光谱核型分析技术在急性髓系白血病细胞遗传学分析中的应用

目的 初步探讨光谱核型分析(Spectral karyotyping,SKY)技术在急性髓系白血病(AML)细胞遗传学分析中的应用价值.方法 对9例AML患者分别采用R显带、SKY检查染色体核型,采用双融合荧光原位杂交(D-FISH)检测MLL、PML-RARα、AML1-ETO等融合基因.将R显带、DFISH、SKY结果进行比较,考察SKY技术在AML细胞遗传学研究中应用的稳定性和可靠性.结果 9例患者标本SKY均获成功.通过SKY技术分别发现9q-,t(15;17)及ins(10;17)(q22;p11p12)3种结构异常及一些数量异常.这些结果均证实和补充了R显带及D-FISH的结论,并定位更精确.结论 SKY技术具有较高的稳定性、可靠性和精确性,可应用于AML的细胞遗传学研究.

Abstract：

Objective To evaluate the value of spectral karyotyping( SKY) in cytogentic analysis of acute myeloid leukemias ( AML).Methods Nine AML patients were analyzed by R-banding and SKY.MLL, PML-RARα, AML1-ETO fusion genes were detected by dual fusion- fluorescence in situ hybridization (D-FISH).Results All 9 samples were successfully hybridized.SKY identified structural aberrations including 9q - , t( 15; 17) and ins( 10; 17) (q22;p11 p12); and some numeral abnormalities.The results of SKY confirmed those of R-band karyotyping and D-FISH; with more accurate localization.Conclusion SKY appears to be fairly stable, accurate and sensitive, for AML cytogenetic study.     

光谱核型分析及其在血液系统肿瘤中的应用

染色体异常是导致先天性缺陷和肿瘤等疾病的主要原因,传统的细胞遗传学显带核型分析费时、费力,特别是对复杂染色体异常的分析尤为困难。经典的荧光原位杂交(FISH)技术采用特异探针检测已知的染色体异常更直观、灵敏和特异,但一次只能检测一个或几个候选位点,且仅能检测已知的染色体异常,不能像核型分析那样进行染色体异常的筛查。近年来,在FISH基础上发展出多色荧光原位杂交技术:光谱核型分析(spectralkaryotyping ,SKY)、多重FISH(M FISH)和彩色显带FISH(Rx FISH) ,一次成像可同时区分2 4条染色体,使得复杂染色体异常的筛查成…     

染色体核型分析在白血病分型诊断中的应用

目的 为确诊1例疑似慢性粒细胞白血病提供细胞遗传学证据.方法 采用24 h短期培养法制备骨髓染色体,G显带并进行染色体核型分析.结果 染色体核型为46,XY,t(1;5)(q21;q33)[15].结论 细胞遗传学不支持慢性粒细胞白血病的诊断.t(1;5)(q21;q33)可能是导致白血病的主要原因.     

M-FISH技术在复杂核型异常的急性白血病患者的诊断、预后分析中的应用

M-FISH,即multi-coclour FISH和multiplex FISH(M-FISH),是分子细胞遗传学方面在过去的10年里最具有发展意义的代表技术之一。这项技术从最初使人类23对染色体上24种特异的荧光色彩以供核型分析,到现在已经产生了许多复杂的变化,也开始被各种不同专业的领域范围所应用。在白血病细胞遗传学上,M-FISH已被应用于下列染色体异常患者的检查:①可疑有未被发现的微小的染色体易位;②具有复杂异常核型的染色体异位(普通方法很难获得完全的染色体核型)。最终的检查结果对白血病患者的诊断、治疗及预后分析具有很大的指导作用。本文就M-FISH的技术原理和常用的探针、M-FISH在急性白血病的诊断、疗效评价及预后分析中的应用进行了综述。     

染色体核型在急性髓系白血病诊断和预后中的作用探究

目的探讨染色体核型在急性髓系白血病(AML)诊断及预后中的应用价值。方法 AML初诊患者138例采用G显带技术进行染色体核型分析,随访分析患者的总生存时间。结果AML中异常核型73例(52.9%),以t(15;17)、t(8;21)和+8最常见。初诊时患者年龄和白细胞计数在核型分组中差异有统计学意义(P0.05)。随访110例AML患者,中位随访时间8个月,生存分析的低危、中危和高危组3年累计生存率分别为84.0%、45.3%和21.0%,差异有统计学意义(P0.05)。结论染色体异常在AML各亚型间存在差异,可用于AML的诊断及预后监测。     

多色荧光原位杂交技术在急性白血病研究中的应用

染色体核型与急性白血病的预后、诊断及治疗关系密切。目前各实验室常规应用的方法是传统染色体核型分析与荧光原位杂交技术,但这两种技术各有不足之处。新近发展起来的多色荧光原位杂交技术有效地弥补了这些不足。本文就多色荧光原位杂交技术的原理、种类、特点及其在急性白血病研究中的应用作一综述。     

染色体核型分析在儿童矮小诊断中的应用

对178例矮小儿童进行外周血染色体检查,采用常规外周血淋巴细胞培养,进行核型分析。结果 178例矮小儿童,共检出异常核型35例,占19.66%。其中常染色体异常3例,占1.68%,21-三体综合征单纯型1例,表现为智力低下,先天性心脏病,典型愚形面容,身材矮小。另2例为21-三体综合征嵌合型,表现除身材矮小外,其他表现不明显。其中性染色体异常32例,占17.97%。分别为性染色体数目异常21例,性染色体结构异常11例。染色体异常是儿童身材矮小的一个重要原因,应引起临床医师的高度重视,特别是女童,应作矮小诊断的常规检查。以免误诊漏诊。     

慢性粒细胞白血病骨髓染色体核型异常的结果分析

慢性粒细胞白血病(CML)是起源于造血干细胞的恶性克隆性骨髓增殖性疾病,其分子标志是由于9号和22号染色体发生相互易位而形成的费城染色体。染色体核型分析对CML的诊断﹑预后以及发病机制的探讨有重要价值。现统计我院近两年来CML患者的骨髓核型结果进行分析,报告如     

常用染色体分析技术在产前诊断中的应用

经典的细胞培养和细胞染色体分析是染色体病诊断的金标准,但该方法有实验周期长,对部分复杂、微小异常诊断困难等缺点;随着分子遗传学技术的不断发展,在传统染色体核型分析的基础上衍生发展了多项染色体分析诊断技术,如荧光原位杂交技术、比较基因组分析、光谱核型分析等不断应用于产前诊断染色体病中。这些新技术具备实验周期短,特异性强,分辨率高等优点。本文将就常用染色体分析技术原理、特点作一综述,并探讨将这些新技术与传统的细胞染色体核型分析技术相结合,合理运用,使得产前诊断中更多复杂的染色体异常核型的明确诊断成为可能。     

急性髓系白血病染色体核型异常分析研究

本研究旨在探讨急性髓系白血病染色体核型异常情况。采用直接法或短期培养法制备骨髓细胞染色体,并应用染色体R显带技术对379例患者进行常规细胞遗传学检测。结果表明：379例患者中共检出216例存在克隆性染色体异常,包括19种平衡易位和70种染色体缺失或获得,占所分析患者的56．99％。t（15;17）（95例）为最常见的染色体异常,-Y（22例）为最常见的数目异常,分别占所分析患者的25．86％和5．80％。90．9％的-Y异常与t（8;21）同时出现,占t（8;21）异常的40．81％。各FAB亚型间染色体核型异常存在统计学差异,M3组显著高于其它组（P〈0．05）。男女性别间统计无显著性差异（P〉0．05）。结论：应用R显带技术可检出56．99％的急性髓细胞白血病患者染色体异常,且主要为染色体特异性重排,部分核型异常与特定的FAB亚型相关,这可有助于急性髓系白血病的诊断及分型。     

染色体核型动态监测对急性白血病患者化疗疗效评估的作用

目的:探讨染色体核型分析在急性白血病患者化疗后疗效评估中的作用。方法:80例初治急性白血病(acute leukemia,AL)按照FAB分型标准分为急性髓细胞白血病(AML)65例,急性淋巴细胞白血病(ALL)15例,采用R显带技术检测染色体,并分析治疗1个月后染色体与化疗疗效的关系。结果:65例AML患者中核型异常者31例,畸变率为47.7%;31例染色体核型异常的AML患者中,t(15;17)9例占29.0%,t(8;21)7例占22.6%,其他核型及复杂核型15例,占48.4%;t(15;17)组缓解率为88.9%,t(8;21)组缓解率为71.4%,其他核型组缓解率为66.7%;组间相比,t(15;17)组缓解率显著高于t(8;21)组、其他核型组与正常核型组为(χ2=9.625,14.267,7.768,P0.05);t(8;21)组与其他核型组、核型正常组缓解率比较差异无统计学意义(χ2=0.517,0.111,P0.05)。在15例ALL患者中,核型正常8例占53.3%,核型异常7例占46.7%,ALL染色体畸变率与AML相比,差异无统计学意义(χ2=0.020,P0.05);核型正常患者缓解率为87.5%,核型异常者为42.9%,两组比较差异具有统计学意义(χ2=43.834,P0.01)。结论:对于AML患者,t(15;17)核型异常者能获得较好的化疗效果,核型正常的ALL患者化疗后临床缓解率较高;染色体核型分析对白血病患者化疗的疗效评估具有重要的参考作用。     

119例慢性髓细胞白血病急变期核型分析

为了探讨慢性髓细胞白血病急变期（CML-BC）核型变化规律及意义，应用R显带技术对119例CML-BC患者的核型资料进行分析，并在其中随机选出28例以荧光原位杂交法（FlSH）检测衍生9号染色体[der（9）]是否缺失．结果表明：124例核型检查中Ph阴性11例（8．9％），P11阳性113例（91．1％），其中典型易位104例（83．9％），单纯变异易位4例（3．2％），复杂变异易位5例（4．0％）；Ph阴性CML-BC中72．6％伴有附加染色体异常，主要类型是：i（17q）、＋14，Ph阳性者72．3％伴有附加染色体异常，主要类型是：＋Ph、＋8、i（17q）；Ph阴性CML-BC急变时间为2-66月，平均29．0月，Ph阳性者急变时间为1-127月，平均34．2月，两组比较无统计学差异（P〉0．05）；FlSH检测发现5例（5／28，17．9％）der（9）缺失。结论：慢性髓细胞白血病急变期附加染色体异常多见，FlSH技术可有效检测der（9）缺失．     

异种移植构建小鼠人急性白血病模型的研究进展

构建小鼠人急性白血病模型的方法包括人白血病细胞异种移植、逆转录病毒转导／移植、小鼠转基因、化学诱变、插入诱变等。通过异种移植构建小鼠人急性白血病模型是当前研究急性白血病的重要手段之一。本文就免疫缺陷鼠、预处理及细胞因子、细胞接种、模型评估及模型应用方面,介绍异种移植构建小鼠人急性白血病模型的最新进展。     

急性髓系白血病cebpa基因突变研究

本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者中cebpa基因突变的发生率及突变情况。选取22例初发或复发的正常核型AML患者,其中M12例,M215例,M52例,M63例例,女性8例,中位年龄48岁(13-71岁)。以基因组DNA为模板,分两段扩增cebpa基因,PCR产物通过直接测序或克隆测序法检测cebpa突变情况。结果表明:22例AML患者中有4例检出cebpa基因突变,突变率为18.2%(4/22),均为M2,其中2例为初发AML患者,2例为复发AML患者。突变主要为N端的无义突变和C端的框内突变。结论:采用PCR扩增联合测序检测cebpa基因突变,主要见于M2型,其预后意义有待进一步研究。     

同期确诊MDS与AML患者染色体核型分析比较

本研究比较分析骨髓增生异常综合征（MDS）及急性髓系白血病（AML）患者的染色体核型异常与诊断、预后的关系,探讨MDS及AML患者不同年龄组染色体预后分层特征。采用骨髓短期培养和R显带技术分析134例MDS和123例AML患者染色体核型。结果表明：MDS与AML患者中染色体异常核型检出率分别为41％及61％。MDS与AML组异常核型分析显示：①MDS组以数目异常为主（主要为＋8）,AML组患者以结构异常为主,主要为t（15;17）及t（8;21）,与FAB亚型相关性不明确的异常核型检出中主要为＋8。复杂异常核型检出及顸后良好、预后不良核型在MDS组均明显高于AML组;MDS组发生AML转化中有12例为染色体核型异常,AML组有3例染色体核型异常者是由MDS转变而来。②两组行年龄分层分析显示：MDS组随年龄增大异常核型检出率增高,其中在1〉60岁组明显高于在≤30岁组,复杂异常核型检出在MDS3个年龄组未显示有统计学差异;AML组异常核型检出随年龄增大检出率减少,≤30岁组明显高于I〉60岁组,而复杂异常核型则显示≥60岁组明显高于≤30岁组;核型预后分析,在MDS与AML组均提示预后不良核型检出率随年龄增长检出率增高,在≥60岁组明显高于在≤30岁组;预后良好核型在MDS及AML则显示≤30岁组又明显高于≥60岁组。结论：MDS及AML患者具有较高的染色体异常,其检测对于诊断、治疗和预后判断具有重要的参考价值;同时染色体核型分析为预后分层提供了重要依据。     

双色双融合荧光原位杂交探针检测慢性髓系白血病Bcr／Ab1基因重排的研究

本研究探讨双色双融合荧光原位杂交技术（DC-DF-FISH）在慢性髓系白血病（CML）中的应用价值,应用常规R-显带技术、DC-DF-FISH、RT—PCR技术检测41例CML患者的染色体核型及bcr／abl融合基因。结果表明,对于初诊CML的18例患者,R-显带显示Ph染色体阳性检出率为94．4％（17／18）,DC—DF—FISH阳性检出率也为94．4％（17／18）,对于治疗后CML的18例患者,R-显带显示14例有可分析分裂相,其中有ll例存在Ph染色体,阳性检出率为78．6％（11／14）;而用DC—DF—FISH检测治疗后患者的阳性率为94．4％（17／18）;移植后的5例患者R-显带均未检出Ph染色体,而FISH检测出1例bcr／abl基因阳性,RT-PCR证实了FISH的检测结论,但在移植患者中,RT-PCR无阳性发现。结论：双色双融合荧光原位杂交技术具有高度的准确性、可靠性,是检测CML患者bcr／abl基因重排的可靠方法,适用于CML的诊断、疗效判定及微小残留病灶的检测。     

CpG-寡核苷酸免疫刺激法在慢性淋巴细胞白血病遗传学研究中的应用

目的:探索CpG-寡核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)免疫刺激法在慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)细胞染色体培养中的价值,对比国内外相关研究的差异,进一步提高CLL核型培养成功率及异常核型检出率。方法:收集82例CLL患者的骨髓标本,分别应用植物血凝素(PHA)、CpG-寡核苷酸联合白介素-2(CpG-ODN DSP30+IL-2)刺激培养72 h后收获细胞,制备染色体,进行常规细胞遗传学(conventional cytogenetics,CC)分析。同时应用D13S25、Rb1、ATM、p53和CSP12探针进行间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,iFISH)检测。比较2种细胞刺激剂进行染色体培养及iFISH检测结果的差异性。结果:PHA与CpG-ODN DSP30+IL-22种免疫刺激法核型培养成功率(可分析分裂相t≥20个)分别为90.2%(74例)和68.3%(56例),异常核型检出率分别为13.5%(10例)和46.4%(26例)。PHA组核型培养成功率显著高于CpG-ODN DSP30+IL-2组(P=0.01),而CpG-ODN DSP30+IL-2组异常核型检出率显著高于PHA组(P=0.003)。iFISH异常核型检出率(74.4%,61例)显著高于CpG-ODN DSP30+IL-2组(P=0.000)。iFISH检测能验证CC分析检出的异常。结论:应用CpG-ODN DSP30+IL-2免疫刺激法培养CLL细胞,可提高异常核型检出率,特别是能检出提示预后差的各种易位。     

急性混合细胞白血病临床特点及免疫学表型的研究

本研究目的是分析急性混合细胞白血病（MAL）的临床特点及生物学特征,临床疗效及预后。回顾性分析了48例MAL患者,这些患者均是根据国际白血病欧洲协作组（EGIL）1995年标准而诊断的急性混合细胞白血病;同时,以同期68例急性非淋巴细胞性白血病（AML）和61例急性淋巴细胞性白血病（ALL）患者作为对照。结果表明：在同期急性白血病500例中MAL发生率为9.6%,细胞形态上往往表现为AML以M1、M2亚型为主,ALL以L2亚型为主;MAL组白细胞中位数明显高于AML组和ALL组,差别有统计学意义（P〈0.05）,MAL组肝脾淋巴结肿大例数明显高于AML组（P〈0.01）,而与ALL组相比较差别无统计学意义（P〉0.05）;MAL组以髓系和B系抗原共表达为主,占70.9%,T系和髓系共同表达的占20.8%,T系、B系和髓系均表达的占8.3%;MAL组CD34阳性率为79.2%,明显高于AML组CD34阳性率（54.4%）和ALL组CD34阳性率（52.5%）,差别均有统计学意义（P〈0.01）,提示MAL可能起源于造血干细胞;MAL组正常核型占32.1%,异常核型占67.9%,其中Ph染色体阳性率（25%）明显高于AML组Ph染色体阳性率（0%）,差别有统计学意义（P〈0.01）,而与ALL组Ph染色体阳性率（16.7%）相比较差别无统计学意义（P〉0.05）;MAL组完全缓解率（CR率）为38.1%,明显低于AML组CR率（70.8%）和ALL组CR率（72.2%）,差别均有统计学意义（P〈0.01）,MAL组疗效与CD34和Ph染色体的表达呈负相关。结论：MAL以髓系和淋巴系抗原共表达为主,它很可能源于造血干细胞,MAL较少见,常伴有较多的不良预后因素,缓解率低,预后差,因此须进一步探讨合理有效的治疗方案。     

SCID小鼠-人白血病模型在白血病研究中的应用

SCID小鼠-白血病模型是研究白血病细胞增殖、分化及其调控机制的重要手段和方法。本文综述了SCID小鼠-白血病模型的建立及研究进展，并对该模型在白血病发病学、白血病细胞生物、临床诊疗措施和判断病人预后等方面的可能应用进行了探讨。最后提出了此模型的应用局限性，以便更好地完善该模型，用于白血病的研究。