贲门腺癌中转化生长因子βⅡ型受体基因启动子区高甲基化及其与TGF-β1表达的相关性分析

目的:探讨贲门腺癌中转化生长因子-βⅡ型受体(transforming growth factor-beta receptor type 2,TGFBR2)基因启动子区的甲基化状态及其与TGF-β1蛋白表达之间的相关性.方法:分别应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)、RT-PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织中TGFBR2基因启动子区甲基化情况、TGFBR2 mRNA和蛋白表达情况,并应用免疫组织化学法检测相应组织中TGF-β1的蛋白表达情况.结果: TGFBR2基因在贲门腺癌组织中甲基化率为47.3%(52/110),显著高于癌旁正常组织(P<0.01);Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中TGFBR2基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05);TGFBR2基因在高、中、低分化的贲门癌组织中甲基化率差异亦有统计学意义(P<0.05).贲门癌组织中TGFBR2 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05)且与其甲基化状态之间有明显的相关性(P<0.01).TGF-β1在贲门癌组织中的表达(65.5%)明显升高,与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.01),且随着肿瘤分期的增高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高(P<0.05).TGFBR2和TGF-β1蛋白在贲门腺癌中的表达呈明显的负相关(P<0.05).结论:TGFBR2受体基因启动子区的高甲基化及其TGF-β1的过表达可能均参与了贲门腺癌的发生发展过程.TGFBR2基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一.     

贲门腺癌中Smad4基因甲基化状态分析

目的：探讨贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma,GCA）中Smad4（mothers against decapentaplegic homolog4）基因启动子区及第1外显子区的甲基化状态及其与TGF-β1蛋白表达之间的相关性。方法：取110例贲门腺癌组织及相应癌旁组织,分别采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）方法检测Smad4基因的甲基化情况,RT-PCR方法检测Smad4 mRNA水平,免疫组织化学法检测Smad4和TGF-β1的蛋白表达情况。结果：贲门腺癌组织Smad4基因启动子甲基化率为5.5%（6/110）,Smad4基因第1外显子5′非翻译区的甲基化率为24.5%（27/110）,相应癌旁正常黏膜均未检测到此两个位点的甲基化,癌组Smad4基因甲基化率显著高于癌旁正常组织（P〈0.05）,且贲门腺癌中Smad4基因5′非翻译区发生甲基化的比率显并高于启动子区（P〈0.01）。贲门腺癌组织中Smad4 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P〈0.05）,其甲基化与蛋白表达之间呈负相关。TGF-β1在贲门癌组织中的表达（65.5%）明显高于相应癌旁组织（15.5%）（P〈0.01）,且随肿瘤分期的增高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高（P〈0.05）。Smad4蛋白和TGF-β1蛋白在贲门腺癌中的表达呈明显的负相关。结论：在贲门腺癌发生发展过程中Smad4基因第1外显子的5′非翻译区比启动子区更易发生高甲基化而导致基因沉默,Smad4甲基化及TGF-β1的过表达可能是贲门腺癌发生的机制之一。     

贲门腺癌中TSP1启动子区高甲基化与TGF-β1表达的相关性分析

目的:探讨贲门腺癌中凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin1,TSP1)基因的甲基化状态及其与转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达之间的相关性.方法:分别应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)、RT-PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织的TSP1基因甲基化、mRNA和蛋白表达情况,应用免疫组织化学法检测对应组织中TGF-β1蛋白表达情况.结果: 96例贲门腺癌组织中有34例发生了TSP1基因甲基化,甲基化发生率为35.4%,显著高于癌旁正常组织(P<0.001).Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中TSP1基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05).贲门腺癌组织中TSP1 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05),且与其甲基化状态之间有明显相关性.TGF-β1蛋白在贲门癌腺组织中的表达明显升高,96例贲门癌腺组织中有50例(52.1%)表达阳性,与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.001);且随肿瘤分期的升高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高(P<0.05).TSP1基因在贲门腺癌中的高甲基化与TGF-β1蛋白表达之间有明显的相关性(P<0.05).结论:TSP1基因启动子区高甲基化和TGF-β1蛋白过表达可能参与了贲门腺癌的发生、发展过程,TSP1基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一.     

贲门腺癌组织中TSP1高甲基化与TGF-β1及细胞免疫水平的关系

背景与目的：凝血酶敏感蛋白1（thrombospondin-1,TSP1）是一种内源性的血管生成抑制因子,其在肿瘤中的高甲基化可导致其基因沉默。本研究探讨贲门腺癌中TSP1基因的甲基化状态及其与TGF-β1含量及细胞免疫之间的关系。方法：应用甲基化特异性PCR方法和免疫组织化学法分别检测贲门癌组织及相应癌旁组织的TSP1甲基化状况和TSP1蛋白表达情况,ELISA方法检测贲门癌患者血清中TGF-β1的含量,流式细胞术对贲门癌细胞免疫水平进行分析。结果：贲门癌组织TSP1甲基化率为35.4%（34/96）,显著高于癌旁组织（3.1%,P〈0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中TSP1基因甲基化率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P＆lt;0.05）。贲门癌组织中TSP1的蛋白表达显著低于癌旁组织（P〈0.05）,且与其甲基化状态之间有明显的相关性。贲门腺癌患者血清中总TGF-β1的含量高于正常对照组（P〈0.05）,Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者血清中总TGF-β1的含量显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P〈0.05）,贲门腺癌患者细胞免疫功能低于正常对照,TSP1发生甲基化的贲门癌患者其细胞免疫功能低于未发生甲基化的贲门癌患者（P〈0．05）。结论：TSP1基因启动子区的高甲基化可能参与了贲门腺癌的发生发展过程,其高甲基化有可能影响患者的细胞免疫功能。     

食管鳞状细胞癌中Smad4基因CpG岛甲基化状态分析

目的：探讨食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中Smad4（mothers against decapentaplegic homolog 4）基因启动子区及第一外显子区的CpG岛甲基化状态及其与Smad4蛋白、TGF-β1蛋白表达之间的相关性。方法：128例ESCC组织标本采集自河北医科大学第四医院2004-2008年的手术病例,每例患者均取癌旁正常黏膜组织作对照。分别应用甲基化特异性PCR（methylmion specific PCR,MSP）、RT-PCR和免疫组织化学法检测ESCC组织及相应癌旁组织中Smad4基因CpG岛的甲基化情况、Smad4 mRNA和Smad4蛋白表达情况,应用免疫组织化学法检测TGF-β1的蛋白表达情况。结果：ESCC组织中Smad4基因启动子区CpG岛甲基化率为5.5%（7/128）,第一外显子5′非翻译区CpG岛甲基化率为305%（39/128）;相应癌旁正常黏膜组织均未检测到这两个位点的甲基化（P<0.05）;ESCC组织中Smad4甲基化率显著高于癌旁正常组织（P<005）。ESCC组织中Smad4 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P<0.05）,且与Smad4甲基化相关。TGF-β1蛋白在ESCC组织中的表达率（66.4%）显著高于相应癌旁正常组织（21.9%,P<0.01）,且随ESCC分期的增高和分化程度的降低而升高（P<0.05）。Smad4和TGF-β1蛋白在ESCC中的表达呈明显的负相关（P<0.01)。结论: Smad4基因CpG岛甲基化及TGF-β1的过表达可能是ESCC发生机制之一,其中Smad4基因第一外显子5′非翻译区CpG岛比启动子区CpG岛更易发生甲基化,从而导致Smad4基因沉默。     

Atrogin-1基因在贲门腺癌组织中的表达及其异常甲基化

目的：探讨atrogin-1基因在贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma,GCA）中的异常甲基化及表达,并分析其临床意义。方法: 选用河北医科大学第四医院2004—2008年间的贲门腺癌患者手术标本共139例,分别应用亚硫酸氢盐转换-甲基化特异性PCR（bisulfite conversion-methylation specific polymerase chain reaction,BS-MSP）、RT-PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁（距癌灶边缘3～5 cm）组织中atrogin-1基因的甲基化、mRNA和蛋白表达情况,应用免疫组织化学法检测相应组织中Smad4蛋白的表达。结果: 贲门腺癌组织中atrogin-1基因启动子区的甲基化率\[44.6%（62/139）\] 显著高于癌旁组织\[3.6%(5/139)\]（χ2=63.891,P=0.001）,且atrogin-1基因的甲基化与TNM分期及肿瘤的组织学分化程度密切相关（χ2=6.144, P<0.05）。贲门腺癌组织中atrogin-1基因的mRNA和蛋白表达水平显著低于癌旁组织\[(0.482 5±0.175 4) vs (0.896 9±0.290 1),t=10.62, P=0.01;34.5% vs 82.0%, χ2=4.441,P=0.001\],且与其启动子区的甲基化状态之间有明显的相关性(r=-0.256,P=0.001)。贲门腺癌组织中Smad4蛋白表达的阳性率显著低于癌旁组织（46.0% vs 95.7%; χ2=2.945,P=0.001）,且与atrogin-1蛋白表达之间呈明显的正相关(r=0.604,P=0.001）。结论: Atrogin-1基因启动子区高甲基化导致的基因沉默可能是贲门癌组织中此基因表达降低的机制之一。     

贲门腺癌中RASSF1A基因的甲基化状态及表达

 目的 研究贲门腺癌（gastric cardiac adenocarcinoma,GCA）中RASSF1A基因的甲基化状态及其蛋白表达情况。 方法 分别应用甲基化特异性PCR（MSP）、RT-PCR及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A甲基化情况和mRNA水平及蛋白表达情况。 结果 92例贲门癌组织中有54例发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织（P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05）。92例贲门癌组织中有43例RASSF1A基因蛋白表达阴性,与相应癌旁正常组织相比有显著性差异（P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌RASSF1A基因蛋白表达显著低于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05）。发生甲基化的贲门癌组织中RASSF1A的mRNA水平的表达显著低于未发生甲基化的贲门癌组织（P<0.01）。 结论 RASSF1A基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一。     

NDRG2基因在贲门腺癌中的甲基化状态及表达

目的： 探讨贲门腺癌(GCA)中NDRG2(N-myc downstream-regulated gene 2)基因启动子区的甲基化状态,并分析其甲基化与表达之间的相关性。方法：应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测97例贲门腺癌组织及相应癌旁组织中NDRG2基因的甲基化状态,应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测97例贲门腺癌组织及相应癌旁组织中NDRG2的mRNA和蛋白表达情况。结果：NDRG2基因启动子区在贲门腺癌组织中的甲基化率(49.5%)显著高于癌旁正常组织(5.1%)(P<0.05),且Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中NDRG2基因甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者,低分化组中NDRG2基因发生甲基化的比率显著高于高中分化组。贲门腺癌组织中NDRG2 mRNA表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。贲门腺癌组织中NDRG2蛋白表达阳性率为44.3%(43/97),显著低于相应癌旁正常组织的蛋白表达94.8%(92/97)(P<0.01),且贲门腺癌组织中NDRG2蛋白表达缺失与其启动子区的甲基化有明显的相关性(r=-0.510,P<0.01)。结论：NDRG2基因启动子区的高甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌中此基因表达降低的机制之一。     

WWOX基因在贲门腺癌中的异常甲基化及其表达

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中WWOX( WW domain-containing oxidoreductase)基因启动子区及第1外显子区的甲基化状态及其对表达的影响,并分析贲门腺癌中WWOX与Smad4(mothers against decapentaplegic homolog 4)蛋白表达之间的关系.方法:分别应用甲基化特异性PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及其相应癌旁组织中WWOX基因的甲基化和蛋白的表达情况:应用免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及其相应癌旁组织中Smad4蛋白的表达.结果:贲门腺癌组织中WWOX基因启动子区(- 382～- 41 bp)及第1外显子区(- 27～+344 bp)的甲基化率[26.4％ (33/125)和23.2％ (29/125)]显著高于其相应的癌旁常组织(0％和0％)(P＜0.01),并与贲门腺癌TNM分期和上消化系统肿瘤家族史有关(P＜0.05).贲门腺癌组织中WWOX蛋白的表达阳性率显著低于相应癌旁组织(P＜0.01),WWOX蛋白的表达与WWOX启动子区和第1外显子区甲基化状态之间呈负相关(r=-0.216,r=-0.255,P＜0.05).贲门腺癌组织中Smad4蛋白表达的阳性率(47.2％)显著低于相应癌旁组织(94.4％)(P＜0.01),且与WWOX在贲门腺癌中的表达呈明显的正相关(r=0.622,P＜0.01).结论:WWOX基因启动子区及第1外显子区的高甲基化导致的基因表达下调可能在贲门腺癌中发挥重要作用.     

贲门腺癌中RASSF1A基因甲基化与cyclin D1表达的关系

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中RASSF1A基因的甲基化状态及其与cyclin D1蛋白表达之间的相关性.方法:分别应用甲基化特异性PCR(mothylation-specific PCR,MSP)方法和免疫组织化学SP法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A基因甲基化情况和cyclin D1蛋白表达情况.结果:92例贲门腺癌组织中有54例RASSF1A发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织(P<0.001).Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05).92例贲门腺癌组织中有72例(78.3%)cyclin D1蛋白表达阳性,与相应癌旁正常组织比较,cyclin D1在贲门癌组织中的表达显著升高(P<0.001);且随肿瘤分化程度的降低,cyclin D1的阳性表达率明显升高(P<0.05).RASSF1A基因在贲门腺癌中的高甲基化与cyclin D1蛋白表达之间有明显的相关性(P<0.05).结论:RASSF1A基因启动子区的高甲基化以及cyclin D1蛋白的过表达可能参与了贲门腺癌的发生发展过程.     

贲门腺癌中 DACT-1 基因的甲基化状态及其临床意义

目的:检测贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)及相应癌旁非肿瘤组织中β-环连蛋白抑制基因1(dishevelled-binding antagonist of beta-catenin 1,DACT-1)的甲基化状态,并探讨其临床意义.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)、定量RT-PCR的方法分别检测112例贲门腺癌(河北医科大学第四医院外科和磁县肿瘤医院胸外科于2006-2014年收治)及相应癌旁非肿瘤组织中DACT-1基因的甲基化状态及其mRNA表达情况.结果:在贲门腺癌组织中,DACT-1基因的甲基化率为51.8％(58/112),癌旁非肿瘤组织中该基因的甲基化率为17.6％ (20/112),癌组织中DACT-1基因发生甲基化的频率明显高于癌旁非肿瘤组织(P＜0.01);癌组织中DACT-1基因mRNA的表达量为0.580±0.143,明显低于癌旁非肿瘤组织(0.654 ±0.110,P＜0.01);在DACT-1基因甲基化的贲门癌组织中该基因mRNA的表达量为0.488±0.097,明显低于该基因未甲基化的贲门癌组织(0.675 ±0.120),且该基因甲基化状态与其mRNA表达量相关(P＜0.01).癌组织中DACT-1基因的高甲基化状态与肿瘤患者的淋巴结转移情况及上消化道肿瘤家族史有关(P＜0.05),而与肿瘤患者的年龄、性别及肿瘤组织的病理分级、临床分期均无关(P＞0.05).结论:贲门腺癌中基因CpG岛的高甲基化可能是DACT-1基因表达下调的机制之一;DA CT-1基因启动子区的甲基化状态有望为贲门腺癌临床辅助诊断和预后评估提供新的指标.     

贲门腺癌中E-钙黏蛋白基因甲基化状态研究

目的：研究贲门腺癌（gastric cardiac adenocarcinoma，GCA）中E-钙黏蛋白（E—cadherin）的基因甲基化状态及其蛋白表达情况。方法：分别应用巢式甲基化特异性PCR（methylation specific PCR，MSP）方法及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的甲基化和蛋白表达情况。结果：92例贲门癌组织中有63例E—cadherin发生了甲基化，甲基化率为68．5％，显著高于癌旁正常组织（P〈0．001）；Ⅲ期和Ⅳ期的发生率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P=0．01）；低分化腺癌组发生甲基化的比率显著高于中、高分化腺癌组（P〈0．01）。92例贲门癌组织中有51例蛋白表达呈明显的异质性．贲门癌组织的E-cadherin蛋白表达率为44．6％，与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义（P〈0．001）。Ⅲ期和Ⅳ期患者的蛋白表达明显低于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P〈0．01）；低分化腺癌组的蛋白表达率也低于中、高分化腺癌组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：E—cadherin基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一，可作为反映贲门腺癌生物学行为的指标。     

贲门腺癌中Wif-1基因甲基化状态与VEGF-C/VEGF-D表达的关系

目的 研究贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma, GCA）中Wnt抑制因子-1（Wnt inhibitory factor-1, Wif-1）基因启动子区甲基化状态及VEGF-C、VEGF-D蛋白表达情况,探讨其相互关系及其在贲门腺癌发生发展中的作用。方法 应用巢式甲基化特异性PCR（MSP）方法检测贲门腺癌组织及相应正常黏膜组织中Wif-1基因甲基化状态;应用免疫组织化学SP法检测VEGF-C/VEGF-D蛋白表达情况。结果 Wif-1基因在贲门腺癌及相应正常黏膜组织中的甲基化率分别为61.7%和34.0%,癌组织中Wif-1基因的甲基化率明显高于正常黏膜组织（P=0.000）;癌组织中VEGF-C、VEGF-D蛋白的阳性表达率分别为63.8%和76.6%,显著高于正常黏膜组织（P=0.000）;发生甲基化的贲门腺癌组织中VEGF-C、VEGF-D蛋白的阳性表达率明显高于未发生甲基化的贲门腺癌组织（P_VEGF-C=0.008;P_VEGF-D=0.022）;癌组织中Wif-1基因的甲基化与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移相关（P<0.05）,而与肿瘤的病理分级无关。结论 Wif-1基因启动子区的高甲基化及VEGF-C、VEGF-D蛋白的过表达可能与贲门腺癌的发生有关。     

凋亡蛋白酶活化因子-1基因在贲门腺癌中的甲基化状态及其临床意义

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptosis protease activating factor-1,Apaf-1)基因启动子区甲基化状态及其与果蝇zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白表达之间的相关性.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1基因甲基化状态,应用免疫组织化学法检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1和EZH2蛋白的表达情况.结果:GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于癌旁组织[49.6％ (62/125)vs4.0％(5/125),P＜0.01],Ⅲ期和Ⅳ期GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期(58.8％vs 38.6％,P＜0.05),但GCA组织中Apaf-1基因甲基化率与GCA的组织学分化程度无关(P＞0.05).GCA组织中Apaf-1蛋白表达阳性率显著低于相应癌旁组织(39.2％ vs 96.0％,P＜0.O1),且与Apaf-1基因甲基化状态相关.GCA组织中EZH2蛋白表达阳性率显著高于相应癌旁组织(74.4％vs 11.2％,P＜0.01),且与Apaf-1蛋白的表达呈负相关.结论:GCA组织中Apaf-1基因启动子区呈高甲基化,Apaf-1和EZH2蛋白可能共同参与了GCA的发展.     

食管鳞癌及贲门腺癌中分泌型卷曲相关蛋白4基因启动子区甲基化状态的联合检测

目的:检测食管鳞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)和贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中分泌型卷曲相关蛋白4(secreted frizzled related protein 4, SFRP4)的基因甲基化状态,探讨其与食管鳞癌和贲门腺癌发生的关系.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)及RT-PCR的方法检测49例食管鳞癌及58例贲门腺癌中SFRP4基因的甲基化状态及其mRNA表达情况,应用免疫组织化学法检测Wnt通路中心因子β-catenin蛋白的表达情况,并分析其与临床病理参数间的关系.结果: 在食管鳞癌及贲门腺癌中,SFRP4基因的甲基化率分别为42.6%(21/49)和72.4%(42/58),均明显高于癌旁非肿瘤组织(P<0.01).在贲门腺癌中SFRP4基因的高甲基化与肿瘤患者的临床分期相关,与病理分级无关;而在食管鳞癌中,该基因的甲基化与各临床病理指标均无关(P>0.05).SFRP4基因在食管鳞癌及贲门腺癌中mRNA阳性表达率分别为69.3%(34/49)和44.8%(26/58),均明显低于癌旁非肿瘤组织(P<0.05),且肿瘤组织中mRNA表达与该基因的甲基化状态明显相关(P<0.01).通路中心因子β-catenin蛋白在食管鳞癌及贲门腺癌中的异质表达率分别为65.3%(32/49)和86.2%(50/58),均明显高于癌旁非肿瘤组织(P<0.01),且其异质表达与SFRP4基因的甲基化状态相关(P<0.05).结论:SFRP4基因的高甲基化状态可能是引起贲门癌及食管癌发生的共同分子机制之一,并有可能通过Wnt/β-catenin信号转导通路发挥作用. 检测SFRP4基因甲基化状态对于贲门腺癌的预后评估有一定参考价值.     

人贲门腺癌组织中 IGFBP7 基因的甲基化状态

目的:探讨人贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)组织中胰岛素样生长因子结合蛋白-7(insulin-likegrowth factor binding protein 7,IGFBP7)基因启动子区及第1外显子区甲基化状态及其与IGFBP7蛋白表达之间的关系。方法:选取河北医科大学第四医院2009年4月至2011年12月间收治的85例GCA患者癌组织标本和67例癌旁组织标本。采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法、RT-PCR及免疫组织化学法检测IGFBP7基因在GCA组织及癌旁组织中的甲基化情况、IGFBP7 mRNA及蛋白的表达。结果:GCA组织中IGFBP7基因启动子区甲基化率为52.9%(45/85),第1外显子5’非翻译区的甲基化率为35.3%(30/85),相应癌旁组织IGFBP7基因启动子区及第1外显子5’非翻译区的甲基化率分别为35.8%(24/67)和19.4%(13/67);癌组织IGFBP7基因启动子区及第1外显子5’非翻译区的甲基化率明显高于癌旁组织(P<0.05),且GCA组织中IGFBP7基因启动子区甲基化率显著高于第1外显子区(P<0.05)。GCA组织中IGFBP7 mRNA和蛋白表达显著低于癌旁组织(P<0.05),且与其启动子区甲基化状态呈负相关。结论:GCA组织中IGFBP7基因启动子区比第1外显子区更易发生甲基化而导致IGFBP7表达缺失,IGFBP7基因启动子区异常高甲基化可能是GCA发生的机制之一。     

结直肠癌中 RASSF1A 启动子甲基化与Cyclin D1和P53表达的关系

目的： 检测结直肠癌组织中Ras相关区域家族1A（ras-association domain family 1A, RASSF1A )基因启动子甲基化以及Cyclin D1和P53蛋白的表达,分析它们与结直肠癌临床病理特征的关系。 方法： 收集2008年8月至2009年8月长海医院病理科37例结直肠癌组织和14例癌旁组织(癌灶边缘5 cm以外组织）标本。甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）检测结直肠癌组织中 RASSF1A 基因启动子的甲基化,免疫组织化学法检测结直肠癌组织中 Cyclin D1和P53蛋白的表达,分析 RASSF1A 启动子甲基化、Cyclin D1和P53表达的关联性以及三者与结直肠癌临床病理特征的相关性。 结果： 37例结直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化有23例（62.16%）,14例癌旁组织中 RASSF1A 启动子甲基化有12例（85.71%）;37例癌组织中Cyclin D1阳性14例（37.84%）、P53阳性15例（40.54%）,14例癌旁组织中Cyclin D1和p53表达均为阴性。直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化阳性率高于结肠癌（P<0.05）。结直肠癌患者年龄与Cyclin D1表达呈负相关（P<005）,淋巴结转移与P53表达呈正相关（P<0.05）。结直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化与Cyclin D1和P53的表达无相关性。 结论： RASSF1A 启动子甲基化、Cyclin D1和P53蛋白表达三者的联合检测对研究结直肠癌的发生、发展有一定意义。     

β-环连蛋白抑制基因2甲基化状态对贲门腺癌发生发展的影响及机制

[目的]检测贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)及相应癌旁组织中β-环连蛋白抑制基因2 (dishevelled-binding antagonist of beta-catenin 2,DACT2)的表达情况及其临床意义,探讨引起基因表达异常的可能机制及对Wnt通路活化的影响.[方法]应用甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MSP)、RT-PCR分别检测河北省上消化道肿瘤高发区104例贲门腺癌及相应癌旁非肿瘤组织中DACT2基因的甲基化状态及mRNA的表达情况.应用免疫组织化学(IHC)检测β-catenin蛋白的表达.[结果]在104例贲门腺癌组织标本中,DA CT2基因的甲基化发生率为60.6％(63/104),明显高于癌旁非肿瘤组织(P＜0.01);且在发生该基因的甲基化的贲门腺癌标本中其mRNA表达及Wnt通路中心因子β-catenin的异常表达率均明显高于未发生该基因甲基化的贲门癌组织(P＜0.01);且该基因的甲基化状态与肿瘤患者的病理分级、临床分期、淋巴结转移和上消化道肿瘤家族史相关(P＜0.05),而与肿瘤患者的年龄、性别无关(P＞0.05).[结论]基因启动子区的高甲基化状态是DACT2基因表达下调的机制之一,其低表达可引起Wnt/β-catenin信号传导通路的异常活化并在贲门腺癌的发生发展中发挥一定的作用.     

食管胃交界部腺癌中MGMT基因启动子区甲基化状态对预后的影响北大核心CSCD

目的检测食管胃交界部腺癌组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O^6-methylguanineDNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区甲基化状态以及蛋白表达情况,评价其与临床参数及预后的关系。方法选取107例食管胃交界部腺癌患者,应用甲基化特异性聚合酶链反应(methylmion specific PCR,MSP)检测MGMT基因甲基化情况,免疫组织化学法检测MGMT蛋白表达情况,分析两者与临床特征及生存时间的关系。结果癌组织中MGMT基因启动子区甲基化率显著高于癌旁正常组织;癌组织中MGMT蛋白阳性率显著低于癌旁正常组织。Spearman等级相关分析表明MGMT基因启动子区甲基化与MGMT蛋白表达呈负相关。MGMT基因启动子甲基化及蛋白表达与淋巴结转移、pTNM分期之间具有相关性。多因素Cox回归分析,MGMT基因启动子区甲基化、MGMT蛋白表达及pTNM分期是影响患者生存的独立预后因素。结论 MGMT基因启动子甲基化、MGMT蛋白表达与pTNM分期是影响食管胃交界部腺癌患者预后的独立影响因素。     

结肠癌组织中Foxp3和TGF-β1的相互关系

目的：对结肠癌组织中Foxp3、TGF-β1蛋白进行检测,结合临床病理资料,分析其表达与患者临床病理资料及预后的关系。方法：收集56例结肠癌、癌旁组织标本和15例健康对照组的标本。应用免疫组化法检测56例结肠癌原发灶及癌旁组织和15例健康对照组织中Foxp3、TGF-β1蛋白的表达。结果：结肠癌患者组织Foxp3、TGF-β1阳性表达率均显著高于健康对照组和癌旁对照组（ P〈0.01）。癌旁对照组Foxp3、TGF-β1阳性表达率高于健康对照组,有统计学意义（ P〈0.05）。阳性表达率与淋巴结转移、临床Duke分期有关（P〈0.05）,与组织学分级、肿瘤大小无关（P〉0.05）。Spearman等级相关分析表明,结肠癌组织Foxp3与TGF-β1蛋白表达呈正相关。结论：Foxp3、TGF-β1在结肠癌组织中表达增高,提示在结肠癌患者中,全身免疫状态与肿瘤的生长和侵袭密切相关,Foxp3、TGF-β1可作为判断患者预后的指标,并为结肠癌的靶向治疗提供新的途径。