再生障碍性贫血患者外周血CD4+CD25+ T细胞的检测

目的:通过对外周血CD4+CD25+ T细胞的检测,初步探讨CD4+CD25+ T细胞水平与再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)发病和预后的关系。方法:流式细胞术分别检测20例正常对照、30例初发AA患者、10例治疗有效AA患者和10例治疗无效AA患者的CD4+CD25+ T细胞和CD4+CD25highT细胞水平。结果:4组患者CD4+CD25+ T细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);初发AA和治疗无效组AA患者CD4+CD25highT细胞比例均低于正常对照组(P<0.01和P<0.05),但与治疗有效AA患者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CD4+CD25highT细胞比例下降是造成AA患者免疫耐受破坏的原因之一,CD4+CD25+ T细胞比例可能并不能反映AA患者的预后状况。     

免疫抑制治疗对小儿重型再生障碍性贫血CD4+CD25+T细胞及相关细胞因子表达的影响

目的 探讨免疫抑制治疗对小儿重型再生障碍性贫血CD4+CD25+T细胞及相关细胞因子表达的影响.方法 选取2017年1月至2019年4月本院收治的重型再生障碍性贫血患儿74例,采用随机数字表法分为对照组和研究组,每组37例.对照组采用环孢素A(CsA)治疗,研究组在对照组基础上采用抗淋巴细胞球蛋白(ALG)治疗,比较两组CD4+CD25+T细胞和T淋巴细胞亚群表达,血清IL-10、IL-35、TGF-β水平及治疗效果.结果 研究组CD4+T、CD25+T、CD4+CD25+T、CD4+CD25+T/CD4+T均低于对照组,血清IL-10、IL-35、TGF-β水平均低于对照组(P<0.05);研究组总有效率高于对照组(P<0.05).结论 在对小儿重型再生障碍性贫血进行治疗的过程中,免疫抑制治疗效果较为理想,对相关细胞因子的表达以及CD4+CD25+T细胞具有一定的影响,值得临床推广应用.     

再生障碍性贫血造血细胞Fas抗原表达与T淋巴细胞功能的研究

目的 研究造血细胞凋亡与T淋巴细胞免疫在再生障碍性贫血(再障，Aplastic anemia，AA)发病机制中的作用及两者相关性。方法 采用流式细胞仪测定40例AA患者和15例非血液、免疫系统疾病对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)的总CD34^ 、CD34^ Fas^ 、CD34^ Fas^-、CD3^ 、CD8^ 、CD3^ 、CD3^ CD25^ 标记值。结果 (1)与对照组比较，AA组总CD34^ 细胞％明显减少而其Fas表达率(以占总CD34^ 细胞％为计)明显增高。(2)AA组CD34^ 细胞％数与其Fas抗原表达率无明显负相关。(3)AA组T细胞％明显增多，且以CD8^ 细胞和CD3^ CD25^ 细胞增多为主。(4)AA组CD34^ 细胞％数与其T细胞活化状态无显著负相关。(5)AA组CD34^ 细胞Fas表达率与其T细胞活化状态无显著正相关。结论 AA骨髓存在着造血细胞数量减少和T淋巴细胞亚群数量、功能的异常，造血细胞数量减少还可能与Fas以外途径诱导的凋亡过度有关。骨髓造血细胞凋亡过度可能有活化T淋巴细胞免疫以外的途径诱导Fas途径或活化T淋巴细胞可以通过Fas之外的途径诱导造血细胞凋亡。     

再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群的变化

本文应用T淋巴细胞单克隆抗体和间接免疫荧光技术检测了28例再生障碍性贫血患者和20名正常人外周血中T淋巴细胞及其亚群的变化。结果发现再障患者OKT3、OKT。正常，OKT8明显高于正常，OKT4／OKT8比值明显降低，其中5例(18%)再障患者OKT4/OKT8≤l。以上结果提示再障患者抑制性T细胞增高。这种免疫平衡失调而导致的造血抑制可能与再障发病密切相关。     

再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞对CD4~-细胞功能的影响

目的探讨再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)对正常CD4-细胞功能的影响。方法采集和分离15例AA患者和10例正常人BM-MSCs进行体外培养。倒置显微镜结合荧光共聚焦显微镜观察BM-MSCs的形态和生长情况,流式细胞术检测免疫表型,诱导BM-MSCs成骨和成脂,综合进行BM-MSCs鉴定。BM-MSCs与免疫磁珠负集的外周血CD4-细胞共培养观察其对CD4-细胞功能的影响,采用倒置显微镜和BrdU方法分析CD4-细胞的克隆形成和增殖能力,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CD4-细胞分泌的细胞因子水平。结果正常人和AA患者骨髓间充质干细胞均呈长梭形,辐射状或旋涡状贴壁生长;诱导后均向成骨细胞和脂肪细胞分化;均表达CD105、CD73、CD90、CD29、CD44、CD49e、CD166、CD13和HLA-ABC,不表达CD34、CD45和HLA-DR。与正常对照组比较,AA患者BM-MSCs抑制CD4-细胞克隆形成和增殖能力减弱(P<0.05)。同时,AA患者BM-MSCs抑制CD4-细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)的能力明显低于正常对照组(P<0.05)。结论 AA患者骨髓间充质干细胞在调节CD4-细胞免疫功能方面存在缺陷,可能进一步加重骨髓免疫损伤。     

CTLA-4Ig抑制再生障碍性贫血患者T淋巴细胞

研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4融合蛋白（CTLA 4Ig）诱导再生障碍性贫血（AA）患者骨髓T淋巴细胞免疫耐受的作用。方法：采用免疫荧光标记法、流式细胞术分析CTLA 4Ig阻断前后AA患者骨髓T淋巴细胞表型CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、CD4+CD25+和CD8+CD25+的变化。结果：再障试验组与对照组相比，重型再障（SAA）和非重型再障(NSAA)患者骨髓CD3+、CD25+比值、CD4+和CD8+细胞中CD25+细胞比值均明显减低(P＜0.05),CTLA 4Ig对重型再障的抑制作用高于非重型再障，对CD4+细胞的抑制作用高于CD8+群体。结论：CTLA 4Ig能够抑制再生障碍性贫血患者骨髓局部的异常自身免疫反应，降低骨髓T淋巴细胞对丝裂原的异常反应。     

再生障碍性贫血患者T细胞亚群及HLA-DR抗原表达的意义

目的 :检测再生障碍性贫血患者外周血T淋巴细胞亚群CD4 + 、CD8+ 及HLA DRT抗原的表达 ,探讨再生障碍性贫血发病的免疫机制 ,为再障的临床诊断和治疗提供理论依据。方法 :采用免疫组化斑点印迹技术进行检测 ,并用薄层扫描仪对所有班点印迹信号进行扫描。结果 :再障患者CD4 + 降低 ,CD8+ 升高 ,CD4 + /CD8+ 比值倒置 ,HLA DR表达增高。结论 :T淋巴细胞亚群比例失衡及HLA DR表达升高可能参与再障的发病过程     

再生障碍性贫血患者骨髓CD34~+和Fas~+细胞Fas抗原的表达

采用流式细胞术检测再生障碍性贫血 (AA ,以下简称再障 )患者骨髓CD34 + 细胞表面Fas抗原的表达 ,采用体外短期液体培养的方法研究干扰素γ(IFN γ)对AA患者骨髓CD34 + 细胞表面Fas抗原表达的影响 ,以探讨Fas介导的凋亡在AA发病中的作用。正常对照骨髓CD34 + 细胞表面Fas抗原的表达率为 ( 1 0 .0 2± 2 .33) % ,重型再障组(SAA)和慢性再障组 (CAA)分别为 ( 38.2 8± 9.0 1 ) %和 ( 2 6 .6 6± 4 .2 7) % ,SAA组和CAA组与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 ) ;SAA组与CAA组比较也有显著性差异 (P <0 .0 5 )。正常骨髓单个核细胞在含SCF、IL 3、GM SCF和EPO细胞因子组合的液体培养体系中培养 ,加入IFN γ时 ,CD34 + 细胞表面Fas抗原表达稍增高 ,AA患者骨髓在上述相同的条件下 ,CD34 + 细胞表面Fas抗原表达与正常对照骨髓比较显著增高 (P <0 .0 5 ) ,且SAA组明显高于CAA组 (P <0 .0 5 )。实验结果表明 ,AA患者骨髓CD34 + 细胞表面Fas的表达明显高于正常对照 ;AA患者骨髓单个核细胞体外培养时 ,IFN γ促使骨髓CD34 + 细胞表面Fas的表达作用较正常对照明显增强。结果提示 ,AA患者骨髓CD34 + 细胞表面Fas的异常表达可能与AA的发病有关。     

愈障汤对再生障碍性贫血大鼠骨髓细胞超微结构的影响

目的 探讨愈障汤对再生障碍性贫血大鼠骨髓细胞超微结构的影响及保护、修复作用。方法 将80只Wistar大鼠按随机区组法分为正常对照组、模型对照组、中药组和西药组。采用全身照射加腹腔注射药物法建立大鼠再降模型。分组处理后于实验第10,16天测定外周血及骨髓有核细胞数;透射电镜观察骨髓细胞线粒体超微结构。结果 电镜下,对照组造血细胞发育障碍,出现线粒体嵴模糊、嵴间腔消失、髓样变、空泡化等现象,血窦内皮细胞断裂。治疗组外周血象及骨髓细胞病理变化明显好于模型对照组。结论 愈障汤具有升高再障大鼠外周血各项指标,保护、修复骨髓造血细胞损伤,并促进细胞增殖、分化的作用。     

Expression of CD28 and CTLA4 on T Cells in Bone Morrow of Immune-mediated Aplastic Anemia Mice

Summary： To investigate the expression and significance of CD28 and CTLA4 on T cells in bone marrow of aplastic anemia （AA） mice, in vitro bone marrow mononuclear cells （BMMNCs） were activated through being incubated with PHA （15 μg/mL）. The expression of CD28 and CTLA4 on T cells incubated with or without PHA was detected by two-color flow cytometry. The expression of CD28 and CTLA4 was significantly increased after PHA stimulation. In the AA mice. the expression of CD28 with or without PHA stimulation was both higher than that in the normal mice （both P〈0.01）, but the expression of CTLA4 with or without PHA stimulation showed no significant difference in comparison to that in the normal mice （both P〉0.05）. In the AA mice, there were more activation and activated potential of T cells than the normal, and the abnormal expression of CD28 and CTLA4 may participate in immunological disorder mediated by T cells.     

红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响,并探讨其造血调控作用机制。方法 用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法和流式细胞术（FCM）分别检测红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠外周血、骨髓有核细胞以及骨髓细胞周期的影响,同时用免疫组织化学方法检测各组骨髓细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况。结果 低剂量和高剂量红景天苷能明显升高外周血白细胞（WBC）和骨髓有核细胞（BMC）数,低剂量红景天苷能明显升高外周血血小板（PLT）数,促进骨髓G0／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,而高剂量红景天苷具有明显促进S期细胞向G2／M期细胞转化的能力,从而导致高、低剂量组G2／M期细胞比例明显升高,增殖指数（PI）也明显升高。另外,高、低剂量红景天苷都能促进骨髓细胞中Bcl-2的表达。其中低剂量红景天苷的促进作用更为明显。同时,高、低剂量红景天苷也都能明显降低骨髓细胞中Bax的表达。结论 红景天苷可能通过促使骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞解除G0／G1期阻滞,加速骨髓G0／G1期细胞向S期细胞、S期细胞向G2／M期细胞的转化以及升高骨髓细胞Bcl-2的表达、降低Bax的表达来抑制骨髓细胞凋亡,促进骨髓造血功能的恢复。     

再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞中细胞周期蛋白D的表达及意义

目的 观察再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞中细胞周期蛋白D(CyclinD)不同亚型的表达，以探讨其发病机制。方法 抽取再生障碍性贫血患者及正常对照组骨髓标本，用淋巴细胞分离液分离出骨髓单个核细胞，按Trizol-氯仿-异丙醇一步法提取细胞总RNA，用RT-PCR方法检测Cyclin D不同亚型(D1、D2、D3)的表达。结果 Cyclin D1在两组标本中都没有表达，而Cyclin D2、Cyclin D3有表达，且再生障碍性贫血患者的表达率及表达水平都显著低于正常对照组。结论 再障患者骨髓单个核细胞中Cyclin D的表达显著降低可能是再障造血抑制、骨髓衰竭的原因之一。     

rhBMP-2对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血恢复的促进作用

探究了人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)对再障小鼠的治疗作用。采用5-FU联合白消安建立小鼠再障模型,通过干预rhBMP-2进行治疗。考察了各实验组小鼠白细胞数、骨髓单核细胞数、体重、存活率、脾系数、粒系-巨系细胞集落(CFU-GM)数以及骨髓单核细胞中CD34⁺细胞比例,进行股骨、脾脏HE切片分析。结果表明,相较于再障对照组,rhBMP-2治疗组小鼠的白细胞数、存活率、CFU-GM集落数及骨髓单核细胞数显著提高,并且骨髓单核细胞中的CD34⁺细胞含量也提高,显著改善脾脏功能和缓解骨髓抑制,证实rhBMP-2能够促进再障小鼠造血损伤的修复。     

再生障碍性贫血治疗前后骨髓病理改变分析

再生障碍性贫血是由于骨髓干细胞或造血微环境的损伤以及免疫因素作用致使红骨髓脂肪变,红骨髓总容量减少,血中全血细胞减少的疾病。临床常表现为严重的贫血、出血和感染,其典型的骨髓病理改变是骨髓造血组织减少,脂肪组织所占面积增多。临床治疗较困难,近年免疫抑制剂环孢素A广泛用于治疗再生障碍性贫血,特别是对重型再生障碍性贫血的治疗取得较好的疗效,现将我院近4年来收治的再生障碍贫血病例对其治疗前后骨髓活检的病理改变进行总结。     

愈障汤对慢性再生障碍性贫血患者骨髓CD_(34)~+细胞bcl-2表达的影响

目的　探讨愈障汤治疗慢性再生障碍性盆血 (CAA)的作用机制。方法　对愈障汤治疗的 39例CAA患者分别于治疗前后采用磁式细胞分选器 (MACS)分离纯化骨髓CD3 4+ 细胞 ;采用SABC亲和细胞法和CMIAS系列多功能真彩图像分析仪检测骨髓CD3 4+ 细胞bcl 2的表达 ,并与 2 6例健康对照组比较。结果　CAA患者骨髓CD3 4+ 细胞bcl 2蛋白表达的阳性率和OD值治疗前均较健康组减低 (P <0 .0 1) ,治疗后显著升高 (P <0 .0 1) ,bcl 2蛋白表达与临床疗效呈正相关。结论　愈障汤治疗CAA的作用机制可能是通过上调凋亡抑制基因bcl 2的表达 ,从而阻抑了骨髓CD3 4+ 细胞的过度凋亡。     

愈障汤对慢性再生障碍性贫血患者骨髓CD34^＋细胞bcl—2表达的影响

目的探讨愈障汤治疗慢性再生障碍性盆血(CAA)的作用机制.方法对愈障汤治疗的39例CAA患者分别于治疗前后采用磁式细胞分选器(MACS)分离纯化骨髓CD34+细胞;采用SABC亲和细胞法和CMIAS系列多功能真彩图像分析仪检测骨髓CD34+细胞bcl-2的表达,并与26例健康对照组比较.结果CAA患者骨髓CD34+细胞bcl-2蛋白表达的阳性率和OD值治疗前均较健康组减低(P＜0.01),治疗后显著升高(P＜0.01),bcl-2蛋白表达与临床疗效呈正相关.结论愈障汤治疗CAA的作用机制可能是通过上调凋亡抑制基因bcl-2的表达,从而阻抑了骨髓CD34+细胞的过度凋亡.     

补髓生血颗粒对CAA患者骨髓单个核细胞c-met受体mRNA表达水平的影响

目的探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血（CAA）患者骨髓单个核细胞C-metmRNA表达的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞c-metmRNA表达水平的变化。结果CAA患者骨髓c-metmRNA表达水平高于正常组,治疗后二者表达水平均有不同程度下降,并且补髓生血颗粒对二者表达水平的下调程度优于再障生血片（P〈0．05）。结论CAA患者骨髓c-metmRNA的表达存在异常,补髓生血颗粒剂可能通过调节骨髓c-metmRNA的表达来改善CAA患者的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复。