HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的优选实验

1995年 ,美国Ｓｉｍｏｎｓ等和Ｌｉｎｎｅｎ等分别从肝炎患者的血清中克隆出庚型肝炎病毒 (ＧＢＶ Ｃ/ＨＧＶ)的基因组 ,并建立了检测血清ＧＢＶ Ｃ/ＨＧＶＲＮＡ的逆转录套式聚合酶链反应 (ＲＴ ｎＰＣＲ)方法。但是 ,该检测方法的灵敏度存在着较大差异。本实验使用Ａ～Ｅ共 5套ＰＣＲ引物 ,基中Ａ、Ｂ、Ｄ为自行设计的ＨＧＶ 5′端非编码区引物 ,目的产物长度分别为36 8ｂｐ ,15 8ｂｐ及 2 2 0ｂｐ ;Ｃ引物为参照文献设计的核心区引物 ,目的产物为30 2ｂｐ ;Ｅ引物为李倬副研究员设计的ＮＳ3区引物 ,目的产物长度为 5 91ｂｐ。采用改良的…     

庚型肝炎病毒致病性的初步研究

目的 探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的致病性。方法 应用ＲＴ－ｎＰＣＲ检测３６８例肝炎患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ和血清酶的变化,并对其中１例单独庚型肝炎肝硬化病例进行肝脏活组织是检测。结果 在７１例急性黄疸型肝炎中检出单纯性ＨＧＶ ＲＮＡ阳性７例,１５５例慢性肝炎中检出单纯性ＨＧＶ ＲＮＡ阳性２２例,５１例肝硬化中检出单纯ＨＧＶ ＲＮＡ阳性３例。其中１例肝穿组织免疫组化证实为ＨＧＶ ＮＳ ５Ａｇ阳性。结论 争性黄疸型肝炎及乙、丙型肝炎病毒携带者,其慢性肝炎、肝硬化和肝癌中均可检出ＨＧＶ ＲＮＡ,ＨＧＶ感染可为单独感中与乙／丙型肝炎病毒混合或重叠感染,肝脏病理和免疫组化检查证实庚型肝炎病毒是一种嗜肝病毒,其定位主要存在于细胞浆内,可引起慢性病毒性肝炎甚至肝硬化。庚型肝炎病毒很可能具有致病性。     

利用多组套式引物检测庚型肝炎病毒RNA

利用庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）ＮＳ３～５区序列合成了四组套式引物，建立了灵敏、特异的庚型肝炎病毒ＲＮＡ双扩增聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。用此方法检测了１０份庚型肝炎病毒抗体阳性患者血清及１０份阴性的健康人血清。前者不同组引物的检出率为ＮＳ３（１）引物９份阳性，ＮＳ３（２）引物８份阳性，ＮＳ４引物４份阳性，ＮＳ５（１）引物５份阳性，ＮＳ５（２）引物９份阳性；后者各组引物检测均为阴性。结果表明，庚型肝炎病毒不同区域引物用于ＲＴ－ＰＣＲ检出率差异较大。ＮＳ３（１）及ＮＳ５（２）这两组引物检出率最高，更适合用于ＲＴ－ＰＣＲ检测庚型肝炎病毒ＲＮＡ。     

PT—PCR检测庚型肝炎病毒和GB病毒感染

ＨＧＶ和ＧＢＶ是近二年发现的新肝炎病毒，引起非Ａ￣Ｅ肝炎。目前实验室检测ＨＧＶ和ＧＢＶ感染主要靠ＲＴ－ＰＣＲ。本文就ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＧＶ和ＧＢＶ ＲＮＡ的临床标准处理、引物、扩增条件、产物检测和目前临床应用研究予以介绍。     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

病毒性肝炎HGV-RNA的RT-PCR检测及血清学研究

庚 型肝炎病毒 (ＨＧＶ)是近年发现的新型肝炎病毒 ,能够引起非甲 非戊型肝炎 ;ＨＧＶ广泛存在于输血后肝炎及献血员中。本文应用ＲＴ ＰＣＲ技术对我市 1 996年 4月～5月间急性肝炎流行期间的 441例患者血清进行ＨＧＶ ＲＮＡ检测 ,并观察其肝损害情况 ,现报告如下。1　资料与方法1 .1　标本来源随机采集 1 996年 4月～ 5月间入院的急性肝炎患者血清 441例 ,病原学分型标准按 1 990年上海第六届全国病毒性肝炎会议修订的“病毒性肝炎防治方案”。1 .2　仪器和试剂ＨＧＶ ＲＮＡ测定采用ＲＴ ＰＣＲ法 ,试剂由北医大肝病研究所北京肝炎试剂…     

逆转录—巢式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒RNA方法…

庚型肝炎病毒基因组为单链，正肌ＲＮＡ，全长９３９２ｂｐ。根据５‘－非编码区基因序列设计合成两对引物。随机选取酶联抗－ＨＧＶ阳性病人血清３份，阴性病人血清６份，应用逆转录－巢式聚合酶链反应进行检测。结果２份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较强的特异扩增带，１份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较弱的特异扩增带，其余６份抗－ＨＧＶ阴性血清均无特异性扩增带。     

用逆转录-套式聚合酶链反应检测我国不同临床型肝炎/肝病患者中庚型肝炎病毒感染

目的为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况。方法根据已发表的ＨＧＶ的５’端非编码区（５’－ＵＴＲ区）及螺旋酶区（ＮＳ３区）两段高度保守的基因序列分别设计两套引物，用逆转录－套式聚合酶链式反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果从北京、秦皇岛、河南等地采集各种肝病患者及职业献血员血清３５４份，ＨＧＶＲＮＡ阳性７９份，阳性率为２２．３％。其中已确定的临床型肝炎／肝病患者２５４例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为５０例，阳性率为１９．６％。原因不明的或非甲～戊型肝炎患者４３例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为１３例，阳性率为３０．２％。丙型肝炎阳性的职业献血员５７例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为１６例，阳性率为３０．２％。结论提示ＨＧＶ感染在我国多种人群中普遍存在，它不仅可能是引起非甲～戊型肝炎的重要病原之一，也可能是引起输血后肝炎的病原因子     

35例庚型肝炎临床及酶学变化观察

目的探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的临床意义。方法应用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测１６５例肝炎患者血清ＨＧＶＲＮＡ和血清酶的变化。其中急性肝炎２４例，慢性肝炎７８例，肝硬化１８例，肝癌４例，乙、丙肝携带者４１例。结果在急性黄疸型肝炎中检出单纯性ＨＧＶ感染３例（１２５％），血清ＡＬＴ水平在４８８±６５Ｕ／Ｌ之间，ＡＳＴ在４５２±７１Ｕ／Ｌ之间，ＴＢｉＬ在７７１±１４３μｍｏｌ／Ｌ。急性肝炎酶的升高一般在１个月内降到正常，而ＨＧＶＲＮＡ在ＡＬＴ降到正常后仍持续一段时间才转阴，其中１例发病后９个月转阴。慢性肝炎中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性１９例（２４４％），其中单纯性ＨＧＶ阳性４例（５１３％）。肝硬化肝癌中ＨＧＶＲＮＡ阳性４例，其中１例肝硬化为单纯性ＨＧＶ阳性。结论在急性黄疸型肝炎、乙型肝炎病毒携带者、慢性肝炎、肝硬化以及肝癌中均可检出庚型肝炎病毒，为单独感染或与乙、丙型肝炎病毒同时或重叠感染，其传播途径与乙、丙型肝炎的传播途径相同。     

逆转录－巢式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒RNA方法的建立及初步应用

庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）基因组为单链、正股ＲＮＡ，全长９３９２ｂｐ。根据５’－非编码区基因序列设计合成两对引物。随机选取酶联抗－ＨＧＶ阳性病人血清３份，阴性病人血清６份，应用逆转录－巢式聚合酶链反应进行检测。结果２份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较强的特异扩增带，１份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较弱的特异扩增带，其余６份抗－ＨＧＶ阴性血清均无特异性扩增带。特异扩增片断大小与设计相符，并经序列分析及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交给予证实。     

深圳地区不同人群庚型肝炎病毒感染的分子流行病…

在庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）基因５’端非编码区（５’－ＵＴＲ）设计两对套式引物，建立检测ＨＧＶＲＮＡ的逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）。对深圳地区１０６例职业献血员，１６８例肝炎病人及８０例静脉毒瘾者进行ＨＧＶＲＮＡ的检测，阳性率分别为８．５％，７．７％与４６．３％前两者与后者相比较差异均有显著性意义（Ｐ〈０．０１）。６１例慢性乙型肝炎与３３例慢性丙型肝炎病人ＨＧＶＲＮＡ阳性率分别     

肾综合征出血热病毒逆转录—聚合酶链反应检测方法的实…

选择覆盖肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）基因的保守区核苷酸序列合成引物，采用异硫氰酸胍一步法抽提ＲＮＡ，建立了逆转录（ＲＴ）聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测临床血清样本中ＨＦＲＳＶ ＲＮＡ的方法。扩增产物经凝胶电泳Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实了其具有特异性。结果显示ＨＦＲＳＶ阳性细胞培养液、１６份患者血清均为阳性，而１０份正常人血清均为阴性。该方法具高特异、高敏感的特点，为临床早期、快速诊     

中国南京庚型肝炎病毒部分基因的克隆及cDNA序列分析

采用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）从南京地区某输血后丙型肝炎患者血清中克隆出庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构区部分基因。序列分析结果表明：该序列与国外发表的庚型肝炎病毒ＨＧＵ４４４０２，ＨＧＵ４５９６６，ＨＧＵ３６３８０（ＧＢＶＣ）对应位置核苷酸序列同源性分别为８９０９％，９２１２％，８７２７％，与已报道的ＨＧＶ河北株序列同源性为９３９４％。对４０份输血后丙型肝炎血清和３０份非甲非乙非丙非丁非戊型肝炎血清进行了检测，ＨＧＶＲＮＡ阳性率分别为１０００％和６６７％。     

肾综合征出血热病毒逆转录－聚合酶链反应检测方法的实验研究和临床意义

选择覆盖肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）基因的保守区核苷酸序列合成引物，采用异硫氰酸胍一步法抽提ＲＮＡ，建立了逆转录（ＲＴ）聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测临床血清样本中ＨＦＲＳＶＲＮＡ的方法。扩增产物经凝胶电泳及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实了其具有特异性。结果显示ＨＦＲＳＶ阳性细胞培养液、１６份患者血清均为阳性，而１０份正常人血清均为阴性。该方法具高特异、高敏感的特点，为临床早期、快速诊断，并从分子生物学角度鉴定ＨＦＲＳＶ提供了新手段。     

血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病原学研究

目的对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎进行病原学研究。方法用ＨＢＶＰＣＲ、ＨＣＶＲＴ－ＰＣＲ和ＨＥＶＲＴ－ＰＣＲ分别检测血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎患者血清，并对其部分阳性产物进行克隆测序。结果８７例非甲～戊型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，９例（１０．３％）为ＨＣＶＲＮＡ阳性，部分经测序证实为ＨＣＶ１ｂ亚型；余７８例为ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性。该７８例中，１４例因无血清未作ＨＥＶＲＮＡ检测，余６４例中４９例（７６．６％）为ＨＥＶＲＮＡ阴性，１５例（２３．４％）为ＨＥＶＲＮＡ阳性。经序列分析显示，其中９例为典型的中国ＨＥＶ株基因序列，６例变异较大，与典型的中国株基因序列的同源性仅为８０％左右。４９例ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ和ＨＥＶＲＮＡ均阴性的血清中１６例（３２．６％）ＨＧＶＲＮＡ阳性。由此可见，该８７例中至少有９例为ＨＣＶ感染，１５例为ＨＥＶ感染，１６例为ＨＧＶ感染。结论对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病人应该用ＰＣＲ法进行病原学分型，以明确其诊断     

陕西株GBV-C/HGV RNA NS3区cDNA的序列分析

应用反转录及套式ＰＣＲ技术,从陕西省西安市两位非甲～戊型急性肝炎患者的血清中提取ＲＮＡ,经特异性的反转录引物Ｐ４反转录成ｃＤＮＡ,以此为模板分别用Ｐ３,Ｐ４及Ｐ１,Ｐ２两对引物进行ＰＣＲ扩增,扩增到２１８ｂｐ（４２４８ｎｔ～４４６５ｎｔ）的ＨＧＶＲＮ...     

肝病患者庚型肝炎病毒感染的研究

目的 研究肝病患者庚型肝炎病毒感染状况。方法 用酶链免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测１５４例门诊和住院肝病患者（均无输血史）的抗－ＨＧＶ,１５４例中有５４例同时采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶ ＲＮＡ,分别计算抗－ＨＧＶ和ＨＧＶ ＲＮＡ的阳性率。以ＨＧＶ ＲＮＡ阳性为ＨＧＶ感染的判断标准,来分析各类肝病患者ＨＧＶ感染状况。结果 １５４例肝病患者抗－ＨＧＶ阳性者３１例,阳性率２０．１３     

逆转录-热启动PCR检测HGV感染

逆转录－热启动ＰＣＲ检测ＨＧＶ感染杨朝国张玲英陈志远丁广祥新近发现的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与急慢性肝病有关，可经输血及其它相关途径传播。为了解我国ＨＧＶ感染情况，对不同人群血清中ＨＧＶ－ＲＮＡ进行了检测。在地高辛－１１－ｄＵＴＰ存在下，应用ＲＴ－热启...     

庚型肝炎病毒E2抗体的检测及其临床意义

目前多采用逆转录聚合酶链反应(ＲＴ ＰＣＲ)扩增方法检测肝炎病人血清中的庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ) ,此技术需要病毒在血液中存在时才会出现阳性结果 ,同时临床也需要通过特异性免疫测定方法来跟踪感染及恢复过程。由于ＧＢＶ Ｃ在培养中不能成功地获得 ,没有天然抗原可供血清学检测之用 ,近年来国外一种ＧＢＶ ＣＥ2蛋白被克隆并在ＣＨＯ细胞中成功地表达 ,这种分泌型Ｅ2蛋白被纯化后在固相ＥＬＩＳＡ中应用 ,可用于确定人群血清ＧＢＶ ＣＥ2抗体水平、探讨这种抗体的产生在庚型肝炎临床流行病学中的意义。我们对 18例庚型肝炎病毒感染患者…     

庚型肝炎病毒感染对慢性丙型肝炎的临床与病理学影响

目的 探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染对慢性丙型肝炎（ＣＨ－Ｃ）的临床与病理学影响。方法 应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法对５３例经肝穿活检确诊的ＣＨ－Ｃ患者血清标本进行了ＨＣＶ－ＲＮＡ检测,并将合并与未合并ＨＧＶ感染者进行了临床与病理学对比。结果 ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１５例（２８．３０％）。合并与未合并ＨＧＶ感染者在临床表现、肝功能等生化指标水平、ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率及肝脏病理损害等方面差