乙肝病毒E抗原和抗体双阳性者中病毒X及前C基因变异热点研究

目的了解乙型肝炎患者HBcAg和HBeAh双阳性状态下X区及前C区基因热点变异情况，探讨T1762与A1764及A1896热点变异与HBe转换时相的关系。方法采用时间分辨荧光免疫分析方法定量检测乙肝5项标志物，对HBeAg／HBeAb双阳性标本采用巢式聚合酶链反应扩增，其包括X区及前C区在内的DNA片段，并对阳性的PCR产物直接标记测序，测序结果和Genbank中登录的标准序列相比较。结果对15例HBeAg和HBeAb双阳性患者血清中HBV DNA进行了检测，阳性11例，测序结果显示，11例HBV DNA阳性者均存在T1762和A1764的突变，但仅有4例患者出现了A1896的突变。结论在乙型肝炎HBe转换过程中均伴有BCP区T1762和A1764的突变，部分存在A1896位点的突变，T1762和A1764的突变要早于A1896的突变，而A1896的突变主要在E抗体产生过程中或产生以后。     

慢性乙型肝炎乙型肝炎病毒核心启动子区和前核心区基因变异后的预后分析

目的 为了解慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(BCP)区和前核心(前C)区基因变异后的临床转归及其预后。方法 采用DNA序列分析法检测123例HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者血清HBV BCP区(nt1762、nt1764)和前C区(nt1896)基因序列,并同步进行乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)定量及肝功能检测。结果 123例患者HBV BCP区(A1762T、G1764A)和前C区(G1896A)基因变异检出率为76.42％;其中肝炎肝硬化(HLC)患者双变异(A1762T、G1764A)和联合变异(A1762T、G1764A、G1896A)率最高(52．94％与29．41％);慢性重型肝炎患者终止变异(G1896A)率最高(42．86％);HBeAg／抗HBe转换率分别为：双变异组23.91％,终止变异组75．00％,联合变异组84．00％,无变异组13．79％。结论 HBV BCP双变异、前C终止变异和联合变异均可引起慢性乙型肝炎病情加重及肝硬化的发生,但严重肝损伤与这3种变异之间可能无因果关系,只是HBV减少病毒蛋白的产生,逃避免疫监视的一种方式;推测BCP双变异和联合变异可能是引起HLC的重要病因之一;BCP区变异患者时干扰素治疗敏感。     

慢性乙型肝炎患者HBV前C区A1896变异和BCP T1762／A1764双变异与临床相关性分析

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)前C区和基本棱心启动子(BCP)突变与HBV-DNA裁量之间的关系,明确检测突变的意义.方法 PCR扩增HBV-DNA前C区序列,进行PCR产物直接测序,测序HBV感染者血清中HBV前C区A1896突变及BCP T1762/A1764双突变例教.结果 31例慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA发生ntl896位核苷酸G-A点突变18例;发生nt1762住A-T 16例;发生nt1764 位G＞A 18例;发生nt1762位A-T与1764位G-A双突变16例;1762位A-T1764住G-A双变异和1896住G-A变异的联合变异频率明显高于单个变异.用SPSS16.0软件分析突变与HBV-DNA载量的关系.前C区A1896变异,BCP T1762/A1764变异均与HBV-DNA戴量差异无统计学意义.结论 HBV-DNA裁量仅能反映实时病毒裁量,HBV前C区A1896变异和BCP T1762/A1764双变异在各种病毒载量感染者中存在,仅依靠血清学指标及HBV-DNA裁量来判断传染性是不够的.检测HBV-DNA前C区A1896变异和BCP T1762/A1764双变异,可辅助判断传染性及制定抗病毒治疗方案.     

乙型肝炎病毒基本核心启动子区A1762T/G1764A突变检测的意义

目的探讨乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)基本核心启动子区(BCP)A1762T/G1764A联合突变在不同疾病中发生的差异及其与乙肝相关肝癌预后的关系。方法选择慢性乙肝(CHB)患者38例、乙肝肝硬化(LC)患者36例、乙肝相关肝细胞肝癌(HCC)患者74例,用巢式PCR扩增患者血清中HBV BCP区,直接测序法检测HBV BCP区变异,分析A1762T/G1764A突变与HBV复制、HBeAg表达和HBV感染不同阶段的关系,以及与HCC患者预后的关系。结果在148例患者中,A1762T/G1764A突变总体发生率为54.7%,乙肝相关HCC组中A1762T/G1764A突变发生率为79.7%,而CHB、LC患者分别为31.6%、27.8%,HCC组变异的发生率明显高于CHB组(P0.05)和LC组(P0.05);A1762T/G1764A突变组HBV-DNA载量与非突变组比较差异无统计学意义(P0.05);HBeAg阳性组A1762T/G1764A突变发生率为41.4%,HBeAg阴性组为73.5%,HBeAg阴性组变异发生率明显高于HBeAg阳性组(P0.05);HCC患者A1762T/G1764A变异组与非变异组之间无病生存期及总体生存期差异无统计学意义(P0.05)。结论 HBV核心启动子区A1762T/G1764A联合突变与HCC发生具有显著关系,该变异与血清HBV-DNA的复制水平无关,但与血清HBeAg表达水平有关,与乙肝相关HCC预后无显著关系。     

乙型肝炎病毒C基因启动子和前C终止变异与乙型肝炎标志物模式的关系及临床意义

目的研究乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因终止变异与乙型肝炎标志物模式的关系,并分析其临床意义。方法通过基因测序法分析检测104例乙型肝炎患者血清中C基因启动子和前C基因终止变异情况,采用微粒子发光分析法和荧光定量聚合酶链法(PCR),分别检测血清中乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV—DNA)含量,并进行比较分析。结果乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、HBeAg、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)阳性患者1762T／1764A双变异率显著高于HBsAg、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)、抗-HBc阳性患者,而1896G→A终止变异率和联合变异(双变异合并终止变异)率显著低于HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性组,73例HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性患者中32例无变异者,其HBeAg定量值显著高于其他有变异者．31例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性患者中有4例无双变异和终止变异,其HBV-DNA定量值显著低于其他患者。结论1762T／1764A双变异和1896G→A终止变异可使HBeAg含量显著下降,其变异株并不影响病毒的复制。1762T／1764A双变异和1896终止变异株的优蛰积累并逐渐取代野生株是HBeAg向抗抗-HBe转化的原因之一．     

肝癌患者血清中乙型肝炎病毒前C和BCP区基因变异的临床研究

目的了解常州地区乙型肝炎病毒(HBV)DNA前C区(1896)、BCP区(1762/1764)基因的变异,探讨与肝癌的相关性。方法运用基因芯片和核苷酸序列分析技术,对HBVDNA进行分析。结果前C区1896位、BCP区1762/1764位突变普遍存在。(1)在39例HBeAg( )标本组中1896突变为5例(12.8%),1762/1764突变为15例(38.5%);在75例HBeAg(-)组中1896突变为26例(34.7%),1762/1764突变为55例(73.3%)。(2)在114例标本中,慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌组中前C区1896、BCP区1762/1764位的总突变率分别为55.9%、71.4%、75.7%、88.9%。结论前C区1896、BCP区1762/1764位突变与HBeAg(-)显著相关,两者总突变率在肝癌患者中显著升高,尤其前C1896、BCP区1762/1764同时突变与肝硬化和肝癌密切相关。     

乙型肝炎病毒基本核心启动子A1762T／G1764A位点基因多态性检测方法的建立及应用

[目的]建立多聚酶链式反应-限制性片段长度多态分析（PCR-RFLP）法检测乙型肝炎病毒（HBV）C区基本核心启动子区（BCP）A1762T／G1764A联合突变并对部分临床标本进行检测。[方法]根据HBVBCP区基因设计引物，在G1764位设计MboⅠ酶切位点，根据PCR产物酶切结果判断该位点为G或A。[结果]测序及序列比较显示本文一株突变株：DT-BCP确为1762T／1764A变异株；HBeAg阳性慢性乙肝A1762T和G1764A位点双突变率为60％（18／30），HBeAg阴性组为53．3％（16／30），两组变异率无显著性差异（X^2=0．271，P=0．602）。[结论]本文建立的方法可用于检测HBV BCP区A1762T／G1764A位点双突变。     

乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子变异检测方法的比较研究

目的 建立错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（mPCR-RFLP）检测乙型肝炎病毒（HBV）前C区A1896、基本核心启动子（BCP）T1762/A1764双变异的方法,与直接测序法比较,评估其应用价值.方法 利用错配PCR的原理扩增HBV前C区长194 bp、C启动子区长184 bp的基因片段,扩增产物分别经限制性内切酶Bsu36I、BclI酶切,琼脂糖凝胶电泳,根据酶切图谱多态性,建立检测HBV前C A1896、BCP T1762/A1764双变异的方法,对127份HBsAg、HBV DNA阳性的HBV感染者血清进行分析,酶切同时测序.2份标本用克隆测序以验证酶切鉴定变异株、野株混合感染的准确性.结果 127份血清中125（98.42%）份能用酶切、121（95.21%）份能用测序分析HBV前CA1896、BCP T1762/A1764状况.酶切与测序均成功的119份血清中,16份为前C区A1896变异株,34份为BCP T1762/A1764双变异株,21份为前C区A1896、BCP T1762/A1764联合变异株,48份为前C区G1896、BCP A1762/G1764野株,酶切与测序的结果完全一致.1份酶切鉴定为前C区A1896、G1896混合感染标本的5个克隆子中,1个为前C区A1896变异株,另外4个为前C区G1896野株;另1份酶切鉴定为单纯前C区A1896变异标本的5个克隆子均为前C区A1896变异株,酶切分析结果与克隆测序结果完全相符.结论 与测序法相比,本方法较简便、特异性强,能区分野毒株、变异株混合感染,适合较大样本分析,可用于流行病学调查及临床筛查.     

不对称熔解曲线PCR法和DNA测序法检测HBV A1762T/G1764A结果分析

目的：以DNA测序法为标准,探讨不对称PCR熔解曲线法检测乙型肝炎病毒A1762T/G1764A基因变异的敏感性和特异性。方法：选取45例HBV阳性且经PCR熔解曲线法显示A1762T/G1764A变异的乙型肝炎患者血清,另选10例未发生HBV A1762T/G1764A变异的慢乙肝患者血清,用DNA测序法进行比较,分析两者检测结果。结果：55例测序样本中有51例两法结果完全一致,总符合率92.7%,另4例结果是：不对称PCR熔解曲线法检测显示为不完全变异型,而测序法则显示为完全变异型。结论：两法的相符率高,PCR熔解曲线法对A1762T/G1764A变异的检测是一简单易行较实用的方法,适用于临床基层开展。     

阿德福韦酯与乙型肝炎病毒P区、前C/BCP区变异相关性研究

目的 探讨阿德福韦酯治疗后乙型肝炎病毒(HBV)P区、前C/BCP区的变异情况,为合理进行抗病毒治疗提供理论基础.方法 采用套式聚合酶链反应及核苷酸序列分析技术,将2010年3-8月天津市第三中心医院收治的共计61例临床乙型肝炎患者,根据是否使用过阿德福韦酯分为试验组(33例)和对照组(28例),并进行HBV DNA P区、前C/BCP区的突变点检测,对2组的数据进行统计学比较.结果 HBV DNA前C/BCP区G1896A和A1762T/G1764A突变率最高,尤其以乙型肝炎后肝癌患者表现最高[50.0%(8/16)、25.0%(4/16)],且试验组A1762T/G1764A双突变及G1896A突变率明显高于对照组[39.4%(13/33)比17.9%(5/28),27.3%(9/33)比10.7%(3/28),P<0.05].与核苷酸药物阿德福韦酯密切相关的P区突变点以A18lV和N236T突变率最高.结论 前C/BCP区G1896A突变、A1762T/G1764A双突变以及A181V和N236T的突变与核苷酸药物阿德福韦酯治疗密切相关,对于合理指导抗病毒治疗具有重要参考价值.     

乙型肝炎病毒前C区(1896)和BCP区(1762/1764)变异对肝癌发病率的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区(1896)和BCP区(1762/1764)变异对肝癌发病率的影响。方法对520例HBV感染(慢性乙肝)患者进行HBV前C区(1896)和BCP区(1762/1764)变异检测,并观察其继发肝癌情况。结果 520例慢性乙肝患者HBV前C区(1896)变异肝癌发病率为8.3%,BCP区(1762/1764)变异肝癌发病率为30.0%,前C区(1896)和BCP区(1762/1764)同时变异肝癌发病率为10.9%,变异者合计肝癌发病率为22.9%;前C区(1896)和BCP区(1762/1764)均未发生变异(野生型)肝癌发病率为1.1%。变异者肝癌发病率显著高于未发生变异者(P<0.01)。结论 HBV前C区(1896)和BCP区(1762/1764)变异可能与肝癌的发病有关,应加强对此类患者HBV基因变异的检测。     

自贡地区HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896位点突变与HBV相关性肝癌的相关性研究

目的通过分析自贡地区乙肝患者乙型肝炎病毒HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896位点的突变情况,探讨其与HBV相关性肝癌的关系。方法收集2015年9月至2018年6月141例经本院确诊的乙肝性相关疾病患者血清标本(HBV DNA≥103IU/mL):慢性乙肝(CHB组)50例、肝硬化(LC组)45例、肝癌(HCC组)46例,并收集临床相关资料。采用荧光定量PCR法检测患者的HBV DNA水平,多通道荧光PCR法检测HBV基因型,然后采用ARMS-PCR法检测HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896突变情况。采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析。结果HCC组和CHB组在e抗原阳性率、HBV DNA水平及HBV DNA>105IU/mL方面对比发现差异均具有统计学意义(P<0.05);HCC组和LC组在e抗原阳性率方面比较发现差异无统计学意义(P>0.05),而HBV DNA水平方面差异具有统计学意义(P<0.05)。男性、女性乙肝患者HBV基因BCP区1762/1764位点突变率分别为67.0%、57.1%(P>0.05),前C区1896位点突变率分别为61.6%、66.7%(P>0.05)。HCC组患者、LC组患者、CHB组患者的HBV基因BCP区1762/1764突变率分别为91.3%、84.4%、22%,HCC组与CHB组比较差异具有统计学意义(P<0.05),而HCC组与LC组比较差异无统计学意义(P>0.05);HBV基因前C区1896突变率分别为84.8%、62.2%、42.0%,HCC组与CHB组、LC组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。HCC组患者的HBV基因前C区1896和BCP区1762/1764位点同时突变率为78.3%,要高于LC组和CHB组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。HBV基因型方面比较,无论是基因B型还是C型的乙肝相关患者,疾病进程较重(HCC组、LC组)的受试者携带BCP区1762/1764突变型或前C区1896突变型的比例都要高于慢性乙肝患者(CHB组)。结论自贡地区HBV基因BCP区1762/1764和前C区1896突变率高,无性别和基因型差异,其中HBV基因BCP区1762/1764位点和前C区1896位点联合突变与HBV相关性HCC发生可能存在一定关系。     

乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区变异对疾病进展的影响

目的 应用测序列的方法，探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型在南京地区的流行病学状况和HBV基因型与基本核心启动子（BCP）及前C区变异对疾病进展的影响。方法 选用南京地区94例HBV感染患者血清，其中慢性乙型肝炎（CHB）44例、慢性重型乙型肝炎（CSH）、肝硬化（LC）和肝细胞癌（HCC）50例，应用测序列的方法测定HBV的S基因序列以确定其基因型，测定C基因序列以确定其变异状况。结果 南京地区94例HBV感染患者的HBV基因型以B型和C型为主，分别为40例（42．6％）和54例（57．4％），未发现其他型和混合型，CHB组与HCC、CSH和LC组病毒基因型分布差异有统计学意义（P〈0．01），对于不同病情的HBV感染患者，基本核心启动子变异区（T1762／A1764双变异）变异差异有统计学意义（P〈0．05）；而不同基因型的患者基本核心启动子变异差异有统计学意义（P〈0．05）。前C区变异（A1896变异）在不同病情和不同基因型的患者中，差异均无统计学意义。结论 南京地区流行的HBV主要基因型是B和C，C型感染可以引起较重的肝病，尤其是BCP发生双变异者；HBV基因型是影响临床表现的重要因素之一。     

乙型肝炎病毒前C区1896、基本C区启动子区1762／1764变异对拉米夫定抗病毒疗效的影响及其临床意义

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）前C区G1896A变异和基本C区启动子（BCP）区A1762T／G1764A双变异对拉米夫定（LAM）抗病毒疗效的影响及其临床意义。方法收集上海及其周边地区34例慢性乙型肝炎患者,单用LAM或LAM＋聚乙二醇干扰素α-2a进行抗病毒治疗共48周,应用TrugeneHBVgenotyping试剂盒测定分析治疗前（0周）、治疗过程中（24周）、治疗结束时（48周）及随访结束时（72周）RT区YMDD变异;采用HBV基因多态性检测芯片试剂盒测定前C区1896、BCP区1762／1764位点的变异情况。结果在治疗前有9例患者检测出前C区G1896A变异,均为HBVe抗原（HBeAg）阴性慢性乙型肝炎患者;9例前C区G1896A变异患者中7例治疗应答（77．8％,7／9）,BCP区A1762T／G1764A变异在治疗应答者与无应答者中差异无统计学意义;3例患者分别在治疗24和48周时检测到YMDD变异,对治疗均无应答。结论慢性乙型肝炎患者治疗前血清HBVDNA变异状态可能影响LAM抗病毒治疗应答及YMDD耐药变异株的复制能力。     

Nucleic acid sequence analysis of basal core promoter/precore/core region of hepatitis B virus isolated from chronic carriers of the virus from Kolkata, eastern India: low frequency of mutation in the precore region

OBJECTIVE: The aim of the present study was to characterize the predominant hepatitis B virus (HBV) strains and their molecular variants present in the HBV isolates of the different genotypes found among the chronic carriers of the virus in our community. METHODS: Precore/core and core promoter regions of HBV DNA were amplified by polymerase chain reaction and then subjected to direct sequencing. Of the 64 hepatitis B surface antigen (HBsAg)-positive chronic HBV carriers investigated, 44 were HBeAg negative and 20 were HBeAg positive. RESULTS: In addition to genotype D, which was the predominant genotype, 12 genotype C (18.7%) and 6 genotype A (9.4%) were also detected. Presence of T at nt 1858 has often been related to the development of precore stop mutation at nt 1896, while that of C has been related to the development of 1762-1764 double mutation. In our study group, 39 of the 44 HBeAg-negative samples have T1858. The precore stop codon mutation was found in only 8 (18%) of the HBeAg-negative samples. More than half of the HBeAg-negative samples had wild-type sequence in the precore region. The core promoter region could be sequenced from 40 samples, and 1762-1764 double mutation was detected in 13 (32.5%) of them. No significant changes could be detected in the core amino acid sequence of these isolates. CONCLUSION: The pattern of core promoter and precore mutation of HBV isolates in the present study is atypical and not in accordance with reports from other parts of the world, where genotype D and genotype C with T at codon 1858 are common.     

Precore wild-type hepatitis B virus with G1896 in the resolution of persistent hepatitis B virus infection

OBJECTIVE: Factors influencing the resolution of persistent hepatitis B virus (HBV) infection were sought for. METHODS: The loss of hepatitis B surface antigen (HBsAg) from serum was correlated with mutations in HBV DNA for a hepatitis B e antigen (HBeAg)-minus phenotype in patients infected with HBV genotype C and positive for HBeAg at presentation. RESULTS: HBeAg turned negative in all the 22 patients in whom HBV infection resolved, but only in 11 of the 25 patients with severe liver diseases (100 vs. 44%, p = 0.0001). The precore wild type (G1896) persisted significantly more frequently in the 22 patients in whom HBV infection resolved than in the 11 patients who developed decompensated liver cirrhosis or hepatocellular carcinoma (15/22 or 68% vs. 1/11 or 9%, p = 0.005). The double mutation in the core promoter (T1762/A1764) was comparably frequent in the two groups of patients at presentation (14/22 or 64% vs. 7/11 or 64%) and >15 years thereafter (18/22 or 82% vs. 10/11 or 91%). CONCLUSION: The precore wild type (G1896) would seem to facilitate the resolution of HBV infection, while the precore mutant (A1896) may induce severe liver diseases in patients with HBeAg-positive chronic hepatitis who have lost HBeAg from serum.     

HBsAg和HBsAb双阳患者前C/C区基因突变分析

目的 探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎表面抗体(HBsAb)同时阳性(以下简称双阳)患者前C/C区基因突变的特点及其与S区基因突变的关系.方法 选取18例双阳患者,对前C/C区及S区基因序列扩增并测序,分析测序结果.结果 18例双阳患者中,检出前C/C区氨基酸突变者7例;前C/C区发生突变与未发生突变者比较,其S区氨基酸的突变次数及突变率明显增加(P<0.05);7例前C/C区氨基酸突变患者中,4例为前C区nt1896突变,其中1例为HBeAg(-),3例为HBeAg(+).结论 双阳患者不仅S区氨基酸突变增多,其前C/C区氨基酸突变也明显增加;双阳患者前C区nt1896突变更常见于HBeAg阳性者,可能与双阳患者病毒株的复杂性有关.     

阿德福韦酯治疗与乙型肝炎病毒P区、C区及BCP区变异相关性研究

[目的]探究阿德福韦酯治疗前后乙型肝炎病毒P区、c区及BCP区的变异情况，为合理进行抗病毒治疗提供理论基础；[方法]采用套式PCR及核苷酸序列分析技术，对天津市第三中心医院共计61份临床HBV血液标本进行了HBVDNAP区、c区及BCP区的突变点检测。[结果]HBVDNA前c区G1896A和A1762T／G1764A突变比率最高，尤其以肝癌组中表现最高，且实验组A1762T／G1764A双突变及G1896A突变的比率明显高于对照组，与核苷酸药物阿德福韦密切相关的突变点以A181V和N236T突变最高。[结论]前c区G1896A变异联合BCPT1762／A1764双变异以及A181V和N236T的检测与核苷酸药物治疗的过程密切相关，对于合理指导抗病毒治疗具有重要参考价值。