细胞因子调节垂体MtT/S细胞中人生长激素基因启动子的活性

目的:探讨细胞因子白介素-11(IL-11)、睫状神经营养因子(CNTF)和转化生长因子(TGF-β)对大鼠垂体MtT/S细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其与垂体特异性转录因子Pit-1蛋白的关系。方法:采用荧光素酶报告基因的方法。首先建立含hGH基因启动子(-484～30 bp)和荧光素酶融合基因的稳定转化MtT/S细胞系,然后用细胞因子刺激,检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量,反映它们对GH分泌和合成的影响;检测MtT/S细胞内荧光素酶的变化,说明细胞因子对hGH基因启动子活性的作用。将Pit-1蛋白表达质粒(pcDNA-pit-1-cDNA)单独转染或与Pit-1反义寡核苷酸(Pit-1OND)共转染于稳定转化的MtT/S细胞中,观察加入细胞因子后荧光素酶的变化,探讨细胞因子的作用与Pit-1蛋白的关系。结果:IL-11(20 nmol/L)、CNTF(10 nmol/L)能刺激大鼠垂体MtT/S细胞中GH的分泌和合成,增强MtT/S细胞中荧光素酶的表达,分别增加到对照组的134%、122%。TGF-β(5 nmol/L)能减少GH的分泌和合成,抑制荧光素酶的表达到对照组的72%。Pit-1蛋白过表达和表达被抑制对细胞因子的调节作用没有影响。结论:IL-11、CNTF和TGF-β通过调节大鼠垂体MtT/S细胞中hGH基因启动子活性影响GH的合成,Pit-1蛋白可能不参与这一调节作用。     

人生长激素基因在小鼠体内的表达及其对血清中细胞因子浓度的影响

目的 :探讨体内高水平的人生长激素 (GH)对机体免疫功能的影响。方法 :构建人GH基因的真核表达质粒pcDNA3 hGH ,直接注射于小鼠的股四头肌中。注射后分别在第 5、15、2 5天分离血清 ,通过ELISA方法检测血清中GH的水平 ,同时检测血清中IL 2、IFN γ和TNF α水平的变化。结果 :所构建的质粒目的基因插入正确 ,转染细胞能分泌高水平的GH。接受质粒的小鼠血清中人GH的浓度与对照组相比较明显提高 ,但IL 2、IFN γ和TNF α的浓度没有显著变化。结论 :体内较高水平的GH对IL 2、IFN γ和TNF α的分泌没有显著影响     

兔抗人重组生长激素rhGH多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

目的制备抗人生长激素(growth hormone,GH)的多克隆抗体并鉴定其性能。方法真核细胞表达质粒pcDNA3.0-GHcDNA免疫家兔,制备rhGH多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价。亲和层析法纯化后,进行Western blot、免疫组织化学和激光共聚焦显微镜检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果得到兔抗人重组人生长激素rhGH多克隆抗体,效价达1:40000。纯化后的抗体可特异识别超表达的hGH和人内源性GH,可用于免疫组织化学实验、Western blot及激光共聚焦。结论用质粒免疫家兔制备的抗GH抗体具有较高的效价以及特异性,为hGH的功能性研究提供了有力的支持。     

人血清生长激素放射免疫分析的临床应用（文献综述）

人血清生长激素(huraan growth hormone，hGH)的放射免疫分析可以直接准确侧定人血清或血浆中生长激素(GH)的浓度，是研究生理情况下垂体GH分泌的一项可靠的方法。在临床上，此项测定对hGH分泌异常的疾病如肢端肥大症、巨人症，垂体性侏儒和垂体功能低下等疾患的早期诊断有重要价值。     

人生长激素的生物素—新和素放大酶联免疫法的建立

为建立有生物素和亲和素放大系统的人血清生长激素 (hGH)酶联免疫分析法 (BA ELISA) ,以微量的GH抗原免疫BALB/C小鼠 ,利用杂交瘤技术制备出 2 9株分泌抗hGH单克隆抗体 (MCA)的杂交瘤株。选择最佳配对MCA ,利用亲和素与生物素高亲和力的特性 ,建立了血清hGH双位点的BA ELISA法。我们的MCA滴度为 (0 5～ 5 0 0 )× 10 4,亲和常数Ka =(0 13～ 1 40 )× 10 10 L/mol。血清hGH的ELISA的灵敏度为 0 0 4± 0 0 1μg/L ;在血清中分别加入 1,2 5 ,5 μg/L的hGH ,其回收率为 90 7%～ 10 7 6 % (平均为 10 1 2 0 %± 0 0 3 % ) ;hGH含量为 2 8、10 0、2 9 8μg/L的血清批内、批间变异系数分别为 4 9%、3 8%、7 9%和 6 2 %、3 5 %、9 5 % ;用本法测定了正常儿童、生长激素缺乏症 (GHD)患儿和活动性肢端肥大症患者空腹血清hGH水平 ,分别为 1 87± 3 0、0 30± 0 42和 8 71± 6 95 μg/L。上述结果表明 ,本ELISA方法灵敏、特异、稳定、准确 ,能确切反映hGH分泌功能 ,在诸多方面均优于RIA。     

一种伴有基因缺陷的生长激素缺乏症(单纯性生长激素缺乏Ⅰ型A)

单纯性生长激素缺乏Ⅰ型A(IGHD1A)是一种较少见的家族性遗传性侏儒症。1971年在瑞士首先报道,以后在许多国家相继都有发现。hGH和hCS基因组合成基因簇,目前已知有2个hGH基因和3个hCS基因。本型病人是由于生长激素结构基因hGH-N的缺陷所致,其临床较其他垂体性侏儒症另有特点,特异性的诊断依靠DNA分析,早期治疗反应良好,随着hGH抗体的产生,疗效减退乃至消失,但也存在个体差异。     

人生长激素基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞移植对心肌梗死大鼠血流动力学的影响

目的：探讨人生长激素（hGH）基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞移植对心肌梗死大鼠血流动力学和血管新生的影响。方法: 结扎大鼠左冠状动脉前降支制作大鼠心力衰竭模型。2周后将冠脉结扎后存活的30只大鼠随机分为3组,hGH基因修饰的成肌细胞移植组（hGH组）、绿色荧光蛋白(GFP)基因修饰的成肌细胞移植组（GFP组）、注射等体积培养液的对照组。治疗4周后,血流动力学检查各组心功能指标;心肌组织进行HE染色检测心肌梗死面积,Ⅷ因子免疫组织化学检测血管新生。RT-PCR检测bax和bcl〖STBX〗-2〖STBZ〗 mRNA的表达。Western blotting检测各组心肌hGH、血管内皮生长因子（VEGF）、caspase-3蛋白表达情况。结果: （1）与对照组和GFP组相比： hGH组血流动力学指标明显改善,心肌梗死面积缩小。（2）心肌组织Ⅷ因子免疫组织化学检查结果显示： hGH组血管密度显著高于GFP组和对照组。（3）RT-PCR检测结果显示hGH组bax mRNA水平显著低于GFP组和对照组, bcl-2 mRNA水平显著高于GFP组和对照组。（4）Western blotting检测结果显示hGH组大鼠心肌组织有hGH蛋白表达,其余两组心肌组织无hGH蛋白表达。与其它两组相比,hGH组caspase-3蛋白表达降低, VEGF蛋白表达增加。结论: hGH基因修饰的成肌细胞移植可以抑制细胞凋亡,与单独成肌细胞治疗相比可以诱导更大的血管化,更好地缩小心肌梗死面积,并改善心肌梗死大鼠血流动力学。成肌细胞治疗联合hGH基因治疗为心肌梗死后心力衰竭的治疗提供了一个新的途径。     

不同生长激素激发试验诊断垂体性侏儒症的临床价值比较

生长激素(Human growth hormone, hGH)缺乏所致的垂体性侏儒症是儿童矮小的重要原因之一,而通过检测药物性或生理性激发试验后的hGH水平,判断垂体hGH储备功能是诊断hGH分泌是否异常的可靠实验室方法,但目前临床上使用的激发试验方法较多,而且影响hGH基础值和反应值的因素也颇多,各种试验都存在一定的假阳性反应(指GH分泌低下).为此,本文对120例临床疑诊hGH分泌缺乏的身材矮小儿童随机分组分别进行左旋多巴、胰岛素、运动、深睡眠等激发试验,采用放射免疫分析法检测血清hGH,并加以比较,现将结果报道如下.     

细胞因子对T细胞生长激素基因表达的影响

目的 探讨各种细胞因子对T细胞生长激素（GH）基因表达的影响。方法 构建含人GH调控序列的荧光素酶报告基因质粒pGL2-GH-luc，然后转染入T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞中，在培养液中分别加入各种细胞因子。结果 生理浓度的IL－1β，TNF－β和IFN－γ，对Jurkat细胞中荧光素酶的表达具有抑制作用（P＜0．05）。结论 细胞因子参与了调节淋巴细胞GH基因的表达。     

人生长激素基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞移植对心肌梗死鼠血流动力学的影响

目的:探讨人生长激素(hGH)基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞移植对心肌梗死大鼠血流动力学和血管新生的影响.方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支制作大鼠心力衰竭模型.2周后将冠脉结扎后存活的30只大鼠随机分为3组,hGH基因修饰的成肌细胞移植组(hGH组)、绿色荧光蛋白(GFP)基因修饰的成肌细胞移植组(GFP组)、注射等体积培养液的对照组.治疗4周后,血流动力学检查各组心功能指标;心肌组织进行HE染色检测心肌梗死面积,Ⅷ因子免疫组织化学检测血管新生.RT-PCR检测6似和6cl-2 mRNA的表达.Western blot.ting检测各组心肌hGH、血管内皮生长因子(VEGF)、easpase-3蛋白表达情况.结果:(1)与对照组和GFP组相比:hGH组血流动力学指标明显改善,心肌梗死面积缩小.(2)心肌组织Ⅷ因子免疫组织化学检杏结果显示:hGH组血管密度显著高于GFP组和对照组.(3)RT-PCR检测结果显示hGH组6ax mRNA水平显著低于GFP组和对照组,bcl-2 mRNA水平显著高于GFP组和对照组.(4)Westem blotting检测结果显示hGH组大鼠心肌组织有hGH蛋白表达,其余两组心肌组织无hGH蛋白表达.与其它两组相比,hGH组caspase-3蛋白表达降低.VEGF蛋白表达增加.结论:hGH基因修饰的成肌细胞移植可以抑制细胞凋亡,与单独成肌细胞治疗相比可以诱导更大的血管化,更好地缩小心肌梗死面积,并改善心肌梗死大鼠血流动力学.成肌细胞治疗联合hGH基因治疗为心肌     

干扰3T3-L1脂肪细胞生长激素受体对生长激素诱导的细胞炎症因子表达和分泌的影响

目的:探讨干扰3T3-L1脂肪细胞生长激素受体(GHR)对生长激素(GH)诱导的脂肪细胞核因子κB(NF-κB)激活及炎症细胞因子mRNA表达和分泌的影响。方法:采用RNA干扰技术抑制3T3-L1脂肪细胞中GHR的表达;Western blot检测GHR的蛋白表达;双萤光素酶报告基因系统分析GHR对GH激活的3T3-L1脂肪细胞NF-κB转录活性的影响;real-time RT-PCR和ELISA技术检测GHR对GH诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症因子mRNA表达和分泌的影响。结果:干扰3T3-L1脂肪细胞GHR的表达能够显著抑制生长激素诱导的细胞NF-κB的激活,并减少TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症细胞因子的mRNA表达和分泌。结论:干扰3T3-L1脂肪细胞GHR可抑制GH诱导的炎症细胞因子表达和分泌。     

左旋多巴激发试验对儿童生长激素缺乏症的临床价值

目的:探讨左旋多巴激发试验在诊断儿童生长激素缺乏症(GHD)的临床价值。方法:对330例身材矮小儿童应用左旋多巴激发试验,采用化学发光法进行生长激素(GH)检测。以测得的GH最高值为峰值,峰值≥10ng/ml为GH不缺乏,激发试验阳性;10ng/ml>峰值≥5ng/ml为GH部分缺乏,峰值<5ng/ml为GH缺乏,激发试验阴性。结果:激发后峰值强度为(12.23±8.10)ng/ml;峰值出现在(30～90)min者占96%,出现在120min者占4%(阳性3例),两者峰值有显著性差异(P<0.01);GH完全缺乏者占21%,部分缺乏者占22%,完全不缺乏者占57%。结论:左旋多巴激发试验可应用于临床GHD的诊断,但其诊断敏感度低,需要联合其它激发方式和其它指标对GHD患者进行综合评价。     

垂体生长激素的调节激素对人B淋巴母细胞系IM-9中生长激素基因启动子活性的影响

目的：通过观察生长激素释放激素（GHRH）、山德定、生长激素（GH）和胰岛素样生长因子I（IGF－I）对IM－9细胞中GH基因启动子活性的影响，以了解这些激素对B淋巴细胞中GH表达的调节作用。方法：把人外周血淋巴细胞GH基因上游－484～ 2bp调控序列克隆到荧光素酶报告基因质粒中，然后把克隆得到的质粒转染到IM－9细胞内，通过测量荧光素酶泊活性观察垂体GH的各种调节激素对GH基因启动子活性的影响。结果：0．001nmol/L的人GHRH能够显著抑制荧光素酶在IM－9细胞中的表达（P＜0．002），但0．1nmol/L和10nmol/L的GHRH对荧光素酶的抑制作用反而减弱。人IGF－I（1、10和100nmol/L可增强荧光素酶的表达（均P＜0．05）。GH（1．0ng/ml）可显著增加荧光素酶的表达，但作用的强度不大。不同浓度的生长抑素类似物山德定对IM－9细胞中荧光素酶的表达均无显著影响。结论：GHRH、IGF－I和GH对IM－9细胞中GH启动子的活性有一定的调节作用,说明调节垂体GH分泌的GHRH、IGF－I和GH等能够调节G淋巴细胞内irGH的表达。     

双抗体夹心ELISA检测人血清生长激素

本文用两株高亲和力,特异性好的hGH单克隆抗体(McAb),建立了高灵敏度的人血清生长激素(GH)ELISA双抗体夹心法。方法灵敏度为0.05～0.1μg/L,批内、批间变异系数分别为6.1％,11.4％。稀释度试验线性关系好(r=0.99),且通过原点。本法与放射免疫分析法(RIA)结果之间相关性好(r=0.92),与其他垂体激素皆无交叉反应。用本法测定了20名正常儿童,18名正常成年人,10例肢端肥大症,8例GH完全缺乏性侏儒症患者血清hGH基础值,说明本法灵敏,方便,能够满足临床要求。     

三叶因子3在大鼠腺垂体嗜色细胞中的定位

目的探讨三叶因子3(TFF3)在腺垂体远侧部嗜酸性细胞和嗜碱性细胞中的表达,明确TFF3在远侧部的分布。方法采用相邻切片的免疫组织化学染色,在相邻切片上分别显示TFF3/生长激素(GH)、TFF3/催乳素(PRL)、TFF3/促甲状腺激素(TSH)、TFF3/促肾上腺皮质激素(ACTH)、TFF3/卵泡刺激素(FSH)、TFF3/黄体生成素(LH)的表达。结果 TFF3和各嗜色细胞的免疫反应产物为棕黄色,主要位于细胞质,ACTH免疫阳性信号在胞膜也有表达,主要分布在腺垂体的远侧部。邻片显示TFF3存在于部分GH、PRL、TSH、ACTH、FSH、LH细胞,分别占19.4%、22.4%、9.2%、6.5%、35.7%、8.3%,以FSH最多,PRL、GH次之。结论垂体远侧部TFF3可分别表达于GH、PRL、TSH、ACTH、FSH、LH细胞。     

Epac1对垂体腺瘤细胞增殖和细胞周期的影响及分子机制研究

目的 探索垂体生长激素腺瘤细胞增殖的分子机制。方法 收集12例肢端肥大症患者的功能性生长激素垂体腺瘤（fGH-PA）组织样本。qPCR法测定fGH-PA组织和大鼠RGC-5、MMQ、GH3细胞中cAMP直接激活的交换蛋白1(Epac1) mRNA表达水平。免疫组织化学测定fGH-PA组织中Epac1蛋白表达情况。Western blot测定MMQ、GH3细胞中Epac1蛋白表达情况。在GH3细胞中过表达或敲低Epac1,或敲低cAMP反应元件结合蛋白(CREB),流式细胞术测定细胞周期变化;CCK-8法测定细胞增殖能力;Western blot测定细胞内p-CREB、CREB、Cyclin D1、CDK2、p21的表达情况。结果 qPCR和免疫组织化学结果显示,与旁侧正常组织相比,fGH-PA组织中Epac1 mRNA和蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。qPCR和Western blot结果显示,与RGC-5细胞相比,MMQ和GH3细胞中Epac1 mRNA和蛋白表达水平明显增高（P<0.05）。在GH3细胞中过表达Epac1后,与Control组相比,Epac1-OE...     

生长激素对SD大鼠子宫内膜容受性的影响

目的 观察生长激素对着床期SD大鼠子宫内膜整合素αvβ3(Itgαvβ3)及骨桥蛋白(OPN)表达的影响,以探讨改善子宫内膜容受性的方法.方法 随机将50只雌性SD大鼠平均分成两组,对照组为生理盐水(NS)组,实验组为生长激素(GH)组.取发现阴栓后第4天子宫内膜,用免疫组织化学技术检测子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达,同时首次通过SYBR Green嵌合荧光实时定量PCR技术检测子宫内膜上述两种因子mRNA的表达.结果 GH组子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达呈强阳性,对照组表达弱于GH组,两组差异有统计学意义(Itgαvβ3:77.33±4.23比92.56±16.80,0PN:71.75±8.77比80.73± 13.00,均P＜0.05).实时荧光定量PCR结果与免疫组织化学结果相符.结论 生长激素可以增强着床期子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达,可能可改善子宫内膜容受性,提高临床妊娠率.     

人血清生长激素IRMA的临床意义

人生长激素(hGH)对机体生长及发育起着重要作用。尽管正常人血清hGH分泌呈脉冲式,可高至100μg/L,低到RIA不能测出,但是,借助一些激发试验、抑制试验及基础值的测定,也有助于生长激素分泌紊乱的诊断。现行血清hGH大都以多抗建立的RIA测定,与其他激素,如人泌乳素(hPRL)、胎盘泌乳素(hPL)不免有较大的交叉反应,灵敏度也只有0.2μg/L左右。最近,我们以两株高特异性、高亲和力的hGH单克隆抗体建立了血清hGH免疫放射测定法(IRMA),其灵敏度高达10ng/L。本文以本法测定了多种疾病状态和正常人的血清hGH基础值,以进一步考察GH-IRMA测定法的临床应用潜能。     

生长激素对去垂体大鼠免疫系统的影响

为了探讨生长激素(GH)在免疫调节中的作用,对去垂体大鼠GH治疗前、后的免疫功能指标进行了观察.结果显示:(1)去垂体鼠淋巴细胞数量,NK细胞活性,IL—la和IL—2活性均明显下降,甲状腺素和氢化可的松治疗不能改善上述憎况,而合并使用GH可使上述指标得到不同程度的恢复;(2)去垂体鼠LPS诱导的巨噬细胞合成TNFa明显降低,肺巨噬细胞TNFa mRNA表达亦大幅下降,甲状腺素和氢化可的松对TNFa合成无明显作用,而GH可使用去垂体鼠LPS诱导的TNFa合成增高2.5倍以上,巨噬细胞TNFa mRNA表达亦明显增高.认为GH在去垂体鼠中有一定的免疫调节作用.     

生长激素基因

生长激素基因与人绒毛膜生长催乳素基因密切相关，由５个同源性程度很高的基因共同组成基因簇，位于人第１７号染色体长臂的ｑ２２－２４带上，其中只有生长激素结构基因（ＧＨ－Ｎ）能在垂体中表达，表达产物９０％为有活性的２２ｋＤａ ｈＧＨ，１０％为２０ｋＤａ ｈＧＨ。ＧＨ－Ｎ基因的启动子是５＇端上游的前２８９ｂｐ，它含有ＧＨＦ－１因子。反式作用因子、甲状腺素和糖皮质激素的结合位点，它们控制着ＧＨ－Ｎ基因表达的