血管内皮细胞生长因子对体外大鼠椎间盘细胞代谢的影响

目的 观察血管内皮细胞生长因子(vasctdar endothelial cell growth factor,VEGF)对体外培养大鼠椎间盘细胞及基质代谢的影响. 方法 建立大鼠椎间盘细胞培养体系,体外单层培养大鼠椎间盘细胞,取生长良好的第2代细胞,使用抗- Fas抗体诱导凋亡,加入不同浓度(10,100,1 000μg/L)的VEGF,影响椎间盘细胞的凋亡及代谢过程.利用流式细胞仪PI标记法检测椎间盘细胞凋亡情况;利用氯胺-T法和DMB比色法分别检测细胞培养液中羟脯氨酸和蛋白多糖的含量. 结果 (1)加入不同浓度VEGF(10,100,1 000μg/L)后,椎间盘细胞凋亡率为(87.62±11.06)％、(53.30 ±9.23)％和(16.75±4.21)％,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)随着VEGF浓度的增加(10,100,1 000 μg/L),羟脯氨酸含量[(6.71±0.33) μg/L、(9.12±0.41) μg/L、(11.58±0.12)μg/L]、蛋白多糖含量[(23.21±2.87)μg/L、(32.45±5.23) μg/L、(37.18±3.22) μg/L]明显增加.加入不同浓度VEGF后,羟脯氨酸和蛋白多糖的含量与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).羟脯氨酸含量、蛋白多糖含量与VEGF浓度呈正相关( ra=0.972,P＜0.01;rb=0.907,P＜0.01).结论 VEGF可以抑制体外培养的椎间盘细胞凋亡,促进椎间盘细胞基质中胶原及蛋白多糖的合成.     

人端粒酶反转录酶基因转染对人胎儿表皮干细胞增殖的影响

目的 探讨外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染对人胎儿表皮干细胞增殖的影响.方法 采用脂质体转染法,将含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT和卒载体质粒pIRES2-EGFP分别导人体外培养的人胎儿表皮干细胞,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选.用RT-PCR和Western blot检测表皮十细胞hTERT mRNA及其蛋白的表达,端粒重复序列扩增法(TRAP)-ELISA检测其端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期.结果 非转染组和空载体质粒转染组表皮干细胞弱表达hTERT mRNA和蛋白,而质粒转染组表皮干细胞强表达hTERT mRNA和蛋白;与非转染组和窄载体质粒转染组比较,质粒转染组表皮干细胞端粒酶活性的表达量显著升高,G_0/G_1期细胞比例明显下降,而S、G_2/M期细胞比例升高,增殖指数增加.结论 外源性hTERT基因转染能有效增强体外培养的人表皮干细胞hTERT mRNA和蛋白的表达及端粒酶活性,细胞增殖能力明显增强.     

人破骨细胞的体外培养及鉴定

 目的:探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞.方法:分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描电镜分析骨片骨陷窝面积.结果:用α-MEM培养液,10(-7)mmol/L浓度的1,25(OH)2VD3或50ng/ml浓度的RANKL和30ng/ml的M-CSF作为诱导剂,所培养的破骨细胞多核、特异性蛋白表达水平高、蚀骨能力强.结论:用DMEM培养液和α-MEM培养液培养均是一种能在体外诱导生成大量人破骨细胞的方法.同时,建议采用1,25(OH)2VD3作为诱导剂.     

肌损伤液对大鼠肌源性干细胞生物学性状的影响

目的 研究肌损伤局部肌损伤液对大鼠肌源性干细胞(muscle derived stem cells,MDSCs)生物学性状的影响.方法 采用差速贴壁法分离培养大鼠MDSCs.制造大鼠肌肉切割伤,用于肌损伤液的提取,比色法检测不同时相肌损伤液蛋白含量,筛选蛋白含量最高时相的肌损伤液作用于MDSCs.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和划痕实验检测肌损伤对大鼠MDSCs增殖和迁移的影响.免疫组化法及Westem blot检测肌损伤液培养后α平滑肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达.结果 体积分数为10%的伤口液在体外促进MDSCs的增殖和迁移的能力最强,肌损伤液能促进体外培养小鼠MDSCs生成α-SMA和Vimentin,且呈时间依赖关系.结论 肌损伤局部微环境肌损伤液一方面可通过诱导MDSCs的增殖、运动而直接参与修复;另一方面肌损伤液有促进MDSCs向肌成纤维母细胞分化,促进肌纤维化的作用.     

纯化后海藻硫酸多糖-蛋白复合物诱导人肝癌细胞SMMC- 7721 凋亡作用的研究

目的 研究海藻硫酸多糖蛋白复合物(Sulfated Polysaccharide-Protein Complex,SPPC)诱导肿瘤细胞凋亡的效率和机制.方法 选用人肝癌细胞株SMMC-7721为实验对象,用MTT法,流式细胞术,DNA凝胶电泳法,细胞形态学检测方法对纯化后不同剂量SPPC处理的SMMC-7721细胞凋亡情况进行观察分析;并用Western blot 法检测凋亡相关蛋白 procaspase-3的表达量变化.结果 纯化后SPPC中、高剂量组(2.0、10.0mg · ml-1)可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡, SMMC-7721细胞内凋亡相关蛋白procaspase-3有不同程度的表达降低,DNA凝胶电泳法检测到DNA ladder现象,流式细胞检测显示纯化后SPPC在10.0mg · ml-1浓度下出现了典型的二倍体峰.结论 一定浓度的海藻硫酸多糖蛋白复合物有诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,其生化机制可能是通过caspase-3 的活化来实现的.     

桑黄多糖提取工艺研究

目的优选中药桑黄活性多糖的最佳提取条件。方法采用热水浸提法得到粗多糖,经乙醇沉淀除去小分子糖类及游离蛋白,结果通过HPLC法检测。以多糖得率为考察指标,选择浸提温度、时间、固液比作为提取单因素进行了工艺研究,在此基础上通过L9（3^4）正交实验确定最佳提取工艺。结果中药桑黄活性多糖的最佳提取条件为：浸提温度100℃,提取时间8h,固液比1∶15。结论该工艺稳定性好,多糖量提取率高。     

重组人proEMAP1I／p43抑制新生血管生成与细胞凋亡关系研究

目的研究p43蛋白抑制新生血管生成是否通过诱导细胞凋亡来实现。方法用不同浓度的p43蛋白（0,10,50,100μg／m1）作用于HUVEC细胞12h,检测细胞体外管腔形成能力的变化,同时检测细胞周期变化,并通过胞内总半肽天冬酶（caspase）活性检测、caspase3和caspase7基因水平的变化及DNA片段化检测等方法,研究p43蛋白对HUVEC细胞凋亡的影响。结果与结论p43蛋白可明显抑制HUVEC细胞体外管腔形成,并随着p43蛋白浓度的升高抑制作用不断增强;不同浓度的I）43蛋白对HUVEC细胞周期没有明显影响,不能诱导HUVEC细胞凋亡。p43蛋白抑制新生血管的生成不是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

从电鳐电器官中提取N2-AchR纯品建立EAMG模型

目的从厦门海域单鳍电鳐的电器官中提取烟碱型乙酰胆碱受体（N2-AchR）纯品,用纯化的N2-AchR免疫Lewis大鼠,建立实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）动物模型。方法参照文献报道从电鳐电器官提取N2-AchR纯品,并采用SDS凝胶电泳蛋白定性鉴定及考马斯亮兰定蛋白含量;以纯提的蛋白主动免疫Lewis大鼠,共免疫3次,于末次免疫后第3日进行EAMG大鼠临床评分及攀网时间、肌电图、血清N2-AchRab含量、突触后膜上N2-AchR数目的检测。结果纯化的蛋白含量为1.097mg/ml（标准品为1mg/ml）;EAMG模型组与佐剂组比较,攀网时间明显降低（P〈0.01）;临床评分及肌电图第五个反应幅度衰减百分率显著升高（P〈0.01）;血清N2-AchRab含量明显增加（P〈0.01）;突触后膜上N2-AchR数目显著减少（P〈0.01）。结论从单鳍电鳐电器官纯提的N2-AchR蛋白成功诱导EAMG模型,为进一步研究重症肌无力创造了良好条件。     

蓝光致角膜基质细胞损伤的机制研究

正目的:探讨蓝光对角膜基质细胞活性的影响并探讨其损伤机制。方法:将飞秒激光基质微透镜取出术中取出的角膜基质透镜,进行组织贴块体外培养人角膜基质细胞,经蓝光或白光处理不同时间后,倒置显微镜下观察角膜基质细胞形态的变化,应用CCK-8法检测蓝光及白光对角膜基质细胞的增殖的影响的不同。采用蛋白印迹法及免疫荧光法检测蓝光及白光对角膜基质细胞自噬相关蛋白LC-3B及P62表达水     

PPARβ激动剂对肥大心肌细胞蛋白合成及IL-1β表达的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体β亚型（ PPARβ）激动剂对体外肥大心肌细胞蛋白合成及相关炎性因子IL-1β表达的影响。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞,以血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）诱导建立心肌细胞肥大模型,将适宜浓度PPARβ激动剂GW0742作用于心肌细胞,用3 H-亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率,RT-PCR及Western印迹方法分别检测IL-1βmRNA和蛋白水平的表达变化。结果与结论 GW0742在抑制肥大心肌细胞蛋白合成速率的同时,下调其IL-1βmRNA和蛋白的表达,而作为溶剂的DMSO则无此影响,说明GW0742抑制AngⅡ介导的体外心肌细胞肥大,其机制可能与调控炎性因子IL-1β密切相关。     

天冬胶栓塞作用的实验研究报告

目的:通过正常大鼠及荷原发性肝癌大鼠肝动脉给药研究天冬胶作为血管栓塞剂的可行性。方法:给正常大鼠及经二乙基亚硝胺(DENA)诱发原发性肝癌大鼠肝动脉注射天冬胶,注射时在X线透视下观察药物在肝脏内的分布情况。按时间分组处死后剖腹观察大鼠的肝、心、肺、肾、脑等器官的大体状况,并送病理检查。结果:①正常大鼠肝动脉内注入适量天冬胶(大约0.2 ml)后见肝动脉显示良好,可引起肝脏内散在的缺血梗死灶,而且大鼠可以存活。②如加大压力再注入0.1ml,将会造成正常大鼠肝动脉扩张及所有大鼠的死亡。③对荷原发性肝癌大鼠肝动脉内注射天冬胶后,药物除在肝动脉内分布外,还较多进入肿瘤组织内,且镜下见肿瘤结节内有大量梗死灶。结论:无论对正常大鼠,还是对荷原发性肝癌大鼠而言,天冬胶均为良好的末梢型血管栓塞剂。     

In-vitro phantoms for estimating diffusion tensor tractography

No literature has reported on in-vitro diffusion tensor tractography, although it is a useful method to visualize neuronal fiber projections in the living human brain. We applied this technique to phantoms of asparagus stems and bundled polyester yarn, and obtained tractography with high-quality images. On the asparagus stem phantom, straight tracts along the axis were displayed. On the polyester phantom, these tracts followed the course of the bundle whether it was straight or curved. These phantoms are useful for in-vitro evaluation of diffusion tensor tractography.     

生物衍生骨复合成骨细胞体内异位成骨研究

目的探讨生物衍生骨支架材料复合成骨细胞体内植入的成骨作用,了解其用于骨组织工程支架材料的可行性.方法将经物理、化学方法处理制得的复合型完全脱蛋白骨(CFDB)、部分脱蛋白骨(PDPB)、部分脱钙骨(PDCB)3种生物衍生骨支架材料分别与人胚骨膜成骨细胞体外复合培养1周后,植入裸鼠背部肌肉内作为实验组(30只),以单纯材料植入为对照组(30只),经大体观察、碱性磷酸酶活性测定、常规组织学检查及植入物成骨的定量判断,观测细胞-材料复合物的成骨作用.结果组织学检查证明,实验组3种材料皆有成骨作用,并随植入时间的延长,新骨形成增多;成骨含量分析表明,术后4周和8周,CFDB组组织学评分分别为2.90±0.57和4.60±0.70,显著优于其他实验组.对照组无成骨现象.结论生物衍生骨支架材料可作为骨组织工程支架材料,成骨能力以CFDB为最好.     

复合异种骨修复下颌骨缺损的临床研究

采用部分脱蛋白猪骨与自体红骨髓形成复合异种骨,将该骨植入下颌骨骨缺损区,临床应用11例,未发现免疫排斥反应。实践证明,它是一种理想的支架性骨移植材料,可以代管自体骨和异体骨移植。     

海藻硫酸多糖的分离纯化及其抗肿瘤作用研究

目的分离纯化海藻硫酸多糖,观察其对小鼠S180肿瘤的抑制效果,并从免疫调节和抗氧化的角度探讨其抗肿瘤作用机制。方法应用SephacrylS200凝胶柱检验所得海藻硫酸多糖组分均一性,以气相色谱技术研究其单糖组成;建立小鼠荷S180肿瘤模型,腹腔注射给药,观察抑瘤率、脾指数和胸腺指数,检测NK细胞杀伤活性、T淋巴细胞增殖以及肝脏和血清抗氧化活性。结果海藻硫酸多糖经SephacrylS200洗脱呈单一峰,说明组分比较均一,单糖组成以岩藻糖和半乳糖为主;低、中、高海藻硫酸多糖剂量组抑瘤率分别为4.89%、26.63%和29.35%,初步研究显示海藻硫酸多糖的抑瘤机制主要是免疫调节和抗氧化作用。结论所得海藻硫酸多糖均一性较高,通过免疫和抗氧化调节机制起一定的抗肿瘤作用。     

家兔血浆中甘露醇浓度测定

目的建立家兔血浆中甘露醇含量的测定方法。方法家兔血浆样品沉淀蛋白后,加入高碘酸钠使之氧化成为甲醛,再加入Nash试剂显色,在412nm处采用比色法进行测定。结果用本法测定的血浆中的甘露醇在0．50～6．00mg／ml范围内线性关系良好,相关系数r为0．9987;其平均加样回收率为97．59％,RSD为2．51％。结论采用本法测定血浆中甘露醇含量的精密度和重复性良好,并且操作简单易行。     

白花蛇舌草多糖诱导人胃癌细胞凋亡作用的研究

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养人胃癌7901细胞增殖抑制的影响及其作用机理。方法采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草多糖对人胃癌7901细胞增殖的影响;流式细胞技术检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;RT-PCR方法检测药物对人胃癌7901细胞P53和Bcl-2基因表达的影响。结果白花蛇舌草多糖能明显抑制人胃癌7901细胞的增殖,其作用48 h的IC50约为116.52 mg·L-1;流式细胞检测显示40 mg·L-1白花蛇舌草多糖联合5.0 mg·L-1顺铂组总凋亡率为69.42%,明显优于顺铂组的50.85%（P〈0.01）和40 mg·L-1白花蛇舌草多糖组的26.41%（P〈0.01）;PCR结果显示高、中浓度白花蛇舌草多糖可使人胃癌7901细胞的bcl-2 mRNA表达量降低,P53 mRNA表达量增加。结论白花蛇舌草多糖能明显诱导人胃癌7901细胞的凋亡,与顺铂联合可产生协同作用,其作用机制可能与降低细胞bcl-2和增加P53基因表达量有关。     

模拟微重力对芦笋植株^45Ca^2＋分布的影响

为探讨微重力环境对芦笋植株＾４５Ｃａ＾２＋分布的影响，在模拟微重力条件下，采用＾４５ＣａＣｌ２标记的放射自显影方法观察了芦笋幼苗根茎的走向、组织和细胞对微重力的反应，以及＾４５Ｃａ＾２＋在组织中的分布和运转等。结果表明：钙离子的分布与重力作用之间有显著的相关性。重力作用对钙离子吸收、分布和运转均有重要影响。     

铁合金加部分脱蛋白猪肋骨移植修复部分下颌骨缺损

作者报告5例下颌骨部分缺损,采用钛合金加部分脱蛋白猪肋骨移植修复。修复范围7～10cm。手术后一年随访,未发现免疫排斥反应,功能及外形满意。植入骨被宿主新生骨取代。部分脱蛋白猪肋骨免疫原性弱,组织相容性好,并具有骨诱导能力,但机械支持作用差,不能承受咬合力量。钛合金不但具有良好的组织相容性,而且机械支持作用好,能承受巨大咬合力量,但钛乏骨诱导能力。二者共同移植修复下颌骨缺损,发扬了其优点,弥补了其缺点。