人重组骨形态发生蛋白—2和β转化生长因子在诱导成骨中的 …

对人重组骨形态发生蛋白－２和β转化生长因子在诱导成骨的协同作用进行探讨。方法：２１０只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机分为３组,每组７０只,试验侧均位于右后肢,设立ｒｈＢＭＰ－２／牛松质骨载体,单纯牛松质骨载体为对照组,分别于术后１２ｈ－２１ｄ共１１个时间占才,观察其诱导成骨过程。结果ｒｈＢＭＰ－２／ＴＧＦ－β／牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖,分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于ｒｈＢＭＰ－２牛松质骨载体     

转化生长因子-β1对骨形态发生蛋白诱导成骨的促进作用

目的：我们通过观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ,TCF－β1）和骨形态发生蛋白(bone morpho-genetic protein,BMP)共同修复骨缺损,达到进一步阐明BMP诱导成骨机制的目的,方法：实验采用日本大耳白兔左尺骨中段12mm骨缺损实验模型,分为实验组,对照组和空白组,缺损内分别植入BMP／TGF－β1／载体,BMP／载体,载体,通过X线,组织学及电镜对比观察三组骨缺缶修复情况,结果：实验组骨缺损无论是骨痂出现还是骨接发生时间均较对照组明显提前,空白组骨缺损形成骨不连,实验组成骨细胞和软骨细胞无论出现的时间,数量和功能活跃程度均优于对照组,电镜观察见成骨细胞,软骨细胞内线粒体丰富,内质网增多,而对照组则相对较少,软骨细胞内线粒体丰富,内质网络增多,而对照组则相对较少,结论：TGF－β1具有促进BMP诱导成骨的作用,TGF－β1通过促进间充质细胞分裂增殖为BMP提供靶细胞,促进成骨细胞及软骨细胞的分裂增殖,促进骨细胞合成产生I型胶原,促进基质钙化,碱少骨吸收等作用来促进BMP的诱导成骨。     

骨折愈合中转化生长因子β与骨形成的关系

骨折愈合是机体结缔组织的一种再生修复过程,主要涉及两个内容:有关骨折修复的各种细胞的增殖活动;有机基质的形成和无机盐的沉积。随着分子生物学的发展,人们发现多种细胞因子在其中有调节细胞的增殖、分化及基质的合成、钙化的作用。近年来,有关骨愈合的概念,随着分子生物学的发展有所改变。骨愈合过程中,除了成骨细胞和成软骨细胞外,还需要许多的物质参与,特别是全身和局部细胞产生或传递的多种细胞介质的作用[1],这些作用通过自分泌和旁分泌系统促进骨细胞增殖和骨基质的生物合成。在这些细胞因子的作用下,成骨细胞、破骨细胞、骨细胞、…     

下颌骨骨膜牵张成骨的实验研究

目的探讨骨膜牵张诱导成骨在不做骨皮质切开的情况下是否可用于口腔颌面部成骨。方法选成年健康遵义地区产山羊9只，用自制的骨膜牵张装置分别固定于山羊的两侧下颌骨体部，不做皮质骨切开，使牵张器对一侧骨膜施以牵张力，而另一侧不加力，分别在实验后第30、45和60天处死山羊，对标本分别以游标卡尺测量其新生骨厚度。结果实验侧术后均有新生骨组织，而对照侧未见有新生骨组织厚度变化。结论对山羊下颌骨在不做骨皮质切开的情况下进行骨膜牵张有新骨生成，对口腔颌面部骨组织缺损的修复提供新的思路。     

人重组骨形态发生蛋白-2和β转化生长因子在诱导成骨中的协同作用

目的:对人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和β转化生长因子(TGF-β)在诱导成骨的协同作用进行探讨. 方法:210只BALB/c小鼠随机分为3组,每组70只,试验侧均位于右后肢,设立rhBMP-2/牛松质骨载体、单纯牛松质骨载体为对照组. 分别于术后12 h～21 d共11个时间点取材,观察其诱导成骨过程. 结果:rhBMP-2/TGF-β/牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于rhBMP-2/牛松质骨载体组,成骨量优于rhBMP-2/牛松质骨载体组,其碱性磷酸酶水平高峰较对照组提前,其组织钙含量明显高于对照组(P<0.05). 而单纯牛松质骨载体组在21 d 仅出现了少量增殖的间充质细胞. 结论:rhBMP-2和TGF-β在诱导成骨调节中存在着协同作用.     

转化生长因子β1在下颌骨牵引成骨过程中的作用

目的 :研究TGF β1在不同时期下颌骨牵引成骨过程中表达水平的变化 ,探讨其可能发挥的作用。 方法 :恒河猴 16只 ,10只行单侧下颌骨牵引 ,6只行双侧下颌骨牵引 ,采用下颌角部骨截开术 ,5d间歇期后以每天0 .5mm× 2次的速度牵引 ,共 15d。分别于牵引完成时、牵引后 2、4、6、12周时处死一组动物。将牵引区骨块制作脱钙石蜡切片 ,进行HE染色及TGF β1免疫组化染色。结果 :牵引完成后早期阶段 ,TGF β1阳性着色颗粒广泛分布于牵引区的纤维血管基质、成骨细胞及成软骨细胞中 ,尤其是在截骨断端的血肿区 ,TGF β1的阳性着色最强。在稳定期 ,牵引区TGF β1的阳性着色逐渐减弱 ,主要见于胶原纤维矿化、成骨细胞形成类骨质的区域 ,且主要位于血小板、血管内皮细胞及成骨细胞胞浆中。牵引完成后 12周 ,除骨髓腔中纤维血管基质可见少量TGF β1的阳性着色颗粒外 ,在骨外膜、骨基质及骨细胞内已见不到明显的TGF β1的阳性着色。结论 :TGF β1活跃参与了牵引区新骨的形成过程 ,它在刺激和诱导骨前体细胞及原始间充质细胞增殖分化 ,促进牵引区成骨细胞及血管内皮细胞增生方面可能发挥了重要作用。     

转化生长因子β研究新进展

转化生长因子β（transforming growth factor-β,TGF—β）家族由30多个成分组成,包括TGF—βs（即狭义的TGF-β）、活化素（aclivins）以及成骨蛋白（bone morphogenic proteins,BMPs）．它在调节细胞生命周期、胚胎发育等人体众多的生物反应方面起重要作用。胚胎期TGF—β信号反常将导致发育异常,如果其在生后出现异常．将会引起许多疾患．常见的如肿瘤、自身免疫疾病、组织纤维化等．     

抗增殖蛋白抑制转化生长因子-β1诱导的肾脏成纤维细胞增殖和表型改变

目的 研究抗增殖蛋白（prohibitin,PHB）在肾间质纤维化发生中的作用。方法（1）检测48例原发性肾小球肾炎患儿肾组织中PHB蛋白表达,并比较其与肾小管间质损伤程度的相关性。（2）观察PHB在大鼠肾脏成纤维细胞（NRK-49F）中亚细胞定位,以Western印迹和RT-PCR测定NRK-49F受到转化生长因子B1（TGF-β1）刺激后PHB表达的变化。（3）构建PHB表达质粒并转染,观察PHB对NRK-49F细胞周期以及表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白质和mRNA的影响。结果 （1）PHB蛋白主要表达于肾间质细胞和肾小管上皮细胞的胞质,随肾小管间质损伤程度加重而逐渐减弱（组间比较,均P〈0．01）,PHB表达量与肾小管间质损伤程度显著负相关（r=-0．802,P〈0．01）。（2）激光共焦显微镜下见PHB主要分布于NRK49F的细胞质,细胞核亦有较弱表达。TGF-β1刺激后PHB蛋白和mRNA表达均下调,呈现时间和剂量依赖关系（组间比较,P〈0．01）。（3）成功构建PHB真核表达质粒,转染48h细胞中PHB蛋白量升高约2．54倍（与未转染组比较,P〈0．01）。（4）转染PHB基因明显抑制TGF—β1所诱导的细胞增殖,使更多的细胞处于G0／G1期（与TGF-β1组比较,P〈0．01）,而对未受刺激的细胞无影响（P〉0．05）。（5）转染PHB基因明显抑制TGF—β1所诱导的α-SMA蛋白质和mRNA表达（与TGF-β1组比较,P〈0．01）,而对α-SMA基础表达无影响（与TGF-β1组比较,P〉0．05）。结论 PHB在肾组织中的表达水平可以反映肾小管间质损伤程度．外源性PHB显著抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖和表型改变。     

TGF—β促进骨折愈合的实验研究

目的：观察TGF－β对小鼠股骨骨折的修复能力及骨愈合过程。方法：将TGF－β、PBS25μL分别注射于小鼠股骨骨折处，连续注射10天，分别于7、14、21天进行X线摄片和骨折处切片光镜观察，并应用微机图像处理系统作骨痂骨骨系细胞立体定量分析。结果：术后21天给药组小鼠伤肢完全愈合，骨折线消失，骨髓腔再通；而对照组动物骨折处未愈合，断端清楚可见。结论：本实验证明了外源性TGF－β具较强的生物活性，是强促分裂因子，对骨折的修复有很好的促进作用。     

转化生长因子β与糖尿病肾病

糖尿病肾病 (ｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ,ＤＮ)是糖尿病的严重慢性并发症 ,其主要病理特点是肾脏高灌注和肥大 ,肾小球基底膜增厚及以肾小球系膜区为主的细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ)积聚 ,导致弥漫性或结节性肾小球硬化 ,出现蛋白尿、高血压、肾功能衰竭等功能紊乱。ＤＮ已成为终末期肾功能衰竭及糖尿病死亡率增加的重要原因之一 ,然而其发病机制尚不十分清楚 ,近年来关于转化生长因子 β(ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ ,ＴＧＦ- β)的介导作用已引起广泛的关注 ,本…     

成纤维细胞生长因子促进骨形成的实验研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对成骨细胞合成骨作用的影响。方法　实验分为 5组 ,每组 8孔 ,每组分别加入浓度为 0 1、1、10、10 0 μg·L-1的bFGF ,每组均设空白对照 ,分别在实验后 1、2、3、5、7天进行检测。结果　bFGF可明显促进人成骨样细胞活性 ,在 0 1～ 10 μg·L-1呈剂量依赖性 ,10 μg·L-1时bFGF的作用最强 ,10 0 μg·L-1以上者作用减弱。结论　bFGF能有效促进骨形成 ,但需和其他细胞因子协同作用。     

转化生长因子—β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用１４天鸡胚股骨无血清培养、５－溴尿嘧啶核苷（ＢｒｄＵ）掺入标记和细胞核增殖抗原（ＰＣＮＡ）免疫染色方法，研究转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对骺软骨细胞增殖的作用。结果显示：ＢｒｄＵ阳性软骨细胞数目与分布都位于ＴＧＦ－β作用剂量和时间密切相关，ＴＧＦ－β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖，与ＢｒｄＵ标记相比，ＰＣＮＡ阳性细胞分布区域和数目远多于前者，根据染色情况可以将ＰＣＮＡ阳性细胞分为Ｓ期和Ｓ期细胞两种。结论：ＴＧＦ－β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动，并能诱导非增殖软骨细胞表达ＰＣＮＡ，用ＰＣＮＡ作为细胞增殖的指标是不适宜的。     

TGF—β诱导骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化

目的 通过研究转化生长因子－β（TGF－β）对骺板软骨细胞分化的作用,揭示TGF－β软骨内成骨的作用机制。方法 采用鸡胚股骨无血清培养、酶组化检测碱性磷酸酶（ALP）、免疫组化检测Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白（FN）等方法,观察TGF－β在不同作用时间和剂量时对骺板肥大区软骨细胞分化的作用。结果 TGF－β可使肥大区软骨细胞表达Ⅰ型胶原和FN,使ALP表达增加,并存在着量效和时效关系。结论 TGF－β可以诱导鸡胚股骨骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化,与TGF－β的作用剂量和时间密切相关。     

实验性骨延长区TGF—β1的基因表达和细胞定位

目的 了解骨延长过程中TGF-β1基因在骨延长区组织细胞的表达和定位,从分子水平探讨延长区骨修复的机制。方法 采用胫骨上干骺端截骨延长（1.0mm/d）动物模型,14只山头分7个时相点取材。通过延长区组织冰冻切片,TGF-β1地高辛记的cDNA探针原位杂交。结果 延长早期延长区阳性表达细胞逐渐增加（15d）到进取高峰,此阶段主要定位于增生的纤维细胞血管内皮细胞;以后细胞阳性表达率迅速下降,定位于延长区骨小梁边缘的成骨细胞。结论 TGF-β1在延长区骨修复过程中具有重要作用,提高和维持延长区TGF-β1基因高水平有效表达,可能对促进加快延长区骨愈合具有重要的意义。     

rhBMP-2对成纤维细胞成骨表型的影响

目的：研究rhBMP－2对成纤维细胞成骨表型的影响,探讨成纤维细胞成骨条件,方法：向体外培养的成纤维细胞（NIH3T3细胞）内加入不同浓度的rhBMP-2,在第3日和第6日检测碱性磷酸酶（ALP）活性和骨钙素表达,绘制生长曲线,结果：rhBMP-2可增加成纤维细胞ALP活性,促进骨钙素表达,在rhBMP－2浓度为800ug.mL^-1和1200ug,mL^-1作用最强,rhBMP-2对细胞增殖规律无明显影响,结论：rhBMP－2可促进成纤维细胞成骨表型表达。     

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用及BMP蛋白表达影响的研究

目的 探讨TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用及BMP蛋白表达的影响。方法 采用ALP活性测定及骨结节计数方法观察TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外的成骨作用，BMP－McAb免疫组化染色及其定量分析观察TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞BMP蛋白表达的影响。结果 TGF－β（3－7d) 对ALP活性有促进作用，并呈一定的时效和量效关系。TGF－β对骨结节形成低剂量时有促进作用，高剂量时有较强的抑制作用；TGF－β对成骨细胞BMP蛋白表达表现为抑制作用；二者均有显著性差异。结论 TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨及BMP蛋白表达表现为双相作用。