实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体基因表达水平

目的研究建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测人B细胞激活因子受体(BAFF-R)含量的方法，及探讨其在外周血单个核细胞(PBMC)中BAFF-R mRNA表达的检测价值。方法在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针，用逆转录(RT -PCR)扩增目的片段实时检测产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中BAFF-R mRNA含量，并以BAFF-R mRNA和β2M mRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价。结果RFQ-PCR检测BAFF-R含量的线性范围为10^9～10^1pg／ml，低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为12．5％和11．9％，高浓度样本批内和批间CV分别为8．3％和9．3％。30名健康献血员样本的PBMC中，83％(25／30)有BAFF-R mRNA表达，范围为0．14～1．03。结论RFQ-PCR检测BAFF-R mRNA含量的方法，具有较好的检测灵敏度和重复性。     

系统性红斑狼疮患者B细胞激活因子mRNA定量测及其意义

目的建立实时荧光定量PCR(RFQ PCR)检测人B细胞激活因子(BLyS)mRNA含量的方法,初步探讨BLyS表达水平与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法在BLyS基因保守区设计特异性的引物和荧光探针,RT PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,以标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BLySmRNA含量,并以BLySmRNA和内参β2M mRNA含量的比值作为评价BLyS表达水平的指标。结果本法检测BLySmRNA含量的线性范围为109pg/ml～101pg/ml,批内和批间变异系数(CV)分别为2.4%～7.4%和4.3%～12.3%。SLE患者BLySmRNA表达水平(1.45±0.33)显著高于健康献血员(0.88±0.13),P<0.01,而且与血清IgG水平和抗ds DNA抗体滴度有显著相关性。结论建立RFQ PCR检测BLySmRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;BLyS在SLE的发生、发展及预后等方面可能具有重要作用。     

人Toll样受体3基因表达水平的实时荧光定量PCR测定

目的建立检测人Toll样受体3（TLR3）mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录PCR（FQ-RT-Pert）法，及探讨其在外周血单个核细胞（PBMC）中的表达水平。方法用Beacon Designer2．1软件设计TLR3基因特异性引物和荧光探针，逆转录扩增目的片段，构建重组体pMD18-T-TLR3作为定量标准品。在ABIPrism7000型荧光定量分析仪上，通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板，建立标准曲线；并检测30名正常人及20例原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者，20例慢性乙型肝炎肝硬化患者外周血PBMCTLR3基因的荧光强度，根据标准曲线及循环阈值，由软件自动计算样本中TLR3mRNA的起始拷贝数。结果FQ-RT-PCR检测TLR3基因的线性范围为10^2～10^8拷贝数／μl RNA（r=0．9974），内参β-actin的线性范围为10^3～10^8拷贝数／μl RNA（r=-0．9984）；高浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为6．7％和8．7％，低浓度样本批内及批间CV分别为12．3％和14．0％，30名健康人，20例PBC及20例慢性乙型肝炎肝硬化患者PBMC中均有TLR3 mRNA的表达，分别为3．46×10^2～4．51×10^3拷贝／μg RNA、4．92×10^2～1．42×10^4拷贝／μg RNA和2．58×10^2～7．17×10^3拷贝／μg RNA。结论成功建立检测TLR3 mRNA的FQ-RT-PCR方法，可作为临床和基础研究TLR3基因表达的工具。     

TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测外周血单个核细胞TRAIL-mRNA

目的 建立TaqMan实时荧光定量RT-PCR（rQ-RT-PCR）检测外周血单个核细胞（PBMC）中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）mRNA含量的方法,探讨PBMC中TRAIL mRNA的检测价值.方法 在TRAIL基因第二和第三外显子区设计特异性引物和荧光探针,用RT-PCR扩增目的片段,实时检测产物的荧光强度,以标准品建立标准曲线,软件自动计算出待测样本中TRAIL mRNA含量,以TRAIL mRNA和β2M mRNA含量的对数比值进行TRAIL mRNA表达水平评价.结果 TRAIL mRNA含量线性范围为（2.9×10^3～2.9×10^9）copies/ml,批内和批间变异系数分别为9.5%和16.7%.30例健康献血员和58例慢性乙肝患者TRAIL mRNA与β2M mRNA浓度的对数比值的（x）±s分别为0.528±0.014和0.775±0.038,两组差异显著,P＜0.001.结论 FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA水平具有较好的灵敏度和重复性,适用于临床研究.     

大肠癌COX-2和PPARδ基因的表达及其与临床病理的关系

目的研究大肠癌组织环氧合酶2（COX-2）和过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）基因mRNA的表达水平及其与患者临床病理参数的关系。方法采用实时荧光定量道转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测38例手术切除的大肠癌及相应癌外正常大肠组织中COX-2 mRNA和PPARδ mRNA的表达。结果①表达阳性率COX-2 mRNA在癌组织高于相应癌外正常组织（86．8％vs52．6％,P=0．001）,PPARδ mRNA在两者间无差异（50．0％vs44．7％,P=0．646）。大肠癌组织COX-2 mRNA的表达水平高于癌外正常组织[0．011（0,0．088）vs0．0016（0,0．017）,P=0．036];PPARδ mRNA则两者间表达无差异[0．086（0,0．24）vs0．052（0,0．19）,P=0．73]。②大肠癌浸润越深,COX-2 mRNA相对表达水平越高,PPARδ mRNA的表达与临床病理参数间无明显关联;③COX-2和PPARδ mRNA表达无相关性（r=0．098,P=0．560）。结论大肠癌COX-2 mRNA高表达,且与大肠癌浸润程度有关;PPARδ mRNA表达无明显上调,两基因间表达水平无相关性。     

大肠癌c-met基因mRNA定量表达研究

目的：检测c-met基因在大肠癌中的表达情况及其在大肠癌侵袭转移过程中的变化规律。方法：采用荧光实时定量PCR方法检测30例大肠癌及切端正常大肠组织c-met基因的mRNA转录水平，采用免疫组织化学sP法检测其蛋白表达情况。结果：c-met在63％（19／30）的正常大肠组织和90％（27／30）的大肠癌组织中阳性表达。大肠癌组织中c-met在mRNA转录和蛋白水平的表达均高于正常大肠组织（P〈0．05）。c-met的表达与大肠癌的淋巴结转移、浸润深度和Dukes分期明显相关，差异具有显著性（P〈0.05）；而与大肠癌的病理组织学类型和分化程度无关（P〉0．05）。结论：c-met在大肠癌的侵袭与转移中发挥着重要作用。检测c-metmRNA含量可作为判断大肠癌浸润、转移的良好参考指标。并可为将来大肠癌的诊断、分期和治疗开辟一个新的方向     

乳腺癌患者外周血潜伏肿瘤细胞检测对预后判断的价值

目的：以黑色素瘤抗原-A3(MAGE-A3)基因mRNA为特异性标记物，检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞，并探讨其意义。方法：采集南京医科大学第一附属医院2002-11／2003—0940例乳腺癌患者及20例非肿瘤疾病患者的外周血，用巢式RT-PCR方法检测外周血单核细胞(PBMC)中。MAGE-A3基因mRNA。同时用RT-PCR方法检测乳腺癌患者肿瘤组织中上述MAGE基因的表达。结果：18％(7／40)乳腺癌患者的PBMC中可检测到MAGE．A3基因的mRNA，而相应乳腺癌组织MAGE．A3的表达率为23％(9／40)，癌旁组织、乳腺癌组织中不表达肘AGE-A3基因的病例以及20例非肿瘤疾病患者的PBMC中均未测出。MAGE-A3基因mRNA。乳腺癌患者PBMC中两种MAGE基因mRNA的检出率与肿瘤TNM分期密切相关。结论：MAGE-A3基因mRNA可作为特异性肿瘤标记物用于检测乳腺癌患者PBMC中的乳腺癌细胞，巢式RT-PCR的敏感性及特异性较高，其检测结果可能有助于判断乳腺癌患者的预后。     

TLR4 mRNA在中国HIV/AIDS患者外周血单个核细胞中的表达及其与疾病进展关系的研究

目的通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）的方法检测中国HIV／AIDS患者外周血单个核细胞（PBMC）中TLR4 mRNA的表达水平，探讨TLR4 mRNA表达水平与HIV感染后疾病进展的关系。方法构建pUCm-TLR4质粒作为定量模板，在LightCycler检测仪上测定62例HIV／AIDS患者和30名健康对照者PBMC中TLR4 mRNA的含量。结果（1）HIV／AIDS患者PBMC中TLR4 mRNA的表达范围是（4．0×10^5-1．04×10^8）拷贝／μg RNA，显著高于健康对照组的（4．5×10^5-1．25×10^6）拷贝／μg RNA，（P〈0．01）。（2）在HIV／AIDS患者组中，艾滋病（AIDS）组外周血中，TLR4 mRNA的含量高于HIV慢性感染（HIV）组及长期不进展（LTNP）组，HIV组高于LTNP组（P〈0．05），LTNP组与对照组比较差别无统计学意义。（3）HIV／AIDS患者外周血中TLR4 mRNA的含量与HIV-1RNA病毒载量呈显著正相关（r=0．697，P〈0．01）。结论成功建立了人TLR4 mRNA表达水平的荧光定量检测方法；中国HIV／AIDS患者外周血单个核细胞中TLR4 mRNA的含量显著高于健康对照组，且与疾病进展密切相关。     

荧光定量RT-PCR检测糖尿病病人PBMC中TGF-β1表达水平

目的：应用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR），检测糖尿病病人外周血单个核细胞（PBMC）中TGF-β1mRNA的表达水平。方法：分离外周血单个核细胞，用Trizol裂解液提取总RNA，逆转录为cDNA，在扩增体系中加入SYBR Green I，应用FQ—RT—PCR定量检测TGF-β1mRNA。结果：重组质粒测序证明插入的片断为TGF-β1特异性片断。荧光定量RT—PCR检测TGF—β1mRNA的灵敏度达10^5拷贝／ml，线性范围为10^5～10^11拷贝／ml，批内、批问变异系数分别为2．27％～2．56％和4．78％～5．22％．临床应用显示．糖果病惠者PBMC中TGF—β1 mRNA含量显著高于正常。结论：FQ-RT-PCR检测TGF-β1mRNA具有灵敏、特异、快速等特点．为临床应用提供了方法学依据。     

人肝癌组织中APRIL及其受体mRNA水平的定量测定

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQPCR)技术分析肝癌组织中增殖诱导配体(APRIL)及其受体mRNA的表达水平。方法在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量,并以靶基因和内参β2MmRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果RFQPCR检测靶基因mRNA含量的线性范围为10～109pg/ml,批内和批间重复性测定的变异系数v分别为3.87%～10.12%和6.86%～12.29%。20例肝癌组织样本的检测结果显示肝癌及癌旁组织中APRIL和BCMA的水平均显著高于远端正常组织(P<0.01),而TACI的表达水平在三组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立RFQPCR检测APRIL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;而且发现APRIL在肝癌发生、发展过程中可能起了重要作用,有可能还参与了肿瘤细胞的转移,并主要是通过受体BCMA而不是TACI发挥作用。     

临床护士心理压力源与工作满意度调查分析

目的了解临床护士面临的主要心理压力源,为护理管理者有效地帮助护士减轻和消除心理压力提供依据。方法采用自评式问卷调查的方法 ,对内江市2所三级乙等医院287名从事临床护理工作的护士进行问卷调查。结果临床护士的心理压力源依次来源于工作强度、职业需求、工作环境、人际关系、家庭经济收入等方面。其中来源于工作强度、人际关系及家庭方面的压力源,不同年龄组护理人员在其压力程度上差异有统计学意义(P0.05)。结论从事临床护理工作的护士存在着多种心理压力源,这些压力源是导致护士工作不满意的主要原因,也是护理的安全隐患之一,护理管理者应予以足够的重视,并定期针对不同的人群进行心理健康知识培训,建立有效的支持系统,及时帮助他们调整心理状态,减轻和消除压力,从而提高护士对本职工作的满意度和患者对护理服务的满意度。     

ICIQ-SF问卷在尿失禁诊断中的应用研究

目的：分析ICIQ-SF问卷对于诊断不同类型尿失禁（UI）的价值。方法：对2007年8月—2009年7月期间北京大学深圳医院泌尿外科就诊的118例UI女性患者进行研究。由患者自行填写ICIQ-SF问卷表,然后接受尿动力学检查。分别计算ICIQ-SF诊断不同类型UI的敏感性、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值和似然比LR值。结果：根据ICIQ-SF问卷,46/118例（39%）患者表现为压力性UI,18/118例（15%）为急迫性UI,54/118例（46%）为混合性UI。ICIQ-SF诊断压力性UI、急迫性UI和混合性UI的敏感性分别为58%,52%和75%;特异性分别为74%,95%和63%。ICIQ-SF诊断压力性UI、急迫性UI和混合性UI阳性预测价值分别为61%,72%,38%;阴性预测价值分别为72%,88%,89%。结论：ICIQ-SF问卷对于诊断不同类型UI具有重要的临床意义。ICIQ-SF问卷在临床实践中具有良好的应用前景。     

床头抬高报警器对ICU护士床头抬高达标率的影响

目的探讨有效提高ICU护士对机械通气患者床头抬高达标率的方法。方法根据病房单元的布局,将连云港市第一人民医院综合ICU的15张病床分为试验组(1~7床)和对照组(8~13床和15床),将综合ICU的39名护士随机分入试验组(n=19)和对照组(n=20)。两组病床均用量角器标示床头抬高角度,试验组病床安装自制床头抬高报警器,对照组常规管理。每天检查床头抬高角度5次(08:00、12:00、14:00、18:00、01:00),比较两组护士床头抬高的达标率。结果试验组护士对床头抬高30°~45°的达标率为100%,对照组为46.8%;且试验组在各个时间点对床头抬高30°~45°的达标率均高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论使用床头安装床头抬高报警器能有效提高ICU护士对机械通气患者床头抬高30°~45°的达标率。     

护士长管理素质与护士工作压力相关性的调查与分析

目的 :探讨病房护士长的管理素质与护士工作压力的相关性。方法 :采用问卷调查法对 12 5名护士进行调查 ,调查结果用相关性分析进行统计学处理。结果 :护士长的管理素质与护士工作压力呈负相关。结论 :病房管理者只有努力提高自身的管理素质才能相应地减轻护士的工作压力     

Arthritis of the base of the thumb

The purpose of this article is to outline the pathophysiology and epidemiology of arthritis of the base of the thumb. The usual presentation and diagnosis will be discussed along with the current conservative treatment options. Surgical treatment options are determined by the stage of the arthritis as well as the demands of the patient. The current standard surgical treatment options will be reviewed along with their results in the literature.     

血红蛋白分析对地中海贫血筛查的评估

目的:评估血红蛋白分析对地中海贫血(Thal)诊断能力。方法:用HLC-723G7自动血红蛋白分析仪对以临床表现流行病学资料和醋纤薄膜电泳等确定的115例Thal患者进行血红蛋白分析,结合分子诊断评估诊断价值。结果:以HbA2≥5.5%作为血红蛋白分析对β-Thal的诊断标准,则与DNA分析的符合率为81.5%;以HbA2≤2.5%为仪器对α-Thal的诊断标准,则与DNA分析的符合率为92.5%。结论:血红蛋白分析可提供α、βThal的诊断信息,若能结合更多的临床和DNA分析数据,可作为α、β地中海贫血的确诊手段。