胃癌组织中ERCC1基因的高甲基化及DNMT1的表达

目的探讨人切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing gene 1,ERCC1)基因启动子Cp G岛甲基化和DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因的表达与胃癌发生的关系及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测60例胃癌组织及其相应癌旁正常组织中ERCC1基因启动子区甲基化状态。同时应用逆转录聚合酶链反应(realtime RT-PCR)法和免疫组化(IHC)SP法分别检测ERCC1及DNMT1基因的mRNA和蛋白表达水平。结果胃癌组织中ERCC1基因启动子Cp G岛甲基化阳性率为68.3%,明显高于相应的癌旁正常组织(23.3%)。胃癌组织中ERCC1 mRNA阳性率显著低于癌旁正常组织(31.7%vs 71.7%,P0.05),而胃癌组织中DNMT1 mRNA阳性率明显增高,差异均有统计学意义(78.3%vs 16.7%,P0.05)。ERCC1 mRNA阴性表达的胃癌组织中基因启动子的甲基化率较ERCC1 mRNA阳性表达者明显升高,差异具有统计学意义(92.7%vs 15.8%,P0.001)。结论 ERCC1基因启动子Cp G岛高甲基化及DNMT1基因表达上调可能参与胃癌的发生与发展。DNMT1可能调控ERCC1基因的甲基化。     

RASSF1A基因启动子区甲基化在胃癌组织中的检测

目的:检测胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状况,并探讨其与临床病理特征的关系.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCIL MSP)检测39例胃癌组织,及相应癌旁组织和30例对照组织中RASSF1A基因启动子区甲基化水平.结果:胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化率显著高于癌旁组织甲基化率及对照组(64.1%vs 7.7%,0%,均P＜0.01).胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度及淋巴结转移与否的RASSF1A基因甲基化率的差异均无统计学意义.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化与胃癌的发生密切相关,MSP法是一种快速、敏感的基因甲基化检测方法,可用于胃癌的辅助诊断.     

胰腺癌细胞系BxPC3及胰腺癌组织Ras相关区域家族1A启动子CpG岛的甲基化状态

目的 检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株BxPC3及胰腺癌组织中的甲基化状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病机制中的可能作用.方法 采用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测胰腺癌细胞株BxPC3、5例正常胰腺组织、13对胰腺癌及相应癌旁正常胰腺组织中RASSF1A启动子CpG岛的甲基化状态,计算其甲基化率.以甲基化酶抑制剂5-Aza-dC(5-Aza-2-deoxycitydine)处理BxPC3,观察处理前后甲基化率变化情况及RASSF1A mRNA表达变化.结果 在BxPC3细胞株中,RASSF1A启动子的CpG岛甲基化率为62.90%;正常胰腺、癌旁及癌组织中平均分别为9.14%、53.79%和55.82%.与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P值<0.01),而癌旁及癌组织之间无明显差异(P>0.05).BxPC3经5-Aza-dC处理后,RASSF1A的CpG岛甲基化率显著下降至42.50%(P<0.05),同时RASSF1A mRNA表达增强.结论 RASSF1A启动子CpG岛异常甲基化是胰腺癌发生发展中的早期事件,可能参与胰腺癌的发病过程.     

结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化及意义

目的观察结肠癌组织中RAS相关区域家族1A（RASSF1A）基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化,并探讨其意义。方法分别采用甲基化特异性PCR（MSPCR）和RT-PCR技术检测80例结肠癌及癌旁正常结肠组织中RASSF1A基因启动子甲基化、mRNA。结果 80例正常结肠组织中RASSF1A基因启动子未见甲基化,80例结肠癌组织中RASSF1A基因启动子出现甲基化者58例,两者相比,P〈0.05。正常结肠组织均可检测到RASSF1A基因mRNA,结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化者未检测到RASSF1A基因mRNA、未甲基化者可检测到RASSF1A基因mRNA。RASSF1A基因启动子甲基化与结肠癌病理分型、淋巴结转移、远处转移和Dukes分期有关（P均〈0.05）。RASSF1A基因mRNA的表达与结肠癌Dukes分期有关（P〈0.05）。结论结肠癌组织中RASSF1A基因启动子出现甲基化,RASSF1A基因启动子甲基化者RASSF1A基因mRNA表达缺失,这可能与结肠癌的发生发展及转移有关。     

胃癌组织中MGMT基因甲基化与DNMT1蛋白表达的关系

背景:研究表明MGMT基因启动子区甲基化与包括胃癌在内的多种恶性肿瘤密切相关。DNA甲基转移酶1(DNMT1)在多种肿瘤组织中的表达上调。但目前关于胃癌组织中MGMT基因甲基化状态与DNMT1表达关系的研究少见。目的:探讨MGMT基因甲基化、DNMT1蛋白表达与胃癌的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测60例胃腺癌组织及其相应癌旁组织中MGMT基因启动子区甲基化状态,RT-PCR、免疫组化法分别检测MGMT、DNMT1 mRNA和蛋白表达。结果:胃癌组织中MGMT基因启动子区甲基化率明显高于癌旁组织(45.0%对13.3%,P0.001)。胃癌组织中MGMT mRNA阳性表达率显著低于癌旁组织(41.7%对93.3%,P0.001),而DNMT1 mRNA阳性率明显升高(76.7%对18.3%,P0.001)。MGMT mRNA阴性表达的胃癌组织中其基因启动子甲基化率较阳性表达者升高(57.1%对28.0%,P0.05)。胃癌组织中MGMT蛋白表达与DNMT1蛋白表达呈负相关(r=-0.795,P0.01)。结论:MGMT基因启动子区高甲基化和DNMT1高表达可能与胃癌的发生、发展有关。DNMT1可能调控MGMT基因的甲基化过程。     

胃癌组织RASSF1A甲基化对其mRNA及蛋白表达的影响

目的研究RASSF1A基因启动子区甲基化对胃癌组织中RASSF1AmRNA及蛋白表达的影响。方法RT-PCR方法检测54例胃癌及癌旁正常组织RASSF1AmRNA表达,甲基化特异性PCR方法检测RASSF1A启动子区CpG岛甲基化状态;Westernblot方法检测20例胃癌及癌旁正常组织中RASSF1A蛋白表达。结果(1)RASSF1AmRNA和蛋白表达水平在胃癌组织中明显低于癌旁正常组织(A值分别为0·2589±0·2407比0·5448±0·2971,P<0·0001;0·1874±0·0737比0·6654±0·2201,P<0·0001);(2)RASSF1A在胃癌组织和正常组织中的甲基化频率分别为66·7%和14·8%,差异有统计学意义(P<0·0001);(3)在胃癌组织中,甲基化组RASSF1AmRNA的表达明显低于非甲基化组(0·1384±0·1142比0·5018±0·2463,P<0·0001)。结论胃癌组织RASSF1AmRNA和蛋白表达缺失或低下,与其启动子甲基化程度增高显著相关。     

胃癌患者血清RASSF1A基因启动子区甲基化检测

Ras相关结构域家族1A（RASSF1A）基因是近年发现的新型抑癌基因，其启动子区甲基化可能与胃肠道肿瘤的发生、发展密切相关。目的：检测胃癌患者血清RASSF1A基因启动子区甲基化情况，探讨其在胃癌早期诊断和预后评估中的可能作用。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测47例胃腺癌患者、30例胃良性病变患者和30名健康对照者的血清RASSF1A基因启动子区甲基化情况，其中16例胃腺癌患者同时留取手术切除癌组织、癌旁组织标本以及术前、术后血标本行对照研究。结果：胃腺癌患者血清RASSF1A基因启动子区甲基化率为34．0％（16／47），显著高于胃良性病变患者（3.3％，1／30）和健康对照者（0％）（P〈0．01）。16例胃腺癌组织中5例（31．2％）检测到RASSF1A基因启动子区甲基化，其中4例（80．0％）术前、术后血清标本均检测到RASSF1A基因启动子区甲基化。血清RASSF1A基因启动子区甲基化与胃癌患者性别、年龄、肿瘤分化程度、有无转移以及血清癌胚抗原（CEA）水平均无相关性。结论：血清RASSF1A基因启动子区甲基化检测可望为胃癌的早期诊断和预后判断提供依据。     

胃癌组织RASSF1基因启动子区甲基化的意义

目的:探讨抑癌基因RASSF1A启动子在胃癌组织及胃良性病变中甲基化的发生情况及与临床特征的关系.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS- PCR)方法检测32例胃癌组织及32例相应的癌旁组织,以及46例胃良性病变中RASSF1A基因甲基化发生情况.结果:在32例胃癌DNA标本中,RASSF1A基因甲基化发生率为62.5%(20/32).而在32例癌旁组织中,只有1例存在甲基化,占3.1%(1/32),二者之间比较差异有统计学意义(P<0.05).在胃良性病变,浅表性胃炎和萎缩性胃炎中甲基化发生频率分别为3.3%和37.5%.RASSF1A基因甲基化发生率与胃癌分化程度、肿瘤大小及淋巴结转移之间无显著相关性.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化在胃癌的发生发展中起重要作用.     

RASSF1A、MINT31启动子区高甲基化与食管上皮内瘤变和食管鳞癌的关系

背景：食管上皮内瘤变（EIN）是食管正常或慢性炎症组织向鳞癌转变过程中必经的病理阶段,目前对EIN的发生、发展尚缺乏临床实用的早期评估指标。目的：探讨肿瘤相关基因RASSF1A、MINT31启动子区高甲基化和DNA甲基转移酶1（DNMT1）表达与EIN和食管鳞癌发生、发展的关系。方法：以甲基化特异性PCR（MSP）检测30例食管鳞癌、80例EIN和20例正常食管组织中的RASSF1A、MINT31甲基化状态,以亚硫酸氢盐修饰后测序（BSP）验证MSP结果。以免疫组化方法检测EIN和食管鳞癌组织中的DNMT1蛋白表达。结果：正常食管组织、EIN、食管鳞癌组织中的RASSF1A和MINT31甲基化率分别为5．0％和5．0％、32．5％和26．2％、60．0％和46．7％,组间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。BSP方法证实。MSP示RASSFlA甲基化阳性的EIN和食管鳞癌组织。RASSF1A启动子区存在甲基化位点。低级别、高级别EIN和食管鳞癌组织中的DNMT1蛋白表达阳性率分别为32．5％、55．0％和76．7％,组间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。DNMT1高表达与RASSF1A甲基化相关,与MINT31甲基化无关。结论：RASSF1A、MINT31启动子区高甲基化和DNMT1表达上调在EIN和食管鳞癌的发生、发展中起重要作用,其检测或许有助于EIN的评估。     

RUNX3、RASSF1A启动子高甲基化与胃癌进展转移的关系

目的:探讨胃癌RUNX3、RASSF1A基因启动子甲基化在胃癌进展转移中的作用及意义.方法:RT-PCR和MSP检测62例胃癌标本及56例正常胃黏膜组织RUNX3、RASSF1A基因mRNA表达及甲基化状况,免疫组织化学检测VEGF在RUNX3、RASSF1A甲基化与非甲基化胃癌组织及20例正常组织中的表达,并分析RUNX3、RASSF1A甲基化与VEGF表达的关系.结果:胃癌组织RUNX3与RASSF1A表达较正常组织均明显降低(0.629±0.461 vs 0.893±0.543,0.653±0.476 vs 0.858±0.581,均P<0.05),且RUNX3与RASSF1A甲基化率均高于正常组织(69.4%VS 26.8%,66.1%vs 23.2%.均P<0.01).胃癌组织中RUNX3、RASSF1A甲基化组mRNA表达量较非甲基化组明显降低(0.545±0.299 vs 0.736±0.291,0.562±0.208 vs 0.674±0.185,均P<0.05).RASSF1A甲基化与肿瘤TNM分期及浸润深度相走RUNX3甲基化与肿瘤淋巴结转移、血管侵犯及TNM分期相关(P<0.05).RUNX3甲基化组胃癌组织VEGF蛋白表达高于非甲基化组(86.0%vs57.9%),RUNX3甲基化与VEGF表达相关(P<0.05).结论:RUNX3、RASSF1A启动子高甲基化可能是导致其表达降低的原因,并与胃癌进展演变相关.RUNX3甲基化可能参与胃癌血管、淋巴管转移.     

LMXlA基因启动子甲基化以及在胃癌发展中的临床意义

目的通过检测胃癌癌旁距离原发灶不同距离组织及胃癌原发灶LMXlA基因启动子区甲基化状态的差异,分析正常胃组织、癌前病变及癌组织中该基因甲基化的动态变化以及LMXlA基因甲基化与胃癌原发灶病理学的关系,探讨LMXlA基因启动子区甲基化在胃癌阶段性发生及进展中的作用及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR法（MSP）检测距胃癌癌灶边缘1、3、5cm组织及胃癌原发灶组织中LMXlA基因甲基化状态。结果LMXlA基因启动子区甲基化发生率在胃癌组织及距胃癌灶边缘1、3、5cm组织中分别为46．0％（23／50）、22．O％（11／50）、8．0％（4／50）和4．0％（2／50）,从距癌灶边缘5cm胃组织至胃癌原发灶组织中的表达中随距癌灶边缘距离的减少呈上升趋势,原发灶中甲基化阳性率显著高于距原发灶边缘3cm和5cm组织（x^2=15．42,P〈0．05;x^2=12．63,P〈0．01）。LMXlA基因启动子区甲基化发生率在正常胃组织、癌前病变组织及胃癌原发灶中分别为O％（0／25）、16．0％（4／25）和46．O％（23／50）,三者之间的差异具有统计学意义（×^2=24．85,P〈0．01）。LMXlA基因甲基化发生率在胃癌患者透浆膜组57．6％（19／33）显著高于未透浆膜组14．8％（4／27）（X^2=16．50,P〈0．05）;在转移淋巴结数大于7枚以上组52．9％（9／17）显著高于小于7枚组37．5％（6／16）（X^2=12．74,P〈0．05）。LMXlA基因甲基化在性别、年龄、不同大体类型、生长方式及分化程度上胃癌患者间差异无统计学意义。结论LMXlA基因启动子区异常甲基化可能与胃癌的临床进展有一定的相关性。     

Detection of RASSF1A promoter hypermethylation in serum from gastric and colorectal adenocarcinoma patients

AIM：To evaluate the diagnostic role of serum RASSF1A promoter hypermethylation in gastric and colorectal adenocarcinoma.
METHODS：Methylation-specific polymerase chain reaction （MSPCR） was used to examine the promoter methylation status of the serum RASSF1A gene in 47 gastric adenocarcinoma patients, 45 colorectal adenocarcinoma patients, 60 patients with benign gastrointestinal disease （30 with benign gastric disease and 30 with benign colorectal disease）, and 30 healthy donor controls. Apaired study of RASSF1A promoter methylation status in primary tumor, adjacent normal tissue, and postopertive serum were conducted in 25 gastric and colorectal adenocarcinoma patients who later were underwent surgical therapy.
RESULTS：The frequencies of detection of serum RASSF1A promoter hypermethylation in gastric （34.0%） and colorectal （28.9%） adenocarcinoma patients were significantly higher than those in patients with benign gastric （3.3%） or colorectal （6.7%） disease or in healthy donors （0%） （P 〈 0.01）. The methylation status of RASSF1A promoter in serum samples was consistent with that in paired primary tumors, and the MSPCR results for RASSF1A promoter methylation status in paired preoperative samples were consistent with those in postoperative serum samples. The serum RASSF1A promoter hypermethylation did not correlate with patient sex, age, tumor differentiation grade, surgical therapy, or serum carcinoembryonic antigen level. Although the serum RASSF1A promoter hypermethylation frequency tended to be higher in patients with distant metastases, there was no correlation between methylation status and metastasis.
CONCLUSION：Aberrant CpG island methylation within the promoter region of RASSF1A is a promising biomarker for gastric and colorectal cancer.     

Detection of RASSF1A promoter hypermethylation in serum from gastric and colorectal adenocarcinoma patients

AIM: To evaluate the diagnostic role of serum RASSF1A promoter hypermethylation in gastric and colorectal adenocarcinoma.METHODS: Methylation-specific polymerase chain reaction (MSPCR) was used to examine the promoter methylation status of the serum RASSF1A gene in 47 gastric adenocarcinoma patients, 45 colorectal adenocarcinoma patients, 60 patients with benign gastrointestinal disease (30 with benign gastric disease and 30 with benign colorectal disease), and 30 healthy donor controls. A paired study of RASSF1A promoter methylation status in primary tumor, adjacent normal tissue, and postoperative serum were conducted in 25 gastric and colorectal adenocarcinoma patients who later were underwent surgical therapy.RESULTS: The frequencies of detection of serum RASSF1A promoter hypermethylation in gastric (34.0%)and colorectal (28.9%) adenocarcinoma patients were significantly higher than those in patients with benign gastric (3.3%) or colorectal (6.7%) disease or in healthy donors (0%) (P ＜ 0.01). The methylation status of RASSF1A promoter in serum samples was consistent with that in paired primary tumors, and the MSPCR results for RASSF1A promoter methylation status in paired preoperative samples were consistent with those in postoperative serum samples. The serum RASSF1A promoter hypermethylation did not correlate with patient sex, age, tumor differentiation grade, surgical therapy,or serum carcinoembryonic antigen level. Although the serum RASSF1A promoter hypermethylation frequency tended to be higher in patients with distant metastases,there was no correlation between methylation status and metastasis.CONCLUSION: Aberrant CpG island methylation within the promoter region of RASSF1A is a promising biomarker for gastric and colorectal cancer.     

XRCC1 downregulated through promoter hypermethylation is involved in human gastric carcinogenesis

OBJECTIVE: To analyze the expression and aberrant methylation of X-ray repair cross-complementing gene 1 (XRCC1) in gastric carcinogenesis, and identify the molecular mechanism of gastric carcinogenesis. METHODS: The method based on methyl binding domain protein (MBD) immuno-precipitation and promoter microarray was employed to screen the gastric cancer-related methylation-sensitive gene. An immunohistochemistry assay was applied to detect the protein expression of XRCC1 in the multistep progression of gastric carcinogenesis. The mRNA expression of XRCC1 was determined by real-time PCR in tumor tissues and their corresponding non-tumorous tissues. The methylation status and Arg194Trp and Arg399Gln polymorphisms of XRCC1 in gastric cancer and gastritis tissues were analyzed by methylation-specific PCR, bisulfite genomic sequencing and direct DNA sequencing, respectively. RESULTS: Promoter microarray screening and identification suggested that XRCC1 was a methylation-sensitive gene. Immunochemistry results showed that XRCC1 protein expression gradually decreased with progression of gastric mucosal lesions (P < 0.05). The positive rate of XRCC1 in patients with well/moderately differentiated gastric cancer was significantly higher than patients with poorly differentiated gastric cancer (P < 0.05). The mRNA expression of XRCC1 in gastric cancer tissues was significantly lower than that in the non-tumorous tissues (P < 0.05). Meanwhile, XRCC1 methylation in gastric cancer tissues was more frequent than that in the gastritis tissues (P < 0.05), and the downregulation of XRCC1 expression was relevant to methylation (P < 0.05). CONCLUSION: The expression of XRCC1 is downregulated in gastric carcinogenesis, and promoter hypermethylation may be one of the mechanisms contributing to its downregulation.     

骨肉瘤组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态观察及意义

目的 观察骨肉瘤组织中Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区域的甲基化状态,并探讨其临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测30例骨肉瘤组织及瘤旁组织中RASSF1A基因启动子区域的甲基化状态.结果 骨肉瘤组织中RASSF1A基因启动子区域发生甲基化14例(46.7％),瘤旁组织中4例(13.3％),两者比较,P＜0.05.RASSF1A基因启动子区甲基化与骨肉瘤患者的性别、年龄及血清碱性磷酸酶水平有关(P均＜0.05).结论 骨肉瘤组织中RASSF1A基因启动子区甲基化发生率高,其可能在骨肉瘤的发生发展中发挥重要作用.     

hMLH1基因高甲基化在胃癌发生、发展中的作用

基因启动子区CpG岛甲基化使许多基因失活，从而导致恶性肿瘤的发生和发展。目的：检测hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化水平，探讨其胃癌发生、发展中的作用。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测41例胃癌、40例癌前病变和38例对照组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化状态，并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果：胃癌组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为34．1％，显著高于癌前病变组的5．0％和对照组的0％（P〈0．05）。hMLHl基因甲基化阳性率与胃癌患者的年龄和肿瘤浸润深度有关（阳性率分别为46．4％对7．7％和55．0％对14.3％，P〈0．05），与性别、肿瘤分化程度和淋巴结转移无关（阳性率分别为34．8％对33．3％、28．0％对43．8％和38．1％对30．0％）。结论：胃癌组织中存在hMLHl基因启动子区CpG岛高甲基化，可能与胃癌的发生、发展有关．且可能在老年胃癌患者的肿瘤发生过程中起重要作用。