2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,ISA)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(0、100、200、400μmol·L-1)处理组,采用Hochest33258荧光染色和琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡抑制基因bcl-2、凋亡基因bax蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测加药后SH-SY5Y bcl-2,bax及端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA表达水平的变化。结果100、200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h后,荧光染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂形态;bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax mR-NA及蛋白表达水平未见变化(P>0.05);hTERT mRNA表达水平降低(P<0.05),各组间差异比较有统计学意义;200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论2,3-吲哚醌可能通过下调bcl-2和hTERT表达诱导SH-SY5Y细胞凋亡,并在一定浓度范围内呈浓度依赖关系。     

小檗碱改善高糖高脂诱导的胰岛NIT-1细胞凋亡的分子机制

目的观察小檗碱对高脂高糖诱导后NIT-1胰岛β细胞凋亡的改善情况,探讨小檗碱抗凋亡的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在培养基中加入高糖高脂及小檗碱共同培养24h后,比较不同浓度的小檗碱对体外培养及高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞活力的影响;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3mRNA表达水平;免疫荧光法检测caspase-3表达。结果与正常对照组相比,模型组NIT-1细胞凋亡率明显升高(P<0.01),bcl-2mRNA表达明显降低(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达明显增高(P<0.01),且胞质caspase-3表达增加;与模型组相比,小檗碱组NIT-1细胞凋亡率明显降低(P<0.01),bcl-2mRNA表达增高(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达降低(P<0.01),小檗碱组胞质caspase-3表达亦降低。结论小檗碱抑制高糖高脂诱导NIT-1细胞的凋亡可能与其激活bcl-2和抑制bax和caspase-3的表达有关。     

曲古抑菌素对小细胞肺癌细胞系NCI-H446的诱导分化及凋亡作用

目的探讨曲古抑菌素对NCI-H446细胞的诱导分化及凋亡的作用机制。方法用巢蛋白、CD133、波形蛋白和CD44的抗体对NCI-H446细胞进行免疫荧光染色,鉴定该细胞的干细胞特性;用NF-200、βⅢ-Tubulin、微管相关蛋白(MAP2)和BM88、Ki67的抗体进行免疫荧光染色和免疫印迹测定,观察NCI-H446细胞经曲古抑菌素诱导后向神经细胞分化的成熟程度和细胞增殖指数的变化;用Caspase-3、Bax、Bcl-2表达水平的变化,评价曲古抑菌素对小细胞肺癌的抗癌效果。结果小细胞肺癌NCI-H446细胞高表达巢蛋白、CD133、波形蛋白和CD44;曲古抑菌素诱导NCI-H446细胞向神经细胞分化并激活Caspase-3,诱导细胞的Bax表达水平增高,Bcl-2表达水平降低,细胞的增殖指数明显降低,凋亡指数明显增高。结论曲古抑菌素可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞分化成熟,最终激活Caspase-3通路导致细胞凋亡。     

山奈酚诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡及机制

目的探讨山奈酚对人小细胞肺癌H446细胞的抑制作用,并研究其作用机制。方法采用MTT法、DAPI染色、流式细胞术等方法检测山奈酚对H446细胞增殖及凋亡的影响;使用Western blot检测山奈酚处理后H446细胞中p53、bax和bcl-2的表达变化。结果山奈酚抑制人小细胞肺癌H446细胞增殖,促进H446细胞阻滞于S期及G2/M期,诱导该细胞株凋亡,上调p53、bax的表达水平,降低bcl-2的表达水平。结论山奈酚对H446细胞有明显的抑制作用,该抑制作用与山奈酚诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。     

胎盘滋养细胞bax与bcl-2基因表达对分娩发动及妊娠时限的影响

目的 :探讨胎盘滋养细胞凋亡调控基因bax、bcl-2表达对分娩的影响。方法 :采用免疫组化法测定14例自然早产 ,18例足月自然临产 ,19例足月择期剖宫产 ,12例延期或过期自然临产及12例延期或过期未临产而行剖宫产孕妇胎盘滋养细胞bax、bcl-2基因的表达水平。结果 :在自然临产的孕妇中早产、足月产和延期或过期妊娠3组bax基因表达差别无统计学意义 (P>0.05) ;在足月以及延期或过期妊娠中 ,自然临产组bax基因表达水平均显著高于未临产组 (P<0.05) ,而2组bcl-2基因表达水平差别均无统计学意义 (P>0.05) ;延期或过期妊娠组的bcl-2基因表达水平显著低于足月妊娠组。结论 :促凋亡调控基因bax较抑凋亡调控基因bcl-2在分娩发动中发挥了更大的作用 ,而bcl-2基因则在胎盘发育方面发挥着重要作用     

阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的：观察高浓度葡萄糖体外对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。探讨葡萄糖毒性及其分子机制。方法：应用TUNEL法检测高浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR（QRT-PCR1）检测培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞bcl-2和baxmRNA的表达；应用定量RT-PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2和baxmRNA的表达。结果：高浓度葡萄糖使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc-3的凋亡细胞比例明显增加；胰岛细胞凋亡过程中。诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降．致使bcl-2／bax比率明显降低；对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT-PCR检测也显示同样的结果。结论：高浓度葡萄糖可能通过诱导胰岛细胞凋亡增加而加重糖尿病。其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

凋亡基因Bcl-2／Bax与高脂饮食诱导大鼠胰岛细胞凋亡的关系研究

目的 观察凋亡基因Bcl/Bax与高脂饮食诱导大鼠的胰岛细胞凋亡的关系.方法 应用TUNEL法检测高脂饮食诱导的大鼠胰岛细胞凋亡率,应用免疫组化方法检测bcl-2、bax的mRNA的表达.结果 高脂饮食使大鼠胰岛细胞凋亡率明显增加.胰岛细胞凋亡过程中,诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高,抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降.结论 高脂饮食可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病,其中bcl-2/bax mRNA表达比率变化可能起重要作用.     

老年妇女外阴营养不良组织中细胞凋亡及相关基因的表达分析

目的探讨老年妇女外阴营养不良组织中细胞凋亡及相关基因的表达情况。方法选取我院接收的70例老年妇女外阴营养不良患者作为观察1组,同时选取10例老年妇女外阴营养不良恶变患者作为观察2组,利用原位末端标记及免疫组化S-P法对两组患者蜡包埋组织中的细胞凋亡及相关基因bcl-2、bax的表达情况进行检测。同时选取10例石蜡包埋的老年妇女正常外阴皮肤进行对照(对照组)。结果三组患者均在细胞凋亡及bcl-2、bax的表达现象,且观察1组患者的细胞凋亡指数及bcl-2、bax的表达方面均明显高于观察2组(P<0.05);bcl-2、bax二者间的表达呈正相关(P<0.05),在恶变部分凋亡细胞的分布区域及bcl-2、bax的表达方面则无明显相关性。结论外阴营养不良的发生发展与恶变及细胞凋亡间有较大的关系,且bcl-2、bax发挥着一定的作用。     

锰超氧化物岐化酶模拟化合物诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制。方法以人白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;Annexin V/PI双标记和细胞形态学法检测细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2和bax基因mRNA的表达水平;流式细胞术(FCM)测定Bcl-2和Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm)、细胞色素C(Cyt C)释放和Caspase-3活性变化。结果0.5~10mg·mL-1MnSODm明显抑制K562细胞增殖(P<0.01),Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;bcl-2基因mRNA和蛋白表达下调,bax基因mRNA和蛋白表达上调,线粒体Δψm降低,Cyt C释放增多,Caspase-3活性增强。结论MnSODm调控Bax/Bcl-2表达,通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

顺铂对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响

目的研究顺铂(cisplatin,CDDP)对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响。方法收集体外受精—胚胎移植(IVF-ET)时的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,采用MTT法检测不同浓度的CDDP(0、0.5、1、2.5、5mg.L-1)对人黄素化颗粒细胞生长的抑制作用;采用Hochest33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测bcl-2和bax基因蛋白的表达。结果CDDP浓度≥1mg.L-1可抑制颗粒细胞的生长;1、2.5、5mg.L-1CDPP处理人黄素化颗粒细胞24h后,荧光染色可观察到明显的核浓缩、核碎裂形态。FCM检测bcl-2蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax蛋白表达逐渐增加(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义。结论CD-DP可抑制人黄素化颗粒细胞生长,促进凋亡,其作用机制可能是通过上调bax和下调bcl-2基因表达实现的。     

山奈酚对人小细胞肺癌H446的增殖抑制和诱导凋亡作用的影响

目的 探讨山奈酚对人小细胞肺癌H446细胞生长的抑制作用和诱导凋亡作用.方法 采用MTT 法检测生长的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blotting技术检测凋亡相关蛋白.结果 不同浓度的山奈酚能抑制人小细胞肺癌H446细胞生长,且随浓度增加抑制作用增强(P<0.01).流式结果 显示不同浓度山奈酚组...     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法结扎左冠状动脉前降支30mm再灌注60m in复制大鼠心肌缺血再灌注模型,实验分假手术组、缺血再灌注组(IR)、EGCG1(10mg.kg-1)、EGCG2(20mg.kg-1)和丹参(SM,1.0g.kg-1)治疗组。用心功能分析系统测定左室心功能,按试剂盒说明测定血浆SOD,MDA,LDH和CK水平,用TUNEL法检测凋亡细胞,SABC免疫组化法检测凋亡相关基因bc l-2与bax的蛋白表达。结果①缺血再灌注期间,IR组大鼠左室LVSP,±dp/dtm ax呈进行性下降,LVEDP则进行性升高(与假手术组比,P<0.01),EGCG组虽有相似的变化趋势,但明显较缓(与IR组比,P<0.01)。②IR组大鼠血浆SOD水平显著降低;MDA,LDH与CK水平显著升高。EGCG组SOD水平则明显升高;MDA,LDH与CK水平明显降低(P<0.01)。③IR组心肌凋亡细胞明显,bc l-2与bax蛋白表达增多,bc l-2/bax值下降;EGCG组凋亡细胞减少,bc l-2蛋白表达显著增多,bax则明显减少,bc l-2/bax值升高(P<0.01)。结论EGCG通过提高机体清除自由基能力减轻心肌细胞损伤和抑制心肌细胞凋亡而改善心功能,对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

补气活血方对慢性支气管炎肺气虚证大鼠肺组织bcl-2、bax表达的影响

目的：观察补气活血方对慢性支气管炎肺气虚证大鼠肺组织 bcl-2及 bax表达的影响。方法 SD大鼠50只,随机选取10只作为空白对照组,其余40只采用改良烟熏法复制慢性支气管炎肺气虚证大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、补气活血方高剂量组、补气活血方低剂量组、补肺汤组,每组10只。采用免疫组化法检测细胞凋亡相关基因蛋白 bcl-2、bax的表达情况。结果与空白对照组比较,模型组大鼠 bcl-2表达明显增加,bax表达降低（ P 〈0.01）;与模型组比较,补气活血方高剂量组、补气活血方低剂量组、补肺汤组 bcl-2蛋白表达降低,bax 蛋白表达增加（ P〈0.01）;补气活血方高剂量组 bcl-2的表达较低剂量组和补肺汤组明显减少,bax的表达较低剂量组和补肺汤组明显增多（P〈0.01）;补气活血方低剂量组 bcl-2表达低于补肺汤组,bax表达高于补肺汤组（P 〈0.05）。结论补气活血方能够通过抑制细胞凋亡相关基因蛋白 bcl-2的表达,上调蛋白 bax的表达,促进炎性细胞凋亡,可作为预防和治疗慢性支气管炎的有效方法。     

原花青素对实验性脑出血大鼠脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨原花青素对脑出血大鼠脑组织细胞凋亡的影响及其可能机制。方法采用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血,建立脑出血模型。54只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、原花青素低剂量组(50 mg.kg-1)、中剂量组(100 mg.kg-1)、高剂量组(200 mg.kg-1)及尼莫地平对照组(10 mg.kg-1)。术后24 h,检测大鼠脑组织谷胱甘肽(GSH)含量与过氧化氢酶(CAT)的活性,采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织切片bax和bcl-2蛋白表达,TUNEL法检测各组大鼠脑组织凋亡细胞的数量。结果与模型组比较,原花青素低、中、高剂量组大鼠脑中GSH含量与CAT活性明显升高(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,与模型组相比,原花青素低、中、高剂量组的大鼠脑组织bax蛋白表达降低,原花青素中、高剂量组大鼠脑组织bcl-2蛋白表达升高,差异均有显著性(P<0.05,P<0.01)。TUNEL结果显示,与模型组相比,原花青素低、中、高剂量组细胞凋亡数有所减轻(P<0.05,P<0.01)。结论原花青素能够减轻脑出血大鼠的细胞凋亡,其机制可能与原花青素能够提高机体的抗氧化能力,同时增强抗凋亡基因bcl-2的表达,降低促凋亡基因bax的表达有关。     

番茄红素对宫颈癌HeLa细胞bax、bcl-2基因表达的影响

目的 研究番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度番茄红素分别处理HeLa细胞24～72h后，MTT法检测细胞的生长活性，RT-PCR方法检测凋亡相关基因bax，bcl-2的表达。结果实验结果随着番茄红素浓度的增加，bax基因mRNA表达增加而bcl-2的mRNA表达减少。结论番茄红素对HeLa细胞的生长具有抑制作用，可促进宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，bcl-2基因的减少与bax基因表达增加可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

三种不同IL-15基因转染对NCI—H446肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞凋亡的影响。方法用构建的3种转染不同IL-15基因的NCI—H446细胞模型：原型（CIL-15）、成熟肽（CIL-15mp）及以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL—15基因（CIL-2sp—IL-15mp）,以野生株NCI—H446细胞（CW）为对照,流式细胞术检测细胞凋亡率及Fas蛋白表达。结果与CW相比,CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp—IL-15mp凋亡率及Fas蛋白表达依次增加（P＜0．05或＜0．01）。结论3种IL-15基因转染均可致NCI—H446细胞凋亡率明显增加,强度依次为改型＞成熟肽＞原型;这种作用与增加NCI-H446细胞Fas蛋白的表达有关。