抗肺癌单克隆抗体15A1的靶抗原在肺癌细胞中的表达及其转位特征

目的:分析抗肺癌单克隆抗体15A1的靶抗原在肺癌细胞的表达、亚细胞定位和转位的特征,研究15A1的体内外抑瘤功能,为肺癌靶向治疗提供候选抗体药物及靶标。方法:采用免疫荧光及细胞流式术检测单克隆抗体15A1靶抗原在肺癌细胞中的表达及定位,免疫组化分析其在人肺癌组织中的表达;CCK-8法和裸鼠移植瘤体内抗体抑瘤实验评估该单克隆抗体对肺癌细胞的抑制作用。结果:单克隆抗体15A1识别的抗原在人肺腺癌细胞(A549、ANIP-973、GLC-82、Calu-3、H157、H1299)、人肺鳞癌细胞(GLC-P、H520)、人小细胞肺癌细胞(H446、H209)、人大细胞肺癌细胞(PG、H460)共12种细胞的胞内及胞膜上均有表达,肺腺癌细胞的表达强度明显高于其他病理类型肺癌细胞;该抗原在75%的人肺癌组织中非常特异地上调表达。该抗原在肺腺癌细胞中相当一部分从胞核转位至胞质,在肺鳞癌细胞中仅有小部分从细胞核转位至细胞质;转位抗原的一部分表达于膜表面,并同样是肺腺癌细胞的表达强度强于肺鳞癌细胞。该单克隆抗体体内外显著抑制肺癌细胞的生长,抑瘤率在25%～80%。结论:单克隆抗体15A1在体内外能显著抑制肺癌的生长,其靶抗原在人肺癌组织和细胞中特异上调表达,并能以特定转位模式表达于肺癌细胞膜上,可能是一个肺癌靶向治疗的潜在靶标。     

单克隆抗体12H6的靶抗原在肺癌细胞中的表达及功能研究

[目的]分析抗肺癌单抗12H6的靶抗原在肺癌细胞系和肺癌组织中的表达,研究单抗12H6体内外生物学功能.[方法]细胞免疫荧光、流式细胞荧光法检测单抗12H6靶抗原在3种肺癌细胞系中的表达及其定位,免疫组化法检测其在人肺癌组织中表达及特异性;Transwell法和CCK-8法分别检测12H6体外对肺癌细胞系侵袭和增殖功能的影响.共接种模型裸鼠体内治疗实验研究12H6对移植瘤生长的抑制作用.[结果]单抗12H6的靶抗原在人肺腺癌细胞(A549、GLC-82)、人肺鳞癌细胞(GLC-P)的胞内及胞膜均有表达,在3种细胞系胞膜的表达比例分别为31.2％、15.4％和16.7％.单抗12H6在人肺癌组织中的表达比例为80.6％,较配对癌旁组织显著上调.单抗12H6在体外能明显抑制肺癌细胞侵袭和增殖;体内能明显抑制移植瘤生长,抑制率为40％.[结论]单抗12H6具有优良的体内外抑瘤功能,可能为肺癌靶向治疗提供潜在的靶向治疗药物.     

肺癌抑制性抗体及其抗原的鉴定

目的：鉴定抑制肺癌细胞生长的功能性单克隆抗体1E2及其抗原，为治疗肺癌提供有潜力的靶向抗体治疗剂和分子靶位。方法：采用活细胞荧光、MTT细胞增殖实验、ELISA、动物体内治疗实验等方法检测鼠单克隆抗体1E2对人肺癌细胞增殖的抑制、单抗与癌细胞的结合部位、单抗的亚类和单抗对肺癌移植瘤的抑制，以Western blotting和MALDITOF质谱方法鉴定该功能性单抗的抗原。结果：单抗1E2能够与肺癌细胞GLC82和NCI-H520的细胞膜结合，在体外能够明显抑制肺癌细胞的增殖。动物实验表明单抗1E2能够抑制肺癌移植瘤的生长，抑制率达49％。Western blotting显示其抗原相对分子质量约110000，质谱鉴定该抗原为氨甲酰磷酸合成酶（carbamoyl-phosphate synthetase1，CPS1）。结论：单抗1E2能够在体内外抑制肺癌的生长，具有成为肺癌靶向治疗剂的潜力。该抗体识别的抗原CPS1可表达于肺癌细胞的细胞膜，可能是一个肺癌靶向治疗的新靶位。     

抗人小细胞肺癌单克隆抗体基因文库的筛选

在引气浮选中，影响除油效率的因素主要是油粒直径、气泡直径和油粒表面的化学性质。加入表面活性剂、聚合物及无机物凝聚剂，可以降低气泡直径、增大油粒直径、降低油粒表面的电位，从而提高除油效率。     

用单克隆抗体筛选小细胞肺癌相关抗原基因

用分子生物学技术克隆肿瘤相关抗原基因对认识肿瘤抗原本质、深入研究肿瘤抗原的结构和功能、研究肿瘤多肽疫苗有重要意义。我们已获得一组抗人小细胞肺癌单克隆抗体,并在体外证实该抗体所识别的抗原在靶细胞有较好的特异性和较高分布密度,是多肽性抗原决定簇。在此基础上,以抗体为探针,筛选小细胞肺癌基因库,目的在于寻找编码抗体所识别抗原的肿瘤相关基因。 λgt_(11)噬菌体为载体构建的人小细胞肺癌细胞株NCI—H_(128)cDNA文库的效价约1.3×10~6,可在大肠杆菌系统和β-半乳糖苷酶构成融合蛋白的形式,表达插入的外源蛋白。我们用抗NCI-H_(128)单抗2F_7和E_6混合作为控针。碘_(125)用Iodogen方法标记在纯化的抗小鼠抗体上。10~7的菌斑转移到NC膜,经放射自显影,从中筛选到5个阳性菌斑,经4轮克隆化后,阳性斑达100％,对其中N0.4克隆进一步研究。该克隆的溶源菌经     

单克隆抗体N-35对肺癌相关抗原的识别

目的：研究和确定肺癌相关抗原的有关特征及其意义。方法：利用抗人肺癌单克隆抗体Ｎ－３５作为免疫探针,经免疫常常和免疫印迹法测定其相关抗原在肺癌细胞系ＧＬＣ－８２、宫颈癌细胞系ＨｅＬａ、肝癌细胞系ＨｅｐＧ－２、乳腺癌细胞系ＰＭＣ、正常人心脏及肺组织的存在及分布情况;用Ｎ－聚糖酶酶解方法确定肿瘤相关蛋白Ｎ３５与糖蛋白分子的关系。用差速离心技术分离肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２亚细胞结构中的胞膜,胞核及线粒体成     

功能性单克隆抗体40E11靶向治疗肺癌的实验研究

目的:检测分析抗肺癌单克隆抗体40E11识别的靶抗原在肺癌细胞系及肺癌组织中的表达,研究单克隆抗体40E11体内外抑瘤功能,并初步鉴定其识别的抗原蛋白,为肺癌的靶向治疗提供候选抗体药物及靶标.方法:应用细胞免疫荧光检测单克隆抗体40E11所识别的靶抗原在肺癌细胞系中的表达及定位,免疫组化检测其在人肺癌组织中的表达;CCK-8法检测分析40E11对肺癌细胞增殖的影响.裸鼠体内治疗实验研究40E11对移植瘤生长的抑制作用.Western bloting鉴定该单克隆抗体识别的抗原的分子量.结果:单克隆抗体40E11识别的抗原在人肺腺癌细胞(A549、GLC-82、ANIP-973)、人肺鳞癌细胞(GLC-P)的胞内及胞膜均有表达;该抗原在84.6％的人肺癌组织中的表达较癌旁组织显著上调;CCK-8法检测结果显示单克隆抗体40E11明显抑制肺癌细胞体外生长;抗体治疗实验结果表明单克隆抗体40E11明显抑制体内肺癌细胞生长,其抑制率达64.4％,P＜0.05;蛋白质印迹法显示40E11识别的抗原相对分子质量约为100×103.结论:抗肺癌单克隆抗体40E11在体内外能显著抑制肺癌细胞的生长,为肺癌的靶向治疗提供具有重要应用价值的候选抗体药物.     

抗人小细胞肺癌单克隆抗体基因文库的构建

抗人小细胞肺癌单克隆抗体基因文库的构建田培坤，王斌，胡江琴，刘健上海市肿瘤研究所（上海２０００３２）自１９７５年淋巴细胞杂交瘤技术的出现，免疫学界研制出了大量的特异性强，灵敏度高的单克隆抗体，并很快应用于临床。但随之也出现了一个仍待解决的鼠源性单克隆...     

采用抗体库技术筛选抑制肺癌的功能性抗体

 目的 研制抑制肺癌细胞功能性单抗,为治疗肺癌提供靶向治疗剂,并为分离获得肺癌相关的分子靶标打下基础。方法 从新鲜人肺癌组织分离肿瘤细胞免疫Balb/c小鼠,免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后接种于甲基纤维素,制备大容量功能性抗体库。采用活细胞荧光、ELISA、免疫组化、肿瘤增殖、侵袭、黏附、动物体内治疗实验等方法筛选鉴定抑制肿瘤细胞的功能性单抗。结果 本次融合共获得了1573株杂交瘤克隆,在能与肺癌细胞膜反应的314株克隆中,154株与正常肺组织不反应或低反应。功能性筛选发现41株单抗显著地抑制肺癌细胞增殖,24株能抑制肺癌细胞对Matrigel的侵袭,15株能抑制肺癌细胞与CollagenI的黏附,进一步实验验证了2株单抗能在体内抑制肺癌移植瘤的生长。结论 采用大容量功能性抗体库技术成功获得了多株具有抑制肺癌细胞恶性生物学行为的功能性单抗,其中2株可能具有靶向治疗肺癌的应用潜力。     

抗肝癌干细胞功能性单克隆抗体的研制

摘 要? 目的：研制抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞的靶向治疗提供候选抗体药物。方法：从人肝癌组织中分离人肝癌干细胞样细胞（human liver cancer stem-like cells, hLCSLCs）,免疫BALB/c裸鼠,采用脾细胞融合法制备大容量单抗库。应用细胞免疫荧光、无血清成球培养、裸鼠皮下成瘤等方法筛选、鉴定特异识别肝癌干细胞的单克隆抗体。流式细胞仪分选hLCSLCs侧群细胞（hLCSLCs side population cells, hLCSLCs-SP）,无血清悬浮培养法和CCK-8法检测杂交瘤单抗对hLCSLC-SP自我更新和增殖能力的影响。结果：细胞融合后获得2 964株杂交瘤克隆,在能与hLCSLCs反应的237株克隆中,有116株单抗能与hLCSLCs的细胞膜结合,其中的33株杂交瘤单抗只与hLCSLC-SP反应（阳性率为2%~5%）、不与非hLCSLC-SP反应。该33株单抗中有6株能与CD133阳性细胞有不同比例的共染,并且与无血清悬浮培养的成球细胞呈阳性反应(阳性率为3%~26%),明显高于hLCSLCs-SP。裸鼠皮下接种1×104个15D2单抗阳性的hLCSLCs,成瘤率为100%。功能性筛选实验发现,6株单抗中的4株能显著抑制hLCSLC-SP的增殖和成球生长,其抑制率分别为24%~42%和13%~50%。结论：采用自建的大容量单克隆抗体库技术,筛选获得了4株特异性识别hLCSLC-SP的功能性单抗,为肝癌干细胞的抗体靶向治疗奠定了基础。     

抗胰腺癌干细胞单克隆抗体的筛选和鉴定

目的：从抗胰腺癌干细胞单抗库中筛选、鉴定识别胰腺癌干细胞的功能性单抗,为胰腺癌干细胞靶向治疗提供候选抗体药物。方法：无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌HPAC细胞系中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术检测HPAC的干细胞标志物CD133在球体细胞中的阳性比例,检测20株杂交瘤单抗在HPAC亲本和球体细胞中的阳性表达。双色荧光标记流式细胞术检测CD133和单抗在HPAC亲本和球体细胞中的共表达比例;无血清悬浮培养法观察单抗15E9对HPAC成球细胞自我更新的影响。CCK一8法检测单抗15E9对HPAC细胞增殖和耐药的影响。结果：HPAC细胞能在无血清培养基中存活、增殖并形成细胞球,成球率为4．8％±0．6％。HPAC球体细胞中CD133’细胞的比例较亲本细胞提高至11．6倍。20株候选杂交瘤单抗中有3株单抗能识别HPAC球体细胞中CD133’细胞,其中单抗15E9共染比例为3．5％,并能显著抑制HPAC细胞的成球,抑制率达到30．4％。单抗15E9联合吉西他滨能显著抑制HPAC球体细胞的增殖,联合组和对照组Ic50分别为30．8nmol／L和58．1nmol／L。结论：本研究成功筛选出1株杂交瘤单抗可以识别胰腺癌干细胞,并且可识别CD133＋的胰腺癌干细胞;体外功能显示该抗体具有抑制HPAC干细胞的自我更新能力,抗体干预后显著降低HPAC耐药能力,可能是潜在的胰腺癌干细胞的靶向治疗抗体药物。     

抑制结肠癌细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性抗体的初步研究

目的:研制抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性单抗,鉴定该单抗识别的抗原分子.方法:以人肝窦内皮细胞(human liver sinusoidal endothelial cell, HLSEC)免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用甲基纤维素选择培养液培养,制备抗HLSEC的单克隆抗体库.采用免疫荧光染色、黏附实验等方法筛选、鉴定能抑制结肠癌Ls174T细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性单克隆抗体.提取肝窦内皮细胞膜蛋白,采用Western blotting方法鉴定单抗识别的功能性抗原蛋白.结果:HLSEC免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合后产生1 440个杂交瘤株,获得119株产生抗HLSEC抗体的阳性克隆,其中20株能显著抑制具有肝转移能力的结肠癌Ls174T细胞与HLSEC的黏附;其中15株为IgM型,3株为IgG型,2株测不到重链;其中1株抗黏附能力最强的单抗(黏附抑制率为51%)命名为12B6,该单抗在5～200 μg/ml范围内显著阻断HLSEC与Ls174T的黏附,且呈剂量依赖性;单抗12B6所识别的HLSEC抗原蛋白的相对分子质量为46 000.结论:建立了抗HLSEC单克隆抗体库,获得了20株具有抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性抗体,初步鉴定了一种可能参与结肠癌肝转移的黏附分子,为结肠癌的组织器官特异转移机制及靶向治疗的研究奠定了一定的基础.     

小细胞肺癌治疗回顾及展望

小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是对放、化疗极为敏感的恶性实体肿瘤之一,依托泊苷联合铂类的方案仍然是广泛期小细胞肺癌的一线标准治疗方案,客观缓解率为50%～70%.联合放化疗可以使局限期小细胞肺癌完全缓解率增加到40%～50%,但大部分患者会复发.对于复发的患者,单药托泊替康化疗是到目前为止二线治疗较为合适的治疗药物.胸部联合放、化疗、对于放疗时间和分级的优化、预防性的脑放疗可使3年生存率明显提高.     

功能影像在确定非小细胞肺癌生物靶区中的应用和展望

准确勾画非小细胞肺癌（NSCLC）的生物靶区对非小细胞肺癌（NSCLC）三维适形调强放疗有重要的作用。PET、SPECT等功能显像以及图像融合技术的发展为准确定位NSCLC生物靶区提供了可能。本文综述了功能影像技术在NSCLC的应用，并对各种功能显像的现状进行阐明，同时展望了功能影像在非小细胞肺癌生物靶区确定和适形调强放疗中的前景和挑战。     

抗人肝癌血管内皮功能性单抗的筛选与鉴定

目的:筛选、鉴定抗人肝癌血管内皮功能性单抗,为治疗肝癌提供靶向治疗剂,并为分离获得肝癌相关的分子靶标打下基础。方法:采用活细胞荧光、MTT细胞增殖实验、成管实验和动物体内治疗实验,筛选鉴定抑制肝癌内皮细胞的功能性单抗。结果:从能与肝癌内皮细胞膜反应的119株克隆中,筛选出16株单抗显著地抑制肝癌内皮增殖其抑制率达21%~46%,46株能显著抑制肝癌内皮细胞的成管,3株单抗1F9、12B5和1B11能显著抑制肝癌移植瘤的生长抑制率分别为50.8%、48.7%和47.0%。选择1株体内抑瘤效果最好的1B11单抗,通过抗体抗原亲和层析法进行纯化,并对纯化的单抗的相关抗原蛋白进行免疫组织化学实验鉴定,结果显示1B11抗原在肝癌血管组织较高的表达而在正常肝血管组织极少表达。蛋白质印迹法显示其抗原相对分子质量约46×103。结论:采用大容量功能性抗体库技术成功获得了多株具有抑制肝癌内皮恶性生物学行为的功能性单抗,体内外抑制肺癌的生长,具有成为肺癌靶向治疗剂的潜力。其中1株可能是一个靶向治疗肝癌的新靶位。