丙烯基硫脲对日本血吸虫成虫及虫卵作用的初步研究

采用丙烯基硫脲 30 0mg/ (kg·d)连续 3d经腹腔注射感染日本血吸虫 42d的小鼠 ,停药后 2h进行解剖 ,结果发现 :丙烯基硫脲对日本血吸虫雌雄成虫生长发育及雌虫卵巢长度无明显影响 (P >0 .0 5 ) ,而雌虫子宫内则出现无卵或虫卵形状不规则 ,呈沙粒状小团块物 ,未见明显虫卵卵壳。提示丙烯基硫脲作为酚抑制剂能有效抑制日本血吸虫雌虫成虫产卵     

银杏内生真菌CS15菌株鉴定与杀螺作用的初步研究

目的:研究可能影响银杏内生真菌CS15菌株杀螺效果的相关因素。方法:应用形态学特征观察结合rDNA-ITS序列综合分析对该菌株进行鉴定。使用浸泡法配制不同浓度的菌株CS15发酵液；实验随机分为4组(超纯水对照组和1%、2%、4%滤液组),评定不同浓度CS15发酵滤液对钉螺的杀灭效果。采用蒽酮比色定量分析法检测发酵滤液浸泡处理后的螺体内糖原含量变化。结果:菌株经分离培养、形态学及分子生物学鉴定，该菌株为草酸青霉真菌。实验组菌株CS15 1%、2%、4%浓度下的发酵滤液均有一定的杀螺效果。其中在24 h后，以4%发酵滤液杀螺效果最佳(P<0.05),在48 h和72 h后，4%发酵滤液杀螺效率优于1%和2%发酵滤液(P<0.05)。经不同浓度CS15发酵滤液处理后，钉螺软体组织内糖原含量均明显降低，以4%发酵滤液组最为明显(P<0.05)。结论:在本实验条件下，银杏内生真菌CS15发酵滤液对湖北钉螺具有毒杀效应，以4%发酵滤液杀螺效果最佳，其杀螺因素可能与螺软体组织内糖原合成相关。     

咖啡酸的高锰酸钾氧化产物或酶氧化产物对促性腺和促甲状腺激素的影响

已知各种唇形科和紫草科植物叶片的水提取物有抗促性腺和抗促甲状腺的活性,这些活性与植物内的酚性成分如儿茶酚或咖啡酸的氧化产物有关。在植物提取过程中,此氧化反应受儿茶酚氧化酶(邻苯二酚氧化酶)所催化。有报道认为用高锰酸钾氧化也能得到活性产物。本文分离和研究了以高锰酸钾氧化咖啡酸的氧化产物,并与酶氧化产物作比较。咖啡酸经高锰酸钾氧化后,用HPLC测得4个产物,根据保留时间不同,用制备性板层可分得产物1,2,3。以孕马血清(PMS)对体外Leyding细胞的睾酮释放的抑制作用来测定其抗促性腺活性。     

日本血吸虫酚氧化酶同工酶分析

目的：观察日本血吸虫成虫单酚氧化酶(monophenol oxidase，MPO)和二酚氧化酶(diphenol oxidase，DPO)的同工酶酶谱形式。方法：将收集到的42d活成虫置含0．05％戊巴比妥钠的RPMIl640培养基中，23℃孵育8h，分别研磨雌、雄成虫呈匀浆，显色单酚氧化酶的样品匀浆时另加5％的TX-100。超声粉碎、低温高速离心取上清(含PO)．进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及酶染色后分析两种酚氧化酶同工酶酶谱形式。结果：单酚氧化酶的同工酶酶谱与二酚氧化酶的同工酶酶谱基本一致，电泳位置相同，表现为迁移率相同的一条带，但是单酚氧化酶的酶谱谱带较二酚氧化酶的酶谱显色弱。同时，雌虫及雄虫的单酚氧化酶和二酚氧化酶亦表现为迁移率相同的一条主带；但雄虫的酶带显色反应较雌虫弱。结论：日本血吸虫成虫体内酚氧化酶存在两种形式：单酚氧化酶和二酚氧化酶。而且不仅雌性虫含有酚氧化酶，雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同。雄性成虫含有少量酚氧化酶的生理意义有待进一步研究。     

钉螺凝集素的分离纯化及免疫活性的研究

目的:探讨湖北钉螺体内凝集素的提取纯化方法及其免疫活性。方法:钉螺原浆用30%硫酸铵进行粗提,Sepharose-4B亲和层析,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酸胺(SDS-PAGE)凝胶电泳对纯化后的凝集素进行浓度测定,并计算相对分子质量。用纯化后的凝集素行促血淋巴细胞吞噬杀菌实验、抑菌实验,并检测2.5 mg.ml-1的D-葡萄糖、蔗糖、D-半乳糖、EDTA对凝集素免疫活性的影响。结果:Sepharose-4B亲和层析对钉螺凝集素的纯化具有特异性,钉螺亚基相对分子质量约为57 kD;凝集素能促使血淋巴细胞吞噬和杀灭细菌,对细菌生长有抑制作用,上述免疫活性能被D-半乳糖和EDTA抑制。结论:钉螺体内存在半乳糖凝集素,并有促噬杀、抑菌活性,能为EDTA所抑制。     

水稻田钉螺繁殖观察(钉螺生态观察研究之二)

1.上饶黄市乡的钉螺,除7月份未发现交配钉螺外,其余各月均有交配钉螺,其中以冬春两季交配率较高,秋季次之,夏季最低。2.进行了全年的钉螺解剖,观察钉螺生殖器官的发育,自9月份开始卵巢内含有卵细胞,直至次年6月止,而且自10月份起输卵管内已有成熟螺卵,同时卵巢内含卵细胞钉螺数增加,直至次年4、5月份后,逐渐下降,至 6月份仅有少数钉螺含卵细胞,7、8月不含卵细胞。输卵管内含成熟螺卵的钉螺百分率,以3月份为最高。3.从上饶黄市乡野外筛得螺卵最多的月份,是3、4两个月,7、8、9、10、11月均未筛到螺卵,与雌螺卵巢内含卵细胞钉螺百分率相比较基本上一致。4.该乡幼螺出现最多的月份是4、5、6、7、8,五个月,10月后至次年3月均未发现幼螺,幼螺的出现与从野外筛得螺卵及卵巢内含卵细胞的情况也基本上一致。     

急性吗啡染毒大鼠体内吗啡的定位研究

用免疫组织化学法对经腹腔注射吗啡大鼠体内吗啡的分布进行定位观察。结果表明，吗啡分布在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肾上腺、胃、小肠、胰岛、颌下腺和舌下腺中，腹腔注射吗啡１０分钟后，吗啡即在心脏、肝脏、脾脏、胰岛、小肠粘膜中出现；１６０分钟后，心脏和胃可观察到吗啡存在。该研究提供了给药后不同时间吗啡在体内的分布情况，可为吸毒致死后尸检取材提供参考依据。     

氯硝柳胺抗肿瘤作用的研究进展

氯硝柳胺,化学名：N－（2′－氯－4′－硝基苯）－5－氯水杨酰胺,是目前美国食品药品监督管理局唯一推荐使用的灭螺药和治疗蠕虫的药物,已经有50多年的应用历史。研究认为氯硝柳胺主要通过降低钉螺体内细胞色素C氧化酶、乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶、胆碱酯酶和一氧化氮合酶等酶的活性影响钉螺体内糖原合成,导致其能量代谢障碍,从而引起钉螺死亡。氯硝柳胺对寄生虫的的杀灭机制主要表现在使线粒体的氧化磷酸化解偶联,阻断NADH→NADP＋的电子传递,抑制ATP的产生。有研究发现氯硝柳胺通过NF－κB、Wnt、STAT3、mTORC1、Notch等信号通路抑制多种肿瘤细胞及移植瘤的生长,发挥抗肿瘤的作用,还可以与抗肿瘤药物具有协同效应或逆转放化疗过程中抗拒细胞的抗拒性,从而具有增敏作用。因而,对氯硝柳胺抗肿瘤作用的研究可能为其用于肿瘤的治疗提供依据。本文拟对氯硝柳胺抗肿瘤作用的研究进展作一综述。     

恶性疟原虫FCCL/HN株CSP基因表达产物免疫鼠体内抗原定位研究

目的用恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫小鼠,观察其在宿主体内各组织的抗原分布情况.方法提取目的基因PfCSP在HeLa细胞中的表达产物,免疫注射BALB/c小鼠.取免疫后4周及7周小鼠心脏、肝脏、脑、脾及肌肉,通过免疫酶组织化学法及间接免疫荧光法检测组织内的抗原.结果免疫7周后的BALB/c小鼠肝脏组织枯否氏细胞内及肝细胞膜上可见棕黄色特异性抗原-抗体反应,而免疫鼠心、脑、肌肉未出现明显的阳性反应.结论恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达蛋白能被肝实质细胞特异性识别,其免疫后的抗原分布主要在肝脏.     

大鼠小肠缺血再灌注后多器官组织中基因表达及超微结构改变

目的:研究大鼠小肠缺血再灌注后肺、肝、心、肾组织的次级损伤。方法:阻断肠系膜上动脉,建立小肠缺血再灌注模型,分对照组,再灌注后0、30min,1、2h,1、3、7d共8组,用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(S-P)免疫组织化学法观察各组织中Bax、bcl-2、p53的表达情况,在电镜下观察各组织的超微结构改变。结果:大白鼠小肠缺血再灌注后Bax、bcl-2、p53的表达明显改变。再灌注0min至7d,3种阳性细胞逐渐增多,但Bax表达明显高于bcl-2,二者有极显著性差异(P<0.01)。电镜观察发现:肺组织中肺泡型变性坏死及明显的炎症反应。肾小球基膜不规则增厚,肾小管基底破裂,上皮坏死脱落。肝脏细胞和心脏细胞中细胞染色质边集、固缩等改变。结论:大鼠缺血再灌注后可引起远隔器官的次级损伤。     

Laboratory Evaluation of the Molluscicidal Activity of Pulsatilla Chinensis (Bunge) Regel Saponins against the Snail Oncomelania Hupensis

Objective To observe the toxicity of Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel saponins (PRS) against Oncomelania hupensis (0.hupensis).Methods O.hupensis snails were exposed to 40％ and 80％ of 24 h LC50 of PRS for 24 h,and then choline esterase (CHE),alanine aminotransferase (ALT),alkaline phosphatase (ALP),lactate dehydrogenase (LDH) activities in cephalopodium and liver of snails were determined.Niclosamide (NIC) was used as the reference molluscicide.Zebra fish lethality test was evaluated to non-target aquatic species of PRS.Results The molluscicidal activity of PRS (LC50 at 24 h:0.48 mg/L) was similar to that of NIC (LC50 at 24 h:0.16 mg/L).Significant alterations about CHE,ALP,and ALT activities both in the cephalopodium and the liver of snails were observed when O.hupensis was exposed to 40％ and 80％ LC50 of PRS or NIC for 24 h.PRS and NIC could not affect LDH activity in the cephalopodium and the liver.Lower toxicity to fish of PRS was observed up to the highest concentration tested than NIC.Conclusion PRS,as compared with the reference molluscicide NIC,is thought to be used for the control of harmful vector snails safely.     

湖北钉螺人工感染、室内传代与模拟野外饲养的研究

目的:通过人工方法将湖北钉螺制备成血吸虫感染性钉螺,确定钉螺感染的最佳条件,建立钉螺人工感染传代的室内株,为研究其感染活性、遗传变异和疫苗等提供实验室依据.方法:用尼龙绢筛集卵法收集日本血吸虫成熟虫卵,常规法孵化毛蚴.将钉螺与毛蚴按不同比例进行感染,感染方式分为个体感染和集体感染.个体感染随机分6组(Ⅰ～Ⅵ组),每组2...     

湖南省洞庭湖区钉螺分布状态的动态分析

 目的 探索洞庭湖区钉螺分布的动态变化,为钉螺生态学及螺口动力学提供理论依据。方法 选择湖南省岳阳市君山区洞庭湖的一块草滩为研究现场,在2007年10月至2008年5月洞庭湖未涨水期间进行随机抽样查螺,实验室内压螺鉴定死活后分框计数门首先计算中位数、四分位间距及聚集度指标等进行统计描述,然后采用最大似然法拟合负二项分布、对数正态分布、指数分布等不同的分布类型以探索不同时间点的钉螺分布状态。结果 观察期间各月份钉螺的分布均为正偏态分布,钉螺密度的中位数分别为7、9、1、0、3、4和1（只/0.01 m²）,四分位间距分别为13、6、3、2、4、6和4;方差均大于均数,聚集性指数随密度同方向变化。水退初期10月份的钉螺数据对几种分布均不能较好拟合,11月份的钉螺分布呈对数正态分布,2008年4月份的钉螺分布同时符合负二项分布和指数分布,其它各月份的钉螺分布均呈负二项分布。结论 钉螺分布不是单一的负二项分布,可能存在着与密度有关的一种动态变化,有待于提出新的、更广义的分布模型来更好地反映这种动态变化。     

不同复温方法对深低温冷冻复合组织血管活性的影响

目的比较3种不同复温方法对深低温冷冻的复合组织中血管活性的影响,找出一种对复合组织中血管损伤最小的复温方法。方法选用20只新西兰大白兔随机分成四组,切取双侧后肢(对照组为新鲜断肢取血管),三个实验组标本经梯度降温后放入液氮中保存7天。分别采用37℃水浴复温组(A组)、空气复温组(B组)、-20℃冰复温组(C组)方法进行复温。采用光镜、免疫组化方法观察血管内皮细胞活性,结果进行统计学分析。结果光镜观察,A组、B组内皮细胞大片脱落,平滑肌细胞变形;而C组内皮细胞和平滑肌细胞保存较好,更接近对照组;免疫组化检测中,3种复温方法血管内皮中均可见VEGF及CD34呈斑片状的弱表达,-20℃冰复温组(C组)VEGF及CD34的表达更接近对照组,高于37℃水浴复温组(A组)及空气复温组(B组)(P<0.05)。结论 3种不同复温方法对深低温冷冻的复合组织中血管活性影响不同,-20℃冰复温法影响最小。     

α和β-熊果苷对共培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响研究

目的 比较观察熊果苷分子苯环侧链上的糖苷基团α和β-构象对共培养小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的影响.方法 体外melan-a小鼠黑素细胞(MC)与SP-1小鼠角质形成细胞(KC)共培养体系,两种细胞的初始接种比例为1:5.共培养细胞分别用含有0.04、0.2、1 mg/ml的α-熊果苷、β-熊果苷、烟酰胺及10、50、100 μmol/L的甲氧沙林(8-MOP)新鲜培养基换液,药物处理共4 d.用相差倒置显微镜观察细胞表型的改变;用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖率;用放射性核素L-[14C]-酪氨酸底物标记法测定酪氨酸羟化酶与多巴氧化酶活性;用分光光度计法测定细胞总黑素含量.结果 除8-MOP能明显促进共培养细胞(主要是MC)发生增殖外,其他3种化合物对细胞增殖率均无影响.两种熊果苷均能剂量依赖地抑制酪氨酸酶活性和黑素含量.1 ms/mlα-熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制作用比同等浓度的β-熊果苷强(酪氨酸酶活性:37%±4%vs54%±9%,P=0.034).经两种熊果苷(1 mg/ml)处理的MC树状突延长纤细,黑素产生较对照组明显减少,以α-熊果苷更为明显.相反,100 μmol/L 8-MOP处理组的MC数目较对照组显著增加,树状突增加,胞质与树状突内有大量黑褐色黑素堆积.结论 α-熊果苷能明显抑制共培养小鼠黑素细胞的黑素生成,其临床应用价值有待体内实验进一步确认.     

LAMP快速检测日本血吸虫感染性钉螺的研究

目的：建立一种快速检测日本血吸虫感染性钉螺的方法。方法采用环介导等温扩增技术（LAMP ）以日本血吸虫的特异基因为靶序列,利用Primer Explorer V3软件设计扩增靶基因的4条LAMP引物,酚氯仿法提取感染性钉螺中的日本血吸虫DNA ,取适量模板DNA加入LAMP反应体系进行对日本血吸虫靶基因扩增,经肉眼观察、SYBR Green I染色电泳及测DNA序列来判定扩增产物。在99个阴性钉螺中各加入1个阳性钉螺,其中每个阳性钉螺分别感染日本血吸虫毛蚴数量分别为10、8、6、4、2、1条。结果感染性钉螺检测管经显色呈绿色为阳性,阴性钉螺呈棕色;日本血吸虫的特异基因经LAMP扩增后电泳呈现LAMP特征性梯状条带,阴性钉螺及感染肝吸虫不出现LAMP特征性梯状条带;扩增产物经酶切及序列分析显示为目的基因;在100个钉螺中只要有2条日本血吸虫毛蚴感染便可检出。结论环介导等温扩增技术（LAMP）可快速有效检测日本血吸虫感染性钉螺,有望为疫区日本血吸虫感染性钉螺高效快速检测提供一种新方法。     

抗人组织金属蛋白酶抑制剂1的核酶高表达载体的构建及体外活性鉴定

目的:构建特异性切割人组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TIMP-1)的锤头状核酶的真核表达载体并在体外进行活性鉴定,为应用于瘢痕基因治疗奠定基础.方法:设计并合成针对人组织TIMP-1 mRNA的锤头状核酶基因Rz182、Rz358和Rz412及相应的点突变核酶基因,将核酶基因克隆于可在体内高表达核酶的载体pBSKneoU6中,制备嵌合于U6 snRNA分子的核酶基因克隆.逆转录聚合酶链式反应获得全长TIMP-1 mRNA基因片段并克隆至T载体.体外转录法大量制备以α-32P UTP 标记的核酶及靶RNA,进行体外切割实验.结果:核酶基因克隆制备正确,在体外成功转录出嵌合于U6 snRNA的核酶和靶RNA. 37℃的生理温度下,U6Rz182和U6Rz358成功切割了靶RNA,U6Rz182切割效率为49.23%,Km=29.7 nmol/L,Kcat=0.32 min-1.U6Rz358切割效率为55.21%.Km=39.6 nmol/L,Kcat=0.21 min-1.U6Rz412及突变核酶均未显示切割活性.结论:本研究中制备的U6Rz182和U6Rz358有良好的特异催化切割活性,有望在瘢痕成纤维细胞内抑制人TIMP-1的表达,成为新的抗瘢痕核酸药物.     

Tat-GFP融合蛋白的表达纯化及其穿膜活性

目的：获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白（GFP）标记的Tat-GFP融合蛋白,探讨Tat-GFP在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法：应用pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,检测不同异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）浓度（0.5和1.0 mmol•L^-1）和不同温度（22℃和37℃）诱导融合蛋白的表达情况;利用Ni-IDA树脂亲和纯化Tat-GFP蛋白,利用GFP特异性抗体采用Western blotting法分析洗脱液中的蛋白;激光共聚焦荧光显微镜下检测Tat-GFP融合蛋白的跨膜转运活性。 结果：0.5和1.0 mmol•L^-1 IPTG诱导出的细菌总蛋白中所含的Tat-GFP蛋白量无明显差异;低温（22℃）诱导生产的Tat-GFP蛋白量较37℃更高;Western blotting分析,GFP抗体能够特异性识别PVDF膜上的蛋白,条带灰度与Tat-GFP蛋白上样量有关联;细胞穿膜实验,绿色荧光分布于MCF-7细胞的细胞质和细胞核中。 结论：低温诱导时大肠杆菌BL21菌体上清液中Tat-GFP融合蛋白量更高,所生产的Tat-GFP融合蛋白既具备穿膜活性又具有易于检测的绿色荧光。     

Hominis placenta promotes melanocyte proliferation melanin synthesis and tyrosinase activity in vitro]

OBJECTIVE: To investigate the effects of Hominis placenta on melanocytes and tyrosinase activity in vitro. METHODS: MTT assay was used to assess the proliferation of melanocytes treated with Hominis placenta. Hunt method was employed to determine melanin synthesis and the oxidation rate of DL-dopa to evaluate the tyrosinase activity. RESULTS: Hominis placenta promoted melanocyte proliferation (P<0.01) and significantly increased the cell number (P<0.01), melanin synthesis (P<0.01), with the optimal concentration of 0.1g/L (P<0.01), and also enhanced tyrosinase activity (P<0.01) at the optimal concentration of 1 g/L (P<0.01). CONCLUSION: Hominis placenta promotes proliferation, melanin synthesis and tyrosinase activity of the melanocytes.     

不同温度影响唾液淀粉酶活性实验操作流程的再改进

目的探究不同温度对唾液淀粉酶活性的影响,并对实验操作流程进行改进。方法将2011级本科护理和临床学生分为对照组和实验组。结果根据不同的颜色判断酶活性的高低,适宜温度唾液淀粉酶才能发挥其最佳的催化作用;酶的活性在沸水浴（95℃中并没有受到影响,反而比恒温水浴（37℃）反应的更彻底。结论低温抑制酶活性,但不会破坏酶活性;唾液淀粉酶是耐高温的酶。