基因突变和转基因技术评价TLR-4信号受体在流体切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因转录激活中的作用

用基因突变和转基因技术，评价TLR-4信号受体在层流低切应力刺激诱导血管内皮细胞IL-8基因转录激活中的作用，RT-PCR，Northern杂交和免疫荧光细胞化学染色均显示脐静脉血管内皮细胞表达TLR-4，同时RT-PCR和Northern杂交显示，层流切应力刺激1h后血管内皮细胞TLR-4表达增强，用RT-PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR-4cDNA，用PCR技术从其基因组DNA中扩增出IL-8上游调控序列，分别克隆于真核表达质粒pcDNA3和绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1质粒，构建出重组TLR-4缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3-mTLR4和IL-8报告基因表达质粒pEGFP1-IL8USCS。用pEGFP1-IL8USCS转染或pcD-NA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染ECV304细胞，4.2dyne/cm^2层流切应力刺激3h后，流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化，用pEGFP1-IL8USCS转染细胞，经层流切应力刺激3h后荧光蛋白表达增强（1.06:2.71)，同样用pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染细胞，层流切应力刺激3h后荧光蛋白表达未明显增强，提示TLR4/NF-кB信号传导通路可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因的表达。     

流体切应力对内皮细胞IL-8基因表达的影响及信号转导

目的流体切应力对于维持血管的稳定有着重要的作用.另外在一些病理情况下,例如动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病的发病过程中,流体切应力也扮演着关键角色.我们以往的实验结果证实:以低流体切应力(4.2dyne/cm2)处理培养的人脐静脉内皮细胞1 h,其IL-8mRNA的表达上调;处理2 h其表达量上调更为明显.在本实验中我们将进一步阐明流体切应力对培养的人脐静脉内皮细胞IL-8基因表达、蛋白生成的影响及其信号转导途径.方法分别用实时定量RT-PCR及定量三明治ELISA检测IL-8基因表达及蛋白生成;通过基因转染及流式细胞数检测IL-8报告基因pEGFP1-IL8USCS经流体切应力作用后的激活情况;用免疫荧光化学染色观测对照和层流切应力处理以后NF-κB核转移情况;将对照和层流切应力处理后的内皮细胞裂解物进行I-κB和磷酸化的I-κB的免疫印迹实验,以检测切应力诱导的I-κB磷酸化和降解的情况;RT-PCR、Northern杂交和免疫荧光细胞化学染色观察TLR-4和TLR-2在人脐静脉内皮细胞上的表达;用RT-PCR技术从血管内皮细胞扩增胞内区段缺失突变TLR-4 cDNA克隆于真核表达质粒pcDNA3,构建重组TLR-4胞内缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3-mTLR4,与pEGFP1-IL8USCS共转染内皮细胞,流式细胞术观察mTLR4对切应力诱导IL-8报告基因表达的影响.结果和讨论(1)未用切应力处理的内皮细胞没有IL-8基因的表达;切应力处理内皮细胞后,1 h IL-8 mRNA表达增加,2 h IL-8 mRNA表达量至最高值,3 h IL-8 mRNA表达量开始下降,4 h后IL-8 mRNA持续相对高表达;各实验组(2.23、4.20、6.08 dyne/cm2)均表现出相同的IL-8 mRNA随时间的变化规律,即IL-8的表达对切应力有时间依赖性.(2)未用切应力处理的内皮细胞没有IL-8基因的表达;切应力处理内皮细胞后,低切应力时IL-8 mRNA表达量明显增加,高切应力时IL-8 mRNA表达量较低.IL-8 mRNA的表达量与内皮细胞所施加的切应力强度呈反变关系;不同的切应力作用时间(1、2 h)均表现出相同的IL-8 mRNA随切应力强度的变化规律.提示流体切应力诱导内皮细胞表达IL-8,不仅与切应力的作用时间有关,而且IL-8的表达量与切应力作用强度有关,两者之间具有明显的直线负相关.直线回归方程:1 h时为y=7.57-0.11x,相关系数r=-0.97;2 h时为y=7.92-0.10 x,相关系数r=-0.96.(3)未用切应力处理的内皮细胞只有极少量的IL-8蛋白质生成;切应力处理内皮细胞1 h后,IL-8蛋白质生成量增加,处理5 h后IL-8蛋白质生成量增加至最高值,处理8 h后IL-8蛋白质生成量下降,10 h后IL-8蛋白质生成量维持在一个较高的水平.各实验组(2.23、4.20、6.08 dyne/cm2)均表现出相同的IL-8蛋白质生成量随切应力作用时间的变化规律.提示流体切应力确实可以诱导内皮细胞生成IL-8,并且IL-8的生成量与切应力的作用时间有关,呈双相性变化.(4)未用切应力处理的内皮细胞只有极少量的IL-8蛋白质生成;切应力处理内皮细胞后,低切应力(2.23 dyne/cm2)时IL-8蛋白质生成量明显增加,为高切应力(19.29 dyne/cm2)时IL-8蛋白质生成量的约6(作用5h)或7倍(作用6h).IL-8蛋白质生成量与内皮细胞所施加的切应力强度呈反变关系;直线回归方程:5 h时为y=760.12-36.06x,相关系数r=-0.978;6 h时为y=781.87-36.66x,相关系数r=-0.980.(5)pEGFP1-IL8USCS转染细胞,层流切应力刺激3 h后IL-8报告基因绿色荧光蛋白表达增强.(6)NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色显示,切应力刺激0.5 h,胞核即出现阳性反应,刺激1.5 h后,胞核呈强阳性染色.(7)细胞裂解物免疫印迹显示,刺激10 min时磷酸化IκB即显著增强,1 h后磷酸化IκB印迹强度降到无,而IκB随刺激时间延长而逐渐降低,0.5和1 h后降至测不到IκB.(8)免疫荧光细胞化学染色显示脐静脉血管内皮细胞膜表达TLR-4.RT-PCR和Northern杂交显示,人脐静脉血管内皮细胞表达TLR-2和TLR-4 mRNAs;当切应力刺激1 h后,TLR-4 mRNA表达明显增强.pcDNA3-mTLR4和pEGFP 1-IL8USCS共转染细胞,层流切应力刺激3 h后荧光蛋白表达未明显增强.本实验中我们采用的切应力为2.23、4.20、6.08 dyne/cm2,这些切应力与动脉血管分叉处等低切应力区生理切应力大小相似,在这些低切应力区,血管内皮细胞可分泌IL-8,IL-8转而激活中性粒细胞和单核细胞,调控它们和内皮细胞的黏附,这将触发一系列的病理变化,例如:动脉粥样硬化等.结论流体切应力诱导内皮细胞IL-8 mRNA的表达及IL-8蛋白的生成,在感染及动脉粥样硬化等病理过程中扮演着重要角色.     

血管内皮细胞在切应力刺激后Toll基因的表达变化

目的：本室先前的实验观察到原代培养的贴壁融合脐静脉内皮细胞层流刺激后,IL-8mRNA的增强表达和NF-κB的活化。本探讨Toll蛋白在切应力诱导血管内皮细胞表达趋化细胞IL-8基因表达中的可能作用。方法：从正常对照和层流刺激后的原代培养的人脐静脉内皮细胞提取总RNA,根据TLR-2和TLR-4cDNA序列设计特异引物,     

核转录因子κB信号通路在应力调控成肌细胞分化中的作用

背景：NF-κB信号通路在细胞生长分化、炎症反应、肿瘤生长等过程中发挥重要的调节作用,也参与成肌细胞分化的调控。 目的：分析NF-κB信号通路在应力介导的C2C12成肌细胞分化中的作用及其作用机制。 方法：成功构建大鼠C2C12成肌细胞体外培养-力学刺激模型,采用多通道细胞牵张应力加载系统,以0.5 Hz的加载频率和10%的细胞拉伸变形幅度对细胞进行拉伸培养2,6,12,24 h。 结果与结论：①C2C12成肌细胞在周期性机械拉伸力作用下,NF-κB信号通路被激活。当细胞受到应力刺激6 h后,胞核NF-κB p65亚基蛋白表达水平开始增强,24 h内NF-κB p65亚基蛋白表达水平达到峰值。加力12,24 h组与未加力对照组之间差异有显著性意义(P < 0.05)。②IκBα蛋白表达水平在加力6 h后表达显著下降,24 h内IκBα蛋白表达水平减弱达到最低。加力12,24 h组与未加力对照组之间差异有显著性意义(P < 0.05)。③周期性张应力促进C2C12成肌细胞分化过程中Myogenin的表达,加入NF-κB信号通路特异性抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸 (20 μmol/L) 后再加力,Myogenin的表达明显降低。以上结果提示：①NF-κB信号通路可能参与应力介导的C2C12成肌细胞分化的调控过程。②当细胞受到应力刺激时,胞质IκBα发生磷酸化并降解。③NF-κB信号通路在应力介导的C2C12成肌细胞分化过程中发挥重要作用,但不是这一调控过程的惟一通路。     

NF-κB/IκB信号通路在IL-1β诱导的肾系膜细胞环氧化酶-2表达中的作用

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)/IκB信号通路在肾小球系膜细胞环氧化酶-2(COX-2)表达中的作用。方法:放射免疫测定法检测系膜细胞培养上清中PGE₂水平;RT-PCR和Westernblot检测COX-2表达;凝胶电泳迁移率(EMSA)和Westernblot检测肾小球系膜细胞中NF-κB活化、p65亚基核转位以及IκBα和IκBβ的降解。结果:IL-1β显著上调系膜细胞PGE₂释放和COX-2表达,PDTC显著抑制IL-1β诱导的COX-2表达及PGE₂释放;IL-1β诱导系膜细胞NF-κB活化,p65核转位及胞浆内IκBα和IκBβ的降解。结论:IL-1β通过NF-κB/IκB信号转导通路诱导肾小球系膜细胞中COX-2表达。     

流体的不同流动方式对血管内皮细胞血管细胞粘附分子-1、核因子κB表达的影响

目的:探讨在低切应力时不同流态对粘附分子表达的影响。方法:置人脐静脉内皮细胞单层于平板流动腔内,经切应力0.2Pa层流或振荡流作用4h、18h,用组织免疫化学方法测其血管细胞粘附因子-1(VCAM-1)表达及核因子(NF-κB)核转位活性,原位杂交法检测VCAM-1mRNA表达。结果:在相同的低切应力作用下,层流组未见VCAM-1mRNA、VCAM-1有明显变化,而振荡流组则明显上调VCAM-1mRNA、VCAM-1表达分别为对照组2倍、2.4倍及NF-κB核转位活性明显高于对照。结论:VEC在低切应力作用下,振荡流明显上调VCAM-1表达,而层流无影响。     

NF-κB参与脂多糖致永生化小鼠脑血管内皮细胞通透性增高的调控

目的: 探讨脂多糖(LPS)对永生化小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3通透性的影响及可能的机制。方法: 实验分3组:bEnd.3细胞组、bEnd.3/vector细胞组和bEnd.3/muIκBα细胞组,后2组中分别转染空载pcDNA3.1hygro质粒和IκBα显性负性突变体DNMu-IκBα质粒。利用报告基因法、跨内皮细胞电阻抗(TEER)法、直接荧光染色法和免疫印迹(Western blotting)法分别检测LPS对细胞的NF-κB活性、细胞通透性、骨架蛋白F-actin分布、紧密连接蛋白(ZO-1和claudin-5)表达以及肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化水平的影响。结果: bEnd.3组和bEnd.3/vector组细胞中,LPS作用0.5 h可引起NF-κB活化(P<0.05);3 h时细胞TEER开始下降(P<0.05),并伴随细胞F-actin重构,ZO-1表达下调;12 h时,LPS对细胞的TEER、F-actin、ZO-1和claudin-5的破坏程度均达到最高。LPS对bEnd.3组和bEnd.3/vector组细胞早期损害伴有MLC磷酸化增加。而bEnd.3/muIκBα组细胞的NF-κB活性被明显抑制;相应时点,LPS对细胞的TEER、F-actin、ZO-1和claudin-5的损害作用也被减轻。同时LPS引起细胞MLC磷酸化增加的作用被明显抑制。结论: LPS通过破坏紧密连接增加脑微血管内皮细胞的通透性,该过程受NF-κB调控。     

NOD8对LPS诱导巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-1β的影响

 目的： 探讨NOD8对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞释放一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法： pEGFP-C2及pEGFP-NOD8重组质粒分别转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,以LPS刺激RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,采用Griess reagent法测定观察细胞分泌的NO水平;ELISA法检测IL-1β 和 TNF-α 的含量;荧光法测定活化的caspase-1水平; Western blotting检测NOD8蛋白表达及NF-κB  p65亚基的核转位情况。结果： (1)与转染pEGFP-C2空质粒组比较,转染pEGFP-NOD8质粒组NOD8蛋白表达明显增加。(2) LPS刺激6、12、24 h后,RAW264.7细胞释放NO、IL-1β及TNF-α均明显增加;而在pEGFP-NOD8+LPS组RAW264.7细胞, NO于12、24 h 的释放显著降低,IL-1β于6、12、24 h的释放也明显降低,TNF-α的释放则无明显变化。（3）在LPS刺激6、12、24 h后, RAW264.7细胞caspase-1活化水平均明显升高,胞浆NF-κB p65亚基表达明显减少,表明p65核转位增加;而pEGFP-NOD8+LPS组可显著抑制caspase-1的活化以及NF-κB p65亚基的核转位,差异有统计学意义。结论： NOD8可抑制LPS诱导的巨噬细胞NO与IL-1β释放,其作用机制可能与NOD8抑制caspase-1及NF-κB 的活化有关。     

1,25-二羟维生素D3负性调控被动致敏人气道平滑肌细胞中的NF-κB信号通路

 目的：探讨1,25-二羟维生素D3［1,25-(OH)2D3］对被动致敏人气道平滑肌细胞(HASMCs)中核因子κB（NF-κB）信号通路的影响。方法：原代培养HASMCs并使之被动致敏,以1,25-(OH)2D3作为干预因素。EMSA法检测NF-κB的DNA结合活性;免疫细胞化学染色技术观察NF-κB p65的核易位情况;Western blotting法检测核因子κB抑制蛋白α(IκBα)及p-IκBα蛋白的表达水平;实时荧光定量PCR检测维生素D受体(VDR)、维生素D 24-羟化酶(CYP24)和IκBα mRNA的表达水平;放线菌素D处理实验检测IκBα mRNA的表达。结果：(1) 1,25-(OH)2D3显著削弱被动致敏HASMCs中NF-κB的DNA结合活性及其亚单位 p65的核易位;(2) 1,25-(OH)2D3能通过增加被动致敏HASMCs中IκBα的mRNA稳定性及减少其蛋白磷酸化水平2个途径显著上调细胞中IκBα的表达;(3) 1,25-(OH)2D3显著上调被动致敏HASMCs中VDR的mRNA表达并诱发其功能性反应。结论：1,25-(OH)2D3能通过上调被动致敏HASMCs中IκBα的表达抑制细胞NF-κB信号通路,且这一作用与VDR有关,这可能是其调控被动致敏HASMCs的重要作用机制。     

HSV-2gD核酸疫苗的构建及免疫效果观察

目的:在前期筛选的HSV-2gD模拟抗原表位序列P6的基础上,以pcDNA3.1(-)为载体、IL-18为佐剂,构建P6与IL-18串联的重组表达质粒,并在真核细胞中表达。将重组质粒免疫小鼠,观察免疫效果。方法:采用串联简并引物PCR法构建重组质粒pcDNA3.1-IL18-P6和pcDNA3.1-IL18,以酶切、测序鉴定。将重组质粒分别转染CHO细胞进行瞬时表达,通过间接免疫荧光和Western blot法检测P6的表达情况。将构建的真核表达质粒肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔1周。末次免疫后1周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后1个月,处死小鼠,无菌分离脾脏,MTT法测定脾淋巴细胞增殖率。结果:构建的串联重组质粒pcDNA3.1-IL18-P6和pcDNA3.1-IL18经酶切及测序显示基因序列完全正确,经间接免疫荧光、Western blot法检测可证实模拟抗原表位序列P6具有近似天然序列的生物学活性。重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSV P6免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体的产生,诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18。可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。结论:成功构建和表达了重组质粒pcD-NA3.1-IL18-P6,其能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,从而为构建更加有效的HSV-2DNA疫苗奠定了良好的基础。     

转染PF4 cDNA的GRC-1细胞培养液对于ECV-304细胞生长及VEGF表达的影响

目的：构建真核表达载体pcDNA3-PF4-SS，检测稳定转染后的GRC-1细胞的培养上清对于血管内皮细胞ECV304的生长以及转染细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法：构建真核表达载体pcDNA3-PF4-SS，并经Bgl Ⅱ／Bam HI双酶切鉴定.通过脂质体介导，以该载体稳定转染GRC-1细胞，转染细胞中VEGF因子的表达情况用免疫组化染色法检测，转染细胞的培养上清对于ECV304细胞生长的影响用MTT法检测。结果：经Bgl Ⅱ／BamH I双酶切证实，hPF4 cD—NA已成功地克隆到真核表达载体pcDNA3-CD34-SS中。RT—PCR法检测证实，hPF4 cDNA已成功地转染GRC-1细胞。免疫组化染色检测显示，转染PF4基因的GRC—1细胞的胞浆及胞膜均有VEGF表达，但较转染前明显减弱。细胞计数及MTT法显示，转染后GRC-1细胞的培养上清对ECV304细胞的生长具有抑制作用，吸光度值(A)明显降低。结论：构建了真核表达载体pcDNA3-PF4-SS，并稳定转染GRC-1细胞。转染细胞的培养上清对ECV304细胞的生长及VEGF的表达，均具有明显的抑制作用，为探讨抗肿瘤生长机制和肿瘤疫苗的研制奠定了一定的基础。     

RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α转录后调控机制的初步研究

 目的：探讨RNA结合蛋白HuR对NF-κB抑制因子α（IκB-α）转录后调控机制。方法：构建IκB-α mRNA 3UTR报告基因真核表达质粒,并转染3T3细胞;体外生物素标记IκB-α mRNA 3UTR并进行RNA pull-down;过表达及干扰HuR后,qPCR检测其对IκB-α mRNA稳定性的影响,Western bltting检测其对IκB-α 蛋白表达的影响。结果：(1) IκB-α mRNA 3UTR报告基因真核表达质粒构建成功;(2) 报告基因检测：共转染pcDNA3-HA-HuR质粒及IκB-α mRNA 3UTR报告基因质粒后与对照组相比其数值明显增高;(3) 用生物素标记的IκB-α mRNA 3UTR探针进行RNA pull-down,可以检测到特异性结合的HuR蛋白;(4) 过表达HuR,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显上调;干扰HuR 表达后,IκB-α mRNA稳定性无明显变化,蛋白表达明显下调。结论：(1) HuR可以与IκB-α mRNA 3UTR特异性结合并参与调节IκB-α mRNA 3UTR的功能;(2) HuR对IκB-α mRNA稳定性无明显影响,其主要调控IκB-α 蛋白表达,使其表达上调。     

芝麻素通过PKCα/ NF-κB 信号途径抑制肥大细胞活化

目的:观察芝麻素对肥大细胞活化和炎症介质释放的影响并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养HMC-1细胞,用10 μg/ ml 的anti-DNP IgE 处理细胞6 h 后,再用100 ng/ ml 的DNP-HAS 孵育10 min 诱导HMC-1 细胞活化,在DNP-HAS 处理前给予最终浓度25、50 和100 μg/ L 芝麻素预处理30 min 后光镜下观察芝麻素对肥大细胞脱颗粒的影响,ELISA 法检测芝麻素对肥大细胞组胺、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8 释放的影响,Western blot 方法观察芝麻素对Fc RI 受体下游信号Lyn 和 Syk,PKC琢激活,IκB琢磷酸化和NF-κB 活化的影响。结果:DNP-HAS 能明显诱导HMC-1 细胞脱颗粒,促进组胺和TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-8 等细胞因子的释放,激活Fc着RI 受体下游信号分子Lyn、Syk 和PKCα,磷酸化IκBα,促进NF-κB 活化(P<0.05)。芝麻素高(100 μg/ L)、中(50 μg/ L)浓度能明显抑制HMC-1 细胞脱颗粒和炎症介质的释放,阻断Fc着RI 受体下游信号激活,抑制NF-κB 活化(P<0.05)。结论:芝麻素通过PKCα/ NF-κB 途径抑制肥大细胞活化和炎症介质释放。     

心衰大鼠心肌核因子-κB活化及其与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)活化与充血性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞凋亡发生、发展的关系及其对Fas和Fas配体(FasL)表达的调控作用。方法:以假手术组为对照,观察雄性Wistar大鼠心肌梗死(MI)后2周、4周及8周的血流动力学指标、心肌细胞凋亡指数、Fas、FasL、Bcl-2和κB抑制蛋白的表达及NF-κB核结合活性的改变。结果:MI后心肌细胞凋亡指数、Fas及FasL表达水平进行性升高,Bcl-2的mRNA表达下调;κB抑制蛋白水平逐渐降低,而NF-κB活性逐渐增高。结论:心肌细胞凋亡在MI后CHF发生、发展过程中起着重要作用,NF-κB活化启动Fas和FasL基因转录,Fas和FasL表达上调、Bcl-2表达下降介导大鼠MI后心肌细胞凋亡的发生。     

辣椒素对脂多糖诱导血管内皮细胞活化的影响及机制

 目的:探讨辣椒素对脂多糖（LPS）刺激后小鼠主动脉内皮细胞活化的影响,并探讨其可能机制。方法:（1）体外分离培养小鼠主动脉内皮细胞,免疫荧光鉴定内皮细胞特异性标志。（2）以100 μg/L LPS作用于血管内皮细胞后,以不同浓度的辣椒素（50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L）进行干预,分别于12、24和48 h收集主动脉血管内皮细胞及细胞上清液。采用ELISA法检测各组细胞上清液中的可溶性细胞间黏附分子 1（sICAM-1）、可溶性血管细胞黏附分子 1（sVCAM-1）和可溶性P-选择素(sP-selectin)水平,Western blotting法检测各组主动脉血管内皮细胞核内NF-κB p65水平和胞浆p-IκBα、IκBα水平。结果:与对照组相比,LPS组细胞上清液中sP-selectin、sICAM-1和sVCAM-1含量显著升高（P<0.05）, LPS能够时间依赖性上调sICAM-1和sVCAM-1的含量。与同时点的LPS组相比,辣椒素能够剂量依赖性下调sP-selectin、sICAM-1和sVCAM-1水平。与对照组相比,LPS作用24 h后, 细胞核内NF-κB p65和胞浆p-IκBα蛋白水平显著升高（P<0.05）,胞浆IκBα蛋白水平显著降低（P<0.05）。与同时点LPS组相比,辣椒素能够剂量依赖性下调细胞核内NF-κB p65和胞浆p-IκBα蛋白的水平（P<0.05）,剂量依赖性上调胞浆IκBα蛋白水平（P<0.05）。结论: 辣椒素能够显著抑制LPS作用后血管内皮细胞活化水平,该效应可能是通过下调IκBα降解和NF-κB p65胞核内转位而实现的。     

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路下调高脂血清诱导的人脐静脉内皮细胞黏附分子的表达

目的：观察丹皮酚对高脂损伤人脐静脉内皮细胞（HUVECs）核因子-κB（NF-κB）的活化及细胞黏附分子表达的影响,探讨丹皮酚抗动脉粥样硬化的分子机制。方法：以培养HUVECs作为靶细胞,用高脂血清制备损伤模型。采用MTT法检测细胞活性;RT-PCR法检测NF-κB p65 mRNA的表达;Western blotting法检测κB 抑制蛋白α（IκB-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和E-选择素的蛋白表达。结果：丹皮酚能使高脂损伤的HUVECs存活率增加,形态趋于正常;降低NF-κB p65 mRNA的表达,提高IκB-α的表达;下调ICAM-1和E-选择素的蛋白表达。结论：丹皮酚通过抑制血管内皮细胞NF-κB/IκB通路,下调ICAM-1和E-选择素的表达,减少炎症反应,这可能是丹皮酚抗动脉粥样硬化的机制之一。