高效毛细管电泳同时测定川西獐芽菜中龙胆苦苷和獐芽菜苦苷

目的:建立高效毛细管电泳(CE)同时测定川西獐芽菜中龙胆苦苷及獐芽菜苦苷的方法。方法:研究运行缓冲液的浓度、pH、添加剂β-环糊精浓度、检测波长及分离电压对分离结果的影响。在最佳分离测定条件下,龙胆苦苷和獐芽菜苦苷得到快速分离检测。结果:龙胆苦苷和獐芽菜苦苷分别在9.375¹50μg/mL、6.252150μg/mL、6.252¹00μg/mL范围内线性关系良好,r值分别为0.9997和0.9998,加样回收率分别为99.74%和99.58%,保留时间RSD值分别为6.7%和5.1%,峰面积的RSD值分别为1.98%和2.43%。结论:本方法简便、快速、重现性好,适用于含有龙胆苦苷、獐芽菜苦苷类药物成分的检测。     

川西獐芽菜化学成分研究

目的 研究川西獐牙菜Swertia mussotii的化学成分.方法 采用柱色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱解析鉴定化合物结构.结果 从川西獐牙菜75％乙醇提取物中分离得到19个化合物,分别鉴定为1-羟基-3,4,7,8-四甲氧基呫吨酮(1)、1,7-二羟基-3-甲氧基呫吨酮(2)、1,3,7-三羟基呫吨酮(3)、1,3,7,8-四羟基呫吨酮(4)、1,3,8-三羟基-7-甲氧基呫吨酮(5)、1,3-二羟基-7,8-二甲氧基呫吨酮(6)、1,5,8-三羟基-3,4-二甲氧基呫吨酮(7)、1-羟基-3,4,5,8-四甲氧基呫吨酮(8)、1-羟基-3,5,8-三甲氧基呫吨酮(9)、(S)-(+)-龙胆内酯(10a)、(R)-(-)-龙胆内酯(10b)、1,8-二羟基-3,7-二甲氧基呫吨酮(11)、1-羟基-3,7,8-三甲氧基呫吨酮(12)、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基呫吨酮(13)、1,7,8-三羟基-3-甲氧基呫吨酮(14)、1,3,5,8-四羟基呫吨酮(15)、1,7-二羟基-3,4,8-三甲氧基呫吨酮(16),芒果苷(17)、齐墩果酸(18).结论 化合物1～9均为首次从该种植物中分离得到,化合物10a和10b为首次从獐牙菜属植物中分离得到.     

藏药川西獐牙菜及其同属植物的药理作用及临床应用研究进展

川西獐牙菜（Swertia mussotii Franch．）是一种用于治疗黄疸型肝胆疾病和病毒性肝炎的珍稀藏药草本植物。近年来采用现代中药研究方法,从川西獐牙菜中分离、提取出许多新的有效成分。现代药理研究表明,川西獐牙菜具有保肝、抗病毒、抗菌、消炎等多种作用。本文对近年来藏药川西獐牙莱的各种化学成分、药理活性及临床应用等方面的研究进展进行了综述,并提出了开发利用川西獐牙菜资源的建议。     

橐吾属药用植物5S rRNA基因间隔区序列与含HPAs植物的鉴别

目的：对橐吾属Ligularia药用植物的5S rRNA基因间隔区序列进行测定，为含肝毒吡咯里西啶生物碱(HPAs)植物的鉴别提供分子依据。方法：对12种橐吾属植物的5Sr RNA区序列进行PCR扩增、测序，并运用CLUSTAL、MEGA等软件对所测序列进行了排序、对比和分析。结果：建立了12种橐吾属药用植物的5S rRNA区序列数据库，橐吾属植物在该区间具有显著的种间差异，替代数为3～53，变异位点数128个，信息位点数58个。结论：含HPAs的橐吾属植物的5S rRNA区序列具有明显而稳定的特异性鉴别位点，可用作该类型植物鉴别的分子标记。     

藏药川西獐牙菜中SmMK基因的克隆及生物信息分析

目的了解川西獐牙菜Swertia mussotii Franch甲羟戊酸途径中的关键酶甲羟戊酸激酶基因(MK)的功能,并进一步推进川西獐牙菜中的甲羟戊酸途径的研究。方法根据川西獐牙菜的转录组信息,获得了川西獐牙菜MK(SmMK)基因的全长c DNA序列,并且设计了特异性引物,利用RT-PCR对该基因进行了克隆;利用生物信息学方法,对Sm MK基因的序列进行分析;构建原核表达载体MBP-SmMK,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,然后对Sm MK基因进行了原核表达,并对其进行了纯化。结果 Sm MK基因cDNA全长为1 164 bp,共编码387个氨基酸。SmMK与其他植物中的MK具有较高相似性。对其信号肽、跨膜区域、蛋白定位及二级结构和三维构象进行了预测分析。SDS-PAGE检测表明所纯化蛋白与预期蛋白的大小相一致,为40970。结论为进一步研究川西獐牙菜中MK的功能奠定了基础,并为进一步研究川西獐牙菜中的甲羟戊酸途径,提高川西獐牙菜中类异戊二烯化合物的产量提供了依据。     

rRNA基因内转录间隔区测序分析在中草药鉴定中的应用

目的：研究rRNA基因内转录间隔区（internaltranscribded spacer,ITS)PCR扩增及碱基测序分析对中草药进行鉴定的方法，并探讨该方法的科学性及其应用价值。方法：应用PCR－碱基测序法对所提取的植物性中药材DNA中的rRNA基因内转录间隔区进行PCR扩增和序列测定，以获得不同植物性中药材rRNA基因内转录间隔区扩增产物电泳图谱 和碱基序列，以此作为中药材的分子鉴定标记，结果：不同中草药rRNA基因内转录间隔区电泳条带，碱基序列组成，长度各不同同。 结论：不同植物性药材rRNA基因内转录间隔区可作为分子生物学水平鉴定中草药的靶基因之一。     

野生与栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚药效学的比较研究

目的研究野生和栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚的乙醇提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用一次性腹腔注射四氯化碳花生油(0.12%)方法制造染毒小鼠模型,分别给其注射不同剂量的野生和不同剂量、不同地点的栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚对模型动物进行干预性保护,然后测定不同实验组小鼠的ALT和AST活性。结果不同剂量的野生和不同剂量、不同地点的栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚均能降低四氯化碳导致的小鼠血清ALT和AST活性升高。结论栽培川西獐牙菜和椭圆叶花锚完全可以代替野生种,同样对小鼠实验性肝损伤具有一定的保护作用。     

高寒藏药──川西獐牙菜组织培养研究──Ⅱ.愈伤组织的生长和培养条件的影响

报道川西獐牙菜愈伤组织的生长动态以及培养基、激素、接种时期、培养温度对其生长的影响。     

遥感和GIS在四川省中藏药川西獐牙菜适宜性分布研究中的应用

川西獐牙菜是一种珍稀的中藏药材,目前对于川西獐牙菜的研究主要集中在药用疗效和药用价值方面,而基于遥感与GIS适宜性分布研究较少。运用遥感和GIS技术来研究分析四川省川西獐牙菜适宜性分布区域,为野生资源保护开发、人工引种栽培以及调整四川省中药产业布局提供了科学依据。该研究在文献查阅和分析川西獐牙菜分布适宜性的海拔、年降水、年均温等生态因子基础上,基于遥感与GIS技术,获取生态因子、叠加分析、结合GPS野外验证数据,对四川省川西獐牙菜的适宜性分布区域进行了研究。(1)川西獐牙菜在四川省适宜分布面积为1 543.749 km2,主要分布在德格县、甘孜县、道孚县、康定县、马尔康市、金川县、小金县、丹巴县、稻城县、乡城县、新龙县、阿坝县、木里县等县市,占该区县市总面积的7.25%;(2)相关资料以及野外实地验证调查发现,通过GIS得到的川西獐牙菜适宜分布区域与实际分布情况基本吻合。研究表明基于遥感与GIS技术提取川西獐牙菜适宜分布区是可行的,可以应用到其他道地珍稀中药材的适宜性分布区域研究。     

rRNA基因内转录间隔区测序分析在中草药鉴定中的应用

目的 :研究rRNA基因内转录间隔区 (internaltranscribdedspacer ,ITS)PCR扩增及碱基测序分析对中草药进行鉴定的方法 ,并探讨该方法的科学性及其应用价值。方法 :应用PCR—碱基测序法对所提取的植物性中药材DNA中的rRNA基因内转录间隔区进行PCR扩增和序列测定 ,以获得不同植物性中药材rRNA基因内转录间隔区扩增产物电泳图谱和碱基序列 ,以此作为中药材的分子鉴定标记。结果 :不同中草药rRNA基因内转录间隔区电泳条带 ,碱基序列组成 ,长度各不相同。结论 :不同植物性中药材rRNA基因内转录间隔区可作为分子生物学水平鉴定中草药的靶基因之一。     

川西獐牙菜牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆及表达分析

目的从川西獐牙菜Swertia mussotii中克隆牻牛儿基焦磷酸合成酶(Sm GPPS)编码基因,并进行生物信息分析及该基因的表达研究。方法根据川西獐牙菜转录组Sm GPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到c DNA序列,通过生物信息对该序列进行分析;构建原核表达载体p ET-28a-Sm GPPS,转入大肠杆菌BL-21(DE3)中,在37℃、1 mmol/L IPTG诱导下进行表达。采用半定量RT-PCR方法检测Sm GPPS基因在川西獐牙菜不同组织中的表达强度。结果 Sm GPPS c DNA全长1 119bp,编码372个氨基酸。并对其蛋白二级、三级结构进行了分析和预测。Sm GPPS蛋白与其他植物中GPPS蛋白具有高度的相似性。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。半定量RT-PCR结果表明Sm GPPS在叶中表达量最高。结论为进一步研究该基因的功能和利用基因工程手段提高川西獐牙菜中环烯醚萜类化合物产量提供了基础。     

5S-rRNA基因间区序列变异用于金银花药材道地性研究初探

目的;研究金银花药材道地性形成的基因基础。方法：用SDS法提取金银花Lonicera japonica不同居群,外类群细毡毛忍冬L.similis和山银花L.confusa的总DNA,进行5S－rRNA基因间区的PCR扩增和测序,并用软件Mega进行分析。结果：Lonicera L.属植物5S－rRNA基因间区约210bp,其中G＋C含量较高,达70％左右,不同居群的L.japonica碱基序列有差别,通过测序可以进行鉴别。L.confusa与L.japonica间的遗传距离较大。结论：种间5S－rRNA基因间区的序列差异大于种内;道地药材之间的遗传距离较小;道地与非道地药材之间的遗传距离大于道地药材之间的遗传距离。     

rRNA基因间隔区碱基测序对当归进行鉴定的研究

目的 通过rRNA基因内转录间隔区的碱基序列测定。对当归进行分子水平鉴定。方法 常规提取当归种籽DNA，利用合成的特异性引物对其rRNA基因内转录间隔区进行套式PCR扩增，将扩增产物进行碱基序列测定。结果 琼脂糖凝胶电泳证实当归种籽中rRNA基因内转录间隔区PCR扩增产物存在；经测序后得到了当归种籽rRNA基因内转录间隔区的碱基序列。结论 rRNA基因内转录间隔区的碱基序列测定可做为分子水平鉴定植物性中药材的又一有效途径。     

应用rRNA基因间隔区碱基测序对中药(大黄)进行鉴定

目的：对大黄种子中提取的DNA中rRNA基因内转录间隔区进行PCR扩增，对于PCR扩增，并对PCR扩增产物进行碱基序列测定，以期从分子水平建立对中草药的鉴定标准，方法：常规提取当归、大黄种子DNA，利用合成的特异性引物对其DNA中rRNA基因内转录间隔区进行套式PCR扩增，将扩增产物以四色荧光标记的双脱氧末端终止循环法进行碱基序列测定。结果：经琼脂糖凝胶电泳证实大黄种子中rRNA基因内转录间隔区PRC基因内转录间隔区的完整碱基序列。RRNA基因内转录间隔区的碱基序列可作为分子水平鉴定植物中药材的又一有效途径。     

应用rRNA基因间隔区碱基测序对中药(大黄)进行鉴定

目的:对大黄种子中提取的DNA中rRNA基因内转录间隔区进行PCR扩增,对于PCR扩增,并对PCR扩增产物进行碱基序列测定,以期从分子水平建立对中草药的鉴定标准。方法:常规提取当归、大黄种子DNA,利用合成的特异性引物对其DNA中rRNA基因内转录间隔区进行套式PCR扩增,将扩增产物以四色荧光标记的双脱氧末端终止循环法进行碱基序列测定。结果:经琼脂糖凝胶电泳证实大黄种子中rRNA基因内转录间隔区PRC基因内转录间隔区的完整碱基序列。RRNA基因内转录间隔区的碱基序列可作为分子水平鉴定植物中药材的又一有效途径。     

苇叶獐牙菜的化学成分研究

目的研究苇叶獐牙菜Swertia phragmitiphylla的化学成分。方法用柱色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱解析鉴定化学结构。结果从苇叶獐牙菜中分离到17个化合物,鉴定了其中的9个化合物,分别为β-谷甾醇(1)、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基呫吨酮(2)、1,3,8-三羟基-7-甲氧基呫吨酮(4)、1,7,8-三羟基-3-甲氧基呫吨酮(5)、1,5,8-三羟基-3-甲氧基呫吨酮(6)、1,3,5,8-四羟基呫吨酮(7)、8-O-β-D-吡喃葡萄糖-1,5-二羟基-3-甲氧基呫吨酮(8)、8-O-β-D-吡喃葡萄糖-1,3,5-三羟基呫吨酮(9)、芒果苷(10)。其余8个还在鉴定中。结论化合物1～10均为首次从该种植物中得到。     

大孔树脂分离纯化川西獐牙菜中环烯醚萜苷类和酮类成分的工艺研究

目的研究大孔吸附树脂分离纯化川西獐牙菜中环烯醚萜苷类和酮类成分的工艺。方法考察了HPD-300、HPD-400、HPD-600、AB-8、DM-301及D-101-Ⅰ等6种吸附树脂对环烯醚萜苷类和酮类的指标成分獐牙菜苦苷和当药醇苷的动态吸附及洗脱性能,从中筛选出效果较好的树脂完成实验研究。结果HPD-300用于同时分离纯化环烯醚萜苷类和酮类成分,吸附洗脱性能良好,其吸附过程上样量为0.9 g生药/mL树脂,上柱液pH值约为8,体积流量为2 BV/h;洗脱过程采用水洗除杂,7 BV 20%、5BV 70%乙醇梯度洗脱,洗脱率都在90%以上,所得2个固体样品中两类成分质量分数均可达50%以上。结论HPD-300用于同时富集环烯醚萜苷类和酮类成分效果最佳,是一种理想的分离纯化介质。     

塞隆骨原动物高原鼢鼠核基因18SrRNA序列测定与分析

目的 :测定仓鼠科动物高原鼢鼠Myospalax baileyi的核rDNA基因序列 ,为塞隆骨正品基原检定提供分子依据。方法 :采用PCR直接测序技术测定高原鼢鼠 18S rRNA基因核苷酸序列并作序列特征分析。结果 :高原鼢鼠的 18Sr RNA序列长度为 1851bp。根据排序比较 ,高原鼢鼠与 2种鼠科动物间的DNA序列同源性为 72.04%～72.18%。结论 :通过基因序列分析 ,DNA测序技术可成为塞隆骨正品基原检定的准确有效手段。