重组人肝细胞生长因子对心脏移植冠状血管内膜iNOS表达的影响及意义

目的:探讨重组人肝细胞生长因子(rh-HGF)对大鼠心脏移植冠状血管内膜诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响及意义。方法:近交系健康雄性Wistar大鼠和SD大鼠,建立腹腔异位心脏移植模型。实验分3组:同系移植组,异系移植包括对照组(CsA组)和实验组(HGF组)。分别于术后15d、60d采集各组标本,沿冠状动脉切取心肌组织,免疫组化检测冠状血管内膜iNOS的表达,RT-PCR检测冠状血管内膜iNOSmRNA表达,观测冠状血管病理变化。结果:实验组移植心脏冠状动脉内皮细胞完整,内膜轻度增厚,管腔轻度狭窄,病理改变明显轻于对照组。iNOS在移植心脏冠状动脉内膜的表达,实验组均明显高于对照组及同系移植组(P<0.01)。结论:rh-HGF通过上调移植心脏冠状血管内膜iNOS表达,可保护冠状血管内皮功能,预防移植心脏血管病的发生。     

左旋精氨酸对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的　观察左旋精氨酸 (L Arg)对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响 ,探讨其作用机制。方法　建立大鼠自体静脉移植模型。分L Arg组和对照组。L Arg组于术前 7天开始用L Arg灌胃 (每天 1.0g kg)直至取材 ;对照组用等量生理盐水灌胃 ,于术后 1、2、4、6周及 8周取材。观测新生内膜与中膜面积比 (I M)、细胞间黏附分子 (ICAM 1)及细胞周期素A(CyclinA)的表达。结果　术后 2、4、6周及 8周I ML Arg组均显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,术后不同时相ICAM 1及CyclinA表达水平较术前正常静脉均有明显增加 ,L Arg组ICAM 1及CyclinA蛋白阳性细胞百分比显著低于对照组 (P <0 .0 1)。结论　L Arg可以抑制移植静脉内膜增生病变 ,其机制与增加一氧化氮释放 ,减少单核细胞与内皮细胞的黏附 ,抑制血管平滑肌细胞增殖有关。     

一氧化氮合酶在急性肝功能衰竭大鼠主要器官中表达的变化

目的：从分子和蛋白水平揭示在急性肝功能衰竭（ALF）时不同一氧化氮合酶（NOS）诱导产生的一氧化氮（NO）在肝、肺、肾脏和肠组织中表达的变化。方法：雄性Wistar大鼠60只，随机分为6组：假手术（SO组）、ALF6h组、ALF12h组、L－Arg组、L－NAME组、L－Arg L-NAME组，每组10只，L－Arg用量300mg/kg,L－NAME用量30mg/kg；用原位杂交和免疫组化方法检测肝、肺、肾组织eNOSmRNA、iNOSmRNA表达和小肠、大肠eNOS和iNOS表达。结果：ALF6h组肺eNOSmRNA表达明显增加，肝、肺、肾iNOSmRNA表达亦显著增加，而ALF12h组则明显降低（P＜0．05）。应用L－Arg在ALF6h组肝、肾iNOSmRNA表达明显降低，而应用L－NAME和（或）应用L－Arg有ALF6h组肺eNOSmRNA及肝、肺、肾iNOSmRNA表达均显著降低（P＜0．05）；ALF6h组小肠、大肠黏膜iNOS表达显著增加，而eNOS表达在6h、12h组明显降低，尤其在12h组降低更明显（P＜0．05）；应用L－Arg和（或）应用LK－NAME时，小肠、大肠黏膜eNOS、iNOS表达均明显降低（P＜0．05）；应用L－NAME大肠黏膜eNOS、iNOS表达均明显降低（P＜0．05）。结论：ALF早期肺、肾组织iNOSmRNA表达显著增加，小肠、大肠黏膜eNOS活性降低，iNOS活性增加，应用NO供体能够降低肝、肺、肾iNOSmRNA 的应用；应用L－Arg和（或）L－NAME时，能够降低小肠、大肠黏膜iNOS表达，可能减轻NO对肝、肺、肾和肠黏膜的损害。     

大白兔颈动脉移植后血浆一氧化氮浓度的变化

目的:探讨大白兔颈动脉移植后血浆一氧化氮(NO)浓度的变化及其意义.方法:建立大白兔颈动脉移植模型,根据移植前供体血管不同处理方法将30只大白兔随机分为A(自体血管移植组)、B(无预处理异体血管移植组)、C(青霉素和链霉素处理后常温保存异体血管移植组)、D(青霉素和链霉素处理后液氮冷冻保存异体血管移植组)4组.观察移植后血管形态变化.测定并比较移植后1,2,3周血浆NO浓度.结果:B组血管移植后宿主血浆NO平均含量显著高于A组和D组(P＜0.05);C组血浆NO含量和D组与A组无显著差异(P＞0.05).在血管形态上,A组结构正常,仅有炎性细胞浸润.其余各组术后1周可见内膜开始增生,2周内膜明显增厚,3周内膜增厚最显著.其中B组改变最严重.结论:青霉素和链霉素可降低供体血管的抗原性及宿主诱导型一氧化氮合酶活性;液氮冷冻保存可能具有协同效应.     

一氧化氮合酶在肝纤维化及肝硬化大鼠肝脏组织中的表达

目的 探讨一氧化氮合酶在肝纤维化及肝硬化大鼠肝脏组织中的表达。方法 将18只Wistar大鼠分为三组：正常对照组（NCG）、复合因素致肝纤维化组（HFG）、肝硬化组（HCG）。观察外周血浆内毒素（ET）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和肝组织匀浆NO水平，免疫组化染色分析内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在各组肝组织中的表达。结果 血浆ET和ALT、肝组织匀浆NO在HF组和HC组明显高于NG组。eNOS和iNOS的表达均为HF组和HC组明显高于NC组，HF组的iNOS表达高于eNOS表达而HC组的eNOS表达高于iNOS表达。直线相关分析肝组织匀浆NO和外周血浆盯呈高度正相关。结论 eNOS和iNOS可能都参与了肝纤维化及肝硬化时NO的生成，且肝纤维化时以iNOS生成的NO为主，肝硬化时在NO的生成中eNOS和iNOS都起重要作用，可能与内毒素的诱导有关。     

诱生型一氧化氮合酶mRNA的表达对心脏移植术后移植物血管病的抑制作用

目的探讨诱导诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达以促进NO合成对移植物血管病(CAV)形成的抑制作用。方法建立大鼠异位(腹部)心脏移植模型,受者在接受环孢素A腹腔注射的同时,按分组要求分别给予左旋精氨酸(iNOS mRNA组)、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂左旋精氨酸甲酯(L-NAME组),术后测定血浆NO3-的含量、移植心脏冠状血管iNOS mRNA的表达以及冠状动脉内膜与中膜厚度比的改变。结果术后2周和4周,     

HCMV先天性感染胎鼠脑组织中iNOS基因的表达

目的　研究人巨细胞病毒 (HCMV)先天性感染小鼠及在不同剂量诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂和促进剂的干预下脑组织中的iNOS基因表达情况。方法　将 6～ 8周龄BALB/c小鼠分为 6组 ,每组 6只 ,♀♂各半。A组腹腔注射HCMV 1 0ml,B组、C组腹腔注射HCMV 1 0ml后2d ,分别每天腹腔注射氨基胍 (AG) 2 0 0mg/kg、2 0mg/kg ,D组、E组腹腔注射HCMV 1 0ml后 2d ,分别每天腹腔注射左旋精氨酸 (L Arg) 30 0mg/kg、30mg/kg ,F组为DMEM对照组 ,每天每只 0 2ml。持续 17d。以上各组在孕鼠受孕第19天 ,剖腹取胎鼠 ,观察各组胎鼠生长发育及体重 ,有无皮下出血、淤血等情况 ,同时取胎鼠脑组织 ,作以下检测 :①硝酸还原酶法测定脑组织匀浆中NO代谢产物亚硝酸盐的含量。②RT PCR测iNOSmRNA的转录。结果　HCMV感染各组孕鼠在孕 19d ,其体重明显低于对照组 ,有部分胎鼠发育迟缓并可见明显的出血现象。感染各组胎鼠脑组织匀浆NO代谢产物明显高于DMEM对照组 (P <0 0 0 1) ,以B组尤为明显 ,A、C、E组间无差异显著性。RT PCR在感染各组均扩增出iNOSmRNA特异性条带表达 ,B组信号量最高 ,D组信号最弱。DMEM对照组未检测到iNOS特异性条带。结论　HCMV先天性感染可刺激胎鼠脑组织iNOS的表达 ,其表达产物NO可能参与了脑组织病理损伤     

S180移植瘤NO水平变化研究

目的探讨S180移植瘤肿瘤发展中肿瘤组织及宿主小鼠血浆中NO水平变化及发生机理。方法利用Km小鼠复制S180移植瘤模型，采用硝酸还原酶法测定肿瘤组织匀浆及血浆NO2^-／NO3^-水平，免疫组化染色方法检测肿瘤组织iNOS的表达。结果荷瘤时间第10、15天的肿瘤匀浆和血浆中的NO2^-／NO3^-水平显著高于5天组和对照组，荷瘤15天的iNOS PU值显著高于5天、10天组（P〈0．05），病程发展中肿瘤组织iNOS表达与瘤重有正相关关系。结论随肿瘤病程发展，肿瘤组织iNOS表达增加，组织及宿主血浆的NO2^-／NO3^-水平升高。     

一氧化氮在舌鳞癌血管生成中的作用

【目的】探讨一氧化氮 (NO)在舌鳞癌血管生成中的作用。【方法】原位杂交检测 6 8例舌鳞癌活检组织常规石蜡包埋标本中诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA的表达 ,分别以血管内皮生长因子 (VEGF)多克隆抗体、Ⅷ因子单克隆抗体免疫组化检测上述舌鳞癌标本中VEGF的表达和微血管密度 (MVD)。【结果】①舌鳞癌iNOSmRNA表达阳性组微血管密度显著高于阴性组 (P <0 0 0 1) ;在iNOSmRNA表达阳性组 ,iNOSmRNA阳性表达水平与MVD呈高度显著性正相关 ,r =0 6(P <0 0 0 1)。②舌鳞癌iNOSmRNA表达阳性组VEGF阳性率显著高于阴性组 (P <0 0 5 ) ;iNOSmRNA阳性组中 ,iNOSmRNA阳性表达水平与VEGF阳性表达水平呈显著性正相关 ,r=0 5 (P <0 0 5 )。【结论】iNOSmRNA阳性表达与舌鳞癌血管生成正相关 ,NO在舌鳞癌血管生成中起着重要作用。     

一氧化氮对大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响

目的 观察一氧化氮(NO)对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响.方法 用含10%小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,随机分为对照组和不同浓度NO供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(0.5、1、2、5mmol/L)干预组,应用反转录一聚合酶链反应及Western blot技术结合光密度扫描分析,观察NO对血管平滑肌细胞的骨桥蛋白表达的影响.结果 不同浓度NO供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺均明显抑制血管平滑肌细胞的骨桥蛋白mRNA和蛋白的表达,且具有剂量依赖性促进作用.结论 NO能抑制血管平滑肌细胞骨桥蛋白的表达.     

高胰岛素水平对血管平滑肌细胞NO生成的影响

培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）,检测高胰岛素（HI）对VSMC膜蛋白激酶C（PKC）活性的影响,并采用硝酸还原酶法和免疫印迹法检测HI加或不加PKC抑制剂－H7对脂多糖（LPS）＋γ－干扰素（γ－IFN）诱导NO生成和一氧化氮合酶（iNOS) 表达的影响。结果：HI预处理的VSMC,膜PKC活性明显高于对照（P＜0．05）,LPS＋γ－IFN诱导NO生成显著低于对照（P＜0．01）,加H7培育,NO的生成量较HI处理组明显提高,但低于对照（P＜0．01）。免疫印迹示HI处理的VSMC,iNOS表达下降,提示：高胰岛素血症可能通过激活VSMC膜PKC,部分抑制iNOS表达,减少NO产生。     

高胰岛素水平对血管平滑肌细胞NO生成的影响

培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC) ,检测高胰岛素 (HI)对VSMC膜蛋白激酶C(PKC)活性的影响 ;并采用硝酸还原酶法和免疫印迹法检测HI加或不加PKC抑制剂 -H7对脂多糖 (LPS) +γ -干扰素 (γ -IFN)诱导NO生成和一氧化氮合酶 (iNOS)表达的影响。结果 ,HI预处理的VSMC ,膜PKC活性明显高于对照 (P <0 .0 5 ) ;LPS +γ -IFN诱导NO生成显著低于对照 (P <0 .0 1) ,加H7培育 ,NO的生成量较HI处理组明显提高 ,但低于对照 (P <0 .0 1)。免疫印迹示HI处理的VSMC ,iNOS表达下降。提示 :高胰岛素血症可能通过激活VSMC膜PKC ,部分抑制iNOS表达 ,减少NO产生。     

动脉旁路移植术后静脉桥再狭窄通路的机制

  目的  探索动脉旁路移植术后静脉桥再狭窄形成的信号通路机制。  方法  40只家兔随机分2组，假手术组和模型组，假手术组分离颈静脉、颈动脉，不做移植，模型组游离颈静脉，截取一段颈静脉方向调转后与颈动脉做端侧吻合，结扎两吻合口间的颈动脉，建立动脉旁路移植兔模型，移植后2 d、2周假手术组取出颈静脉，模型组取出移植静脉，肉眼观察，组织切片HE染色量化管腔狭窄程度，免疫组化检测p-p38表达水平，进行对比分析。  结果  与假手术组比较，模型组移植静脉2周后管腔显著性狭窄（P < 0.05），静脉移植后2 d、2周p-p38表达均显著性升高（P < 0.05），其中移植后2 d显著高于移植2周（P < 0.05）。  结论  冠状动脉旁路移植静脉桥再狭窄信号传导机制可能通过p38-MAPK通路。     

病毒载体对大鼠移植静脉的影响

目的探讨腺病毒载体转染后对大鼠移植静脉的影响。方法选用Wistar大鼠间置移植颈静脉于同侧颈总动脉,术后移植静脉行HE染色和VG染色,观测血管内膜厚度。应用免疫组织化学染色,观察血管内膜平滑肌细胞（SMC）内增殖细胞核抗原（PCNA）表达及增殖情况。于倒置荧光显微镜,以紫外光激发观察测定腺病毒转染率。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western蛋白印迹检测细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）水平。结果术后3d,GFP表达较高;术后10d,GFP表达有所下降;术后30d,GFP几乎没有表达。移植术后10d试验组及对照组可见明显内膜增生。移植术后30d试验组及对照组内膜增生减轻。试验组及对照组与正常非移植静脉相比,内膜增生明显（P〈0．05）,试验组较对照组内膜增生稍明显,但差异无统计学意义。实验中正常静脉平滑肌细胞PCNA阳性细胞极少,对照组与试验组术后10d,内膜与中膜SMC的PCNA阳性细胞增多,增殖达到高峰。术后30d中膜SMC的PCNA阳性细胞明显减少。试验组及对照组与正常非移植静脉相比,PCNA阳性细胞增高明显（P〈0．05）。试验组较对照组PCNA阳性细胞稍多,但差异无统计学意义。正常静脉ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白表达很少,对照组移植后3d部分细胞即出现阳性表达,10d表达最强,30d仍较高。与正常静脉组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。试验组较对照组表达更高,但与对照组比较,差异无统计学意义。结论腺病毒载体能高效地进行体内基因转移,作用时间短暂。腺病毒载体促进移植静脉的血管内SMC活化、增多、血管内膜增生、ICAM-1、VCAM-1的表达的增加,腺病毒转染到移植静脉血管壁后产生炎症、内膜增生等效果,混淆了目的基因的效果。     

光动力疗法在预防动静脉内瘘再狭窄中的作用

目的 观察光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对动静脉内瘘(native arteriovenous fistulae,AVF)通畅率和静脉端内膜增生的影响.方法 将32只健康新西兰白兔(体质量2.0～2.5 kg,不区分雌雄)完全随机等分为对照组(n=8)、单纯光敏剂组(n=8)、单纯光照组(n=8)、实验组(n=8).建立兔颈部AVF模型,按组别进行不同处理.于术后第2、8、15、22天及第29天用超声检测血流情况.术后4周取近吻合口处静脉观察内膜增生情况并测量厚度.通过S-P检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达,并评估其增殖活性,原位末端标记法检测细胞凋亡情况.结果 术后第15、22天及第29天,实验组AVF血流量明显高于其余3组(P＜0.05);术后4周,实验组内膜增生厚度明显小于其余3组(P＜0.05);PCNA表达明显弱于其余3组(P＜0.05);中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡率明显高于其余3组(P＜0.05).结论 光动力治疗能有效促进VSMCs细胞凋亡,抑制血管内膜增生,从而有效提高AVF血流量.     

核因子κB的小干扰RNA防治自体移植静脉再狭窄的实验研究

目的   探讨核因子κB（NF-κB）的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA)对大鼠自体静脉移植术后血管内膜增殖及相应炎性细胞因子表达的影响。方法    雄性Wistar大鼠80只,随机分为空白组（A组,n=10）;自体静脉移植组（B组,n=18）;空载体组（阴性质粒脂质体医用蛋白胶复合物转染移植静脉,C组,n=26）和基因转染组（NF-κB siRNA阳离子脂质体医用蛋白胶复合物转染自体移植静脉,D组,n=26）。B、C及D组需制作大鼠自体颈外静脉——腹主动脉移植模型,每组4个时点( 3,7,14,21d),相应时间点取移植静脉观察病理形态学变化,免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）,PCR测定单核细胞趋化因子（MCP-1）和肿瘤坏死因子-α（TNF α）的mRNA含量,Western blot测定NF-κB p65蛋白的表达。结果    自体静脉移植术后,B、C和D组移植静脉血管桥均出现内膜增生变厚,新生内膜有大量PCNA阳性细胞,中膜平滑肌细胞增生活跃。术后3d,B组和C组 MCP-1 mRNA及TNF-αmRNA表达水平明显高于A组（P＜0.05）,但D组水平明显低于C组（P＜0.05）。术后7d,B、C组NF-κB p65蛋白表达水平明显高于A组（P＜0.05）,与C组相比,D组NF κB p65蛋白水平明显降低（P＜0.05）。结论     NF-κB的基因表达产物和MCP-1mRNA、TNF-αmRNA的表达有一定相关性,自体静脉移植术后新生内膜增生及炎性细胞因子表达在不同时相点呈动态变化。转染NF-κB siRNA阳离子脂质体复合物可抑制NF-κB的表达,减少MCP-1及TNF-αmRNA的表达,从而抑制移植静脉内膜增生和VSMC增殖,减轻再狭窄。     

家兔静脉移植桥血管内膜c-myc蛋白的表达

目的 :研究c -myc基因在冠脉旁路移植术静脉桥中的表达。方法 :2 5只新西兰大耳白兔随机分为 5组 ,每组 5只。将颈外静脉间置于同侧颈总动脉 ,分别在术后 6h ,2d ,7d ,14d ,2 8d取静脉桥。应用免疫组化和形态学方法观察不同时间c -myc蛋白的表达 ,采用计算机图像分析法测量静脉桥内膜、中膜厚度及其比值。结果 :7d时静脉桥内膜和中膜厚度较 6h明显增厚 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。 14d ,2 8d时静脉桥内膜和中膜厚度较7d没有明显变化 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。移植后 6h至 7d ,c -myc蛋白血管平滑肌细胞逐渐增多 ,于 7d达高峰 (P <0 .0 1)。移植后 14d ,2 8dc -myc蛋白血管平滑肌细胞开始下降 ,与 7d相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :c-myc蛋白表达与内膜增殖有密切联系 ,可作为血管损伤后内膜增殖的早期监测指标     

一氧化氮在大鼠胰腺缺血/再灌注中的变化及作用

目的:探讨一氧化氮(NO)在大鼠胰腺缺血/再灌注损伤中的变化及作用.方法:雄性Wistar大鼠随机分成3组:A、B组胰腺缺血30 min后,再灌注2,4,6,12,24h.B组再灌注前使用诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂,A组仅给与生理盐水.C组仅行假手术.进行大鼠血清中NO水平和淀粉酶活性检测,胰腺组织形态学观察和免疫组化分析.结果:再灌注4 h后,A组iNOS表达于胰腺组织,B组无表达.此时A组NO水平达到高峰,淀粉酶活性开始升高,均高于B组(P＜0.01).再灌注6 h后,A组显微镜下观察到胰腺损伤的表现,B组未见.C组无iNOS表达,血清NO水平和淀粉酶活性均在正常范围.结论:随着再灌注时间的延长,iNOS表达于胰腺组织,NO在大鼠胰腺缺血/再灌注损伤中的有害作用占主导地位.     

局部应用VEGF-165抑制兔颈移植静脉内膜增生的研究

目的 探讨局部应用VEGF-165抑制兔颈移植静脉内膜增生的机制。方法 健康家兔24只,均建立颈外静脉-颈总动脉移植模型并分为对照组及实验组。对照组移植静脉周围仅应用Pluronic-F-127,实验组移植静脉周围应用Pluronic-F-127+VEGF-165。观察静脉移植血管外膜、内膜增生情况,移植静脉VEGF及eNOS的表达量,增殖细胞核抗原PCNA表达情况。分析外膜厚度与静脉桥血管内膜增生的关系。结果 与对照组相比,实验组移植静脉内膜增厚明显减轻、而外膜明显增厚,移植静脉eNOS的表达量明显增加;实验组移植静脉平滑肌细胞向外膜方向迁移;术后免疫组化检查显示,实验组移植静脉血管壁内膜VEGF-165的蛋白含量高;两组移植静脉PCNA的表达量未及明显差异。结论 VEGF-165可以通过增加内皮eNOS表达加速移植静脉血管内皮化,促进移植静脉外膜生长促进平滑肌向外膜迁移减轻移植静脉内膜增厚。     

Effects of Naoxintong on atherosclerosis and inducible nitric oxide synthase expression in atherosclerotic rabbit

Background High levels of nitric oxide (NO) produced by inducible NO synthase (iNOS) have been associated with atherosclerosis processes.Naoxintong is a traditional Chinese medicine for treatment of ce...