葛根素对大鼠缺血侧皮质、纹状体区神经元凋亡及胶质细胞源性神经生长因子的影响

目的 观察葛根素(Puerarin,Pue)对局灶性脑缺血大鼠海马区胶质源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响,进一步探讨Pue的神经保护作用.方法 制作大鼠局灶性大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,30只SD雄性大鼠被系统抽样随机分为假手术组、缺血组、Pue组.应用TTC染色观察梗死体积,TUNEL染色检测凋亡细胞数,免疫组化方法观}察Pue组及缺血组GDNF阳性细胞数,并进行图像分析.结果 假于术组、缺血组及Pue组的神经捌亡细胞分别为(3.1±2.12)、(63.7±12.05)及(31.1±7.23);Pue组的凋亡细胞数较缺血组明显减少(P<0.01).假手术组、缺血组及Pue组的GDNF阳性细胞含量分别为(99.33±3.44)、(117.87±7.77)及(133.11±4.78).与假手术组相比,缺血组及Pue组GDNF阳性细胞均显著增加;且Pue组阳性细胞数显著高于缺血组(P<0.01).结论 Pue的神经保护作用可能与其能提高内源性GDNF的表达水平有关.     

丁苯酞在大鼠脑缺血—再灌注损伤中的神经保护机制的研究

目的 探讨丁苯酞注射液在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及可能的作用机制。方法56只清洁级SD大鼠,随机平均分为假手术组,缺血—再灌注组,丁苯酞24 h治疗组,丁苯酞48 h治疗组。缺血2 h再灌注时,丁苯酞24 h治疗组及丁苯酞48 h治疗组分别予腹腔注射丁苯酞注射液每天20 mg/kg,直至各时间点处死。假手术组和缺血—再灌注组分别向腹腔注射等量生理盐水。观察各组脑缺血体积及脑源性神经营养因子(BDNF)阳性细胞数。结果丁苯酞治疗组比缺血再灌注组的脑缺血体积明显缩小,且丁苯酞48 h治疗组较24 h治疗组缩小更显著(P<0.05)。BDNF阳性细胞检测显示丁苯酞治疗组比缺血再灌注组的BDNF阳性细胞数明显增加,且丁苯酞48 h治疗组较24 h治疗组增多更明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞注射液可能通过诱导BDNF的表达从而发挥对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。     

葛根素对急性缺血脑神经细胞损伤的保护及对HSP70蛋白表达的干预作用

目的探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤的保护作用和对HSP70表达的影响及其作用机制。方法采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对实验标本作HE染色及用免疫组化SP法作HSP70染色,观察其组织病理学改变及HSP70表达情况。结果葛根素干预组死亡神经元数明显少于单纯缺血组,脑水肿程度较轻,而HSP70表达强度显著强于单纯缺血组。葛根素干预暴露因素与神经细胞死亡呈显著负相关（P〈0．01）。结论葛根素对大鼠急性脑缺血损伤有保护作用,其作用机制与上调HSP70的表达有关。     

血管性痴呆大鼠海马BDNF表达的长时程变化

目的观察血管性痴呆（VD）大鼠海马脑源性神经营养因子（BDNF）表达的长时间动态变化,初步探讨脑源性神经营养因子在血管性痴呆发生与发展中的作用。方法60只大鼠随机分为假手术组、模型7d组、模型15d组、模型1m组、模型2m组和模型4m组,每组10只。免疫组化分析海马组织BDNF的表达情况。结果①与假手术组比较,模型7d组大鼠海马的BDNF表达增多,CA1区BDNF阳性神经元排列密集,着色深,染色清晰;模型组大鼠15d组、1m组、2m组和4m组各时点海马BDNF阳性细胞均比假手术组明显减少,分布稀疏,显色较浅,有的BDNF阳性细胞呈萎缩状,胞体明显缩小。②与假手术组相比,模型7d组BDNF免疫反应阳性神经元数量及总面积增多（P〈0.01）,而模型15d组、1m组、2m组及4m组大鼠的海马BDNF阳性神经元表达明显减少（P〈0.01）。模型大鼠各组间比较,BDNF免疫反应阳性神经元数量及总面积逐渐减少（P〈0.05,P〈0.01）,但模型2m组和4m组差异不显著（P〉0.05）。结论BDNF在VD大鼠脑缺血再灌后早期对海马缺血的神经元起保护作用,后期BDNF的保护作用减弱在血管性痴呆发生和发展过程中起重要的作用。     

葛根素对缺氧缺血新生大鼠神经保护作用及其机制

目的：观察葛根素（Pue）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑源性神经生长因子（BDNF）,Bax,及半胱天冬酶-3表达及远期学习记忆能力的影响.方法：7d龄S D大鼠随机分为3组：葛根素组（Pue组）在缺氧缺血后注射葛根素50 mg/kg,1次/d,共7 d;对照组（Con组）给予同体积的的生理盐水;假手术组（Sham组）仅分离经总动脉,不给药.各组分别于1 wk后采用免疫组化方法检测各组BDNF,Bax,Caspase-3在海马区的表达,4 wk后水迷宫检测其远期学习记忆能力.结果：①术后1 wk海马区Pue组BDNF表达水平高于Con组（P〈0.05）,海马区Bax,Caspase-3表达水平低于Con组（P〈0.05,P〈0.01）.②术后4 wk Morris水迷宫Pue组逃避潜伏期缩短明显快于Con组（P〈0.05,P〈0.01）,穿过原平台次数及在目标象限游泳时间与总时间百分比Pue组明显多于Con组（P〈0.05,P〈0.01）.结论：葛根素能减轻新生大鼠缺氧缺血引起的脑组织损伤,提高新生大鼠年长后的学习记忆能力.这种保护作用可能和葛根素增加海马区BD-NF的表达、降低Bax,Caspase-3在海马区的表达抑制海马区神经细胞的凋亡有关.     

腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤Bcl-2蛋白表达的影响

目的观察腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用及其脑保护机制。方法线栓法建立大鼠局灶性脑缺血2h后再灌注损伤模型，通过HE染色在光镜下观察神经细胞损伤变化，免疫组化法检测Bcl-2蛋白的阳性表达。结果光镜下，假手术组（F组）神经细胞结构正常，腺苷预处理组（AP组）和缺血再灌注组（IR组）均有不同程度的缺血再灌注损伤，腺苷预处理组较缺血再灌注组损伤轻；假手术组Bcl-2蛋白表达极弱，缺血再灌注组和腺苷预处理组在脑缺血再灌注后2h在缺血半暗带周围出现Bcl-2蛋白弱阳性表达，6h后表达增多，24h达到高峰，72h开始减少。与假手术组相比，腺苷预处理组和缺血再灌注组Bcl-2蛋白阳性细胞数显著增多（P〈0．05）；与缺血再灌注组相比，腺苷预处理组Bcl-2蛋白阳性细胞数显著增多（P〈0．05）。结论腺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用，腺苷可通过上调Bcl-2蛋白的表达发挥脑保护作用。     

BDNF、NGF在大鼠局灶性脑缺血的表达变化及加减补阳还五汤对其影响的实验研究

目的观察大鼠局灶性脑缺血后脑源性神经营养因子(BDNF)及神经生长因子(NGF)含量的变化,研究加减补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后脑内BDNF及NGF含量变化的影响,探讨其对缺血性脑损伤的神经元保护机制。方法用大鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)建立脑缺血模型,采用免疫组化方法观察BDNF及NGF在不同时间点的表达。结果与假手术组相比,模型组及治疗组大鼠BDNF及NGF的表达在各时间点均增强,以缺血48 h增强最为显著,且治疗组大鼠比模型组大鼠表达增强更显著。结论脑缺血后神经元内BDNF和NGF的含量增多,有利于受损神经元的恢复。加减补阳还五汤可能通过促进BDNF、NGF的表达而保护神经元。     

针刺百会、大椎穴对局灶性脑缺血大鼠皮层脑源性神经营养因子表达的影响

[目的]观察电针对不同时间段局灶性脑缺血大鼠缺血区皮层脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。[方法]SD大鼠36只,随机分为6组,分别为假手术2周与5周组、缺血2周与5周模型组、电针2周与5周组;除假手术组外.其他动物均采用热凝闭大鼠大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型,观察缺血2周和5周后缺血区皮层BDNF的变化规律及针刺对其影响。[结果]假手术组大鼠相应区域仅见少量BDNF阳性细胞,且强度较弱;脑缺血2周及5周组大鼠缺血区BDNF的免疫阳性细胞数量比假手术组增多(P<0.01),但脑缺血2周组与5周组大鼠缺血区脑片比较,BDNF阳性细胞数量无显著性差异(P>0.05);电针2周组与5周组脑片中免疫阳性细胞数量增加,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),但随着时间的推移,此表达呈下降趋势。[结论]电针可以通过提高BDNF在缺血区周围皮层的表达,保护缺血性脑损伤,并可能与大脑可塑性的形成有一定的关系。     

PTD-BDNF对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的观察PTD—BDNF在实验动物体内对脑缺血再灌注损伤的治疗效果。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型。PTD—BDNF组于缺血再灌注后静脉注射PTD—BDNF 2mg／kg,对照组注射等体积生理盐水。采用TTC染色、HE染色及TUNNEL染色分析PTD—BDNF对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。结果在大鼠局灶性脑缺血再灌注模型中,与对照组相比,PTD—BDNF融合蛋白使脑缺血梗死体积百分比从18．20％降至10．12％（n=4,P〈0．01）。HE染色可见PTD—BDNF组脑组织缺血坏死程度明显减轻,细胞核皱缩、碎裂现象减少。TUNNEL染色显示梗死灶周边平均每个视野TUNNEL阳性细胞率,从51．24％降至23．54％（n=6,P〈0．01）。结论PTD—BDNF融合蛋白经静脉给药后能通过血脑屏障发挥神经保护作用,减轻脑缺血再灌注损伤,改善神经功能。     

神经调节素对缺血性脑损伤大鼠COX-2表达的影响

目的探讨神经调节素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后COX-2表达的影响。方法实验分为假手术组、对照组和治疗组。采用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO-R）模型,治疗组给予神经调节素干预治疗。于缺血1 h再灌注6 h1、2 h1、d、2 d、3 d7、d、14 d,对照组和治疗组采用免疫组化和原位杂交技术分别检测COX-2蛋白及COX-2 mRNA的表达。结果假手术组脑组织可见到少量COX-2阳性细胞。对照组缺血再灌注6 h后COX-2阳性细胞数开始增加,再灌注2 d后达高峰,然后阳性细胞逐渐减少,至14 d仍有表达。治疗组COX-2阳性细胞数相对较少,变化规律与对照组相似,同一时间点比较,治疗组均显著低于对照组（t=2.558~6.795,P〈0.05）。结论神经调节素可能通过抑制脑缺血再灌注后COX-2的表达,发挥其神经保护作用。     

大鼠脑缺血后缺血区BDNF表达变化及通心络的影响

目的观察大鼠脑缺血后缺血区BDNF mRNA及蛋白表达水平的变化及通心络对其的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、通心络高剂量(2.24g.kg-1.d-1)、低剂量(1.12g.kg-1.d-1)组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉梗死(MCAO)局灶性脑缺血模型,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化法检测脑缺血后3h、24h、72h、7d缺血区BDNF mRNA及蛋白表达的变化以及通心络的作用。结果(1)大鼠脑缺血后缺血区BDNF表达变化:大鼠局灶性脑缺血后3h缺血区BDNF mRNA表达略有上升,而24h表达下降,72h后又开始上升,至缺血后7d达高峰;免疫组化染色显示:在脑组织缺血区,BDNF主要在小神经元阳性表达,表达趋势与mRNA基本吻合。(2)通心络对缺血区BDNF表达的影响:与模型组相比,通心络高剂量组BDNF mRNA的表达水平在缺血后3h、24h、7d均有显著提高(P<0.01,P<0.05);通心络低剂量组BDNF mRNA的表达水平在缺血后3h、24h有明显升高(P<0.01,P<0.05);在缺血后7d,高剂组BD-NF mRNA的表达与低剂组相比明显升高(P<0.01)。在缺血后各时间点,通心络各组BDNF阳性神经元数量增多。结论局灶性脑缺血可促进缺血区内源性神经保护因子BDNF高表达;通心络可增强和延长缺血区BDNF高表达,发挥对脑缺血的保护作用。     

不同时间脑室注射BDNF对大鼠脑缺血再灌注损伤氧化应激及神经细胞凋亡的影响

目的：比较大鼠脑缺血再灌注（I／R）损伤前后不同时间脑室内注射外源性脑源性神经营养因子（BDNF）对脑缺血再灌注后氧化应激及神经细胞凋亡的影响．方法：采用大鼠大脑中动脉线栓法建立局灶性脑I／R损伤模型,分别于缺血前12,6h、缺血即刻（0）及再灌注6,12h经侧脑室注射0．5μgBDNF．观察指标为超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及脑皮层凋亡神经细胞,每组随机取一术侧大脑皮层行常规透射电镜标本制备,观察脑组织超微结构的改变．结果：与I／R组比较,BDNF侧脑室给药各组脑组织SOD活性明显增强,MDA含量明显降低,给药各组中脑皮层神经细胞凋亡指数均明显降低（P〈0．05或P〈0．01）;以BDNF缺血前12,6h给药组脑组织SOD活性较高、MDA含量以及神经细胞凋亡指数较低（P〈0．05或P〈0．01）．透射电镜观察,I／R组缺血侧脑皮层神经细胞染色质浓缩、集聚或边集化,部分崩解,胞质肿胀、扩张,线粒体肿胀,线粒体嵴断裂甚至消失．部分凋亡细胞裂解成小碎片,由膜结构包裹部分细胞核和细胞质而形成凋亡小体;而BDNF给药各组缺血侧脑皮层神经细胞超微结构损伤改变不大或仅有轻微改变,胞质相对比较均匀,染色质轻度聚集,核仁存在,线粒体结构基本正常或仅轻微改变．结论：不同时间脑室内注射BDNF对大鼠局灶性脑I／R损伤均有不同程度的保护作用,此作用可能与BDNF能够增加体内抗氧化物质SOD的活性并能抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡等因素有关,其中以缺血前应用的脑保护效果较为明显．     

依达拉奉对大鼠缺血脑组织NGF及BDNF表达的影响

目的研究依达拉奉对大鼠缺血脑组织中脑源性神经生长因子（BDNF）和神经生长因子（NGF）表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠,采用改良的Zea-Longa法建立大脑中动脉局灶缺血模型（MCAO）。实验分为模型对照组和依达拉奉组,每组各20只大鼠。依达拉奉组予以腹腔内注射依达拉奉,1次/d,每次3mg/kg;模型对照组每天注射等量生理盐水。72h后行神经功能评分,然后处死,分别取脑梗死周围、海马区和梗死区脑组织作免疫组化染色检测BDNF、NGF蛋白表达变化,原位杂交检测BDNFmRNA、NGFmRNA的表达。结果依达拉奉组神经功能缺损评分低于模型对照组（p〈0.05）。依达拉奉治疗组BDNF和NGF蛋白BDNFmRNA和NGFmRNA在梗死区周围和海马区表达均高于模型对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）,在梗死区差异均无统计学意义（p〉0.05）。结论依达拉奉可上调大鼠梗死区周围和海马区缺血脑组织中BDNF和NGF的表达,并可能通过此机制起到保护作用。     

益气化瘀方对大鼠腰神经根损伤后脑源性神经营养因子表达的影响

目的：观察益气化瘀方对腰神经根压迫损伤后神经根组织和比目鱼肌中脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF） 表达的影响。方法：SD雄性大鼠120只随机分为假手术组、模型组、弥可保（甲钴胺）组和益气化瘀方组,每组各30只。采用自制硅胶片压迫于大鼠腰椎（L4）右侧神经根背根节处建立损伤模型,分别给予生理盐水灌胃、弥可保注射液和益气化瘀方治疗。分别于治疗10、30和60d后处死大鼠,每组10只,取右侧受压神经根及比目鱼肌。采用透射电子显微镜观察受压神经根超微结构,酶联免疫吸附测定法检测压迫后神经根中BDNF蛋白表达,实时定量逆转录聚合酶链反应法检测比目鱼肌中BDNF mRNA的表达。结果：压迫损伤后各时间点模型组神经根中BDNF蛋白表达水平变化轻微,与假手术组相比,差异无统计学意义;益气化瘀方组BDNF含量在损伤后逐渐升高,60d时达到最高值,与模型组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。与假手术组比较,模型组比目鱼肌中BDNFmRNA的表达在损伤后10d时显著升高（P〈0．01）,随后逐渐降低,至60d时降至正常水平（P〉0．05）;与模型组相比,损伤后10d时益气化瘀方组比目鱼肌中BDNF mRNA表达升高受到显著抑制,60d时表达显著升高（P〈0．01）。结论：益气化瘀方可以抑制神经根损伤早期靶器官中BDNF蛋白的升高,并可以促进神经损伤后期神经根及靶器官中BDNF的表达。     

开塞通对大鼠局灶性脑缺血的影响

目的研究开塞通对大鼠脑缺血损伤的保护作用。方法采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血模型,缺血后检测脑组织中的丙二醛（MDA）值、超氧化物歧化酶（SOD）、ATP酶活性和细胞凋亡。结果缺血组MDA明显升高（P〈0．01）,SOD、ATP酶活性明显降低（P〈0．01）,细胞凋亡率显著升高。结论开塞通能清除氧自由基,减轻脂质过氧化反应,改善ATP酶活性,抑制细胞凋亡从而减轻脑组织缺血损伤。     

阿托伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspase-3、Bcl-2表达的影响

[目的]探讨阿托伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.[方法]随机将48只雄性SD大鼠分为4组:对照组、假手术组、缺血再灌注组和阿托伐他汀预处理组.阿托伐他汀预处理组在模型制备前用阿托伐他汀20mg/kg连续灌胃10d,1次/d;假手术组及缺血再灌注组用相同体积的等渗盐水连续灌胃10d.以线拴法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于缺血2h再灌注24 h后行5分制神经功能评分,并断头取脑分别测定脑梗死体积、凋亡细胞数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表达.[结果]与对照组和假手术组比较,缺血再灌注组和阿托伐他汀预处理组神经功能缺损较为严重,脑梗死体积增大,凋亡细胞数目增多,Caspase-3、Bcl-2表达显著增加(P＜0.01).与缺血再灌注组相比,阿托伐他汀预处理组神经功能有不同程度改善,脑梗死体积明显减小,凋亡细胞数及Caspase-3表达降低,Bcl-2表达增高,比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).[结论]阿托伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与阿托伐他汀上调脑组织中Bcl-2、下调Caspase-3表达,抑制细胞凋亡有关.     

生地免煎颗粒对大鼠脑缺血后Nogo-AmRNA表达的干预作用

目的：观察生地免煎颗粒对神经生长抑制因子勿动蛋白（Nogo-A）mRNA表达的影响。方法：将雄性健康sD大鼠分为用药组（A组）、模型组（B组）和假手术组（C组）,采用生地免煎颗粒溶液灌胃的方式作用于大脑中动脉闭塞（MCAO）模型大鼠,分别在造模后第3、7、14天3个时间点采用实时荧光定量PCR方法观察Nogo-AmRNA的表达。结果：经MCAO造模后,模型组Nogo-AmRNA的表达较假手术组明显下调,在第3天和第14天存在显著性差异（P〈0．01）;经生地免煎颗粒溶液灌胃后,用药组Nogo-AmRNA的表达在3个时间点均低于假手术组（P〈0．05）,在第7天时间点上明显低于模型组（P〈0．05）,其余时间点未见显著性差异。结论：MCAO造模后,大鼠脑内Nogo-AmRNA的表达有所下调,有利于缺血性脑损伤后的神经再生;生地免煎颗粒能够在特定时间段进一步抑制Nogo-AmRNA的表达,从而更有利于缺血性脑损伤后的神经再生。     

益气活血法对脑缺血再灌注大鼠MAP-2及NOGO-A蛋白表达的影响

目的：探讨益气活血法对缺血再灌注大鼠的神经保护作用。方法：动物随机分为假手术组、模型组、益气组、活血组、益气活血组,以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注3、7、14 d,用免疫组织化学染色SABC法分别检测MAP-2及NOGO-A蛋白的表达。结果：脑缺血再灌注损伤后,模型组MAP-2表达下降,与假手术相比有显著性差异（P〈0.05）,而益气法、活血法和益气活血法三组治疗组均能显著促进MAP-2的表达（P〈0.01）。脑缺血再灌注损伤7 d时,模型组NOGO-A表达与假手术相比有显著性差异（P〈0.05）。而益气法、活血法和益气活血法三组治疗组NOGO-A的表达与模型组无显著性差异（P〉0.05）。结论：益气活血法能显著促进MAP-2表达,有利于脑缺血后突触重塑和神经细胞轴突的再生,促进脑卒中后神经功能恢复。     

缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的：探讨缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法：大脑中动脉线拴法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤动物模型。将30只雄性SD大鼠随机分为假手术（sham）组、脑缺血再灌注（I／R）组和缺血后适应（IP）组,每组10只。利用原位缺口末端标记法研究神经细胞凋亡的变化。应用Westernblotting检测大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后P38和Caspase一3蛋白表达水平的变化。结果：大鼠脑缺血再灌注后凋亡细胞数量,P38和Caspase-3蛋白表达水平均显著升高,而缺血后适应组凋亡细胞数量,P38和Caspase-3蛋白表达水平均显著低于缺血再灌注组（P〈0．01）。结论：缺血后适应可减少大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的发生,此作用可能与抑制P38和Caspase-3蛋白表达有关。