氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞凋亡

AIM: To examine whether oxidized low density lipoproteins (ox-LDL) could induce apoptosis in rabbit aortic smooth muscle cells (VSMC). METHODS: Low density lipoproteins (n-LDL) were isolated from healthy human plasma by gradient ultracentrifugation and oxidized by CuSO4 10 mumol.L-1. VSMC were exposed to ox-LDL, n-LDL, or phosphate-buffer solution (PBS) as control. Morphological changes were observed under fluorescene microscope after Hoechst 33258 staining. Extracted DNA was electrophoresized on agarose gel. RESULTS: Incubation of VSMC with ox-LDL 300 mg.L-1, not n-LDL, for 24 h induced morphological apoptosis changes (chromatin condensation, nucleus fragmentation) and DNA fragmentation, which was furthered with the incubation time up to 48 h or at a concentration of 400 mg.L-1. Dextran sulfate, a scavenger receptor blocker and butylated hydroxytoluene (BHT), an antioxidant, exhibited no effect on DNA fragmentation. Lysophosphatidylcholine (LPC) at a concentration up to 125 mumol.L-1 (equivalent to ox-LDL 300 mg.L-1) did not elicit DNA fragmentation. CONCLUSION: Ox-LDL induced apoptosis in VSMC without involving oxygen free radicals and LPC.     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :观察雌激素对血管平滑肌细胞 (SMC)凋亡的影响。方法 :以大鼠为对象 ,观察正常对照组、去卵巢组及去卵巢 +雌二醇治疗组大鼠血管平滑肌细胞凋亡的关系。结果 :雌二醇治疗组血管平滑肌细胞凋亡较去卵巢组相比明显减少(P>0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :雌二醇对血管平滑肌细胞的凋亡有抑制作用 ,可能是其预防动脉粥样硬化的机制     

他汀类药物与血管平滑肌细胞凋亡

血管平滑肌细胞（VSMC）的异常增殖和迁移在粥样斑块形成和冠状动脉介入治疗（PCI）后再狭窄中起非常重要的作用。他汀类药物不仅是一种有效的调脂药，同时还有多种调脂以外的作用。如他汀类药物可以抑制VSMC的增殖和迁移，并诱导其凋亡。临近病变部位的中层VSMC的凋亡可能造成斑块纤维帽容易破裂，进而引起斑块不稳定和临床事件。但研究证实他汀类药物有稳定斑块的作用，且新生内膜VSMC对他汀类药物诱导的凋亡作用比普通的血管中层VSMC更敏感。因此，他汀类药物的促新生内膜VSMC凋亡作用可能对预防PCI术后再狭窄起有益作用。具体作用机制以及临床上如何合理发挥此类作用尚待进一步研究。     

ox—LDL诱导血管平滑肌细胞增殖和凋亡的分子机制

血管平滑肌细胞增殖是动脉粥样硬化(atherosclerosisAs)形成和血管再狭窄的重要特征之一。而氧化型低密度脂蛋白(OxidizdeLowdensitylipoproteinox-LDL)是致动脉粥样硬化的一个独立危险因素。随着细胞分子生物学的发展,发现ox-LDL可通过细胞因子介导引起血管平滑肌细胞增殖或凋亡。现综述ox -LDL与细胞因子的关系,进一步探讨细胞因子在动脉粥样硬化形成过程中的作用。1ox -LDLoss诱导趋化因子、细胞因子的表达ox-LDL致动脉粥样硬化的作用与细胞因子、趋化因子和钻附因子的产生有关。Ross认为[1],动脉粥样硬化斑块是一种损伤性炎症反…     

葛根通脉饮诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的研究葛根通脉饮对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导增殖大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的促凋亡作用。方法制备葛根通脉饮含药血清,大鼠VSMC原代培养、鉴定,分为空白组、HCY组、葛根通脉饮组、瑞舒伐他汀(可定)组、葛根通脉饮联合可定组。药物干预后,Annexin/PI双染法检测细胞凋亡率。结果与空白组比较,HCY组细胞凋亡率显著降低(P<0.01);与HCY组比较,葛根通脉饮组、可定组、葛根通脉饮联合可定组细胞凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论葛根通脉饮可促进HCY诱导增殖的大鼠VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用机制之一。     

普罗布考抑制过氧化氢诱导血管平滑肌细胞的凋亡

目的研究抗氧化剂普罗布考(probucol)对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法以1mmol·L-1H2O2为VSMC凋亡诱导剂,probucol浓度为100、10和1μmol·L-1,孵育6h,采用Annexin V-FITC染色、TUNEL法和Hoechst33258染色法观察细胞凋亡;Western blot检测细胞中ASK-1和Trx-1蛋白的表达。结果H2O2可促使VSMCs凋亡,细胞中ASK-1蛋白表达增加,Trx-1蛋白表达降低。Probucol可减轻H2O2所致的细胞凋亡,呈浓度依赖性;同时细胞中ASK-1蛋白表达降低,Trx-1蛋白表达增加。结论probucol能拮抗H2O2诱导的血管平滑肌细胞凋亡,其机制可能与降低细胞中ASK-1蛋白表达,升高Trx-1蛋白表达有关。     

氧化甾醇抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及诱导其凋亡的作用

目的 :研究 3β ,5α ,6 β 胆甾烷三醇 (Triol)和2 5 羟胆固醇 (2 5OH)对VSMC增殖的影响 ,探讨氧化甾醇在动脉粥样硬化 (AS)发病中的作用和意义。方法 :培养和鉴定新西兰白兔主动脉VSMC ;以含不同浓度的Triol和 2 5OH的培养液作用于VSMC为实验组 ,不含氧化甾醇或含胆固醇的培养液作为对照组。VSMC增殖及其代谢活性以WST 1测定 ,细胞凋亡以光镜、透射电镜、脱氧核苷酸末端转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记 (TUNEL)判断。结果 :在1× 10 - 9～ 1× 10 - 7mol·L- 1范围的Triol和 2 5OH对VSMC的WST 1代谢活性无明显变化 (P >0 .0 5 ) ,而≥ 1× 10 - 6 mol·L- 1的氧化甾醇则使其代谢活性显著下降 (P <0 .0 1) ;≥ 2 0× 10 - 6 mol·L- 1的Triol和2 5OH诱导VSMC胞体皱缩变小、染色质在核周边浓集、核碎裂、空泡和凋亡小体形成等超微结构变化 ;TUNEL呈阳性反应。结论 :小剂量氧化甾醇无促进VSMC增殖而较大剂量氧化甾醇可诱导VSMC凋亡。     

维拉帕米诱导血管平滑肌细胞凋亡及其在再狭窄机制中的作用

目的探讨维拉帕米能否诱导血管平滑肌细胞凋亡及细胞凋亡在再狭窄机制中的作用。方法分别取正常兔髂动脉,动脉粥样硬化及再狭窄髂动脉血管中膜组织进行平滑肌细胞培养,［３Ｈ］ ＴｄＲ参入法测定细胞增殖活性,维拉帕米诱导平滑肌细胞凋亡,通过电镜观察,ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞仪了解各组平滑肌细胞凋亡情况。结果维拉帕米诱导下,平滑肌细胞的变化具有凋亡的典型特征。血管成形术后,细胞增殖及凋亡系统均被激活,再狭窄组细胞增殖程度增加２６％,细胞凋亡激活程度增加１９％,二者比例失衡。结论维拉帕米能够引起血管平滑肌细胞凋亡,而平滑肌细胞凋亡的相对减少在再狭窄的发生机制中发挥一定的作用。     

氧化甾醇诱导血管平滑肌细胞凋亡及其作用特点的研究

目的研究３β,５α,６β－胆甾烷二醇（Ｔｒｉｏｌ）诱导血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡及其与２５－羟胆固醇（２５－ＯＨ）比较的特点。方法体外培养ＶＳＭＣｓ、光镜、透射电镜及ＴＵＮＥＬ技术。结果ＶＳＭＣｓ经Ｔｒｉｏｌ处理后,贴壁层细胞呈现核染色质浓集,核碎裂和凋亡小体形成等凋亡的超微结构变化;ＴＵＮＥＬ显示ＶＳＭＣｓ凋亡细胞数随Ｔｒｉｏｌ浓度的增加而增多;剂量为 ３０ μｍｏｌ·Ｌ－１的 Ｔｒｉｏｌ和 ２５－ＯＨ诱导 ＶＳＭＣｓ的凋亡作用,前者不能而后者能被 ５０ μｍｏｌ·Ｌ－１的胆固醇所抑制。结论Ｔｒｉｏｌ能诱导ＶＳＭＣｓ凋亡,不同氧化甾醇可能有不同的作用通道和机制;氧化甾醇诱导ＶＳＭＣｓ凋亡可能是引起动脉粥样硬化斑块破溃,导致急性心血管事件发生的机制之一。     

细胞内游离钙在辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的　研究 3 羟 3 甲戊二酰辅酶A (HMG CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀诱导血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的机制。方法　以荧光染料Fura 2 /AM负载后荧光分光光度计法检测细胞内游离钙浓度 ,以DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪PI/膜联蛋白 (an nexin)V染色及半胱天冬酶 3激活来检测细胞凋亡。结果　辛伐他汀 30 μmol·L- 1孵育VSMC后 ,细胞内游离钙浓度显著升高 ,6h时达对照的 3倍以上 (P <0 .0 1) ,维拉帕米 80 μmol·L- 1与辛伐他汀 30 μmol·L- 1共同孵育VSMC 6h后细胞内游离钙浓度为 (14 4± 34)nmol·L- 1(P <0 .0 1)。辛伐他汀可诱导细胞凋亡率增高、“DNA梯状”样改变及半胱天冬酶 3的激活 ,这些变化均可被维拉帕米所逆转。结论辛伐他汀通过使细胞外钙大量内流而诱导VSMC凋亡。     

曲古菌素A抑制血管平滑肌增殖和诱导凋亡的研究

目的观察曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)体外抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导凋亡的作用。方法采用MTT比色法和BrdU参入法观察TSA对血清诱导的VSMC增殖的抑制作用;采用流式细胞仪和检测细胞周期蛋白表达的方法观察TSA对VSMC细胞周期的影响;采用测定DNA片段和活化caspase-3表达的方法观察TSA诱导VSMC发生凋亡的作用。结果小剂量TSA抑制血清诱导的VSMC增殖而无明显的细胞毒作用,大剂量TSA激活caspase-3并诱导VSMC发生凋亡。TSA干预可延缓血清诱导VSMC进入S期,此效应与抑制cyclinD1和cyclinA表达有关。结论TSA能抑制血清诱导的VSMC增殖,使VSMC停滞于静止期,大剂量条件下诱导VSMC凋亡。TSA有望成为治疗血管增殖性疾病的新策略。     

福辛普利对平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用，并研究福辛普利对其的影响。方法：采用流式细胞技术测定在不同浓度和不同作用时间血管紧张素Ⅱ作用下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2表达的变化和福辛普利对其的影响。结果：血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用。福辛普利可抑制AngⅡ作用，对细胞凋亡有一定的影响，同时可影响凋亡调控基因的表达。结论：血管紧张素Ⅱ具有一定的的促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用，尤其大剂量作用较明显。而福辛普利可明显抑制AngⅡ对血管平滑肌细胞的作用。     

缬沙坦对人脐静脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的调节作用,以探讨缬沙坦抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:荧光显微镜观察缬沙坦作用后VSMC凋亡的形态学变化,用流式细胞仪测定缬沙坦用药前后VSMC凋亡率并作周期分析,用流式细胞仪检测缬沙坦对凋亡相关基因Bax,Bcl-2和caspase3表达的影响.结果:缬沙坦高浓度 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组的VSMC凋亡率较AngⅡ模型组明显提高,缬沙坦单药高、中、低浓度组的VSMC凋亡率较对照组明显提高.细胞周期分析表明,AngⅡ 缬沙坦组与AngⅡ组比较,G0/G1期百分率显著升高,S期百分率显著降低,且具有浓度依赖性.Bax和caspase 3基因经高浓度缬沙坦组作用24 h后表达水平增加,Bcl-2则没有改变.结论:缬沙坦对AngⅡ诱导VSMC的增殖有抑制作用;缬沙坦可能促进VSMC凋亡;缬沙坦促进VSMC凋亡可能与Bax和caspase基因表达增加有关.     

粉防己碱促进和敏化肾性高血压大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的：从大鼠血管平滑肌细胞凋亡角度探讨粉防己碱逆转肾血管性高血压血管重构的机制。方法：两肾-夹法制备肾性高血压模型,原位末端标记法检测主动脉和尾动脉动脉壁平滑肌细胞凋亡数量;[3H]-TdR掺入和流式细胞术分析粉防己碱对培养细胞凋亡率的影响。结果：粉防己碱能够诱导血管平滑肌细胞凋亡,并使低血清和TNFα、转化生长因子（TGFβ1）诱导的细胞凋亡率增加。结论：粉防己碱逆转肾性高血压大鼠（RHR）血管重构的机制可能与诱导和敏化RHR血管平滑肌细胞凋亡有关。     

Store-operated calcium entry in vascular smooth muscle

In non-excitable cells, activation of G-protein-coupled phospholipase C (PLC)-linked receptors causes the release of Ca(2+) from intracellular stores, which is followed by transmembrane Ca(2+) entry. This Ca(2+) entry underlies a small and sustained phase of the cellular [Ca(2+)](i) increases and is important for several cellular functions including gene expression, secretion and cell proliferation. This form of transmembrane Ca(2+) entry is supported by agonist-activated Ca(2+)-permeable ion channels that are activated by store depletion and is referred to as store-operated Ca(2+) entry (SOCE) and represents a major pathway for agonist-induced Ca(2+) entry. In excitable cells such as smooth muscle cells, Ca(2+) entry mechanisms responsible for sustained cellular activation are normally considered to be mediated via either voltage-operated or receptor-operated Ca(2+) channels. Although SOCE occurs following agonist activation of smooth muscle, this was thought to be more important in replenishing Ca(2+) stores rather than acting as a source of activator Ca(2+) for the contractile process. This review summarizes our current knowledge of SOCE as a regulator of vascular smooth muscle tone and discusses its possible role in the cardiovascular function and disease. We propose a possible hypothesis for its activation and suggest that SOCE may represent a novel target for pharmacological therapeutic intervention.     

虎杖苷对VSMC内钙信号的调节机制初探

目的　观察虎杖苷对大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)内游离钙浓度的变化 ,以探讨虎杖苷对血管平滑肌细胞的调节机制。方法　用荧光染料Fluo 3 AM标记细胞 ,在粘附式细胞仪上测定细胞内游离钙的变化。结果　给予虎杖苷 5min后 ,VSMC内游离钙浓度升高。当虎杖苷加入前 10min用河豚毒素和优降糖分别预处理后 ,其VSMC内游离钙都不再明显升高 ;而给予普萘洛尔、甲氰咪胍及亚甲蓝分别预处理时 ,细胞内钙浓度反而升得更高 ,与单纯虎杖苷作用相比差异都有显著性。结论　虎杖苷可增加细胞内游离钙浓度 ,其作用可能与钠、钾通道开放有关 ,并且受 β肾上腺素能受体、H2 受体系统及鸟苷酸环化酶系统的反向调节。