人巨细胞病毒对红系祖细胞的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）的分化和增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法：取１５例脐血标本,用红系祖细胞单向半固体培养技术,观察３种不同浓度的ＨＣＭＶ ＡＤ１６９株对ＣＦＵ－Ｅ集落形成的影响,用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ检测集落中的ＨＣＭＶ ＤＮＡ与ｌａｔｅ ｍＲＮＡ。结果：３个感染组ＣＦＵ－Ｅ均减少,与正常对照组比较,分别为１１．４６％、２１．８８％、３４．４５％（Ｐ     

HCV重组体转染细胞系的研究

目的：建立ＨＣＶ重组体转染ＳＭＭＣ７７２１肝缲细胞模型。方法：采用ＦＵＧＥＮＥ＾ＴＭ６转染法，然后用ＲＴ－ＰＣＲ法测定细胞内重组体ｍＲＮＡ瞬时表达情况：结果：６７．５％的培养孔可筛选到转染细胞表达重组体ｍＲＮＡ。结论：该转梁法效率高，建立的细胞模型可用于筛选抗病毒转录的药物。     

黑色素瘤抗原-1基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原－１（ＭＡＧＥ－１）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,为用ＭＡＧＥ－１基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗提供依据。方法 用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对４５例ＨＣＣ患者组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－１ｍＲＮＡ表达情况进行了研究,对６例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物的目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定,并以测序证实为ＭＡＧＥ－     

RT-PCR法测定脂肪组织解偶联蛋白mRNA表达水平的探讨

目的：建立解偶联蛋白（ＵＣＰ）ｍＲＮＡ表达水平的竞争ＲＴ－ＰＣＲ测定法;并应用该方法测定ＵＣＰ ｍＲＮＡ在成人腹膜内与腹膜外脂肪组织的表达水平。方法：应用剪接重叠延伸ＰＣＲ（ＳＯＥ－ＰＣＲ）合成中央缺失型ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ。ＵＣＰ ｍＲＮＡ与作为内设标准的ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ用相同的引物在同一反应体系中进行逆转录反应和ＰＣＲ扩增。通过比较ＵＣＰ ｍＲＮＡ产物和ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ产物的放射性信号强度求     

RT-PCR 扩增MUC1检测胃癌微转移研究

目的 以ＲＴ－ＰＣＲ检测胃周淋巴结胃癌转移细胞并评价其临床应用价值。方法 以ＭＵＣ１ｃＤＮＡ的特异旬为ＲＴ－ＰＣＲ引物,酶切分析法及系列稀释该法的特异性和敏感性进行分析,对临床收集的胃周淋巴样品作ＲＴ－ＰＣＲ检测及产物ＤＮＡ点杂交验证。结果 （１）胃及胃癌组织均存在ＭＵＣ１ｍＲＮＡ的表达;（２）该扩增体系具有较好的特异性;（３）敏感性可达１ｐｇＲＮＡ,相当于从１０＾５个淋巴细胞中检出１个胃癌细胞;     

uPAR mRNA测定及其在U937细胞中的表达

目的 研究凝血酶、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ等对Ｕ９３７细胞表达ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ的影响,观察凝血系统、炎症介质与纤溶功能变化间的关系。 方法 建立并应用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定培养Ｕ９３７细胞的ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ。 结果：１．经测定批间变异系数（ＣＶ间）确认了ＲＴ－ＰＣＲ法测定ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ的稳定性;２．以不同浓度凝血酶刺激２４ｈ,对Ｕ９３７细胞表达ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ有抑制和促进两种不     

检测人巨细胞病毒的免疫—PCR方法的建立

目的：依据免疫－ＰＣＲ基本原理，建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的免疫＿ＰＣＲ方法。方法：我们建立的免疫－ＰＣＲ方法与酶联免疫ＥＬＩＳＡ不同之处是，用ＰＣＲ扩增生物素化线性ＰＢＶ２２０ＤＮＡ代替ＥＬＩＳＡ的酶催化底物，经琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色观察分析扩增产物异条带，判断结果。结果：用本法检测ＨＣＭＶ的敏感性高于ＥＬＩＳＡ法１０＾３－１０＾５倍，可检测到５个感染ＨＣＭＶ细胞；而检测ＨＳ     

正常SD大鼠心血管系统内皮素转换酶表达水平及意义

目的：探讨正常ＳＤ大鼠心脏及血管（动脉、静脉）内皮素转换酶（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ＥＣＥ）ｍＲＮＡ的分布。方法：半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测组织中的ＥＣＥ ｍＲＮＡ,同时以甘油醛－３－磷酸脱氢酶（Ｇｌｙｃｅｒ－ａｌｄｅｌｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＧＡＰＤＨ）作内参照。结果：正常ＳＤ大鼠心脏各部位及血管（动脉、静脉）ＥＣＥ ｍＲＮＡ的     

SURGICAL TREATMENT OF BONE TUMORS IN CONJUNCTION WITH MICROWAVE－INDUCED HYPERTHERMIA AND ADJUVANT IMMUNOTHERAPY A PRELIMINARY

ＳＵＲＧＩＣＡＬＴＲＥＡＴＭＥＮＴＯＦＢＯＮＥＴＵＭＯＲＳＩＮＣＯＮＪＵＮＣＴＩＯＮＷＩＴＨＭＩＣＲＯＷＡＶＥ－ＩＮＤＵＣＥＤＨＹＰＥＲＴＨＥＲＭＩＡＡＮＤＡＤＪＵＶＡＮＴＩＭＭＵＮＯＴＨＥＲＡＰＹＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＲＥＰＯＲＴＦａｎＱｉｎｇｙ...     

体外感染后巨细胞病毒即刻早期基因转录及细胞结构变化的研究

目的：研究巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染后即刻早期基因转录及细胞结构的变化。方法：用ＨＣＭＶＡＤ１６９株感染人胚肺成纤维细胞,通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）动态检测感染后不同时间ＨＣＭＶ即刻早期基因（ＩＥＧ）ｍＲＮＡ转录,同时在电镜下观察细胞结构变化的特点。结果：ＨＣＭＶ感染细胞６ｈＩＥＧｍＲＮＡ开始转录,并持续到９６ｈ;感染初期（６～１２ｈ内）胞体肿胀,内质网（ＥＲ）囊腔膨大,１２～２４ｈ可见典型的“猫头鹰眼”样包涵体,细胞变圆,晚期（４８ｈ后）细胞灶性脱落,胞质退缩,ＥＲ少见,核中见待出核的成熟病毒颗粒。结论：ＨＣＭＶＩＥＧ在病毒复制过程中持续转录,并伴有细胞结构的病理变化,因此ＨＣＭＶＩＥＧ可作为病毒活跃复制的监测指标。     

免疫组化法和RT-PCR法检测胃癌淋巴结微转移

目的 :应用免疫组化方法和RT PCR方法检测常规病理检查淋巴结阴性胃癌之淋巴结微转移 ,比较两种检测方法的敏感性同时探讨检测胃癌淋巴结微转移的临床意义。方法 :采用CEA单克隆抗体免疫组织化学方法和CEAmRNART PCR方法分别检测 11例常规病理检查淋巴结阴性胃癌的 2 0 5枚淋巴结。结果 :CEA单克隆抗体免疫组织化学法检出 18枚 (8.8% )微转移淋巴结 ,而CEAmRNART PCR法共检出 46枚 (2 2 .4% )微转移淋巴结 ,两者比较差异显著 (P <0 .0 1)。 11例患者中有 6例存在淋巴结微转移 ,此 6例患者的重新TNM分期均有所上升。随访中发现有 2例微转移阳性患者分别于根治术后第 6、9个月出现复发。结论 :应用CEA单克隆抗体免疫组织化学方法或CEAmRNART PCR法可以检测出常规病理检查遗漏的胃癌淋巴结微转移灶。而且RT PCR法检测胃癌淋巴结微转移较免疫组织化学法更为敏感。检测常规病理检查淋巴结阴性胃癌的淋巴结微转移 ,有助于临床准确分期 ,判断预后及指导治疗。     

结直肠癌淋巴结微转移的检测及其临床意义

目的 探讨结直肠癌淋巴结微转移的发生率,研究淋巴结微转移与结直肠癌转移复发的关系。方法 应用免疫组化LSAB法检测结直肠癌肿瘤组织和淋巴结 癌胚抗原（CEA）的表达,并采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法检测结直肠癌淋巴结癌胚抗原（CEA）的表达。结果 免疫组化法示50例Dukes‘B期患者128枚淋巴结中发现10枚淋巴结CEA表达,有淋巴结CEA表达的6例患者全部在术后5年内出现肿瘤转移或复发,而其他44例患者只有5例出现肿瘤转移或复发。RT－PCR法示11例肠癌的44枚淋巴结中有12枚淋巴结CEA mRNA表达,而病理组织学检查（HE染色）仅发现3枚淋巴结存在肿瘤转移,免疫组化法发现4枚淋巴结CEA表达。结论 存在淋巴结微小转移的大肠癌患者预后较差,基于RT－PCR的CEA检测可作为早期检测结直肠癌淋巴结微小转移的一种手段,为结直肠癌术后辅助化疗提供理论依据。     

检测非小细胞肺癌患者纵隔淋巴结微转移的临床意义

目的:采用分子生物学方法检测非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)患者纵隔淋巴结微转移情况,分析其与患者临床特征之间的关系,为临床合理的纵隔淋巴结廓清范围提供依据,使术后外科病理分期更加精确,以更好地拟定术后治疗方案。方法:随机选取2006年11月~2007年12月间在内蒙古医科大学附属医院胸心外科行肺癌根治术后的37例NSCLC患者为对象,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测其术后常规病理学检查阴性的纵隔淋巴结中MUC1 mRNA基因的表达,以明确是否存在微转移灶。分析非小细胞肺癌患者纵隔淋巴微转移与原发肿瘤大小、年龄、性别、吸烟、肿瘤位置、组织学类型、分化程度、外科病理分期(P-FNM)、淋巴结大小、淋巴结融合之间的相关性。结果:在37例患者常规病理学检查阴性的50枚纵隔淋巴结中,13例患者的20枚淋巴结检出微转移灶,阳性率为35.1%(13/37),其中P-N0期纵隔淋巴结微转移率为29.2%(7/24),P-N1期为46.2%(6/13)。微转移与原发肿瘤大小、年龄、性别、吸烟之间无明显相关性(P>0.05),但与肿瘤位置、组织学类型、分化程度、分期、淋巴结大小、淋巴结融合情况等有一定的相关性(P<0.05)。外科病理分期(p-TNM)与分子TNM分期方法之间总符合率为64.9%,两者之间有统计学差异(P<0.05)。结论:RT-PCR方法检测纵隔淋巴结MUClmRNA基因对非小细胞肺癌患者的预后及指导术后治疗有临床应用价值,并有望成为非小细胞肺癌患者手术后精确TNM分期一个重要的手段,可使目前的肿瘤TNM分期更加精确。     

巢式RT-PCR技术检测肺癌76例微量癌细胞转移分析

目的 :建立检测肺癌患者外周血及淋巴结微转移癌细胞的敏感的分子检测方法 ,并探讨其临床应用的意义。方法 :采用巢式逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术特异引物扩增 CK19- m RNA,以检测肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19- m RNA的表达情况。分析CK19- m RNA扩增结果与患者临床指标的关系。结果 :76例肺癌患者外周血标本中 39例CK19- m RNA阳性 ,阳性率为 5 1 .3% ,2 7例肺良性病变中仅 1例阳性 ,阳性率为 3.7% ,1 5例健康对照者均为阴性。全部患者 1 5 7枚淋巴结中 CK19- m RNA检测出阳性率为 38.9%( 61 / 1 5 7) ,常规病理方法检出阳性率为 1 4.6% ( 2 3/ 1 5 7) ,两种方法比较 ,有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ,且 HE染色阴性的 1 34枚淋巴结中 ,经 RT- PCR法证实存在癌转移的阳性率为 2 8.3% ( 38/ 1 34) ,两组比较有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 :巢式 RT- PCR是一种特异性和敏感性均较高的癌细胞微量转移检测方法 ;可能有助于肺癌细胞微转移的早期诊断。     

Detection of occult metastases in lymph nodes from patients with colorectal ca rcinoma by reverse transcriptase-polymerase chain reaction

Objective To detect occult metastases in lymph nodes from patients with colorectal carcino ma and its clinical significance.Methods The metastases in 260 lymph nodes from 39 histologically verified colorectal can cer patients were studied by both hematoxylin-eosin (HE) staining and cytokerat in-20 (CK20) specific RT-PCR. Ten normal lymph nodes were served as negative controls, and HT29 colon cancer cell line and 5 colorectal cancer specimens as p ositive controls. Results Ten normal lymph nodes were CK20-negative, HT29 cells and 5 tumor specimens wer e all CK20-positive. All 29 lymph nodes from 16 patients which confirmed metas tases by HE staining exhibited CK20 positive expression; an additional 28 lymph nodes from 5 patients with no histologically detectable metastases expressed CK2 0 mRNA, i.e. presence of metastases. The difference of the positivity was sig nificant (11.1% vs 21.9%, P&lt;0.01). According to the HE staining, the cas es of Dukes’ A, B, C and D were 3, 20, 12 and 4, respectively. In the 20 patien ts of Dukes’ B stage, 5 of them had CK20-positive lymph nodes. Conclusion CK20-specific RT-PCR is a highly sensitive, specific and simple method for det ecting occult metastases in lymph nodes.     

CT、病理和MAGE基因在诊断非小细胞肺癌淋巴结转移的对照研究

目的:比较CT、病理和MAGE-1、-2、-3、-4基因在诊断非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结转移中的意义。方法:采用CT、病理和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑色素瘤抗原(MAGE)基因3种方法对53例患者的111组淋巴结分别进行癌转移的检测。结果:80组常规病理检查阴性淋巴结中4种MAGE基因至少有一种表达的淋巴结有19组,几率是23.8%(19/80)。31组常规病理检查阳性淋巴结标本中4种MAGE基因至少有一种表达的几率是87.1%(27/31)。非肺癌患者淋巴结4种MAGE基因表达均为0。应用常规病理检查和应用RT-PCR技术检测MAGE基因在淋巴结微转移阳性率分别为27.9%(31/111)和41.4%(46/111),差异统计学意义(P<0.05)。31组CT阳性淋巴结标本中4种MAGE基因至少有一种表达的几率是80.6%(25/31),80组CT阴性淋巴结中4种MAGE基因至少有一种表达的淋巴结有21组,几率是26.3%(21/80)。结论:应用RT-PCR检测MAGE基因可检出常规病理方法和CT未能检出的淋巴结微转移。     

胃窦癌肝十二指肠韧带淋巴结微转移与清扫

目的检测进展期胃窦癌肝十二指肠韧带淋巴结微转移状况,探讨进展期胃窦癌根治术肝十二指肠韧带淋巴结清扫的必要性。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以细胞角蛋白20(CK20)mRNA为标志基因,对45例进展期胃窦癌患者的86枚肝十二指肠韧带淋巴结标本进行检测。结果45例进展期胃窦癌患者有23例出现肝十二指肠韧带淋巴结CK20阳性(51.11%),与常规病理检查相比,存在显著性差异(P<0.01);常规病理检查阴性的86枚淋巴结有46枚CK20阳性(53.49%),亦存在显著性差异(P<0.01)。肝十二指肠韧带淋巴结微转移与临床分期、浸润深度以及肿瘤分化程度显著相关。结论RT-PCR技术检测CK20 mRNA是诊断胃窦癌淋巴结微转移敏感而特异的方法,进展期胃窦癌根治术应包括肝十二指肠韧带淋巴结的清扫。     

RT- PCR检测乳腺癌前哨淋巴结CK19 mRNA 的表达

目的探讨乳腺癌前哨淋巴结定位和检测CK19 mRNA的临床意义。方法对42例乳腺癌患者术中注射美蓝定位前哨淋巴结,用RT-PCR检测前哨淋巴结CK19 mRNA表达以确定转移病灶。结果42例乳腺癌患者中成功确定了前哨淋巴结35例,共63枚,每例1~4枚,平均每例1.8枚,检出成功率为83.33%。35例患者前哨淋巴结中,病理学证实有7例为肿瘤细胞所浸润,阳性检出率为20.00%;RT-PCR检测有20例CK19呈阳性表达,阳性检出率为57.14%,两种检测方法的阳性检出率有显著差异(P<0.05)。结论利用RT-PCR技术检测CK19 mRNA表达可明显提高乳腺癌前哨淋巴结转移病灶的检出率。     

大肠癌淋巴结中CEA、CK20和MMP-7mRNA表达诊断肿瘤微转移的意义

目的探讨大肠癌淋巴结中癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白(CK20)和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)mRNA的表达及其与肿瘤微转移的关系。方法分别用RT-PCR技术检测CEA、CK20、MMP-7基因的mRNA在106例大肠癌患者628个淋巴结及18例良性肠道疾病患者45个淋巴结中的表达情况,并与常规病理学检查进行比较。结果大肠癌患者淋巴结中CEA、CK20、MMP-7mRNA表达阳性率分别为41.6%(261/628)、42.7%(268/628)和56.1%(352/628),病理学检查转移阳性率为22.3%(140/628);CEA、CK20、MMP-7mRNA的阳性检出率均明显高于病理学阳性检出率(均P<0.01)。而18例良性肠道疾病患者45个淋巴结三者表达均阴性。结论RT-PCR技术检测淋巴结CEA、CK20、MMP-7mRNA的表达可用于诊断大肠癌的微转移,其结果较常规病理学检查敏感,对临床分期、预后评估具有重要意义。