T细胞DNA低甲基化在SLE的研究进展

系统性红斑狼疮是一种自身免疫性疾病,越来越多的研究认为DNA甲基化异常在其发病中起重要作用。为此,总结了系统性红斑狼疮的甲基化特征、T细胞发生DNA低甲基化的机制、DNA低甲基化引起SLE的相关基因变化、基因活性的变化引发系统性红斑狼疮的主要途径,其中重点综述了淋巴细胞功能相关抗原1、穿孔素、CD70分子过度表达而引发系统性红斑狼疮的3种途径的新进展。     

系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞CD70基因表达及其启动子区域甲基化状态的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者T淋巴细胞CD70mRNA和蛋白的表达及CD70基因启动子DNA甲基化的状态。方法 分离15例活动期SLE患者、15例非活动期SLE患者和15例健康对照外周血CD4+与CD8+细胞,用实时定量逆转录PCR（RT-PCR）方法检测CD4+和CD8+细胞CD70 mRNA转录水平,流式细胞仪检测CD4+CD70+ 细胞和CD8+CD70+细胞百分率,亚硫酸氢钠基因测序法检测CD4+细胞和CD8+细胞CD70基因启动子区域甲基化水平。组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。 结果 ①活动期、非活动期SLE患者CD4+细胞CD70 mRNA转录水平分别为0.82 ± 0.12和0.73 ± 0.11,明显高于健康对照组（0.45 ± 0.09）,F = 53.017,P < 0.01,活动期SLE患者CD4+细胞的CD70 mRNA转录水平显著高于非活动期SLE患者（P < 0.05）。活动期、非活动期SLE患者外周血CD4+CD70+细胞百分率分别为80.30% ± 11.04% 和66.80% ± 3.98%,明显高于健康对照组（12.48% ± 3.45%）,F = 311.517,P < 0．01,活动期SLE患者CD4+CD70+细胞百分率显著高于非活动期SLE患者（P值 < 0.05）。SLE患者外周血CD70+CD4+细胞百分率与SLE疾病活动度呈显著正相关（r = 0.792,P = 0.000）。活动期、非活动期SLE患者组的CD4+细胞CD70基因启动子序列-600 ~ -300 bp 区域平均甲基化水平分别为0.32 ± 0.05和0.36 ± 0.05,明显低于健康对照组（0.62 ± 0.05）,F = 152.64,P < 0.01,活动期平均甲基化水平明显低于非活动期SLE患者组（P < 0.05）。结论 CD4+细胞CD70基因启动子区域处于低甲基化状态,这种低甲基化状态可能是CD70过度表达的直接原因。     

SLE患者T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化状态的探索

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域DNA甲基化状态及其在发病机制中的作用.方法 分离9例活动期SLE患者和7例正常人对照外周血CD4⁺与CD8⁺T细胞,并分别提取DNA.采用亚硫酸氢钠-测序法对CD4⁺与CD8⁺T细胞穿孔素基因启动子区域DNA甲基化水平进行检测.结果 在穿孔素基因启动子区域,正常对照组CD4⁺T细胞平均甲基化水平显著高于CD8⁺T细胞(P<0.05).活动期SLE患者CD4⁺T细胞平均甲基化水平显著低于正常对照组(P<0.05),而CD8⁺T细胞与正常对照组的差异则无统计学意义(P>0.05).结论 活动期SLE患者的CD4⁺T淋巴细胞的穿孔素基因启动子区域处于低甲基化状态.     

SLE患者T淋巴细胞TNFSF7基因启动子区域的甲基化状态

目的探讨系统性红斑狼疮患者(SLE)T淋巴细胞TNFSF7基因启动子区域DNA甲基化状态及其在发病机制中的作用。方法分离15例活动期SLE患者、15例非活动期SLE患者和15例正常人对照外周血CD4+与CD8+T细胞,并分别提取DNA。采用亚硫酸氢钠测序法对CD4+与CD8+T细胞TN-FSF7基因启动子区域DNA甲基化水平进行检测。结果在TNFSF7基因启动子区域,活动期、非活动期SLE患者组的CD4+T淋巴细胞的TNFSF7基因启动子序列-600～-300bp区域平均甲基化水平(0.32±0.05,0.36±0.05)明显低于正常人对照组(0.62±0.05,P=0.000),且活动期平均甲基化水平明显低于非活动期SLE患者组(P=0.000)。活动期、非活动期SLE患者组的CD8+T淋巴细胞的TN-FSF7基因启动子序列平均甲基化水平与正常人比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论活动期、非活动期SLE患者的CD4+T淋巴细胞的TNFSF7基因启动子区域处于低甲基化状态,且启动子甲基化水平与SLE的活跃性相关。     

T细胞DNA低甲基化在SLE的研究进展

系统性红斑狼疮是一种自身免疫性疾病，越来越多的研究认为DNA甲基化异常在其发病中起重要作用。为此，总结了系统性红斑狼疮的甲基化特征、T细胞发生DNA低甲基化的机制、DNA低甲基化引起SLE的相关基因变化、基因活性的变化引发系统性红斑狼疮的主要途径，其中重点综述了淋巴细胞功能相关抗原1、穿孔素、CD70分子过度表达而引发系统性红斑狼疮的3种途径的新进展。     

SLE患者外周血CD4~+ T淋巴细胞DNA中p16基因启动子区甲基化研究

目的 检测SIJE患者外周血CD4~+T淋巴细胞DNA中p16基因的甲基化状态及其在SLE发病机制中的作用.方法 以Taqman探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法检测28例SLE患者和20例正常人CD4~+T淋巴细胞中p16基因启动子区甲基化状态.结果 SLE患者CD4~+T淋巴细胞的p16基因启动子区甲基化率(35.7%,10/28)高于对照组(10.0%,2/20).两者比较筹异有统计学意义(x~2=4.11,P<0.05).SLE患者疾病严重程度评分与对应的标准甲基化指数无统计学相父性(r_s=-0.29,P>0.05).结论 SLE患者CD4~+T淋巴细胞p16基凶甲基化异常,提示p16基因的高甲基化在SLE的发病中起一定作用.     

CD70在SLE患者外周血T淋巴细胞中表达的研究

目的 通过研究共刺激分子CD70在SLE患者外周血T淋巴细胞的表达水平,以及DNA甲基化抑制剂氮杂胞苷对正常人外周血T淋巴细胞表达CD70分子的影响,探讨DNA甲基化在SLE患者外周血T淋巴细胞表达CD70分子中的调控作用。方法 用流式细胞仪检测了10例活动期、10例非活动期SLE患者和10例正常人对照外周血T淋巴细胞以及甲基化抑制组（氮杂胞苷处理正常人T淋巴细胞）的CD70+CD4+ T淋巴细胞阳性率;用RT-PCR方法测定了各组外周血T淋巴细胞的CD70 mRNA转录水平。结果 正常人外周血CD4+CD70+ T淋巴细胞阳性率为14.55% ± 5.49%,活动期、非活动期SLE分别为85.25% ± 14.08%和77.65% ± 18.77%,甲基化抑制组为81.54% ± 8.71%,与正常人对照组相比,活动期、非活动期SLE患者和甲基化抑制组CD70+CD4+ T淋巴细胞阳性率均明显升高（P < 0.01）,其外周血T淋巴细胞CD70 mRNA表达水平亦明显增加（P < 0.05）;SLE患者外周血CD70+CD4+ T淋巴细胞阳性率与SLE疾病活动度呈显著正相关（r = 0.72,P < 0.05）。结论 CD70的过度表达在SLE的免疫紊乱中起着重要的作用,并且CD70过度表达可以作为SLE疾病活动的一个指标。     

T细胞DNA低甲基化在系统性红斑狼疮发病中的作用

当各种原因使患者出现T细胞DNA低甲基化时 ,可能导致白细胞功能相关抗原 1、白介素 6、Ha ras等因子的过度表达 ,从而激活T细胞使之成为自身反应性细胞。通过这种自身反应性细胞与B细胞的相互作用 ,引起多克隆B细胞的活化 ,最终导致病理性自身抗体的产生及系统性红斑狼疮的发生。     

SLE患者外周血单个核细胞IL—13mRNA的表达

探讨IL-13在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及其意义,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PGR)检测了34例活动期SLE患者和30名正常人外周血单个核细胞(PBMC)中IL-13mRNA的表达水平.结果表明,活动期SLE患者IL-13的阳性表达率与正常人对照组相比无明显差异(P＞0.05);活动期SLE患者PBMC中IL-13mRNA的平均表达水平(0.8983±0.1153)明显高于正常人对照组(0.6085±0.0903),差异非常显著(P＜0.001).提示高水平的IL-13表达可能与SLE患者外周血T细胞高度活化、功能异常有关,其通过刺激B细胞活化、分化与增殖或激活B细胞旁路,参与SLE的发病过程.     

CD70 mRNA及其蛋白在SLE患者T淋巴细胞中的表达

目的通过研究SLE患者T淋巴细胞CD70mRNA及其蛋白的表达,探讨CD70在SLE发病机理中的作用。方法用定量RT-PCR方法测定15例活动期、15例非活动期SLE患者和15例正常人对照组外周血T淋巴细胞CD70mRNA转录水平。用流式细胞仪检测各组的CD70+CD4+T淋巴细胞阳性率。结果活动期、非活动期SLE患者及正常对照组T淋巴细胞CD70mRNA转录水平分别为(0.82±0.12),(0.73±0.11)和(0.45±0.09),活动期、非活动期SLE患者明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01),且活动期显著高于非活动期SLE患者,差异有统计学意义(P<0.01)。活动期、非活动期SLE患者及正常人外周血CD4+CD70+T淋巴细胞阳性率分别为(80.30±11.04)%,(66.80±3.98)%和(12.48±3.45)%,活动期、非活动期SLE患者明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01),且活动期显著高于非活动期SLE患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CD70的过度表达在SLE的发生发展中起着重要的作用,并且CD70过度表达可以作为SLE疾病活动的一个指标。     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4与SLE

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4可表达于免疫细胞为主的多种细胞.细胞毒性T淋细胞相关抗原-4Ig和抗单抗是细胞毒性T淋细胞相关抗原-4用于防治自身免疫性疾病、移植排斥及肿瘤的两种分子,其效能在动物实验及临床应用中已得到证实.SLE是一种常见的累及多器官自身免疫性疾病,其免疫学特征是T细胞反应受损和B细胞活性调节障碍,从而导致B细胞高活性和产生大量自身抗体.     

系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞Fas抗原的表达和凋亡的研究

我们利用流式细胞仪定量检测了不同病期ＳＬＥ患者外周血Ｔ淋巴细胞Ｆａｓ抗原的表达情况,并用琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ断裂,旨在探讨ＳＬＥ免疫发病机理。一、病例和方法（一）研究对象:ＳＬＥ患者为我院第一附属医院皮肤科门诊和住院患者,均符合美国风湿病协会（ＡＲＡ）１９８２年修订的诊断标准。活动期和非活动期ＳＬＥ的判断参照郑敏等［１］的标准。其中活动期１０例,均为女性,年龄２０～４６岁;非活动期１０例,均为女性,年龄２２～５１岁;正常人１０例,均为女性,年龄２３～４８岁,为苏州市中心血库健康献血员。各组年龄、性别可匹…     

系统性红斑狼疮患者T细胞亚群与T淋巴细胞CD2免疫分子功能研究

系统性红斑狼疮(SLE)与T细胞受体介导的信号传导异常有关。红细胞具有天然免疫特性，又具有适应性免疫的特性，有识别、黏附、杀伤抗原，清除循环免疫复合物的能力．参与机体免疫调控。红细胞CD58、CD59与T细胞的CD2分子密切相关，二者互为天然配体，其相互作用是红细胞调控细胞因子产生的主要分子基础。我们通过对SLE患者红细胞的天然免疫研究，探讨T淋巴细胞CD2及T细胞亚群CD4^ 、CD8^ 以及CD4^ ／CD8^ 的比值在SLE患者中的意义，进一步探讨SLE的发病机制。     

SLE血清中IFN-α的变化与外周血淋巴细胞凋亡的关系

目的探讨SLE血中淋巴细胞凋亡与IFN-α的关系.方法采用双抗夹心ELISA法及吖啶橙染色法测定36例SLE患者和10例健康人血清中IFN-α和淋巴细胞凋亡率.结果SLE患者血清中IFN-α及淋巴细胞凋亡率明显高于正常健康人,差异显著(P＜0.01),IFN-α增高与淋巴细胞凋亡率呈明显正相关(r=0.5108,P＜0.05).结论凋亡细胞可能促进IFN-α的诱生,两者在SLE的发病中起重要作用.     

SLE患者红细胞CR1与IL-8R的表达

目的:研究红细胞CR1和IL-8R在系统性红斑狼疮患者(SLE)中的表达及两者之间的相关性。方法:分别用V型板红细胞离心洗涤免疫酶联法和酶联免疫吸附试验检测活动期SLE患者44例、稳定期SLE42例红细胞CR1及IL-8R的表达,并与健康人作对照,CR1与IL-8R之间的相关性采用Sperman相关分析。结果:活动期SLE患者红细胞CR1和IL-8R较健康人对照组和稳定期SLE患者的表达水平显著下降(P<0.001);稳定期SLE组与健康人对照组比较,CR1和IL-8R分子的表达差异无显著性(P>0.05);活动期SLE的CR1表达与IL-8R的结合活性呈正相关,即活动期SLE的红细胞CR1数量表达和IL-8R的结合活性都显著降低。结论:活动期SLE患者的红细胞CR1免疫识别、黏附、清除CIC能力下降,可能是SLE免疫发病机制中的一个重要环节;CR1及IL-8R在SLE发病机制中可能起重要作用;CR1和IL-8R有可能作为SLE患者病情是否活动、药物疗效判断的一个有价值的辅助指标。     

SLE患者基因组DNA甲基化水平的检测

Objective To assess the DNA methylation status in peripheral blood mononulclear cells (PBMCs)from patients with systemic lupus erythematosus (SLE) using a constructed methyl-CpG-binding domain (MBD) proteins.Methods A recombinant plasmid MBD-pET30b+ was transformed into E.coli (DH5a)for clonal expansion followed by sequencing.Then,plasmids with correct sequence were transformed into E coli BL21 (DE3) for the expression of MBD proteins under the induction of isopropy-β-D-thiogalactoside (IPTG).The expression products were purified by Ni-NTA chromatography and identified by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis (SDS-PAGE)and Western blotting.Cultured 293T cells and isolated PMBCs from 21 patients with SLE and 15 normal human controls were immunostained with the expressed protein,and analyzed by fluorescence microscopy and flow cytometry.Results The sequence of recombinant plasmid was proved to be consistent with the expectation.SDS-PAGE and Western blotting demonstrated that the molecular weight of expressed tetrameric-protein was 46000,with the presence of N-terminal His-tag and C-terminal HA-tag.As fluorescence microscopy showed,the MBD proteins could specifically bind to intracellular CpG DNA in 293T cells.Patients with SLE had a significantly lower methylation level than the controls did(9.32±1.33 vs 11.66±1.04,t=5.68,P<0.05),and the DNA methylation level negatively correlated、with SLE disease activity index(r= -0.78,P<0.01).Condusions There is a lower DNA methylation in patients with SLE than in normal human controls,and the methylation level negatively correlates with SLE disease activity index.     

SLE患者T细胞受体Vβ基因的表达水平与特征

利用逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）及Southern印迹技术,对15例活动性系统性红斑狼疮（SLE）患者TCRVβ1－20基因亚家庭的表达水平进行了半定量研究。结果：显示,与正常对照相比,SLE患者Vβ8,Vβ16基因亚家族表达水平明显增高,提示在自身抗原的刺激下TCRVβ基因存在着优势取用。