p53基因对人胃癌细胞生长及致瘤性的抑制作用

p53基因异常是人类肿瘤中最常见的基因变异之一．是最有希望用于肿瘤基因治疗的目的基因。在人胃癌组织中有较高频率的p53基因缺失和突变，为探讨p53基因用于胃癌治疗的可行性，我们采用脂质体介导方法将外源性野生型p53基因转染一株p53基因有部分缺失的人胃癌BGC823细胞，获得较高的转染效率，对转染后细胞DNA，RNA和蛋白进行分析．结果表明外源性p53基因已整合人细胞并获稳定表达，表达有外源性野生型p53基因的细胞生长速度，软琼脂集落形成率及裸鼠致瘤性均有部分抑制。这一结果进一步证明p53基因在胃癌发生发展过程中起重要作用．本研究为采用野生型p53基因转染进行胃癌基因治疗提供了细胞学实验依据。     

重组人p53腺病毒注射液联合顺铂对卵巢癌细胞生长及凋亡的影响

目的:探讨重组人p53基因腺病毒(recombinant adenovirus-p53,rAd-p53)注射液联合顺铂(cisplatin, DDP)对卵巢癌细胞株生长及细胞凋亡的影响.方法:利用MTT、FCM和Western 印迹法比较单独采用rAd-p53、DDP及2者联合用药对卵巢癌细胞株SKOV-3和CAOV-3细胞生长抑制、细胞周期、细胞凋亡以及p53蛋白表达的影响.结果: rAd-p53注射液对卵巢癌细胞株的生长有抑制作用,并呈时间、剂量依赖性关系;联合用药对卵巢癌细胞株生长抑制作用更显著(P<0.01),联合用药时不同的用药顺序对卵巢癌细胞株生长抑制无明显差异(P>0.05).联合用药72 h后,卵巢癌细胞株细胞周期明显阻滞于G0/G1期,S期比例明显减少,且细胞凋亡率显著升高(P<0.01).rAd-p53作用于卵巢癌细胞株72 h后,有明显的p53蛋白表达.结论:rAd-p53能将外源性野生型p53基因导入卵巢癌细胞基因组,使之表达p53蛋白,从而使肿瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制细胞生长,并促进细胞凋亡.rAd-p53与DDP联合应用,其抗肿瘤效应较单药用药更加显著.     

P53基因抑制人肝癌细胞的生长

P53基因定位于人17号染色体短臂,正常的P53基因作为一种细胞增殖的抑制因子在正常的细胞中调节生长和分化,但若基因突变或丢失,就使这种调节作用丧失。目前,巳有大量报道,在人脑、乳房、肺、骨、结肠、直肠的恶性肿瘤里,均发生P53基因的突变和野生型P53等位基因经常伴随着丢失。这些研究提示正常的(野生型的)P53产物可能起着抑制瘤生长的作用,而突变或丢失,或两者兼     

腺病毒介导的p53基因对喉癌细胞生长的抑制作用

目的探索ｐ５３基因在喉癌基因治疗方面的可行性。方法以人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２为实验对象,将载有人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ并含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３）感染Ｈｅｐ－２细胞及肿瘤组织,体内外实验观察Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３对Ｈｅｐ－２细胞生长的影响。结果当Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３在１００ＭＯＩ效靶比时,全部Ｈｅｐ－２细胞得到转染。感染２天后ｐ５３蛋白表达达到高峰,Ｈｅｐ－２生长受到明显的抑制。Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３感染Ｈｅｐ－２细胞在裸鼠中失去致瘤性。瘤内注射Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显减小。结论Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３转导野生型ｐ５３基因可能是一种有效的喉癌基因治疗途径。     

Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的:探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法:将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-PTEN)感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术(FCM)检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果:Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论:重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

重组人p53腺病毒联合肿瘤坏死因子对乳腺癌Ca761细胞的抑制作用

目的：探讨重组人p53腺病毒注射液（rAd/p53）联合肿瘤坏死因子（TNF）对荷瘤小鼠体内外的乳腺癌细胞Ca761的抑制效果。方法：MTT法,流式细胞术检测细胞凋亡率,观察rAd/p53和TNF对乳腺癌细胞的体外抑制作用及促凋亡作用。建立乳腺癌Ca761细胞小鼠移植瘤模型,瘤内分别注射rAd/p53和TNF及两药联合,观察对肿瘤生长的影响,并对肿瘤组织进行病理学和免疫组化检查。结果：rAd/p53和TNF体内外均可显著抑制乳腺癌Ca761细胞的生长,可以促进乳腺癌细胞Ca761株的凋亡。两药联合对肿瘤细胞具有协同杀伤作用。结论：重组人p53腺病毒注射液（rAd/p53）治疗Ca761乳腺癌细胞移植瘤是有效的,TNF也可抑制其生长,rAd/p53和TNF联合应用有协同作用,为临床乳腺癌的综合治疗提供了依据。     

Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法：将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-PTEN）感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术（FCM）检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果：Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论：重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

TGF_α-PE40对人低分化胃癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨基因重组转化生长因子 α 绿脓杆菌外毒素融合蛋白 (TGFα PE40 ,简称TP40 )对人低分化胃癌细胞生长的导向抑制作用。方法　用免疫组化LSAB法检测人低分化胃癌MKN 45细胞表皮生长因子受体 (EGFR)的表达 ,用结晶柴染色法和3 H 亮氨酸掺入法检测TP40对MNK 45细胞生长及蛋白质合成的抑制 ,用过量EGF竞争拮抗TP40的细胞毒作用。结果　MKN 45细胞免疫组化显示出大量棕黄色的EGFR阳性染色。TP40浓度为 1～ 10 0ng/ml时 ,对MKN 45细胞长生及蛋白质合成呈剂量依赖性抑制。过量EGF能完全拮抗TP40的细胞毒作用。结论　人低分化胃癌MKN 45细胞能高水平地表达EGFR ,重组TP40对MKN 45细胞生长具有较强的抑制作用 ,作用部位为细胞的EGFR     

TGFα-PE40对人低分化胃癌细胞生长的抑制作用

 目的　探讨基因重组转化生长因子α-绿脓杆菌外毒素融合蛋白(TGFα-PE40,简称TP40)对人低分化胃癌细胞生长的导向抑制作用。方法　用免疫组化LSAB法检测人低分化胃癌MKN-45细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达,用结晶柴染色法和3H-亮氨酸掺入法检测TP40对MNK-45细胞生长及蛋白质合成的抑制,用过量EGF竞争拮抗TP40的细胞毒作用。结果　MKN-45细胞免疫组化显示出大量棕黄色的EGFR阳性染色。TP40浓度为1～100ng/ml时,对MKN-45细胞长生及蛋白质合成呈剂量依赖性抑制。过量EGF能完全拮抗TP40的细胞毒作用。结论　人低分化胃癌MKN-45细胞能高水平地表达EGFR,重组TP40对MKN-45细胞生长具有较强的抑制作用,作用部位为细胞的EGFR。     

p53与血管生长抑素基因共转染对SG7901细胞生长的抑制作用

背景与目的：p53基因为抑癌基因，血管生长抑素（angiostatin，Angio，AS）基因能抑制血管内皮细胞生长和血管新生，间接抑制肿瘤的生长。本研究探讨以pV1TRO2质粒为载体共转染野生型人p53和人Angio基因（pV1TRO2-hp53-hAngio）对人胃癌细胞生长的影响。方法：用脂质体转染法将pV1TRO2-hp53-h-Angio转染人胃癌细胞系SG7901。以RT—PCR法检测转染后细胞目的基因的表达，通过细胞集落形成试验、MTT生长曲线、流式细胞仪调亡检测观察其生物学特性变化。结果：野生型p53基因或AS基因转染后均能抑制转染细胞的生长（细胞集落形成试验及MMT，P〈0．05），而共转染两种基因的细胞生长抑制诱导凋亡效果优于单个甚因转染（细胞集落形成试验及MMT，P〈0．05）。结论：p53和AS基因具有协同抑制肿瘤细胞生长作用，提示联合基因可能有利于肿瘤的基因治疗。     

腺病毒介导的FasL基因转移及对胃癌细胞生长和凋亡的影响

目的：探讨FasL基因对人胃癌的作用以及FasL基因治疗胃癌的可能性。方法：通过腺病毒载体介导FasL基因转移到低水平表达FasL的人胃癌细胞系SGC－7901,对FasL基因的表达,细胞生长的抑制与机制和对肿瘤生长模型的治疗效果进行分析。结果：外源性FasL基因在靶细胞高水平的表达,显著抑制了SGC－7901的生长和集落形成,流式细胞仪检测显示细胞G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad-FasL对裸鼠体内移植瘤有一定的抑瘤作用。结论：FasL基因参与了肿瘤细胞凋亡的诱导,能抑制胃癌细胞的生长,因此该基因在肿瘤的基因治疗上有着广泛的应用前景。     

奥沙利铂通过调控miRNA-7-5p/RAF-1促进胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨奥沙利铂如何调控MAPK通路,抑制胃癌细胞的增殖。方法 NCBI检索文献,利用TargetScan、StarBase和miRBase数据库,进行GO分析与KEGG通路富集,找到相关miRNAs,预测靶基因。应用Real-time PCR、MTT、Hoechst33258、流式细胞术、细胞划痕实验、Western blot等方法分析人胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期、侵袭及蛋白表达情况。结果胃癌细胞中miR-7-5p显著低表达,RAF1与miR-7-5p存在互靶关系。miR-7-5p mimics与奥沙利铂均可促进SGC-7901细胞的凋亡,提高G1期细胞百分率(P<0.05),降低侵袭、迁移速度。caspase3、caspase9蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。结论过表达mi R-7-5p与奥沙利铂均可促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡,提示奥沙利铂可能通过上调mi RNA-7-5p促进SGC-7901细胞的凋亡,降低侵袭、迁移速度。     

羟基喜树碱和奥沙利铂联合应用对大肠癌细胞凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱（Hydmxycampothcin，HCPT）、奥沙利铂（Oxaliplatin，L—OHP）两药联合对人大肠癌细胞株的作用机制方法：建立人大肠癌裸鼠实验动物模型，腹腔内注入HCPT、L—OHP及HCPT＋L—OHP后，观察细胞凋亡形态．流式细胞仪分析细胞凋亡比率及细胞周期的变化。结果：HCPT组和HCPT＋L—OHP组肿瘤结节较用药前及对照组明显缩小并均以细胞凋亡为主，HCPT＋L—OHP组细胞凋亡率明显高于HCPT组和对照组（P〈0．05），L—OHP组主要表现为细胞坏死HCPT组及HCPT＋L—OHP组阻滞细胞周期于S期，而HCPT＋L—OHP对S期的阻滞作用明显高于其他各组结论：HCPT＋L—OHP对大肠癌细胞株有较好的抑制作用，其作用机理有可能是通过L—OHP加强HCPT诱导大肠细胞凋亡发挥抗肿瘤作用．并主要作用于细胞周期的S期，使S期细胞减少。     

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的　观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法　采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果　显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。     

甘氨酸延伸型胃泌素对人胃癌细胞株SGC-7901的体外作用

目的体外研究甘氨酸延伸型胃泌素(Glycin-extended gastrin, G-Gly)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖以及对丝裂霉素（MMC）促凋亡作用的影响,探讨G-Gly在胃癌发生发展中的作用。方法应用MTT法检测不同浓度G-Gly对SGC-7901增殖的影响,应用流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果G-Gly能促进SGC-7901的增殖,其增殖率在一定范围内与剂量有关,在浓度0.1 nmol/L时具有最大增殖效果。其效应不能被缩胆囊肽B受体（Cholecystokinin B receptor,CCKBR）的抗体所抑制。G-Gly能抑制MMC诱导的凋亡（P<0.01）。结论G-Gly能促进SGC-7901的增殖和抑制MMC诱导的凋亡,提示G-Gly能促进胃癌肿瘤的生长。     

人参皂苷CK对胃癌细胞株SGC-7901及其内源性VEGF的影响

目的 研究人参皂苷CK对胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期的影响及其对内源性分泌的血管内皮细胞生长因子(VEGF)的作用。方法 以50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg/ml的人参皂苷CK作用于胃癌细胞株SGC-7901,通过MTT法检测人参皂苷CK对细胞的抑制作用;采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;ELISA定量检测细胞培养液中内源性VEGF的含量变化。结果 MTT法显示人参皂苷CK对胃癌细胞株SGC-7901有抑制作用,并且呈浓度、时间依赖关系;SGC 7901细胞经人参皂苷作用后出现明显凋亡峰,且细胞周期被阻滞在G0/G1期;人参皂苷CK处理组VEGF含量低于对照组(P<0.05),高浓度组低于低浓度组(P<0.05),且随着作用时间延长,VEGF含量降低。结论 人参皂苷CK可通过诱导凋亡抑制胃癌细胞株SGC-7901生长,并可抑制SGC 7901细胞内源性分泌VEGF,人参皂苷CK可能成为一种潜在的抗胃癌药物。     

Autophagy Inhibition Sensitizes Cisplatin Cytotoxicity in Human Gastric Cancer Cell Line Sgc7901

We aimed to investigate the mechanism and effects of autophagy on cisplatin (DDP)-induced apoptosis inhuman gastric cancer cell line SGC7901. After SGC7901 cells were treated with DDP and/or chloroquine, cellproliferation was measured using MTT assay; cell apoptosis was determined by flow cytometry; autophagy andapotosis-related proteins expression were detected by Western blot; and quantitative analysis of autophagy aftermonodansylcadaverine (MDC) staining was performed using fluorescence microscopy. We found after treatmentwith 5 mg/L DDP for 24 h, the rates of cell apoptosis were (21.07±2.12)%. Autophagy, characterized by an increasein the number of autophagic vesicles and the level of LC3-II protein was observed in cells treated with DDP.After inhibition of autophagy by chloroquine, the rates of cell apoptosis were increased to (30.16±3.54)%, andthe level of Caspase-3 and P53 protein were increased, and Bcl-2 protein was decreased. Therefore, autophagyprotects human gastric cancer cell line SGC7901 against DDP-induced apoptosis, inhibition of autophagy canpromote apoptosis, and combination therapy with DDP and chloroquine may be a promising therapeutic strategyfor gastric cancer.     

塞来昔布诱导SGC-7901人胃癌细胞凋亡及其影响端粒酶活性的实验研究

目的探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞生长、端粒酶活性，细胞凋亡及相关基因的影响，研究其抗肿瘤的作用机制。方法终浓度为100、200及300μmol／L的塞来昔布作用于SGC-7901人胃癌细胞后，采用MTT比色法测定细胞的生长抑制率，采用半定量-TRAP银染法检测端粒酶活性，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及bcl-2表达水平变化。结果不同浓度的塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞均有抑制作用，抑制率与对照组相比，差异均有显著性（P〈0．05）；流式细胞学检测到凋亡峰，细胞阻滞于G0／G1期。同时它也显著抑制胃癌细胞的端粒酶活性，其抑制作用呈时间-剂量依赖性，且端粒酶活性的降低与bcl-2表达水平下降有关。结论塞来昔布能抑制胃癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，降低端粒酶活性，其作用机制与bcl-2表达水平下降有关，此可能是COX-2抑制剂抗肿瘤的机制之一。     

原子力显微镜对华蟾素作用的SGC-7901细胞的凋亡研究

目的应用原子力显微镜（AFM）研究华蟾素对胃癌SGC-7901细胞的作用,在单细胞水平上分析胃癌SGC-7901细胞超微机构的变化,为进一步探讨华蟾素对胃癌SGC-7901细胞的作用机制奠定基础。方法利用原子力显微镜高分辨率、高灵敏度的特点,观察不同浓度（0、6.25、12.5、25、37.5、50ug/ml）华蟾素对胃癌细胞的作用,以及同等浓度药物作用下,随着作用时间（24h,48h,72h,96h）的延长,观察细胞超微结构的变化。同时,利用流式细胞仪对凋亡情况进行分析。结果药物作用后,细胞开始塌陷变矮。细胞表面结构的几何参数,包括高低差（Rp-v）、均方根粗糙度（Rq）、平均粗糙度（Ra）、平均高度（Meant Ht）均出现明显变化,且加药后的细胞凋亡率明显高于对照组（5.04±1.11）%。结论通过AFM观察细胞表面超微结构的变化,从纳米尺度上研究了华蟾素对胃癌细胞的作用,从另一层面增加了对胃癌细胞的认识,从而使AFM有望成为临床肿瘤诊断的一种新仪器。     

吡格列酮对胃癌细胞生长的影响及其机制

 目的研究过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)在人胃癌MGC803中的表达及其配体吡格列酮(PGZ)对胃癌细胞生长的影响。方法用不同浓度的吡格列酮处理人胃癌MGC803细胞,采用RT-PCR法检测MGC803中PPARγ的表达变化;MTT法观察细胞增殖抑制作用;Hoechst33342/PI双荧光活细胞染色法和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡。结果MGC803中存在PPARγ表达;PGZ能显著抑制MGC803生长(P<0.05),IC50值为9.01×10-6μmol/L,且作用呈剂量依赖性;高浓度PGZ能明显诱导凋亡产生;PGZ作用MGC803细胞后PPARγ表达呈剂量依赖性上调趋势(P<0.05)。结论吡格列酮依赖激活PPARγ能在体外抑制肿瘤细胞生长并诱导其凋亡,提示PPARγ可能是胃癌治疗的一个新的分子靶点。