骨肿瘤

目的 探讨大段异体骨移植在骨肿瘤保肢治疗中的临床疗效。方法 回顾观察了 1991年 9月～ 1998年 10月,应用大段异体骨修复 79例骨肿瘤患者瘤段骨切除后骨缺损的治疗情况。男 55例,女 24例;年龄 9～ 70岁,平均 28.8岁。骨肉瘤 38例,恶性骨巨细胞瘤 12例,其他肿瘤 29例。骨段移植 24例,半关节移植 50例,复合人工关节移植 5例。植入异体骨长度 8～ 22 cm,平均 13.5 cm。非交锁型髓内钉固定 16例,交锁型髓内钉固定 53例,钢板固定 5例,复合人工关节移植 5例。结果 67例患者得到随访,时间 5个月～ 7年,平均 2.8年,结果异体骨愈合 62例,不愈合 5例。主要并发症 :复发 8例,感染 8例,骨不连 5例,骨折 4例,内固定失败 4例,关节面吸收塌陷 7例。功能按 Mankin标准评定 :优 25例,良 23例,中 11例,差 8例。结论 大段异体骨移植是一种修复骨肿瘤瘤段切除后骨缺损的有效手段;牢固的髓内固定有利于异体骨愈合。     

胆管癌新鲜组织标本库建立与鉴定

目的利用解放军总医院肝胆外科的医疗优势,摸索一套合理的操作方法,有计划地建立胆管癌新鲜组织标本库,为系统开展胆道肿瘤研究做好准备。方法选取2000年1月～2001年6月解放军总医院肝胆外科以胆道肿瘤为主要诊断而行手术切除的患者的手术标本21例,包括肿瘤组织、正常组织和(或)癌旁组织,将切取的组织块分割后装入编号的灭菌贮藏管,迅速放入液氮转移罐,深低温冰柜保存。全部组织标本均经常规病理组织学检查予以鉴定,并取其中部分组织使用Trizol试剂提取总RNA鉴定以判断组织成分的完整性。结果21例标本中肝内胆管癌4例,肝门胆管癌6例,肝外胆管癌7例,壶腹癌4例。由于肿瘤标本大小不同,所切取的组织块数目各异;因手术难度及人为因素的影响使得组织留取平均时间为(47.60±43.87)min。所取组织经Trizol试剂提取后,可见离心管底部沉淀的呈黄白薄片状的RNA,经紫外分光光度计分析得出其A260/A280=1.6～1.8,总RNA经1%琼脂糖凝胶电泳后可见明显的28s和18s条带,而且28s条带的亮度大约是18s的2倍;2例超过2h的标本的A260/A280<1.6,且电泳显示28s和18s条带不清、消失及拖尾。结论人类遗传资源库的建设是开展疾病相关基因研究的重要的基础性工作,本实验建立的胆管癌组织标本留取操作流程可保证标本库质量。标本的留取必须在知情同意和保证留有足够的用于病理诊断的组织前提下,由有经验的相对固定的医护人员完成;标本离体时间应掌握在1h之内,应常规将标本分割多管保存。     

骨库移植骨污染及控制

目的：为避免同种异体移植骨的污染，减少感染及交叉感染的危险，总结了全军骨科研究所综合骨库移植骨制备情况，特别是对植骨污染情况进行了调查。方法与结果：自１９９１年９月～１９９７年１２月共得到２８例供体，经系列筛选５例不合格，占１８％，以ＨＢＶ感染者为主。经无菌取骨的大段骨关节细菌污染率仍高达３０％，主要为软组织、骨膜及骨干表面污染，而髓腔内污染少。所染细菌主要为非致病人，６例术后感染，其中大段骨关节     

骨形态发生蛋白在异体骨段移植愈合中的表达及临床意义

目的：研究骨形态发生蛋白（BMP）在异体骨段移植愈中的表达及临床意义。方法：采用新西兰大白兔股骨中段切除1．5cm骨干和骨膜实验动物模型。方法：36只兔随机分实验组和对照组。实验组植入深低温保存的异体骨,对照组植入自体新鲜骨,均用髓内针固定,分别于术后第1、2、3个月用免疫组织化学染色法观察BMP在异体骨愈合过程的表达情况,结果：深低温保存的同种异体骨移植愈合BMP表达与体骨相似,移植骨段BMP表达阴性,新生骨及其周围类基质表达阳性。新生编织骨BMP表达活跃,成熟板层骨BMP表达减弱（P＜0．01）。结论：异体骨移植愈合中骨吸收和骨诱导是同时,骨诱导在异体骨愈合早期发挥了重要作用。     

细胞连接对组织冷冻损伤的作用

目的 了解在无保护剂条件下细胞连接在组织冷冻损伤中的作用。方法 采用细胞单层中可形成细胞连接的犬上皮细胞系（MDCK）细胞和不形成细胞连接的中国仓鼠成纤维细胞系（V79）细胞,分为细胞悬液组、贴壁组和单层细胞组分别进行0－40℃之间的梯度冷冻实验,然后采用新型的四氮唑盐法和脂溶性细胞活化剂法测定细胞的活力并进行比较。结果 两种方法测定的结果一致,均显示两种细胞的细胞悬液冷冻后活力高于贴壁组和单层细胞组;MDCK细胞贴壁组活力高于单层细胞组,V79细胞则无明显差异;MDCK单层细胞组活力却明显低于V79单层细胞组。结论 组织细胞间的连接以及细胞与细胞基质的连接对组织冷漠的损伤有重要的作用,它们的存在直接影响组织细胞的活力,其原因可能与构成细胞连接的细胞骨架系统有关。     

玻璃化法保存血管异体移植的免疫反应

目的评价玻璃化法保存异体血管移植后的免疫反应。方法对玻璃化法保存14d的新西兰兔股动脉进行异体移植,在4周时对移植动脉进行组织学观察,分别于0、2、4、6、8、12、16和24周采血测定血清抗体滴度和抗体细胞毒作用,并与新鲜新西兰兔股动脉和低温冷冻法保存的新西兰兔股动脉进行比较。结果异体血管移植后在局部和全身均产生了免疫排斥反应。血清抗体滴度的峰值出现于术后第4周,玻璃化法保存的异体血管组织匀浆抗体滴液为0.120±0.023,和新鲜异体血管(0.198±0.020)的差异有统计学意义(P<0.01),和低温冷冻法保存的异体血管(0.130±0.024)的差异无统计学意义(P>0.05)。结论经玻璃化法和低温冷冻法保存的血管免疫原性降低。     

玻璃化法保存家兔股动脉条件的筛选

目的　筛选玻璃化法保存家兔股动脉的最佳条件。方法　 (1)运用正交设计和氯化三苯基四唑 (TTC)染色筛选出适合家兔股动脉玻璃化保存和低温冷冻保存的条件。 (2 )通过细胞培养了解玻璃化动脉的细胞活性。结果　 (1)玻璃化动脉的活性为 82 .67% ;低温冷冻动脉为73 .2 9% (P <0 .0 1)。(2 )二者经培养所得到的细胞为平滑肌细胞。结论　玻璃化法保存动脉由于在降温和复温过程中没有冰晶形成 ,对动脉整体结构和活性影响小 ,因而玻璃化动脉具有较好的细胞活性。