生存素反义寡核苷酸在恶性肿瘤治疗中的研究进展

生存素(survivin,SVV)是目前恶性肿瘤基因治疗研究中的新靶点.应用反义寡核苷酸技术(ASODN)等治疗方法可以抑制SVV的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.近年应用SVV-ASODN对恶性肿瘤的研究已成为肿瘤治疗领域的研究热点,这将为恶性肿瘤的治疗提供新的理论基础.     

皮肤肿瘤

20122065生存素反义寡核苷酸在恶性肿瘤治疗中的研究进展(综述)/郝玉琴(内蒙古医学院三附院皮肤科),郑绘霞∥中国麻风皮肤病杂志.-2012,28(5).-339～341生存素(survivin,SVV)是目前恶性肿瘤基因治疗研究中的新靶点。应用反义寡核苷酸技术(ASODN)等治疗方法可以抑制SVV的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。近年应用SVV-ASODN对恶性肿瘤的研究已成     

生存素反义寡核苷酸对人恶性黑素瘤A375细胞生物学行为的影响

目的研究生存素反义寡核苷酸(AS-ODN)经脂质体介导转染对A375细胞增殖、凋亡的影响。方法合成生存素硫代反义寡核苷酸(AS-ODN),脂质体携带转染人恶性黑素瘤A375细胞。采用台盼蓝计数、软琼脂克隆形成试验、电镜、流式细胞仪检测AS-ODN对A375细胞增殖及凋亡的影响。通过裸鼠致瘤实验观察AS-ODN对A375细胞动物体内增殖的抑制作用。结果生存素反义寡核苷酸能降低G2/M期细胞百分比,诱导细胞凋亡发生,明显抑制A375细胞的生长和克隆形成,裸鼠体内A375细胞恶性增殖潜力下降。结论脂质体介导生存素AS-ODN能有效抑制A375细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡。     

靶向生存素的小干扰RNA抑制人黑素瘤M14细胞系生长的研究

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）对人黑素瘤M14细胞系生存素基因表达的抑制作用及对细胞凋亡、增殖和侵袭的影响。方法 构建靶向生存素的siRNA表达质粒,用脂质体法转染M14人黑素瘤细胞。RT-PCR检测M14细胞生存素mRNA的表达,Western印迹检测生存素蛋白的表达,流式细胞仪检测AnexinV标记的凋亡细胞,噻唑蓝（MTT）法分析细胞增殖,Transwell法分析侵袭能力。结果 与M14细胞和转染空载体的M14细胞比较,转染siRNA的表达质粒可以明显抑制生存素基因在转录和翻译上的表达。M14组和空载体组几乎无凋亡细胞,siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加（χ2 ＝ 31.55,P < 0.01）。细胞增殖抑制率（63.6% ± 1.6%）也明显增加,同时Transwell细胞侵袭实验显示,siRNA表达质粒转染组抑制作用显著。结论 靶向生存素的siRNA表达质粒可以特异性抑制生存素的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭并诱导细胞凋亡。     

生存素与皮肤肿瘤相关性的研究进展

生存素基因是凋亡抑制蛋白家族新成员,因其结构较为独特,且能选择性地在肿瘤中表达,正常终末分化组织中不表达,是皮肤鳞癌、恶性黑素瘤的预后指标;抑制其表达能显著促进常见皮肤恶性肿瘤细胞发生凋亡,对正常组织无明显影响,有望成为肿瘤标记物和肿瘤治疗的新靶点。     

几种IAP蛋白及其相关因子在蕈样肉芽肿中的表达及NB-UVB的作用

目的 探讨生存素（Survivin）和Livin两种凋亡抑制蛋白（IAP）及其相关因子Bcl-xl和Caspase-3在蕈样肉芽肿（MF）中的表达情况和窄谱中波紫外线（NB-UVB）的干预作用。方法 采用免疫组化SABC法测定生存素、Livin、Bcl-xl和Caspase-3在MF皮损中的表达，用TUNEL法和原位杂交技术检测NB-UVB治疗前后四种因子mRNA的转录水平和细胞凋亡指数的变化。结果 在MF红斑期、斑块期和肿瘤期，生存素的表达阳性率分别为40.00%、75.00%、77.78%；Bcl-xl为60.00%、68.75%、88.89%，二者在正常皮肤均无表达。Livin在MF三期中阳性率依次为40.00%、25.00%和44.44%；Caspase-3为60.00%、43.75％和22.22％，二者均与正常皮肤相似。NB-UVB治疗后，MF中凋亡细胞显著增多（t = 6.49，P < 0.001），生存素mRNA和Bcl-xl mRNA的表达较照射治疗前有显著降低（P < 0.10），而Caspase-3 mRNA的表达增加（P < 0.10），Livin mRNA的表达在照射治疗前后无显著变化（P > 0.10）。结论 生存素、Bcl-xl和Caspase-3可能参与MF中T淋巴细胞凋亡障碍的调节过程，与MF的发病有关。NB-UVB对MF的治疗作用可能与其抑制生存素mRNA和Bcl-xl mRNA的转录，降低IAP蛋白水平，增加Caspase-3的转录，进而增强MF肿瘤细胞的凋亡有关。     

siRNA抑制生存素基因对恶性黑素瘤细胞A375凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞株A375生存素基因表达后,对A375细胞凋亡的影响。方法 构建针对凋亡抑制基因生存素的siRNA真核表达载体pU-生存素-siRNA,用电穿孔法转染A375细胞,采用蛋白质印迹技术检测生存素的表达,并用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 转染pU-生存素-siRNA后,生存素在A375细胞中的表达(0.24±0.02)较对照组(0.98±0.21)明显下降,试验组细胞的凋亡率(83%)较对照组(28%)明显增加。结论 通过RNA干扰技术可抑制生存素的表达,诱导A375细胞的凋亡增加。     

Survivin与皮肤恶性肿瘤

生存素（survivin）是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族新成员。具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂及参与肿瘤血管形成等多重功能，于多种肿瘤组织中高表达而在正常成人组织中一般不表达。Survivin在皮肤恶性肿瘤中高表达，与皮肤恶性肿瘤的演主莹、复发、预后、耐药及病人生存率等有关，可作为皮肤恶性肿瘤诊断及治疗新的切入点，     

生存素、bcl-2在皮肤鳞状细胞癌皮损及细胞系的表达

目的 探讨凋亡抑制基因生存素、bcl-2在皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）皮损及皮肤鳞癌细胞系（SCL-1）细胞中的表达意义。方法 细胞免疫组化观察60例鳞癌患者皮损中生存素、bcl－2蛋白的表达并进行统计分析。Western印迹检测HaCaT细胞系和皮肤鳞癌细胞系（SCL-1）细胞中生存素bcl－2蛋白的表达。结果 免疫组化示正常皮肤组织中未见bcl-2与生存素表达;生存素、bcl-2在鳞癌皮损中呈阳性表达,bcl-2、生存素蛋白表达阳性率分别为70%、 60%,两者表达无相关性（P > 0.05）。生存素的表达与年龄、性别、发病部位、病理分级无明显关系,与有无淋巴结转移密切相关。bcl-2蛋白的表达与年龄、性别、发病部位,淋巴结转移无明显关系,但随着鳞癌肿瘤病理分级的升高而降低。Western印迹分析示生存素、bcl-2蛋白在SCL-1细胞中表达明显高于HaCaT细胞。结论 生存素、bcl-2在鳞癌的发生发展中,可能通过不同的抗凋亡路径发挥作用。     

生存素和端粒酶逆转录酶在皮肤肿瘤中的表达

目的 研究皮肤肿瘤凋亡抑制基因生存素与人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达及相互关系.方法 免疫组化SP法检测17例鳞状细胞癌(鳞癌)、21例基底细胞癌(基癌)、19例鲍恩病、25例脂溢性角化病和13例正常人皮肤组织中生存素表达水平;原位杂交法检测上述组织中hTERT mRNA的表达水平;分析皮肤肿瘤中生存素与hTERT mRNA表达的相关性.结果 ①在鳞癌、基癌、鲍恩病中生存素及hTERT mRNA表达的阳性率均较正常人皮肤中显著增加;②脂溢性角化病中生存素表达的阳性率与正常人皮肤组织中比较差异有统计学意义,但hTERT mRNA表达的阳性率与正常人皮肤组织中比较差异无统计学意义;③鳞癌、基癌、鲍恩病中生存素阳性率及hTERT mRNA阳性率之间均呈显著正相关,脂溢性角化病中两者阳性率之间无显著相关性.结论 生存素与皮肤肿瘤发病关系密切,在鳞癌、基癌、鲍恩病中生存素与hTERT mRNA的表达具有一定的相关性.     

Galectin-3 and the skin

Galectin-3 is highly expressed in epithelial cells including keratinocytes and is involved in the pathogenesis of inflammatory skin diseases by affecting the functions of immune cells. For example, galectin-3 can contribute to atopic dermatitis (AD) by promoting polarization toward a Th2 immune response by regulating dendritic cell (DC) and T cell functions. In addition, galectin-3 may be involved in the development of contact hypersensitivity by regulating the migratory capacity of antigen presenting cells. Galectin-3 may act as a regulator of epithelial tumor progression and development through various signaling pathways, such as inhibiting keratinocyte apoptosis through regulation of the activation status of extracellular signal-regulated kinase (ERK) and activated protein kinase B (AKT). Galectin-3 is detected at different stages of melanoma development. In contrast, a marked decrease in the expression of galectin-3 is observed in non-melanoma skin cancers, such as squamous cell carcinoma (SCC) and basal cell carcinoma (BCC). Galectin-3 may play an important role in tumor cell growth, apoptosis, cell motility, invasion, and metastasis. Galectin-3 may be a novel therapeutic target for a variety of skin diseases.     

A case of acral lentginous melanoma: the correlation between CD95L expression on melanoma cells and apoptosis of tumor infiltrating lymphocytes

There is an increasing amount of evidence that melanoma cells express the ligand for CD95 (CD95L), a potent inducer of apoptosis which contributes to creating the immune privileged circumstances of tumor sites. However, it still remains to be demonstrated whether the capacity of melanoma cells to express CD95L is acquired during the progression. We addressed this question with a case of acral lentiginous melanoma by employing immunostaining using an antibody directed against CD95L as well as by in situ TUNEL staining. H&E-staining of tumor specimens revealed that there were two different growth patterns. The central part of the tumor showed a deeper invasion into the dermis (Breslow thickness >4 -mm). The horizontally growing edge of the tumor proliferated more superficially (Breslow thickness<3-mm). Relatively fewer lymphocytes were observed around the melanoma nests in central areas, which expressed detectable amounts of CD95L. In contrast, more lymphocytes were observed among the melanoma cells in the peripheral lesion, where CD95L was not detected. To evaluate the relevance of the CD95L expression, in situ TUNEL staining was performed. This indicated a significant correlation of lymphocyte apoptosis with CD95L expression on melanoma cells. Together the data suggest that expression of CD95L is turned on depending on the level of melanoma, and that it may tribute to creating immune privileged circumstances by initiating apoptosis of tumor filrating lymphocytes.     

阿维A对人表皮鳞状细胞癌A431细胞株生长及凋亡的影响

目的 研究阿维A对上皮鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生长的影响及其诱导凋亡作用。方法 以体外培养的人表皮鳞癌细胞A431细胞和角质形成细胞HaCaT细胞为研究对象,用MTT法观察阿维A对A431细胞和HaCaT细胞的生长抑制作用,用光镜和电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰的出现,Annexin-V染色证实凋亡的发生。结果 随着阿维A作用时间的延长及剂量的增加,对A431细胞增殖的抑制作用增加。同样浓度和同样作用时间的阿维A对A431细胞增殖的抑制率高于对HaCaT细胞的抑制率。光镜和电镜观察显示随阿维A作用时间延长,A431凋亡细胞增多。流式细胞仪检测显示随阿维A作用时间的延长,亚G1期凋亡峰明显增加,Annexin-V染色阳性细胞数增多。结论 阿维A具有抗上皮鳞癌细胞生长及诱导上皮鳞癌细胞凋亡作用。     

基质金属蛋白酶家族和皮肤黑素瘤

皮肤黑素瘤是常见的恶性肿瘤，具有高度侵袭和转移能力。降解细胞外基质是肿瘤侵袭和转移的关键，研究显示，基质金属蛋白酶家族不但介导肿瘤细胞对宿主细胞外基质的降解，还影响肿瘤新生血管生成、影响细胞黏附分子的功能、影响肿瘤细胞和非基质蛋白之间的相互作用，以及调控肿瘤细胞的凋亡等。基质金属蛋白酶和黏附分子，生长因子相互作用，调控肿瘤细胞凋亡和血管形成。     

普萘洛尔治疗婴儿血管瘤的研究进展

【摘要】 普萘洛尔是非选择性β肾上腺素受体阻滞剂,多项研究已证实其治疗婴儿血管瘤安全有效,作用机制主要包括：①由周细胞介导的血流动力学改变及后续效应;②阻滞血管瘤来源的内皮细胞和干细胞的细胞周期进程从而抑制其增殖,诱导血管瘤来源的内皮细胞凋亡和血管瘤来源的干细胞向脂肪细胞分化;③抑制内皮祖细胞的募集;④降低促血管生成因子（如血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶等）的水平。     

维A酸CD437和阿维A抑制人黑素瘤A375细胞的比较

目的探讨合成的维A酸CD437与阿维A对体外培养的人黑素瘤A375细胞的增殖抑制、凋亡诱导、周期阻滞作用及对Bax/bcl-2蛋白表达的影响。方法MTT法测定CD437及阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测两种药物诱导细胞凋亡及周期阻滞;细胞爬片SABC免疫细胞化学分析两种药物对细胞Bax/bcl-2蛋白表达的影响。结果干预24h后,10-5mol/L维A酸CD437和阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制率(PIR)和凋亡率分别为58.6%和43.25%,28.03%和17.13%(P<0.05),CD437促A375细胞G0/G1期阻滞,而阿维A无此作用;两药均上调A375细胞Bax蛋白表达和下调bcl-2蛋白表达,但CD437组与阿维A组差异无显著性。结论与阿维A相比较,CD437更有效抑制人黑素瘤A375细胞的增殖及更明显的凋亡诱导和G0/G1期阻滞作用;在辅助治疗黑素瘤方面,CD437比阿维A可能更具潜力。     

蕈样肉芽肿皮损中IL-10与树突状细胞关系的研究

目的探讨蕈样肉芽肿(MF)疾病进程中IL-10的变化特征与树突状细胞(DC)的关系。方法取皮肤MF肿瘤组织冰冻切片,采用单克隆抗体免疫组化染色(AEC,DAB,VIP单染,DAB/VIP双染及DAB/VIP/H istoG reen多染)及TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行原位检测。结果MF肿瘤组织的斑片及斑块期真表皮内IL-10+细胞数明显低于肿瘤期(P<0.05),肿瘤期真皮浸润性T细胞区域可见许多IL-10+细胞,为两种不同的细胞。双染显示IL-10+细胞常聚集在未成熟的DC周围,多染发现吞噬有凋亡细胞的未成熟DC周围有IL-10+细胞存在。结论MF皮损中IL-10增多是这一疾病进展的重要征象,它可能至少有两种细胞分泌,在肿瘤期,IL-10可能通过阻止吞噬有凋亡细胞的DC的成熟诱导抗肿瘤免疫耐受。     

干扰素γ/Fas介导的HaCaT细胞凋亡及8种人参皂甙的作用

目的体外诱导角质形成细胞凋亡并研究人参皂甙对细胞凋亡的影响。方法将IFN-γ,Anti Fas Ab作用于体外培养角质形成细胞HaCaT诱导细胞凋亡,并检测人参皂甙对细胞凋亡的影响。结果50 ng/mL IFN-γ和25 ng/mL Anti Fas Ab共同作用可以诱导21.5%角质形成细胞HaCaT凋亡。8种人参皂甙中,Mx,CK和Re可逆转Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡,逆转率分别为18.4%,14.5%和9.6%。结论IFN-γ和Anti Fas Ab共同作用可诱导HaCaT细胞凋亡。人参皂甙Mx,CK和Re对Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡有一定的抑制作用。     

Bax expression and growth behavior of basal cell carcinomas

BACKGROUND: To understand the typical growth behavior of basal cell carcinoma (BCC) we searched for the correlation between proliferation and apoptosis and progression of BCC. METHODS: Expression of Bcl-2, Bax, and Ki-67 was immunohistochemically investigated in both normal skin and BCC cells, as well as in the epidermis overlying BCC. RESULTS: The results showed that in normal epidermis, Bcl-2 was homogeneously expressed in the basal cell compartment, whereas Ki-67 expression was largely restricted to the parabasal layer, the layer just above the basal cell layer, and exhibited a more scattered staining pattern. Bax was occasionally expressed in the basal layer and widely in the suprabasal compartment. Strikingly, the apparently normal epidermis overlying BCC showed an increased Bd-2 staining. In BCC, cells stained homogeneously for Bcl-2, whereas Bax and Ki-67 showed scattered staining patterns. Simultaneous expression was seen for Bcl-2 and Bax in 80 +/- 7% of the tumor cells, and co-expression of Bcl-2 and Ki-67 in 20 +/- 7% of the tumor cells. The cells expressing Bcl-2 and Ki-67, but lacking expression of Bax, the progressive fraction, comprised on average 7 +/- 3% of the tumor cell population. CONCLUSION: These results suggest that this small progressive fraction of tumor cells, in combination with the relatively high percentage of cells still prone to apoptosis, can explain the indolent growth behavior of BCC.