阿霉素诱导大肠癌LoVo细胞产生多药耐药中端粒酶逆转录酶的变化

目的:观察在阿霉素诱导大肠癌LoVo细胞产生多药耐药过程中,端粒酶逆转录酶基因表达,明确端粒酶是否参与了多药耐药机制. 方法:采用阿霉素浓度递增法,建立人大肠癌细胞多药耐药模型LoVo/Adr;用MTT法鉴定耐药LoVo/Adr细胞的耐药性;以流式细胞术检测其周期分布;用RT-PCR方法检测hTERT mRNA水平在诱导耐药过程中的变化. 结果:历经8 mo 、传代67次连续培养,建立了人大肠癌耐药模型LoVo/Adr细胞株;LoVo/Adr对阿霉素、长春新碱、丝裂霉素、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶耐药倍数分别是61倍、14倍、3倍、9倍和1倍;LoVo/Adr细胞与LoVo细胞相比,S期细胞减少,而G1, G2期增多;亲本LoVo细胞的hTERT mRNA呈低水平表达,在阿霉素诱导初期即显著增高,随后基本保持高表达状态,并不随着耐药性增加而增强. 结论:耐药株LoVo/Adr是一个典型的具有多药耐药性表型的耐药模型,端粒酶参与了其耐药机制.     

阿霉素在耐药株LoVo／Adr细胞内的摄入及分布特点

目的 观察阿霉素在耐药株LoVo／Adr细胞内的摄入及分布特点，探讨其耐药机制。方法 采用流式细胞术检测阿霉素在细胞中的摄入；利用荧光显微镜观察阿霉素在细胞内的分布；采用免疫组化法检测P－糖蛋白（P－gp）的表达。结果 LoVo／Adr细胞内阿霉素含量显著低于LoVo细胞，且阿霉素在核区分布明显减少，相对在胞质中增多；而在敏感LoVo细胞中，阿霉素集中分布在核区，胞质中很少。加入维拉帕米后，不仅LoVo/Adr细胞对阿霉素的蓄积能力显著增强，而且可使阿霉素在LoVo／Adr细胞中的分布恢复到敏感状态。P-gp染色在LoVo细胞株均为阴性，而耐药株LoVo/Adr细胞膜呈强阳性。结论 阿霉素在耐药细胞中不仅摄入减少，而且分布异常，主要与P－gp有关，P-gp是药物耐药的机制之一。     

蛋白激酶C对大肠癌耐药株LoVo／Adr细胞多药耐药性的影响

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）活性对大肠癌多药耐药性的影响以及可能涉及的调控机制。方法 （1）以放射性^32P掺入法检测了在十字孢碱（SP）和佛波脂（PMA）作用下大肠癌耐药细胞LoVo/Adr中PKC活性的变化；（2）以流式细胞术检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞摄入阿霉素的影响；（3）以RT-PCR法检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞mdrl基因表达的影响。结果 （1）PMA可双向调节LoVo/Adr细胞的PKC活性，SP对LoVo/Adr细胞胞浆和胞膜中的PKC活性均有显著的抑制效果；（2）在PMA作用30min时，LoVo/Adr细胞中阿霉素的摄入量显著减少。作用24h时，阿霉素摄入量显著增加；（3）PMA和SP均不影响mdrl基因的表达。结论 PKC可调控细胞的多药耐药性，但并非通过调节mdrl基因的mRNA水平而实现。     

阿霉素在耐药株LoVo/Adr细胞内的摄入及分布特点

目的观察阿霉素在耐药株LoVo/Adr细胞内的摄入及分布特点,探讨其耐药机制。方法采用流式细胞术检测阿霉素在细胞中的摄入;利用荧光显微镜观察阿霉素在细胞内的分布;采用免疫组化法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达。结果LoVo/Adr细胞内阿霉素含量显著低于LoVo细胞,且阿霉素在核区分布明显减少,相对在胞质中增多;而在敏感LoVo细胞中,阿霉素集中分布在核区,胞质中很少。加入维拉帕米后,不仅LoVo/Adr细胞对阿霉素的蓄积能力显著增强,而且可使阿霉素在LoVo/Adr细胞中的分布恢复到敏感状态。P-gp染色在LoVo细胞株均为阴性,而耐药株LoVo/Adr细胞膜呈强阳性。结论阿霉素在耐药细胞中不仅摄入减少,而且分布异常,主要与P-gp有关,P-gp是药物耐药的机制之一。     

蛋白激酶C对大肠癌耐药株LoVo/Adr细胞多药耐药性的影响

目的　探讨蛋白激酶C（PKC）活性对大肠癌多药耐药性的影响以及可能涉及的调控机制。方法　（1）以放射性32P,掺入法检测了在十字孢碱（SP）和佛波脂（PMA）作用下大肠癌耐药细胞LoVo/Adr中PKC活性的变化;（2）以流式细胞术检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞摄入阿霉素的影响;（3）以RT-PCR法检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞mdr1基因表达的影响。结果（1）PMA可双向调节LoVo/Adr细胞的PKC活性,SP对LoVo/Adr细胞胞浆和胞膜中的PKC活性均有显著的抑制效果;（2）在PMA作用30min时,LoVo/Adr细胞中阿霉素的摄入量显著减少,作用24h时,阿霉素摄入量显著增加;（3）PMA和SP均不影响mdr1基因的表达。结论　PKC可调控细胞的多药耐药性,但并非通过调节mdr1基因的mRNA水平而实现。     

大肠癌耐药LoVo/Adr细胞PKC亚型与MDR的关系

目的 探讨大肠癌LoVo/Adr细胞蛋白激酶(PKC)亚型分布与多药耐药(MDR)关系. 方法 采用Western blot法,检测PKCα, PKCβ和PKCγ和PKCε在LoVo/Adr细胞胞膜和胞质中的表达;采用流式细胞术,检测了PKC对LoVo/Adr细胞阿霉素摄入的影响. 结果 在LoVo/Adr细胞中,PKCα主要分布在胞膜中,且含量显著高于LoVo细胞;PMA作用30 min时,可以使胞质中的PKCα几乎全部转移到胞膜中,PMA作用24 h时,胞质和胞膜中PKCα几乎测不到;PMA作用30 min时,阿霉素摄入量(荧光强度)由原来的2.04±0.70减少到1.74±0.56,显著减少(P＜0.01);PMA作用24 h时,阿霉素摄入量增加到2.21±1.28,显著增加(P＜0.01). 结论 PKCα与MDR的形成可能有关.     

GST-π基因对人脐血造血干细胞抗肿瘤药物耐药性的影响

目的：研究谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)基因转染人脐血造血干细胞对其抗肿瘤药物耐药性的影响。方法：取正常足月妊娠分娩抗凝脐血，采用磁分离法分离CD34 细胞，应用反转录病毒载体将GST-π基因转导入人脐血CD34 细胞。采用RT—PCR检测GST-π基因在被转染的CD34 细胞内的表达。采用克隆培养技术进行体外耐药试验，检测在不同浓度的卡铂、4-羟基环磷酰胺(4-HC)或阿霉素(ADM)存在的条件下，CD34 细胞形成CFU—GM及BFU—E克隆的数目，判断GST-π基因转染对CD34 细胞耐药性的影响。并采用RT—PCR技术检测耐药CFU—GM克隆中GST-πmRNA的表达。结果：体外耐药试验显示，药物浓度为0时，实验组与对照组CFU—GM及BFU—E无显著性差异；当卡铂达到一定浓度时，经GST-π基因转染的CD34 细胞，CFU—GM及BFU—E克隆形成数显著高于对照组。ADM及4-HC存在条件下，实验组CFU—GM形成数也显著高于对照组，而BFU—E在两组差异无显著性。在对卡铂(3μg／ml)耐药的CFU—GM中，70％(7／10)检测到GST-πmRNA；对ADM(25ng／ml)耐药的CFU—GM中，80％(8／10)检测到GST-πmRNA；对4-羟环磷酰胺(2．5μg/ml)耐药的CFU—GM中，80％(8／10)检测到GST-πmRNA。对照组中均未检测到GST-πmRNA。结论：GST-π基因转染人脐血造血干细胞，能增强造血干细胞对卡铂、阿霉素及4-羟基环磷酰胺的耐药性。     

乙酰阿地咪逆转肿瘤细胞多药耐药及其机制的研究

目的 探讨乙酰阿地咪体外逆转多药耐药细胞株人乳腺癌耐阿霉素细胞（MCF-7/Adr）以及人非小细胞肺癌耐阿霉素细胞（A549/Adr）的耐药作用及其作用机理。方法 采用乳酸脱氢酶释放法检测乙酰阿地咪与阿霉素共处理MCF-7、A549、MCF-7/Adr以及A549/Adr细胞的细胞毒作用,以观察增敏和逆转耐药作用;用全功能酶标仪测定乙酰阿地咪与阿霉素共同处理MCF-7/Adr和A549/Adr细胞后细胞内积累阿霉素的荧光强度,并采用Western blot检测细胞膜上多药耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）表达的变化。结果 乙酰阿地咪能降低MCF-7/Adr和A549/Adr对阿霉素的耐药性,10 μmol/L的乙酰阿地咪对MCF-7/Adr和A549/Adr逆转倍数分别为10.8、20.1,其逆转作用与乙酰阿地咪呈剂量依赖关系,且对MCF-7和A549细胞也具有增敏作用;随着乙酰阿地咪浓度的增加,MCF-7/Adr和A549/Adr细胞内积累阿霉素的荧光强度增加率增加,呈剂量依赖性;经乙酰阿地咪处理的MCF-7/Adr和A549/Adr细胞P-gp蛋白表达水平降低,且降低水平随乙酰阿地咪浓度增加而更明显。结论 乙酰阿地咪可显著逆转肿瘤细胞的多药耐药性,其机理与抑制多药耐药蛋白P-gp的表达有关,提示乙酰阿地咪具有潜在的克服肿瘤化疗中多药耐药现象的应用价值。     

苯丙素甙化合物逆转大肠癌LoVo/Adr细胞多药耐药性

目的：以大肠癌LoVo/Adr耐药株为实验对象,观察苯丙素甙（PPG）化合物逆转多药耐药（MDR）作用及可能机制.方法：采用MTT法检测PPG对LoVo细胞和LoVo/Adr细胞增殖的影响.用PPG小于IC10（存活率〉90%）的剂量进行耐药逆转试验,确定半数抑制浓度（IC50）并计算逆转倍数.流式细胞术检测PPG对LoVo/Adr细胞阿霉素（ADR）的摄入影响;荧光显微镜观察PPG对ADR在细胞中分布的影响.结果：当PPG浓度为80,160mg/L时,LoVo细胞存活率分别为（69.34±3.48）%,（30.15±1.86）%;LoVo/Adr细胞分别为（67.89±2.87）%,（34.96±2.14）%,提示PPG具有抑制细胞增殖作用且具有一定的量效关系（P〈0.05）.当PPG浓度小于40mg/L时,LoVo/Adr,LoVo细胞存活率均大于90%;PPG浓度为20,40mg/L时,逆转倍数分别为5.24,9.78.ADR主要分布在LoVo/Adr细胞胞质区,加用PPG后,胞质区荧光强度从2.04±0.70升至2.35±0.87,摄入能力显著增强（P〈0.05）.结论：PPG具有抗肿瘤、逆转耐药作用,PPG通过增加LoVo/Adr细胞对ADR的摄入及细胞胞质区积聚是其逆转耐药机制之一.     

人肝癌裸鼠移植模型阿霉素诱导法建立肝癌多药耐药细胞系

目的:建立人肝癌多药耐药细胞系研究其耐药特性及机制.方法:给予移植人肝癌细胞的裸小鼠腹腔注射阿霉素(ADM)长期诱导,获得多药耐药细胞系BEL-7402/ADM.相差显微镜和HE染色观察细胞,MTT法检测耐药细胞的多药耐药性,流式细胞术检测耐药细胞表面多药耐药基因(mdr)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/GST)的表达.结果:BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对阿霉素的耐药性提高了20.33倍.BEL-7402/ADM细胞表面P-gp和MRP表达阳性,与对照细胞BEL-7402表达比较,差异十分显著(P<0.01).GSH/GST表达无明显变化.结论:BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生及逆转具有重要价值.     

完善病案复印 改善医患关系

《医疗机构病历管理规定》存在一些未详细说明的问题，如什么是有效身份证明，什么年份的病案可以复印等？这不仅影响医院为患者提供病历复印工作，更影响和谐医患关系，造成医患关系紧张；因此，一方面要完善《医疗机构病历管理规定》，另一方面，医院应利用出院记录等医疗文件进行详尽的告知义务，同时，应将住院检验、影像报告单一式两份，一份贴于病案中，一份直接给病人，这样能极大的方便患者，改善医患关系。     

病案信息管理发展趋势

目的探索病案信息管理未来发展方向。方法将病案信息管理过程中所涉及的问题进行分析。结果病案信息管理在医疗、教学、科研、医院管理、医疗保险、法律等起着举足轻重的作用。结论病案信息管理发生显著的变化,向数字化、高智能化的电子病案方向发展。     

拓展利用病案资源 突出病案服务功能

从病案信息利用的范围及病案信息利用的管理两大方面阐述了病案在信息时代所处的地位及其利用价值,同时就拓展病案利用价值提出了一些建议。     

加强病历书写的质量监控确保病案质量

目的针对住院病案缺陷的常见原因，提出解决方法。方法对2007年上半年出院病案进行质量检查。结果抽查病历924份，病历缺陷924份，共2540项次。结论加强医师的法制观念，加强责任感，强化基本功讪练，实行病案质量四级监控，杜绝缺陷病案归档上架，确保病案质量。     

从“神、形、纳、眠、便”判断糖尿病治疗效果

朱章志教授通过长期临床实践,在糖尿病治疗方面形成了一套独特的理论,创新性的提出以"神、形、纳、眠、便"判断疗效,即以患者的精神状态、形体、饮食、睡眠及二便等症状作为糖尿病治疗效果的判断标准。人体的"神、形、纳、眠、便"是在人体正气的推动下才能够正常,"神、形、纳、眠、便"出现异常,实际上是反应了人体正气的虚弱,因而可以用来评价人体的正气是否正常,这一方法在临床上具有很强的实用性,以此作为指导,取得了广大患者的认可。     

病案首页信息质量与统计报表的准确性

目的提高病案首页信息质量,保证医院统计报表的准确性.方法通过了解病案首页信息质量的要求(完整性、准确性、时效性);分析病案首页信息质量常见问题对医院统计指标的影响;提出对病案首页信息质量存在问题的对策.结果病案首页信息质量,直接影响医院统计报表的准确性.结论只有提高病案首页信息质量才能保证医院统计报表的准确.     

学习环境中的气味与记忆成绩相关性研究

目的探索学习环境中的气味,单独或同时出现于编码与提取过程中,其对短时记忆储存的影响。方法设计两个试验:试验一,将被试随机分为气味组、想象组、控制组,在有桂花香气味、想象气味、没有也不想象气味的学习环境中分别测验被试的整体回忆成绩和相关词汇的回忆量,并进行统计学处理。试验二,气味为愉快气味和不愉快气味2种,试验是3个被试间设计(学习时伴随气味:愉快的,不愉快的,无气味×3;回忆时伴随气味:愉快的,不愉快的、无气味×3)。试验分两次进行,间隔24h,然后进行统计学处理。结果试验一,气味组的整体回忆成绩(12.500±3.117)个高于想象组(9.571±2.387)个和控制组(7.625±5.225)个,变差分析显示3组间差异有显著性(P<0.05),想象组成绩低于气味组,但高于控制组。试验二,在学习中呈现气味和回忆中呈现气味之间有着显著的相互作用(P<0.05);但对气味呈现于测验(回忆)中则无显著影响(P>0.05)。均数逐对检验亦发现A1B1、A2B1、A2B3三个组的均数与其余各组(除A2B2组外)都差异有显著或非常显著;A2B2组只与A3B1组差异有显著性。结论1.学习和回忆时,如果呈现同一种愉快气味,那么会产生记忆的增益(提高)现象,愉快气味可以认为是一种有效的记忆提取线索;2.学习时,如果呈现一种不愉快气味,那么回忆时不管有否气味,都会产生记忆的增益(提高)现象。     

学习环境中的气味与记忆成绩相关性研究

目的 探索学习环境中的气味,单独或同时出现于编码与提取过程中,其对短时记忆储存的影响.方法 设计两个试验:试验一,将被试随机分为气味组、想象组、控制组,在有桂花香气味、想象气味、没有也不想象气味的学习环境中分别测验被试的整体回忆成绩和相关词汇的回忆量,并进行统计学处理.试验二,气味为愉快气味和不愉快气味2种,试验是3个被试间设计(学习时伴随气味:愉快的,不愉快的,无气味×3;回忆时伴随气味:愉快的,不愉快的、无气味×3).试验分两次进行,间隔24 h,然后进行统计学处理.结果 试验一,气味组的整体回忆成绩[(12.500±3.117)个]高于想象组[(9.571±2.387)个]和控制组[(7.625±5.225)个],变差分析显示3组间差异有显著性(P＜0.05),想象组成绩低于气味组,但高于控制组.试验二,在学习中呈现气味和回忆中呈现气味之间有着显著的相互作用(P＜0.05);但对气味呈现于测验(回忆)中则无显著影响(P＞0.05).均数逐对检验亦发现A1B1、A2B1、A2B3三个组的均数与其余各组(除A2B2组外)都差异有显著或非常显著;A2B2组只与A3B1组差异有显著性.结论 1.学习和回忆时,如果呈现同一种愉快气味,那么会产生记忆的增益(提高)现象,愉快气味可以认为是一种有效的记忆提取线索;2.学习时,如果呈现一种不愉快气味,那么回忆时不管有否气味,都会产生记忆的增益(提高)现象.     

肠内营养支持对胎儿宫内发育迟缓的疗效

目的探讨肠内营养支持对胎儿宫内发育迟缓（IUGR）治疗效果,以及妊娠期长时间应用肠内营养支持的可行性和安全性。方法胎儿宫内发育迟缓孕妇48例,随机分为观察组和对照组,每组24例,对照组给予相应胎龄所需热量的饮食,观察组除给予对照组的饮食外再加适量的肠内营养制剂,应用30天。结果观察组孕妇的宫高和双顶径的增加显着大于对照组孕者;观察组胎儿无应激试验（NST）阳性的比率显着大于对照组（P〈0.01）;观察组低体重出生儿（小儿出生体重小于2500g）及和Apgar小于7分的患儿比率显着小于对照组（P〈0.01）。结论肠内营养支持在胎儿宫内发育迟缓的治疗中不仅有效,而且对孕妇和胎儿也是安全的。