聚合酶链反应快速检测多重耐药葡萄球菌实验研究

目的 :应用聚合酶链反应检测葡萄球菌属菌株所携带耐甲氧西林mecA基因和红霉素抗性基因ermA、ermC与临床药敏试验比较。方法 :根据上述抗性基因保守区域选用引物经聚合酶链反应检测成都地区临床分离78株耐药葡萄球菌与临床药敏试验比较并追踪其预后。结果 :mecA基因型与表型符合率 79 5 % ,ermA、ermC基因型与表型符合率 82 2 % ,检测mecA、ermA、ermC基因均阳性患者与上述基因阴性患者死亡率存在显著性差异(P <0 0 1)。结论 :多重PCR检测mecA、ermA、ermC基因敏感、快速 ,可作为判断预后参考指标。     

菌液直接进行聚合酶链反应快速检测葡萄球菌mecA基因的研究

耐甲氧西林葡萄球菌 (MRS)因其对 β内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物的多重耐药而成为危害严重的医院感染病原菌之一 ,不适当的治疗常常造成病情的延误以及病原菌在病房内的流行 ,这就需要临床微生物室快速准确地检测出MRS。应用聚合酶链反应 (PCR)直接检测mecA耐药基因 ,具有高度的特异性和灵敏度且报告时间较快[1]。以往报道的PCR方法都要求先提取细菌染色体DNA做模板 ,我们在实验中发现不进行标本的预处理 ,直接以菌液进行PCR扩增 ,亦可得到满意结果。一、材料和方法1.菌株 :2 15株葡萄球菌多数为本院 2 0 0 1～ 2 0 0 2…     

双重PCR反向杂交快速检测及鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的　研究以非培养法为基础的快速检测和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的方法。方法　将金黄色葡萄球菌mecA基因特异性探针固定在尼龙膜上 ,双重聚合酶链反应 (PCR)同时扩增待检DNA片段 ,在扩增中用bio 11 dUTP标记扩增产物 ,然后与探针膜杂交。结果　 5 0株金黄色葡萄球菌sa4 4 2特异性基因片段检测结果为 10 0 %阳性 ,mecA基因结果阳性占 72 %。结论　该方法灵敏度高、特异性强 ,适用于临床快速检测和鉴定MRSA。     

基于液相芯片技术建立快速检测6 种临床常见血流感染厌氧菌的方法及评价

目的 基于液相芯片技术建立一种可同时快速检测 6种临床常见血流感染厌氧菌的方法。方法 通过 GenBank寻找脆弱拟杆菌、厌氧消化链球菌、具核梭杆菌、中间普雷沃菌、产气荚膜梭菌和痤疮丙酸杆菌的 16S rDNA基因序列,经序列比对分析,选择菌内保守菌间特异的区域作靶序列,使用 Primer 5.0软件设计特异性引物及探针,建立不对称多重 PCR扩增体系,将 PCR产物与偶联核酸探针的荧光微球混合物进行杂交,建立一种多重检测方法,并对该方法的特异度、灵敏度和重复性进行评价。收集 2020年 6月～2022年 5月东莞市厚街医院阳性血厌氧培养瓶 84例及阴性培养瓶 16例,应用建立的方法进行检测,结果与传统培养法进行比较。结果 6种厌氧菌靶基因序列经 PCR扩增后,电泳成像清晰可见 6条目标条带;经反应体系优化,生物素标记与非标记引物浓度比为 4∶1时,选择退火温度 56℃进行多重扩增,加入 5μl PCR产物, 52℃温育 20 min检测效果最佳;各目标序列荧光强度中位值（median fluorescence intensity,Mfi）＞ 1 000,无非特异性信号;最低检测限可达 103cfu/ml～104cfu/ml;当菌液浓度为 105cfu/ml时,批内及批间的变异系数分别在 7.38%和 11.10%以下; 100例临床样本中 6种厌氧菌的检测结果与培养法一致。结论 成功建立一种快速、简便、高效的液相芯片方法,可同时检测 6种常见血流感染厌氧菌。     

耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测

目的探讨沈阳地区耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）的感染情况、流行特征。方法应用ＭＲＳ鉴别培养，聚合酶链反应产物的酶联检测（ＥＤ－ＰＣＲ）及常规药敏试验法。结果从７６株葡萄球菌中检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）１０株，耐甲氧西林血浆凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲ－ＣＮＳ）１３株。１０株ＭＲＳＡ的血泺凝固酶型别主要集中在Ⅵ型，Ⅱ型次之。结论沈阳地区耐甲氧西林葡萄球菌感染较为严重（２３／７６），主要的血浆凝固酶型别为Ⅲ型。３种检测方法比较，ＥＤ－ＰＣＲ法具有操作简便、特异、敏感等优点，宜于推广应用     

实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌方法的试验研究

目的建立金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR的快速检测方法,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据金黄色葡萄球菌femB基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于金黄色葡萄球菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌的方法。结果成功构建了金黄色葡萄球菌重组质粒标准品和金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR方法;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性试验,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;将模拟标本与分离培养对比,两者符合率为100%。结论金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为金黄色葡萄球菌感染诊断及食源性金黄色葡萄球菌污染的快速检测提供依据,可用于临床感染诊断及食品卫生监管、商品检验检疫等。     

耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测

目的探讨沈阳地区耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）的感染情况，流行特征，应用ＭＲＳ鉴别培养，聚合酶链反应产和的酶联检测（ＥＤ－ＰＣＲ）及常规药敏试验法。结果从７５株葡萄球菌中同耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）１０株，耐甲氧西林血浆凝固酶阴性力葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）１３株。１０株ＭＲＳＡ的血浆凝固酶型别主要集中在Ⅳ型，Ⅱ型次之，结论 沈阳地区耐甲氧西林葡萄球菌染较为严重（２３／７６），主要的血浆凝固酶     

生物素标记的DNA探针检测葡萄球菌肠毒素B基因

目的　建立一种灵敏度高、特异性好的 Ｄ Ｎ Ａ 探针检测葡萄球菌肠毒素 Ｂ 基因方法。方法　用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 扩增的方法进行葡萄球菌 Ｂ 型肠毒素基因探针生物素标记，用制备好的基因探针，进行斑点杂交，对葡萄球菌肠毒素１０ 株标准株和３９ 株临床株分别进行了检测。结果　探针灵敏度为２５０ ｐｇ ，检测模板灵敏度为０９８ ｎｇ 。对西安、济南、北京等地临床分离株，进行 Ｐ Ｃ Ｒ 和斑点杂交方法的比较，阳性符合率达到１００ ％ 。结论　用 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增的方法标记生物素基因探针，建立斑点杂交的方法，为葡萄球菌肠毒素 Ｂ 基因的诊断提供了科学依据。     

套式聚合酶链反应检测巨细胞病毒的初步研究

目的建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）。方法在ＨＣＭＶ直接早期蛋白ＥｃｏＲＩＪＤＮＡ片段内，自行设计两对引物，建立套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶＤＮＡ，同时结合病毒分离检测临床标本。结果２３例新生儿肝炎综合征患儿中，１０例病毒分离及套式ＰＣＲ均阳性；１例病毒分离阴性，但套式ＰＣＲ阳性。对５８例妊娠早期孕妇血标本进行检测，套式ＰＣＲ阳性率为９％，病毒分离阳性率则为７％。结论套式ＰＣＲ加限制性酶切分析是一种临床检测ＨＣＭＶ的快速有效手段，值得临床推广。     

甲胎蛋白的液相芯片法检测与方法学评价

甲胎蛋白（alpha fetoprotein．AFP）是一种广泛用于临床检测的肿瘤标志物，主要用于临床肝癌患者检测的初筛。目前临床常用的检测方法主要有酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫、化学发光、电化学发光等。EULSA法虽然操作简单，但是在检测的敏感性、准确性、稳定性方面都存在问题。放射免疫法虽然具有高敏感性，但是检测时间长，容易对操作者和周围的环境产生放射性污染，因而限制了其在临床的广泛使用。     

抗癌胚抗原抗体的交联浓度对液相芯片荧光检测信号的影响

目的探讨不同交联浓度的抗癌胚抗原（CEA）单克隆抗体对液相芯片荧光检测信号的影响，明确CEA检测中最适抗体交联浓度。方法分别以不同交联浓度的标记有生物素的抗-CEA单抗与Luminex公司生产的44号荧光微球交联，交联完成后在每个反应孔中加入交联有不同浓度抗体的荧光微球各5000个，每个浓度加8孔，在每个抗体交联浓度下对应的检测孔中分别加入藻红蛋白（PE）标记的亲和素，经过15min的反应后用Luminex-100荧光检测仪检测荧光强度。结果CEA抗体的最适交联浓度为100μg／ml。结论在液相芯片的蛋白检测中CEA抗体有其最适的交联浓度。     

干化学法检测氯离子的实验研究

目的研究干化学试剂和微型光谱仪技术快速检测氯离子的方法。方法将所配制的电解质氯离子液体试剂冻干于微型光谱仪配套的检测杯中,运用冷冻干燥机真空抽干,制备成干粉状试剂,封存备用。测定时,在配制好的干试剂检测杯中加入标本和稀释液后,放入微型光谱仪的检测卡槽中,经微型光谱仪的磁力搅拌系统混匀,经加热系统孵育后,运用速率法的反应原理,于405 nm处进行氯离子的吸光度(A)值检测。并对试剂的性能进行评价,将结果进行统计学分析。结果该指标线性范围为40~160 mmol/L,冻干后90 d内反应稳定性良好。其批内变异系数(CV)<4%,批间CV<5%,回收率为96.5%~104.4%。当血清内胆红素(TB)<280.0μmol/L以及三酰甘油(TG)<12.0 mmol/L时,结果未见明显干扰。结果显示,与全自动生化分析仪具有良好的相关性(r=0.976 9)。结论以微型光谱仪干试剂法测定电解质氯离子结果准确可靠,检测过程简便,可用眼直接观察颜色变化,避免漏检且仪器试剂携带方便,符合战地救治、基层医疗的需要。     

表面等离子体共振型基因芯片系统对临床常见病原微生物的检测

目的 研究表面等离子体共振(SPR)系统在临床病原微生物的基因芯片检测中的应用.方法 对27份临床样本进行SPR的芯片检测.其中血液阳性标本8份,脓液阳性标本3份,白带阳性标本及生殖道脓液标本9份,活组织检查阳性标本1份,活组织检查阴性标本6份.采用生物信息学方法设计各靶病原体特异的引物和探针,并分别利用PCR技术以及酶标化学发光芯片技术对设计的引物和探针进行验证;制备的SPR响应型基因芯片,结合SPR芯片系统对临床标本进行检测.结果 设计的引物和探针经验证均具有良好的特异性和准确性,能够顺利实施对各靶病原体的有效扩增和对芯片的检测应用;新构建的基因芯片结合SPR芯片系统对临床26份标本的检测结果与临床常规检测结果一致.结论 SPR检测系统具有良好的检测性能,检测方法准确可靠,可应用于对临床病原微生物的芯片检测.     

The rapid detection kit based on neuraminidase activity of influenza virus

The ZstatFlu test(ZymeTx, USA) is a rapid detection kit for influenza types A and B virus. This test is based upon the reaction between viral neuraminidase from influenza viruses and chromogenic substrate. The positive specimen of influenza type A or B virus cleave the substrate and produce a blue colored product. The ZstatFlu was evaluated by a prototype viruses, isolated viruses and clinical specimens. At result, this kit was reactive for all human influenza type A and B virus. No cross reactivity was detected with other respiratory viruses, including parainfluenza type 1, 2, 3 and mumps viruses with neuraminidase activity. Throat swabs were used for the test. By comparison with cell culture and RT-PCR. The sensitivity and the specificity was 77.0% and 90.2% respectively. The ZstatFlu should be useful for the rapid diagnosis of influenza virus infection.     

微型光谱仪干试剂法检测血清钾离子的研究

目的研究一种基于微型光谱仪和干化学试剂技术快速检测血清钾离子浓度的方法。方法根据酶法制备干粉钾离子试剂,研究其在微型光谱仪上的检测方法,并对试剂及仪器的性能进行评价,进行统计学分析。结果制备的干试剂结构疏松、溶解性好,90d内反应稳定。用630nm波长检测,其线性范围为3～8mmol/L,批内变异系数(CV)<4%,批间CV<5%,回收率为98.5%～106.9%。当血清内胆红素小于290.40μmol/L,三酰甘油小于11.20mmol/L时,无明显干扰。与全自动生化分析仪电极法结果的相关性良好(r=0.978)。结论微型光谱仪及干试剂法测定血清钾离子浓度结果准确可靠,操作简便,仪器携带方便,可适用于现场或床旁的快速检测。     

基于Sinofiler检测系统的福建汉族群体遗传多态性研究

目的 调查福建地区汉族群体15个STR基因座遗传多态性参数,同时评估Sinofiler荧光标记复合扩增系统在福建地区汉族群体中的法医学应用价值.方法 应用Sinofiler荧光标记复合扩增系统检测500个福建地区汉族无关个体的15个STR 基因座的多态性,统计该群体各项遗传学参数.结果 15个STR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡（HWE）定律.15个STR遗传标记均具有高度多态性,匹配概率为0.033～0.140,个体识别力为0.860～0.967,多态性信息含量为0.70～0.85,非父排除率（PPE）为0.492～0.774,纯合度为0.110～0.261,杂合度为0.739～0.890.发现18个稀有等位基因.结论 Sinofiler检测系统的15个STR基因座在福建地区汉族群体中具有较高的遗传多态性.     

应用寡核苷酸芯片技术检测食源性感染常见致病菌

目的建立食源性感染常见致病菌的快速检测方法。方法利用带正电荷尼龙膜为芯片载体，合成寡核苷酸探针，点样于载体制成寡核苷酸芯片，对食源性感染常见致病菌23Sr DNA基因片段扩增产物进行杂交检测。结果在同一条件下运用设计的通用引物扩增出16种(属)细菌23Sr DNA基因片段。大肠埃希菌、沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、肉毒梭菌和空肠弯曲菌等10种(属)菌杂交结果显示，高灵敏度和特异性；金黄色葡萄球菌、链球菌、小肠结肠炎耶尔森菌和产气荚膜梭菌等4种(属)菌，未能显示预期的种(属)杂交结果；而应用食源性感染模拟标本，检测肺炎链球菌和绿脓假单胞菌两种与食源性感染无关的致病菌未与芯片上探针出现杂交反应，检出水平可达10CFU／ml。结论建立的寡核苷酸芯片技术在食源性感染常见致病菌的检测上快速准确等优点，为食源性感染的诊治与预防提供了有效的技术手段和方法依据。     

Simple multiplex real-time PCR for rapid detection of common 16S rRNA methyltransferase genes

We have developed a real-time multiplex PCR assay to detect the three most common 16S rRNA methyltransferase genes (armA, rmtB and rmtC), which encode problematic high-level resistance to all clinically-relevant aminoglycoside antibiotics. All results were consistent with published conventional PCR assays and these genes still appear rare in Australia.     

Experimental study on disinfection effect of different dose of rapid hand disinfectant

PurposeTo investigate the appropriate antiseptic handrubbing method.MethodsSeventy-four clinical nurses were randomly divided into two groups based on the number of disinfectant presses used, with group 1 using one-press and group 2 using two-presses. Sterilizing effects as a function of presses were compared and analyzed between the two groups.ResultsPrior to hand disinfection, the hand sampling region resulted in 72 colony forming units for the 74 nurses. Following disinfection, only 2 colony forming units (p < 0.001) were found. The analysis of drying time effects on the disinfection rate between the two groups showed a significant difference (p = 0.049).ConclusionIn an effort to reduce the incidence of nosocomial infection, the medical personnel should sufficiently dry hands following handrubbing with disinfectant in a strict accordance with the six part washing technique for antiseptic handrubbing.     

基于快速原型技术的定制化人工半膝关节复合系统的研究

目的传统方法制造的人工半膝关节存在个体匹配性、排异性及纯机械固定易松动等问题，为此设计基于快速原型(RP)的定制型人工半膝关节复合系统的制造方法。方法首先利用快速原型技术快速准确地制作出与人体半膝关节形状相匹配的人工植入体原型，然后分别运用钛合金离心铸造和生物材料烧结成型技术制作出人工金属半膝关节和胫骨近端活性人工骨。结果和结论利用快速原型技术制作出了人工半膝关节和胫骨近端活性人工骨。与传统植入体相比，该系统可实现人工半膝关节和对侧半膝关节面的匹配运动，而且功能孔和髓内钉的设计实现了植入体的生物固定和机械固定相结合，大段生物活性人工骨的复合促进了成骨生长，将排异反应减至最低。