罗格列酮抑制肝星状细胞活化的作用机制研究

目的 探讨罗格列酮对大鼠肝星状细胞生物学特性的影响是否是通过PPARγ起作用.方法 设立10 μmol/L罗格列酮组、GW9662加10 μmol/L罗格列酮组、对照组、GW9662组.采用RT-PCR方法检测PPARγ及Ⅰ型前胶原mRNA表达;用Western blot法检测PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达;电泳迁移分析法(EMSA)检测PPARγ蛋白的结合活性;用免疫细胞化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化.结果 10 μmol/L罗格列酮组PPARγ mRNA及蛋白表达显著高于其他各组(P<0.01),Ⅰ型前胶原mRNA及蛋白表达明显低于其他各组(P<0.01);10 μmol/L罗格列酮组PPARγ蛋白结合活性最强,α-SMA表达明显低于其他组(P<0.05).结论 罗格列酮对大鼠肝星状细胞的影响是通过PPARγ起作用的.     

辛伐他汀对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织纤维化的影响及分子机制

目的 探讨辛伐他汀对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝组织纤维化模型及肝星状细胞的作用及其分子机制.方法 ①体内实验应用高脂饮食建立NAFLD肝组织纤维化大鼠模型,并用辛伐他汀干预,RT-PCR法和Western印迹检测大鼠肝组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型NOS(iNOS)和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达.②体外实验采用促进脂肪细胞分化的培养基诱导人肝星状细胞株LX-2细胞获得静止表型,分别用转化生长因子β1( TGF-β1)、NOS抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)、辛伐他汀、TGF-β1+辛伐他汀、L-NAME+辛伐他汀处理静止型LX-2细胞,RT-PCR法和Western印迹检测各组LX-2细胞中eNOS、iNOS、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的变化.结果 ①随造模时间延长,模型组大鼠肝组织eNOS mRNA和蛋白表达逐渐减少,iNOS和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达逐渐增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P分别＜0.05和0.01).与24周末模型组相比,辛伐他汀干预组大鼠肝组织eNOS mRNA和蛋白的表达分别增加(0.30±0.02比0.24±0.01和0.45±0.04比0.22±0.02,P值均＜0.05),iNOS mRNA和蛋白的表达分别减少,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达分别减少(P值均＜0.05).模型组大鼠肝组织中eNOS mRNA和蛋白表达与Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达均呈负相关(P值均＜0.01);iNOS mRNA和蛋白表达与Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达均呈正相关(P值均＜0.01).②体外培养LX-2细胞中,L-NAME能抑制LX-2细胞活化,减少eNOS和iNOS的表达,增加α-SMA和Ⅰ型胶原表达,与TGF-β1作用一致;辛伐他汀能直接增加静止型及活化型LX-2细胞中eNOS的表达,减少iNOS的表达,维持其静止表型,抑制其活化.结论 辛伐他汀通过增加LX-2细胞中eNOS表达,减少iNOS表达,减少α-SMA和Ⅰ型胶原生成,抑制或逆转肝纤维化发生和发展.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对TGF-β1诱导肾成纤维细胞细胞外基质表达的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对转化生长因子β1(TGF-β1)致肾间质纤维化作用的影响,探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用.方法:体外培养大鼠肾成纤维细胞株(NRK/49F),利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGF-β1诱导的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连结蛋白(FN)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA表达的影响,利用Western Blot方法观察PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的FN蛋白表达的影响.结果:TGF-β1能显著增加NRK/49F细胞CTGF、FN和ColⅢmRNA表达,并呈剂量依赖和时间依赖效应.与TGF-β1刺激组相比,10 μM 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组α-SMA、CTGF、FN和ColⅢmRNA表达量显著减少,FN蛋白表达量显著下降.结论:PPARγ激动剂可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞CTGF表达和细胞外基质(ECM)合成.     

PPARγ、脂联素抑制肝星状细胞增殖

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对大鼠肝星状细胞(HSC)-T6生物学特性、脂联素表达的影响。方法将大鼠肝星状细胞培养后分成空白对照组;罗格列酮组;GW9662阻断组;罗格列酮+GW9662组。检测各组细胞的增殖情况;同时检测脂联素、PPARγm RNA及其蛋白表达情况。结果 MTT实验结果显示罗格列酮组的肝星状细胞增殖率较其他组明显减弱(P<0.01),脂联素、PPARγm RNA及蛋白表达量较其他组明显升高(P<0.01);且脂联素、PPARγ表达存在显著相关关系(P<0.01)。结论 PPARγ能上调脂联素的表达,抑制HSC增殖,抑制肝纤维化的发展。     

15-脱氧前列素2抑制MG63细胞活性并诱导其凋亡的机制

目的研究过氧化物酶体增殖活化受体(PPAR)γ的内源性配体15-脱氧前列素2(15d-PGJ2)对骨肉瘤细胞株MG63的增殖活性的影响及诱导其凋亡可能的作用机制。方法采用人骨肉瘤细胞MG63,分别用终浓度为0.1、1、5、10和50μmol/L15d-PGJ2处理,对照组不给予药物,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定药物作用24 h、48 h、72 h及96 h细胞增殖的变化;流式细胞术(FCM)结合Annexin V/PI双染色观察终浓度5μmol/L和20μmol/L15d-PGJ2作用48 h和72 h MG63细胞周期变化及诱导细胞凋亡和坏死情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测终浓度20μmol/L15d-PGJ2处理48 h对MG63细胞中PPARγm RNA的表达影响;通过免疫细胞化学技术检测终浓度20μmol/L15d-PGJ2作用48 h,MG63细胞中凋亡相关蛋白caspase3,p53和Bax/bcl-2的表达情况。结果 MTT结果显示:1各浓度15 d-PGJ2作用24 h、48 h、72 h及96 h,对MG63细胞增殖均有抑制作用,48 h达到最佳抑制效果。48 h、72 h及96 h抑制率两两比较均无差异(P>0.05),且50μmol/L对细胞的抑制率几乎达100%;2在各时间点,各浓度组间比较均有差异(P=0.000),在0.1⁵0μmol/L浓度组区间,相同时间点的抑制率有随浓度升高而递增的趋势。流式细胞术检测结果显示:不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义(P=0.000)。加药组G0/G1期细胞比例均高于对照组,S和G2/M期相应减少,且细胞凋亡率增高,表明加药组可使细胞G0/G1期阻滞且诱导细胞凋亡;RT-PCR检测PPARγm RNA的表达,并同时逆转录稳定的内参片段β-actin,以二者的面积灰度值比值作为该m RNA的相对表达量,20μmol/L 15d-PGJ2作用48 h,PPARγm RNA的相对表达量(2.06±0.35)与对照组(0.94±0.23)比较有差异(P<0.05);免疫细胞化学结果显示:药物干预组凋亡相关蛋白caspase3和Bax表达与对照组比较显著增加,而p53和bcl-2表达下降(P<0.05)。结论 1PPARγ激动剂15d-PGJ2能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的生长,引起细胞G1期阻滞并诱导细胞凋亡。215d-PGJ2可能通过增加PPARγm RNA表达,上调凋亡相关蛋白caspase3和Bax及下调p53和bcl-2表达而诱导细胞凋亡。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ在哮喘气道血管重构中的作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)在哮喘小鼠气道血管重构中的作用.方法 50只小鼠随机分为5组:对照组、激动组、拮抗组、激素组和哮喘组.卵白蛋白雾化吸入建立小鼠哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液、肺组织中炎症反应和重构情况;并以western blot技术测定肺组织中PPARγ的表达水平,比较其与重构程度的关系.结果 哮喘组血管管壁厚度[(4.66±0.73) μm]和血管旁胶原纤维沉积量[(22.1±2.42) μm2/μm]较对照组[(2.87±0.46) μm、(1.73±0.73) μm2/μm]明显增加;激动组和激素组中这一变化均较哮喘组明显减轻,且两组间比较无显著性差异.血管管壁厚度与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积(r=0.576、0.692,P<0.01)以及血管旁胶原纤维面积与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积呈正相关(r=0.825、0.928,P<0.01).除激素组外,核内PPARγ的表达水平与气道平滑肌厚度、气道旁胶原纤维面积和血管旁胶原纤维面积呈负相关(r=-0.73、-0.85、-0.91,P<0.01),而与血管管壁厚度无相关性.结论 PPARγ激动剂通过促进PPARγ的核定位,抑制哮喘的气道炎症和气道重构.     

过氧化体增殖物激活型受体γ抑制转化生长因子β1诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用。方法体外培养大鼠主动脉VSMC,先分为正常对照组、不同浓度TGF-β1组(1、2、4、8μg/L),观察TGF-β1对VSMC的影响;再分为正常对照组、钙化组(TGF-β1 4μg/L)、罗格列酮(RSG,20μmol/L)组、钙化+罗格列酮(RSG,20μmol/L)组,观察PPARγ激动剂罗格列酮对VSMC钙化后的作用,对细胞进行钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,茜素红S染色检测钙化结节的形成情况,Western blot检测VSMC标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PPARγ、成骨样细胞标志物Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白表达情况。结果与正常对照组相比,TGF-β1处理后的VSMC钙盐沉积和ALP活性明显升高(P0.05),且TGF-β1浓度为4μg/L时作用最明显,成骨样细胞标志物Runx2表达明显升高(P0.05),同时平滑肌细胞标志物α-SMA表达减少(P0.05)。而加入罗格列酮后,VSMC的钙盐沉积和ALP活性明显降低(P0.05),α-SMA、PPARγ表达明显上升(P0.05),相反,Runx2的表达则明显受到抑制(P0.05)。结论 TGF-β1可以诱导VSMC向成骨样细胞分化和钙化,而PPARγ激动剂罗格列酮可以抑制TGF-β1诱导下VSMC钙化的发生。     

伴有窦房竞争现象的加速的交接性逸搏心律1例

患者男,80岁。临床诊断：冠心病。图1(Ⅱ导联为连续记录)示：P波形态可归纳为3类①窦性P波：ⅡaP2、3、5、9,ⅡbP3～6,ⅡcP1～3、7Ⅲ2、3、5～9,分别呈直立,双峰、低平,为不同程度的不完全性结间束及房间束传导阻滞。P-P间期0．68～0．72s(83～88次／min),P-R间期0．16s;②逆行P^-波：ⅡaP1、4,6～9,ⅡbP1、2、4、5,7～9,ⅡcP4～6,8,9,Ⅲ4、6～8,P^--P^-间期0．70～0．73s(82-86次／min),     

过氧化物酶体增殖活化受体γ激动剂对呼吸机相关肺损伤大鼠肺胶原合成的影响及机制

目的探讨过氧化物酶体增殖活化受体(PPAR)γ激动剂[15-去氧-△~(12,14-)前列腺素(PG)J_2 (15d—PGJ_2)]对呼吸机相关肺损伤大鼠肺胶原合成的影响及机制。方法普通级雄性SD大鼠24只,随机分为3组(正常对照组、Ⅰ组、Ⅱ组),每组8只。Ⅰ和Ⅱ组呼吸机条件相同(VT16ml/kg,PEEP为5cmH_2O,吸呼比为2：1,FiO_2为1．0),其中药物干预组(Ⅱ组)通气前1h腹腔注射15d-PGJ_2(1mg/kg),分别通气4h。通气结束后测定肺组织湿/干重(W/D)、肺组织光镜病理、Ⅰ型前胶原肽(PINP)和Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)浓度、Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达、以及PPARγ和核因子(NF)-kB活性。结果①Ⅰ组肺组织W/ D显著高于正常对照组和Ⅱ组(P＜0．05)。肺组织W/D在正常对照组和Ⅱ组之间无显著差异。②Ⅰ组肺组织Ⅰ型前胶原mRNA表达显著高于正常对照组和Ⅱ组(P均＜0．05)。Ⅱ组与正常对照组肺组织Ⅰ型前胶原mRNA表达无显著差异。③与Ⅰ组比较,正常对照组和Ⅱ组Ⅲ型前胶原mRNA表达均显著降低(P均＜0．05)。与正常组比较,Ⅱ组Ⅲ型前胶原mRNA表达无显著改变。④与正常对照组比较,Ⅰ组和Ⅱ组NF-kB活性均显著增高(P均＜0．05)。Ⅰ组与Ⅱ组NF-kB活性比较,无显著差异。⑤Ⅰ组PPARγ活性显著低于正常对照组(P＜0．05)。与Ⅰ组比较,Ⅱ组PPAγ活性显著增高(P＜0．05)。结论15d- PGJ_2下调呼吸机相关肺损伤大鼠肺组织Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达,其机制可能与激活PPARγ有关。     

高温对老年小鼠腹腔巨噬细胞热休克蛋白及其它免疫指标表达的影响

目的　研究高温对老年小鼠腹腔巨噬细胞热休克蛋白 (HSP) 70、诱导性一氧化氮合酶 (i NOS)及其基因 (i NOS m RNA)表达的影响 ,探讨提高老年机体对缺血、缺氧及其它有害刺激的预适应能力及免疫调节能力的途径。方法　将小鼠分为实验组和对照组。采用免疫组化、组织化学、原位杂交及完整细胞斑点印迹技术检测 HSP70、i NOS及 i NOS m RNA的表达 ,对所有斑点印迹信号作薄层扫描 ,并用 t检验对扫描值进行统计学处理。结果　 HSP70、i NOS及 i NOS m RNA的表达实验组为 5.97± 2 .1 1、1 1 .0± 1 .2及 2 1 .4± 1 .8;对照组为 2 .1 4± 0 .76、7.3± 0 .7及 1 4 .4±1 .8;两组相比有显著差异 (P<0 .0 1 )。结论　高温对老年机体免疫调节及对有害刺激的预保护能力有促进作用。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ在哮喘气道血管重构中的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)在哮喘小鼠气道血管重构中的作用。方法50只小鼠随机分为5组:对照组、激动组、拮抗组、激素组和哮喘组。卵白蛋白雾化吸入建立小鼠哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液、肺组织中炎症反应和重构情况;并以western blot技术测定肺组织中PPARγ的表达水平,比较其与重构程度的关系。结果哮喘组血管管壁厚度[(4.66±0.73)μm]和血管旁胶原纤维沉积量[(22.1±2.42)μm2/μm]较对照组[(2.87±0.46)μm(、1.73±0.73)μm2/μm]明显增加;激动组和激素组中这一变化均较哮喘组明显减轻,且两组间比较无显著性差异。血管管壁厚度与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积(r=0.576、0.692,P<0.01)以及血管旁胶原纤维面积与气道平滑肌厚度或气道旁胶原纤维面积呈正相关(r=0.825、0.928,P<0.01)。除激素组外,核内PPARγ的表达水平与气道平滑肌厚度、气道旁胶原纤维面积和血管旁胶原纤维面积呈负相关(r=-0.73、-0.85、-0.91,P<0.01),而与血管管壁厚度无相关性。结论PPARγ激动剂通过促进PPARγ的核定位,抑制哮喘的气道炎症和气道重构。     

肺复康合剂对大鼠肺纤维化的抑制作用及相关机制

目的探讨肺复康合剂对大鼠肺纤维化的抑制作用及相关机制。方法 40只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、造模+肺复康组、单纯肺复康组。模型组、造模+肺复康组气管灌注博莱霉素(5 mg/kg),而对照组和单纯肺复康组气管灌注同等剂量无菌生理盐水,随后对照组和模型组生理盐水灌胃28 d,造模+肺复康组、单纯肺复康组肺复康合剂灌胃(12 ml/kg)28 d。给药28 d后麻醉处死,计算各组肺系数、肺干重/体重变化,检测肺组织羟脯氨酸(HYP)、一氧化氮(NO)、肺动脉血浆NO2-/NO3-含量、丙二醛(MDA)水平,以及Western印迹法检测诱导型NO合酶(i NOS)、结缔组织生长因子(CTGF)、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)表达水平。结果与对照组相比,模型组肺系数、肺干重/体重、HYP、NO、NO2-/NO3-、MDA、i NOS、CTGF、p-ERK表达均明显增高(P<0.05);与模型组相比,造模+肺复康组肺系数、肺干重/体重、HYP、NO、NO2-/NO3-、MDA、i NOS、CTGF、p-ERK表达水平均明显降低,肺纤维化指标均明显改善;单纯肺复康组与对照组相比,上述指标没有明显变化(P>0.05)。结论肺复康合剂通过抑制促纤维化因子i NOS、CTGF表达及ERK信号通路,减少博莱霉素所致的应激损伤、病理变化、胶原合成,发挥抑制肺纤维化的药理作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ在结肠癌中的表达及其激动剂对结肠癌细的生长抑制作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在结肠癌中的表达以及PPARγ激动剂对结肠癌细胞生长的抑制作用、作用途径及可能机制.方法 采用SP法检测56例结肠癌及相应正常组织中PPARγ的表达.应用RT-PCR及Western-blot方法检测PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞中的表达.MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率. 结果 结肠癌组织中PPARγ的阳性率为71.4%,显著高于正常组织的44.6%(P＜0.01).PPARγ在Dukes分期C期 D期中的阳性率为82.9%,显著高于A期 B期的52.4%(P＜0.05).PPARγ在有淋巴结或肝转移组的阳性率(分别为81.1%,100%)显著高于无淋巴结或肝转移组的52.6%和66.0%(P值均＜0.05).PPARγ在两种结肠癌细胞中均有表达,其激动剂15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和吡格列酮(PGZ)对2种结肠癌细胞均有生长抑制作用,并呈时间和剂量依赖性.PPARγ激动剂的生长抑制作用能部分被其拮抗剂GW9662阻断.15d-PGJ2和PGZ能诱导细胞生长周期改变,即G0/G1期细胞比例增加,而S期明显减少,并诱导凋亡率显著上升(P值均＜0.01).结论 PPARγ的高表达与结肠癌的发生、发展有关.15d-PGJ2和PGZ部分通过PPARγ依赖途径抑制结肠癌细胞生长,该作用可能与诱导癌细胞阻滞于G0/G1期及增加细胞凋亡有关.     

三七对急性脑梗死小鼠模型总一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶的影响

目的观察三七对脑梗死模型小鼠总一氧化氮合酶(t NOS)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)水平的影响。方法将50只SD小鼠随机分成正常组、模型组、三七低剂量组、三七高剂量组。通过线栓法构建小鼠脑梗死模型,成模后,三七低、高剂量组开始对小鼠灌胃给药12 w。正常组和模型组给予等体积的生理盐水溶液。给药结束后观察肝、肾脏器系数、血清中t NOS、i NOS水平,并对脑神经功能缺陷进行评测,通过实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测Ng R1、Bax、Bcl-2 m RNA的水平。结果三七高、低剂量组均能显著下降模型组的t NOS、i NOS水平,其中三七高剂量组效果更好,而且三七低、高剂量组均可下调Ng R1、Bax m RNA的表达,与模型组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论三七可能通过下调脑梗死模型小鼠的t NOS、i NOS水平及下调Ng R1、Bax m RNA的表达,减轻局灶性缺血小鼠脑梗死。     

辛伐他汀对大鼠门脉高压性胃病的作用

目的探讨辛伐他汀在大鼠门脉高压性胃病(portal hypertensive gastropathy,PHG)中的作用与机制。方法采用门静脉主干部分结扎+左肾上腺静脉结扎法构建PHG模型。40只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(SO组,n=14)、模型组(LIG组,n=14)、辛伐他汀治疗组(SVS组,n=12)。于结扎2周后开始对SVS组大鼠予以辛伐他汀(20 mg/kg)灌胃,同时SO组和LIG组给予等量的生理盐水,1次/d,持续4周。4周后测量各组大鼠门静脉压力(portal pressure,PP)值,胃黏膜组织病理学变化、胃黏膜下层血管面积、血管最大直径及黏膜组织内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、组织型一氧化氮合酶(constitutive nitric oxide synthase,c NOS)活性和NO含量。结果 LIG组大鼠胃黏膜病变严重,PP值、胃黏膜下层血管面积、血管最大直径、黏膜组织内i NOS活性及NO含量明显高于SO组(P0.01),c NOS和i NOS活性相对比例失衡。SVS组胃黏膜病变程度较LIG组明显减轻,PP值、胃黏膜下层血管面积、血管最大直径、黏膜组织内i NOS活性及NO含量明显低于LIG组(P0.01),但仍高于SO组(P0.01),c NOS和i NOS活性比例失衡在一定程度上得到纠正。结论辛伐他汀对PHG模型大鼠胃黏膜有保护作用,可能与降低胃黏膜组织内i NOS的活性、减少NO的过度产生、恢复i NOS与c NOS活性相对平衡有关。     

过氧化物酶增殖体激活受体γ通过上调miR-124表达抑制急性肺损伤肺泡巨噬细胞炎症反应

目的探讨PPARγ上调miR-124表达对急性肺损伤(ALI)肺泡巨噬细胞炎症反应的抑制作用及分子机制。方法分离和培养10例ALI和10例健康非吸烟者的肺泡巨噬细胞,检测PPARγ、miR-124及其靶基因TRAF6的表达变化;分别用PPARγ激动剂罗格列酮(RGZ)、PPARγ拮抗剂GW9662或miR-124抑制剂(antagomir-124)干预人肺泡巨噬细胞后,real time RT-PCR检测miR-124及其靶基因TRAF6的表达;人单核细胞THP-1细胞转染含miR-124启动子区的虫荧光素酶报告基因质粒,再经PPARγ激动剂RGZ或拮抗剂GW9662处理,检测报告基因活性;小鼠经LPS刺激后再经PPARγ激动剂RGZ处理,或经antagomir-124预处理后,再经PPARγ激动剂RGZ处理后,real time RT-PCR检测小鼠肺组织中miR-124、炎症相关因子TRAF6、IL-6、TNF-α的表达。结果 ALI患者肺泡巨噬细胞中PPARγ与miR-124的表达均降低,而miR-124靶基因TRAF6表达显著升高;激动剂活化的PPARγ能上调人肺泡巨噬细胞的miR-124,并下调miR-124靶基因TRAF6,而PPARγ拮抗剂GW9662可削弱罗格列酮上调miR-124的表达进而减弱miR-124对其靶基因TRAF6表达的抑制作用,并且miR-124抑制剂减弱PPARγ对TRAF6表达的抑制作用;活化的PPARγ显著促进miR-124启动子活性,而PPARγ拮抗剂GW9662,明显减弱PPARγ激动剂罗格列酮对miR-124启动子的转录活性的上调作用;在LPS诱导的小鼠ALI模型上,活化的PPARγ通过上调miR-124抑制小鼠肺组织IL-6、TNF-α的表达,而PPARγ拮抗剂GW9662和antagomir-124预处理均减弱PPARγ对小鼠肺组织IL-6、TNF-α的表达的抑制作用。结论PPARγ激活后可通过上调miR-124表达抑制ALI肺泡巨噬细胞的炎症反应。     

不同种类脂肪酸对巨噬细胞M1/M2极化的影响

背景:巨噬细胞表型和功能改变在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生、发展中具有重要作用。近年研究发现不同种类脂肪酸在NAFLD中发挥不同作用。目的:探讨不同种类脂肪酸对巨噬细胞M1/M2极化的影响及其可能机制。方法:分别以脂多糖(LPS)、白细胞介素-4(IL-4)、饱和脂肪酸[棕榈酸(PA)]、多不饱和脂肪酸[二十二碳六烯酸(DHA)]、LPS/IL-4联合PA/DHA处理小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞株,同时设立阴性对照组。采用real-time PCR检测M1型巨噬细胞极化基因[诱生型一氧化氮合酶2(i NOS2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和M2型巨噬细胞极化基因[精氨酸酶1(ARG1)、甘露糖受体C2(MRC2)]表达;采用蛋白质印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和磷酸化核因子-κBp65(p NF-κBp65)表达。结果:与阴性对照组比较,LPS组i NOS2、TNF-α表达显著升高(P<0.01;P<0.05),IL-4组ARG1、MRC2表达显著升高(P<0.01;P<0.05),PA组i NOS2、TNF-α、ARG1表达显著升高(P<0.05;P<0.01;P<0.05),DHA组i NOS2表达显著降低(P<0.01)。LPS+PA组和IL-4+PA组可进一步影响TNF-α、ARG1表达,但与LPS组、IL-4组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与LPS组比较,LPS+DHA组i NOS2、TNF-α表达显著降低(P<0.05;P<0.05);与IL-4组比较,IL-4+DHA组ARG1表达显著降低(P<0.01)。与阴性对照组比较,PA组、DHA组PPARγ蛋白表达水平显著升高,PA组p NF-κBp65蛋白表达水平显著升高。结论:饱和脂肪酸能诱导巨噬细胞M1/M2混合型极化,而多不饱和脂肪酸则抑制巨噬细胞M1型极化。不同种类脂肪酸可能通过PPARγ/NF-κB相关信号通路参与巨噬细胞M1/M2极化的转化。     

PPARβ/δ及其配体在RAW264.7泡沫细胞模型中的作用

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome Proliferators-activated Receptor,PPAR）-β/δ及其激动剂GW0742、抑制剂GSK0660在RAW264.7泡沫细胞模型中的作用。方法本研究选用RAW264.7细胞,共分为6组,分别是对照组、LPS组、ox-LDL组、模型组、激动剂组和抑制剂组。实时定量PCR（Real-time Quantitative PCR）用来检测PPARβ/δ和单核细胞趋化蛋白（monocyte chemoattractant protein,MCP）-1 m RNA的水平,蛋白质印迹法（Western Blotting,WB）检测PPARβ/δ和MCP-1蛋白的表达,酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA）测定细胞培养液上清中炎症因子肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α,白介素（interleukin,IL）-10和MCP-1的水平。结果对照组、LPS组、ox-LDL组、模型组、激动剂组的PPARβ/δ蛋白质和m RNA水平逐渐增加（P〈0.01）,而抑制剂组PPARβ/δ蛋白质和m RNA水平则明显低于模型组和激动剂组（P〈0.01）。MCP-1蛋白质和m RNA的水平在对照组、ox-LDL组、LPS组、模型组逐渐增加（P〈0.01）,而激动剂组明显降低（P〈0.01）,抑制剂组又有所增加（P〈0.01）。总之,MCP-1的蛋白质和m RNA水平在各组之间差异显著（P〈0.01）。细胞培养液中TNF-α、MCP-1的水平LPS组、ox-LDL组、模型组明显升高（P〈0.01）,而激动剂组明显降低（P〈0.01）,抑制剂组又有所增加（P〈0.01）。而IL-10在激动剂组和抑制剂组则表现出相反的趋势。结论 GW0742可以显著增加PPARβ/δ的表达,降低炎症因子MCP-1、TNF-α的水平,升高IL-10的水平;GSK0660则发挥完全相反的作用。     

microRNA-200c对3T3-L1前体脂肪细胞向脂肪细胞分化的调控作用

目的 探讨microRNA(miRNA)-200c对3T3-L1前体脂肪细胞分化的影响.方法 利用实时PCR检测miRNA-200c在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向脂肪细胞分化过程及向骨细胞分化过程中的表达.通过将miRNA-200c类似物、miRNA-200c抑制剂转染至3T3-L1前体脂肪细胞,从而在细胞中增强或抑制miRNA-200c的表达,油红O染色检测转染后3T3-L1前体脂肪细胞诱导成熟后的脂滴形成情况.实时PCR检测转染后脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)和表征基因aP2在成脂过程中的表达变化.结果 实时PCR结果显示,在小鼠骨髓MSCs诱导成脂后miRNA-200c表达升高(t=24.709,P＜0.01),而诱导成骨后,miRNA-200c表达下降(t=8.783,P＜0.01).转染miRNA-200c类似物后,3T3-L1前体脂肪细胞中脂滴明显增多,PPARγ和aP2表达显著升高(t=7.674、9.657,P均＜0.01);转染miRNA-200c抑制剂后,3T3-L1前体脂肪细胞中脂滴明显减少,PPARγ、aP2表达显著降低(t=9.483、6.419,P均＜0.01).结论 miRNA-200c能够促进3T3-L1前体脂肪细胞向脂肪细胞分化.     

蛋白涂层支架携带一氧化氮合酶基因转染小型猪冠状动脉的可行性研究

目的 :探索蛋白涂层支架携带质粒介导人肝脏诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)基因转染小型猪冠状动脉可行性。　　方法 :使用蛋白支架吸附去内毒素纯化质粒 ,以常规支架置入技术置入小型猪冠状动脉前降支中段。置入后第 7天取出前降支置入段 ,分别提取总核糖核酸 (RAN)并进行逆向多聚酶链反应 (RT- PCR) ,免疫组化染色检测导入人肝脏i NOS蛋白的表达。　　结果 :小型猪前降支置入支架处显示人 i NOS基因信使核糖核酸 (m RNA)转录 ,免疫组化染色显示中膜、内膜人i NOS基因表达人 i NOS蛋白的颗粒 ,以平滑肌细胞最明显。　　结论 :蛋白涂层支架吸附去内毒素携带人 i NOS基因质粒植入小型猪前降支冠状动脉 ,RT- PCR显示人 i NOS基因的 m RNA转录 ,免疫组化显示人 i NOS蛋白的表达。