脐血干/祖细胞的生物学特点

脐血是一重要的造血干 /祖细胞 (ＨＳＰＣ)来源 ,可用作临床干细胞移植 ,目前有关脐血的研究主要集中于ＨＳＰＣ的比例、细胞亚群的划分、对造血因子刺激的反应能力、增殖 /扩增潜能的控制及ＨＳＰＣ体外扩增的条件等。研究表明 ,脐血和成人骨髓来源的ＨＳＰＣ功能有显著不同 ,我们力图在细胞和分子水平论述其生物学特点。1　脐血中ＨＳＰＣ的比例　研究表明 ,1ｍｌ脐血中大约有原始红系祖细胞 (ＢＦＵ Ｅ) 80 0 0个 ,髓系祖细胞 (ＣＦＵ ＧＭ) 130 0 0～2 40 0 0 ,多能祖细胞 (ＣＦＵ ＧＥＭＭ) 10 0 0～ 10 0 0 0。由于培养条件的不同 ,各…     

体外长期培养对脐血造血干/祖细胞细胞周期及凋亡的影响

目前造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)已成为难治性血液病、免疫缺陷病及恶性肿瘤等的主要治疗手段。脐血是造血干 /祖细胞 (ＨＳＰＣ)的一种重要来源 ,由于单份脐血中细胞数量有限而限制了其临床应用 ,故脐血造血干 /祖细胞的体外扩增越来越引起人们的关注。我们观察了体外长期培养对脐血ＨＳＰＣ细胞周期及凋亡的影响 ,以了解脐血ＨＳＰＣ在体外扩增过程中某些生物学特性的变化。材料和方法1　脐血来源　 6份肝素抗凝脐血均来自我院妇产科健康产妇 ,采集量为 5 0～ 10 0ｍｌ,于采集后 4ｈ内分离单个核细胞(ＭＮＣ) ,洗涤 ,备用。2　ＣＤ3 4+细胞…     

巨细胞病毒对人骨髓粒-巨噬系祖细胞生长的影响

目的探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对人骨髓粒巨噬系祖细胞集落（ＣＦＵＧＭ）是否有直接抑制作用。方法采用造血祖细胞体外培养技术,研究病毒株ＨＣＭＶＡＤ１６９对ＣＦＵＧＭ生长的影响,用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测ＣＦＵＧＭ的细胞内ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结果高浓度ＨＣＭＶＡＤ１６９（２×１０６ｐｆｕ／ｍｌ和２×１０５ｐｆｕ／ｍｌ）在体外能明显抑制ＣＦＵＧＭ的生长（Ｐ＜０．０１）,而低浓度（２×１０４ｐｆｕ／ｍｌ）ＨＣＭＶＡＤ１６９则无此作用,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ的抑制作用因其浓度的不同而有差异;经ＩＳＰＣＲ检测发现在ＣＦＵＧＭ的细胞核中存在ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结论ＣＦＵＧＭ是ＨＣＭＶＡＤ１６９的宿主细胞之一,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ生长的抑制作用与其对ＣＦＵＧＭ的直接感染有关。     

外周血干细胞移植在再生障碍性贫血治疗中的应用

再生障碍性贫血 (再障 )的发病机制之一是造血干 /祖细胞量和 (或 )质的缺陷。近年来 ,应用造血细胞生长因子(ＨＧＦ)动员的外周血干细胞移植 (ＰＢＳＣＴ)治疗再障取得了一定进展 ,现综述如下。1　外周血造血干细胞 (ＰＢＳＣ)的优缺点　　与骨髓相比 ,ＰＢＳＣ不仅具有采集方法简便、患者痛苦少等优点 ,而且正常供者经动员后的ＰＢＳＣ中粒 巨噬细胞集落形成细胞 (ＣＦＣ ＧＭ)、ＣＤ3 4 细胞及长期培养起始细胞 (ＬＴＣ ＩＣ)的含量均高于骨髓[1] 。临床应用中也发现 ,ＰＢＳＣＴ后造血系统及免疫系统的重建快 ,降低了感染率及早期死亡…     

CD34+造血祖细胞的定向诱导分化研究

目的：探讨不同细胞因子组合定向诱导ＣＤ３４＋细胞向红系、粒系、巨核系及树突状细胞（ＤＣ）分化的能力。方法：利用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐血ＣＤ３４＋细胞，在液体培养体系中经不同细胞因子组合的诱导，检测各系祖细胞及ＤＣ的扩增倍数。结果：干细胞因子、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ６、粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素、血小板生成素的不同组合，可使红系、粒系或巨核系细胞优势生长，其祖细胞可分别被扩增１４．９７±２．８９，１４．４６±３．１９及３４．６７±４．６２倍，ＣＤ４１ａ＋细胞增加了１７．２９±２．３４倍，ＦＬＴ３配基＋ＧＭＣＳＦ＋ＩＬ４＋肿瘤坏死因子α的组合可诱导ＣＤ３４＋细胞形成大量树突状细胞，ＣＤ１ａ＋细胞的比例增至２４．２８％±２．１４％（对照组为０．３６％±０．２８％）。结论：不同细胞因子组合可定向诱导ＣＤ３４＋细胞向红系、粒系、巨核系及树突状细胞分化，这在造血调控研究、造血细胞支持治疗及肿瘤免疫治疗中具有广阔的应用前景     

正常骨髓CD^＋34造血干／祖细胞的富集

应用阳性选择策略，以新型ＩｓｏｌｅｘＴＭ５０系统建立了富集ＣＤ３４＋造血干／祖细胞（ＨＳＣ／ＨＰＣ）的免疫磁珠无菌分选术，对正常骨髓单个核细胞中的ＣＤ３４＋ＨＳＣ／ＨＰＣ进行富集与鉴定。结果表明，富集前ＣＤ３４＋ＨＳＣ／ＨＰＣ为１．４％～３．４％，富集后纯度高达８７．５％～９５．０％，回收率为４９％～８０％，仍保持细胞活力。该系统具有高效、快速和可复性好的特点，每次能分选２×１０９单个核细胞，可获取较多的ＣＤ３４＋ＨＳＣ／ＨＰＣ，整个分离过程≤３．５小时，为深入研究人类ＨＳＣ／ＨＰＣ的生物学特征与功能奠定了基础     

造血因子对骨髓增生异常综合征患者c-kit受体的调控作用

ｃ ｋｉｔ原癌基因是干细胞生长因子 (ＳＣＦ)的受体基因 ,ｃ ｋｉｔ受体 (ＣＤ1 1 7)与其配体结合对造血干 祖细胞起支持作用 ,并发挥调节造血的作用[1 ] 。国外报道 ,正常骨髓单个核细胞ｃ ｋｉｔ受体表达率为 (4.0± 1.8) % [2 ] 。我们曾报道正常骨髓单个核细胞ＣＤ1 1 7表达率为 (3.0 4± 1.49) % ,并发现骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)患者骨髓单个核细胞ｃ ｋｉｔ受体表达异常[3] ,这一异常是否与造血因子调控有关目前尚无报道。我们研究了ＳＣＦ、白细胞介素 3(ＩＬ 3)及红细胞生成素 (Ｅｐｏ)对ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞ｃ ｋｉｔ受…     

FLT3及其配体FL研究进展

ＦＬＴ３是一种受体型酷氨酸激酶,主要表达在造血干细胞（ＨＳＣ）上。ＦＬＴ３配基（ＦＬ）是新近发现的与造血凋控有关的早期造血生长因子。ＦＬＴ３与ＦＬ特异性结合后,自身酷氨酸激酶被激活,并与细胞内一系列蛋白质结合催化其酷氨酸残基磷酸化,启动细胞内的信号传递从而进造血功能增殖与分化。当与ＳＣＦ、ＥＰＯ、ＩＬ－３、ＩＬ－６、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ等联合应用时,则显示较强的体外扩增造血干／祖细胞及定向分化     

血小板第4因子及四肽AcSDKP的造血保护作用研究

目的了解血小板第４因子（ＰＦ４）和四肽Ｎ乙酰丝天赖脯（ＡｃＳＤＫＰ）对５氟尿嘧啶（５ＦＵ）处理后小鼠体内造血的作用。方法实验鼠用ＰＦ４（４０μｇ／ｋｇ）或ＡｃＳＤＫＰ（４μｇ／ｋｇ）注射２次,间隔６小时,第２次注射后２０小时再注射５ＦＵ（１５０ｍｇ／ｋｇ）。第６,８和１３天时,检查高增殖潜能的集落形成细胞（ＨＰＰＣＦＣ）、红系爆式集落形成单位（ＢＦＵＥ）、粒巨噬系集落形成单位（ＣＦＵＧＭ）、巨核系集落形成单位（ＣＦＵＭＫ）及巨核细胞（ＭＫ）。结果ＰＦ４或ＡｃＳＤＫＰ可促使６～８天的ＨＰＰＣＦＣ以及８天的ＢＦＵＥ和ＣＦＵＧＭ明显增加;ＰＦ４还能促进８天的ＣＦＵＭＫ和ＭＫ增加,但ＡｃＳＤＫＰ则无此作用。结论ＰＦ４和ＡｃＳＤＫＰ虽然对巨核祖细胞的作用不同,但它们均能加速体内ＨＰＰＣＦＣ、ＣＦＵＧＭ和ＢＦＵＥ的恢复,这两种分子有可能具有保护造血细胞抵抗化疗药物杀伤的作用。     

血小板第4因子对急性照射小鼠造血保护作用的实验研究

近年的研究表明,血小板第4因子(ＰＦ4)可抑制造血干祖细胞的生长[1,2],其抑制作用是可逆的,利用此性质能保护骨髓造血干祖细胞免受损伤[3]。作为肿瘤治疗重要手段之一的放疗及核泄漏等意外事故造成的核辐射可损伤正常造血组织,出现感染、出血甚至死亡。我们旨在探讨ＰＦ4对急性放射损伤小鼠骨髓细胞保护的作用机制。材料和方法1　实验动物　ＢＡＬＢｃ小鼠,雄性,体重18～20ｇ,鼠龄10～12周,购自第四军医大学实验动物中心。2　照射条件　60Ｃｏγ射线一次全身均匀照射,吸收剂量为75Ｇｙ,吸收剂量率为1.67Ｇｙｍｉｎ。3　试剂　ＰＦ4由上海贝…     

表达Y568F/Y570F双位点突变型人c-kit受体对小鼠FDCP-1细胞增殖特性的影响

我们选择来源于正常小鼠骨髓的一种典型的早期造血祖细胞ＦＤＣＰ 1作为细胞模型 ,通过对稳定表达野生型和Ｙ5 6 8Ｆ Ｙ5 70Ｆ双位点突变型人ｃ ｋｉｔ受体的重组细胞株ｈｃ ｋｉｔ ＦＤＣＰ 1和ｈｃ ｋｉｔＤＭ ＦＤＣＰ 1生物学特性进行比较 ,研究ｈｃ ｋｉｔ受体近膜区第 5 6 8位和 5 70位酪氨酸磷酸化对ＦＤＣＰ 1细胞增殖的影响。材料和方法1　试剂　重组人ＳＣＦ购自Ｒ＆Ｄ公司 ,抗人ｃ ｋｉｔ受体单克隆抗体购自Ｎｅｏｍａｒｋｅｒｓ公司 ,ＦＩＴＣ标记的山羊抗小鼠ＩｇＧ购自邦定泰克公司 ,四甲基偶氮唑盐 (ＭＴＴ)和碘化丙锭 (ＰＩ…     

脐血CD34^＋／CD19^—细胞与体外培养集落的相关性分析

用两种单克隆抗体（单抗）标记脐血造血祖细胞表面抗原（ＨＰＣＡ，ＣＤ３４）用流式细胞仪分析，并比较两种单抗标记的ＣＤ３４＾＋细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）和混合集落形成单位的相关性，结果表明脐血有核细胞中，抗ＨＰＣＡ－２ＦＩＴＣ阳性的细胞占１．０５±０．７２％，Ｔｕｋ３（纯抗体）阳性细胞占２．０６±１．２５％，差别显（Ｐ＜０．０５），每μｌ     

脐血CD_(34)~ CD_(19)~－细胞与体外培养集落的相关性分析

用两种单克隆抗体（单抗）标记脐血造血祖细胞表面抗原（ＨＰＣＡ，ＣＤ＿（３４））用流式细胞仪分析，并比较两种单抗标记的细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）和混合集落形成单位的相关性，结果表明脐血有核细胞中，抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ阳性的细胞占１．０５１０．７２％，Ｔｕｋ３（纯抗体）阳性细胞占２．０６±１．２５％，差别显著（Ｐ＜０．０５），每μｌ脐血两种单抗标记的细胞分别为９６．５６±５６．６４和２３１．４０±１６３．９３（Ｐ＜０．０５），变异系数依次为５８．４７％和６８．４３％。尽管抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ阳性细胞与阳性细胞数量呈显著正相关，但前者与ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｍｉｘ以及ＣＦＵｓ（ＣＦＵ－ＧＭ＋ＢＦＵ－Ｅ＋ＣＦＵ－Ｍｉｘ）均呈正相关，而后者仅与ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵｓ呈正相关。研究结果提示在检测造血祖细胞时，用抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ代替可降低假阳性，获得较好的细胞与ＣＦＵ间的线性关系。     

自体外周血CD_34~ 细胞移植治疗二例恶性血液病

移植物中含有肿瘤细胞是自体外周血造血干细胞移植(Ａｕｔｏ ＰＢＳＣＴ)治疗恶性血液病复发的主要因素之一。人造血干 /祖细胞表面表达ＣＤ3 4抗原 ,而许多肿瘤细胞如淋巴瘤、多发性骨髓瘤细胞表面不表达ＣＤ3 4抗原 ,采用纯化的自体ＣＤ3 4 细胞移植治疗淋巴瘤等肿瘤 ,可能达到净化移植物的目的。我们采用纯化的自体外周血ＣＤ3 4 细胞移植治疗恶性血液病 2例取得成功 ,报告如下。病例和方法1　病例　例 1,男 ,13岁 ,非霍奇金淋巴瘤 (ＮＨＬ)ⅢＡ 期 ,原始淋巴细胞性、弥漫型 ,经ＣＨＯＰ(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松 )等方案化…     

脐血造血干/祖细胞体外定向诱导扩增的研究

目的　观察不同因子组合在体外对脐血 (CB)中的巨核系等造血祖细胞的诱导扩增作用。方法　用体外液体悬浮培养法 ,将白细胞介素 3(IL 3)、白细胞介素 6 (IL 6 )、血小板生成素 (TPO)、脐血血浆 (CBP)作为刺激因子 ,添加不同的细胞因子组合 ,对CB的单个核细胞 (MNC)短期培养 2 1d。在培养的 0、7、14、2 1d检测新鲜细胞和培养细胞中的有核细胞数 (NC)、巨核系祖细胞 (CFU Mk)、粒巨噬系祖细胞 (CFU GM)、混合系祖细胞 (CFU GEMM)增殖倍数。结果　在 2 1d内 ,3个实验组的NC数 ,CFU GM、CFU Mk、CFU GEMM都有不同程度的增加 ,其中NC、CFU GM在培养的 2 1d达到高峰。CFU Mk、CFU GEMM在培养的 14d达高峰。在含有TPO的实验组中 ,CFU Mk的增殖倍数高于不含TPO的实验组 ,CFU GM、CFU GEMM增殖的倍数也高于不含TPO的实验组。含有CBP的实验组对CFU GM、CFU Mk、CFU GEMM有明显的促增殖作用。结论　CB中的含有丰富的造血干 祖细胞 ,可以在不同细胞因子的刺激下进行定向扩增 ,TPO可以促进干 祖细胞向巨核系分化 ,对粒巨噬系祖细胞也有促进作用。脐血血浆可以作为协同刺激因子促进CB中干 祖细胞增殖。     

血小板生成素的研究进展

生成血小板的巨核细胞是从骨髓造血干细胞分化发育来的。造血干细胞首先分化生成巨核系祖细胞,即巨核系集落形成单位。祖细胞阶段的细胞核内的DNA一般是2—8倍体,当祖细胞是2倍体或4倍体时具有增殖能力,这也是巨核细胞系可以增加细胞数量的唯一阶段。巨核系祖细胞继续向前分化成为具有8-32倍体的巨核细胞,并进一步成熟后分裂     

家族性高胆固醇血症合并家族性载脂蛋白B100缺陷的复合型杂合子表现更高的高胆固醇血症

家族性高胆固醇血症 (ＦＨ)是发生于ＬＤＬ受体上的常染色体显性遗传缺陷 ,导致早熟冠状动脉疾病 (ＣＡＤ) ,发生率为1∶5 0 0。家族性载脂蛋白Ｂ 10 0缺陷 (ＦＤＢ)是由 2号染色体上的ａｐｏＢ 10 0基因点突变造成的配基 受体结合异常。发生率亦为 1∶5 0 0 ,也可导致早熟ＣＡＤ。ＦＤＢ无法从表型与ＦＨ区分开。同时患有ＦＨ和ＦＤＢ的个体极为罕见。本文报道一个患有两种症候群的家族成员。方法　用ＰＣＲ单链构象多态性分析 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)和ＰＣＲ变性梯度凝胶电泳分析 (ＰＣＲ ＤＧＧＥ)研究ＬＤＬ受体全部 18个外显子和启动子区。…     

α干扰素联合GM-CSF体外培养多发性骨髓瘤患者外周血树突状细胞

树突状细胞 (ＤＣ)是目前公认的体内功能最强的抗原提呈细胞 (ＡＰＣ) ,它能显著地刺激初始Ｔ细胞 (ｎａｉｖｅＴｃｅｌｌｓ)的增殖 ,启动机体免疫反应 ,在激发以抗原特异性细胞毒性Ｔ细胞过继性免疫治疗肿瘤中起着重要的作用。ＤＣ经典的培养方法是用ＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 4从外周血ＣＤ1 4+细胞或用ＧＭ ＣＳＦ和ＴＮＦα从ＣＤ3 4 +造血干细胞中制备生成[1 3 ] 。 1998年Ｐａｑｕｅ ｔｔｅ等[4] 发现ＩＦＮα能诱导正常人外周血单核细胞向ＤＣ分化。但ＩＦＮα是否也能诱导多发性骨瘤 (ＭＭ)患者ＤＣ的生成尚不清楚。我们在体外应用ＩＦＮα…     

三种细胞因子对维持外周血CO34^＋CD33^—细胞体外长期培养的作用

外周血ＣＤ３４抗原阳性，ＣＤ３３抗原阴性的细胞，在造血细胞生长因子－Ｇ－ＣＳＦ，ＩＬ－３和干细胞因子的联合作用下，可以在体外维持造血达９周，克隆形成细胞大量增加，ＣＦＣ和有核细胞增殖高峰在液体培养的第６－７周，在液体培养中不加入ＨＧＦ和单独应用Ｇ－ＣＳＦ的情况下，这类细胞不能在体外增殖，结果表明，ＨＧＦ的联合应用在维持外周血造血细胞的体外长期生长起主要作用。     

自体外周血干细胞动员中测定CD34^＋Thy—1＋细胞的意义

目的：确切评估动员后外周血干细胞（ＰＢＳＣ）水平的变化，及时指导临床选择最佳采血时机。方法：用流式细胞术测定化疗和粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）联合动员时外周血ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋细胞含量的变化，同时用体外集落培养方法评价外周血祖细胞（ＰＢＰＣｓ）的克隆形成能力。结果：动员后循环血中ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋细胞、ＣＤ３４＋细胞和克隆形成细胞（ＣＦＣ）含量分别增高４８．６倍、５０．０倍和５３．１倍，高峰时间在化疗后第１２～１４天（注射Ｇ－ＣＳＦ的第６～８天）；外周血单个核细胞中ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋细胞、ＣＤ３４＋细胞的比例分别增高１３．８倍和１０．５倍；动员的早期阶段，ＣＤ３４＋细胞中Ｔｈｙ－１＋细胞比例最高。结论：联合应用化疗和Ｇ－ＣＳＦ对ＰＢＰＣｓ，尤其对早期干／祖细胞具有显著动员作用；用流式细胞术检测ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋细胞可及时指导临床准时采集ＰＢＳＣ。