分泌抗MCG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

分泌抗ＭＣＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立周昌奎蓝兰张云峰＊＊（福建省计划生育科学技术研究所，福州３５００１１＊福建省立医院生物治疗中心＊＊福建省福港生物工程研究中心）谢弘王放（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）以苯甲酸－丙酮一步法，从...     

分泌抗精氨酸加压素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道利用杂交瘤技术制备了抗精氨酸加压素单克隆抗体,通过鉴定,证明所得抗体稳定性好,对精氨酸加压素有较强的特异性结合,对赖氨酸加压素和催产素基本无反应。用免疫双扩散技术还证明所得抗体属小鼠IgM类。     

两种分泌抗PrP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步鉴定

目的 制备具有广谱种属反应性的PrP单克隆抗体(McAb)，用于可传播性海绵样脑病(TSE)的诊断及致病机制研究。方法 分别将对应于牛PrP29-48(BoP1)、PrP89-108(BoP2)的两种多肽与匙孔碱血蓝蛋白(KLH)偶联，免疫BALB／c小鼠，经细胞融合后获得分泌针对上述两种多肽的杂交瘤细胞株，用Western-blot方法检测这些细胞株分泌的McAb与牛(Bo)、人(Hu)和仓鼠(Ha)PrP蛋白的反应性。结果 通过细胞融合和2-3轮克隆化，用ELISA筛选出分泌抗BoPl和BoP2抗体的杂交瘤细胞株D11和D8。Western blot显示，获得的McAb均能分别与重组BoPrP(25-242)、重组HuPrP(23-231)和HaPrP(23-231)反应。结论 获得了可与牛、人和仓鼠PrP反应的两种McAb，可用于哺乳类PrP检测及TSE致病机制研究。     

分泌抗人角蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

角蛋白（keratin）作为一组相对分子质量（M）为40000－70000不溶于水的细胞结构蛋白，在上皮细胞的发生、分化成熟过程中逐渐形成，是所有哺乳动物细胞骨架的中间丝之一，其组成因不同上皮而异。近年来，随着分子生物学技术的推广和应用，角蛋白的基础研究得到了不断深化；同时采用多种特异性抗角蛋白的mAb进行皮肤病的临床研究，也取得很大的进展。本实验选用从剥脱性皮炎型药疹患者皮屑中提取的角蛋白免疫动物，制备出3株抗人角蛋白的mAb，并对其进行了鉴定。l材料和方法1．l角蛋自的提取取剥脱性皮炎型药疹患者的皮屑，按常规方法提取…     

抗人全T细胞单克隆抗体大鼠杂交瘤细胞株的建立

通过融合大鼠免疫细胞株IR983F和经T细胞株HPB—ALL免疫大鼠脾细胞,获得分泌单克隆抗体LO—CD6a的杂交瘤细胞株。实验证实,LO—CD6a是人全T细胞特异性的。     

分泌抗人IgA单克隆抗体杂交瘤细胞建株成功

54041部队单克隆抗体研究小组,在广西壮族自治区防疫站实验研究室的协作下,经过10个月的努力,于1986年2月将此种单克隆抗体研究成功。IgA抗原系自骨髓瘤病人血清中提取,免疫于BALB/c小鼠体内,取其脾细胞,与骨髓瘤细胞(Sp2/0和NS-1),在PEG作用下进行融合,产生了杂交瘤细胞。此种细胞所分泌的抗体即单克隆抗体(单抗)。该小组成功建立的是两株细胞11B7和5C2。用酶联吸附试验检测,光密度(OD)值分别为1.91和     

抗人IFN—α单克隆抗体杂交瘤细胞的建株及应用研究

人ＩＦＮα在治疗淋巴细胞瘤、黑色素瘤、白血病和肾癌等肿瘤疾病，以及预防感冒、治疗乙型肝炎、单纯疱疹等病毒性疾病中，具有广泛的应用前景。据统计，我国约有肿瘤患者３００～４００万人，慢性乙肝患者近１００万人，单纯疱疹及带状疱疹患者约有１亿人以上，估计每年对ＩＦＮα的总需求量大约为５～６亿支。由于应用于临床（尤其是注射用）的ＩＦＮα纯度要求极高，因此作为治疗用的ＩＦＮα必须进行高度纯化。应用ｍＡｂ技术进行ＩＦＮα的分离纯化，具有操作简便、回收率高、可重复使用等优点，尤适合大规模地对重组和天然…     

抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定

目的 建立分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（mAb)的杂交瘤细胞系，并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 用成骨肉瘤细胞系（OSPS-9607）免疫Balb/c小鼠，取脾细胞按常规方法融合，筛选，克隆化及腹水mAb制备，取骨肉瘤手术标本（60例）及正常组织（6种），用mAb进行免疫组化ABC染色。结果 筛选出2株能持续，稳定分泌特异性抗骨肉瘤mAb的杂交瘤细胞株（6E5和3F7），2株杂交瘤细胞经过100d连续培养，分泌mAb的特性稳定，mAb特异性强，效价高。免疫组化染色检测表明，mAb6E5和3F7针对的抗原，在成骨肉瘤组织及成骨肉瘤细胞系均呈高表达（70%）。针对mAb6E5的抗原主要分布于细胞核上，针对mAb3F7的抗原主要分布于细胞浆内，6种正常组织中除胃粘膜可见弱阳性反应外，其余未见明确的阳性反应。结论 此两株杂交瘤细胞分泌的mAb对成骨肉瘤细胞具有特异亲和性，为成骨肉瘤的早期诊断。免疫治疗及发现成骨肉瘤新的标志物奠定了基础。     

重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

本文报道重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株建立的方法及结果。为获得供融合用的小鼠脾细胞,用两种不同的方案免疫了两组(每组3只)BALB/c小鼠。血清抗体效价最高的第4号小鼠,于加强免疫4天后取脾,制成脾细胞悬液。按照常规方法与小鼠骨髓瘤SP 2/0·Ag 14细胞融合。采用直接中和试验法筛选融合细胞孔的上清液,从中选出两株(A3和B3)分泌抗重组人γ-干扰素的杂交瘤细胞。交叉中和试验显示,A_3和B_3抗体只中和重组或自然的人γ-干扰素;与α-干扰素或β-干扰素无反应。此两株单克隆抗体的效价分别超过128,000和25,600。双扩散试验证明,A_3和B_3均为小鼠IgG_1型抗体;液氮中保存半年以上,仍保持原有的各种特性。     

抗人IgG单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道用人IgG免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,获得 3株分泌抗人 IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为 SIBPH1、SIBPH2和 SIBPH3。现重点报道SIBPH1株。用琼脂双扩散和免疫电泳等方法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体,对IgG具有良好的专一性,注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价抗IgG的腹水(双扩散1:256～512),单克隆抗体属小鼠IgG_1亚类,该杂交瘤细胞株经组织培养传代逾半年,冻存12个月,复苏良好,分泌抗IgG性能稳定。本文还对杂交瘤细胞建株的若干问题进行了讨论。     

人源性TPO单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人源性ＴＰＯ（ｈｕＴＰＯ）皮下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０实体瘤细胞融合，建立了２株稳定分泌抗ＴＰＯ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为１９Ｄ１２和４９Ａ５，并对其进行了初步鉴定，采用简易正辛酸法从腹水中纯化单克隆抗体。结果：细胞融合率为８２％，杂交瘤细胞染色体数目正常，分泌的抗体为ＩｇＧ，腹水抗体效价为０．６￣１．２×１０＾－３，与ＥＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ无交叉反应，连续培养生物性状     

抗人IgG单克隆抗体的研究 Ⅲ.8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性分析和初步应用

本文报道8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的血清学特性,其中4种属抗全IgG,3种是对IgG_4无反应的抗IgG,1种是对IgG_3无反应的抗IgG。各单克隆抗体之间的效价和结合抗原的能力有所差异。根据组合试验,选出A_2与B_1二种单克隆抗体进行组合,用以检测正常人血清中IgG含量,与常规抗血清相比较呈良好的相关性(r=0.90)。用以制备亲和层析柱,纯化人IgG,得率比常规抗血清高7.3倍。据此认为,研制这类单克隆抗体将为临床免疫检测提供有效的试剂。     

抗人红细胞膜中3-磷酸甘油醛脱氢酶杂交瘤细胞株的建立和鉴定

应用正常人红细胞膜提纯的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)免疫 BALB/c 小鼠的脾细胞与 SP2/O 小鼠骨髓瘤细胞在50%(W/V)PEG 1,000作用下融合。经三次克隆后,获得一株分泌抗正常人红细胞膜中 GAPD 杂交瘤细胞株(简称9C_6)。经被动血凝实验,生物化学酶抑制试验以及酶联免疫电泳转移试验证明此杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)属小鼠 IgM,对正常人红细胞膜 GAPD 是特异的。此 McAb 可用于 GAPD 的纯化、人红细胞膜中 GAPD 活性的测定以及对阵发性夜间性血红蛋白尿症病因的探讨。     

细胞表面抗原单克隆抗体的筛选

本文采用固定细胞ELISN,间接免疫光和SPA花环三种方法同时检测抗白血病细胞表面抗原单克隆抗体.结果证明固定细胞ELISA法阳性率最高.SPA花环法较低,间接免疫荧光法是筛选细胞表面单抗的最好方法. 采用双抗体夹心法检测杂交瘤上悬液中免疫球蛋白分泌情况。结果提示双抗体夹心法阳性者用三种筛选方法证明可为阴性.提示这种抗体可能是非特异性抗体.不与细胞表面抗原反应。     

抗人C1q杂交瘤细胞中一未知DNA片段的克隆与分析

使用一对ＩｇＶＨ通用引物，应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从分泌抗人Ｃ１ｑＭｃＡｂ的Ｂ６杂交瘤细胞株总ＲＮＡ扩增出－３８７ｂｐ的ＤＮＡ片段。通过计算机网络系统对其进行序列的类似性检索，未发现与之一致或显著相似的序列。     

抗人IgM重链单克隆抗体的特性分析

本文报道取正常人混合血清纯化 IgM,经断链后获得(Fo)_5μ片段作为免疫原免疫动物,应用杂交瘤技术获得16株分泌抗人IgM McAb的细胞株。用琼脂双扩散、免疫电泳、ELISA等方法证实所分泌的 McAb对人 IgM 呈高特异性。杂交瘤细胞诱生腹水的抗体效价在双扩散试验中可达1:256,在ELISA 中可达10~(-7)。用被动血凝抑制试验及ELISA试验比较了其中4种McAb(M_5、M_(12)、M_(23)、M_(25))的抗原结合力大小,表明M_(12)有较高亲和力。用ELISA固相竞争试验分析,证明该4种McAb针对同一抗原的不同决定簇。该 16种McAb除 M_(22)为 IgA外,余均属 IgG1亚类。     

ESTABLISHMENT AND CHARACTERIZATION OF PERMANENT MURINE HYBRIDOMAS SECRETING MONOCLONAL ANTI-THY-1 ANTIBODIES *

Hybridomas secreting anti-Thy-1 antibodies were produced by fusing cells of the mouse myeloma line P3-NSI/1-Ag4-1 (NS-1) with spleen cells from AKR/J mice immunized with C3H/Di thymus cells and by subsequent growth in tissue culture and selection of the hybrid cells. Two permanent hybridomas, 1B5 and 1aG4/C5, secreting antibodies of IgG3 subclass were isolated by repeated cloning of cells by dilution and in soft agar. Growth of the hybrid cell colonies depended on the presence of feeder cells; spleen cells at 1-2 X 10⁶/ml were most effective, then thymus cells at 1-4 X 10⁶/ml and peritoneal cells at a concentration 1-2 orders of magnitude lower. The two hybridomas were grown in vitro or in vivo and their products were further analysed. In tissue culture in serum-free medium under the optimum conditions the supernatant from hybridoma 1B5 contained 0.07 mg/ml of antibodies and that from hybridoma 1aG4/C5 had 0.26 mg/ml of antibodies, whereas ascites 1B5 contained 3.6 mg/ml and ascites 1aG4/C5 4.4 mg/ml of antibodies. A very low electrophoretic mobility of both antibodies facilitated their isolation. The specificity of the antibodies was tested in the cytotoxicity assay in the presence of complement and by the binding of isotopically labelled antibodies to thymus cells from A/Ph mice and other Thy-1.2⁺ strains and A. Thy-1.1 and AKR/J mice. Antibodies of clone 1aG4/C5 were specific for Thy-1.2⁺ cells, whereas antobodies of clone 1B5 at higher concentrations also reacted with Thy-1.1⁺ cells from the thymus and lymph nodes. Both antibodies killed more than 95% thymus cells and 60-70% lymph node cells in the cytotoxicity assay. The specificity of antibodies for T lymphocytes was confirmed in the functional test in which the antibodies eliminated the response of spleen cells to Concanavalin A but did not affect the response to lipopolysaccharide in the presence of complement.