识别乙型肝炎病毒前S(2)抗原决定簇的单克隆抗体——前S(2)抗原决定簇及抗前S(2)抗体的特征

作者将小鼠骨髓瘤细胞与经乙型肝炎病毒(HBV)免疫的小鼠脾淋巴细胞融合,获得一株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,所产生的McAb能特异性地识别由HBV基因组前S(2)区编码的抗原决定簇。由这株杂交瘤细胞分泌的McAb Mo-F124能与HBV及重组HBsAg颗粒表面和前S(2)抗原决定簇反应。前S(2)抗原决定簇为前S(2)和S基因产物,即HBV包膜上的34KD糖蛋白,经金     

抗Ⅱ型单纯疱疹病毒表面抗原gD单克隆抗体的制备及鉴定

制备抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(Simplex Herpes VirusⅡ,HSV-2)表面抗原gD的单克隆抗体(mAb)并对其性质进行鉴定。以基因工程重组制备纯化的HSV2-gD为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规融合制备杂交瘤细胞,通过HAT选择培养、有限稀释法获得单克隆细胞株,用间接ELISA法、Western blot方法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株。获得了4株可稳定分泌抗HSV2-gD抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A11C6、1A11F10、4C9D5以及4C9E9,抗体的类型均为IgG1,轻链均为κ型,Western blot结果显示各单抗都可以特异性识别HSV2-gD。用杂交瘤细胞注射小鼠制备腹水,腹水内的抗体效价均大于1×10-5,腹水内的抗体经硫酸铵-辛酸分级沉淀和阴离子交换柱纯化,成功制备了纯度超过95%的高特异性抗体,抗体有较好的特异性。为进一步研究HSV2感染和临床上的预防、诊断及治疗提供了有力的工具。     

人载脂蛋白A5单抗制备及临床应用的研究

目的制备抗人载脂蛋白A5（ApoA5）单克隆抗体（McAb）,建立ELISA双抗体夹心法,并进行初步的临床应用。方法利用合成的人ApoA5抗原免疫BALB/c小鼠,制备McAb,并对抗体的效价、特异性、亚类及位点进行了测定,建立了ELISA双抗体夹心法,测定了正常对照组（145例）和冠心病组（68例）血清中ApoA5的含量。结果获得了5个稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,且均为IgG2a型。腹水效价达到1.6×10^5。冠心病组胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和ApoB水平明显高于对照组（P〈0.05）,而高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、ApoA1和ApoA5水平明显低于对照组（P〈0.05）。ApoA5与HDL-C、ApoA1水平呈正相关（r值分别为0.53和0.63,P〈0.05）,与TC、TG、LDL-C、ApoB呈负相关（r分别为-0.69、-0.63、和-0.59,P〈0.05）。结论ApoA5参与脂质代谢,对于心血管疾病的预防和治疗具有一定的临床意义。     

抗哇巴因单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗哇巴因单克隆抗体。方法以半抗原哇巴因与蛋白质载体卵清蛋白(OVA)的耦联物为抗原,免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株分泌抗哇巴因的单克隆抗体的细胞株(OUA1,OUA2)。结果两株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞;所分泌抗体为小鼠IgG1亚类;小鼠腹水效价测定分别为5×106,8×106;和地高辛交叉反应率分别为1.342%和2.323%;ELISA相加试验表明,两株单克隆抗体可能针对同一抗原决定簇。结论成功制备出小分子物质哇巴因的单克隆抗体。     

人结缔组织生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

用纯化的人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)免疫BalB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备CTGF单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),获得2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系7C7和8A11。两株细胞染色体众数分别为95条和91条;单抗亚类鉴定结果显示2株单抗均为IgG1型;间接ELISA法测定7C7和8A11腹水效价分别为:1.3×105和8.1×104;相对亲和力:7C7>8A11。CTGF单克隆抗体的制备为相关实验研究和临床诊断提供了条件。     

合成肽诱导抗脊髓灰质炎病毒中和抗体

作者按Hopp等的方法,合成含有Ⅰ型脊髓灰质炎病毒结构蛋白VP1氨基酸顺序的5种肽。用6种单克隆中和抗体(能分别与不同的中和反应抗原决定簇A、B、C、D、E和F相结合)与5种合成肽作ELISA,测定这些合成肽被单克隆抗体(McAb)识别的能力。结果表明,5种肽中有4种能被McAb所识别。     

分泌抗水稻细菌性条斑菌单克隆抗体杂交瘤株的建立及其在种子检验上的应用

本文首次报导了通过硫酸铵沉淀法提取水稻细菌性条斑菌(Xanthomonas campestris pv.oryzicola)(以下简称细条菌)的蛋白质,并以它作抗原建立了4个杂交瘤细胞株E_5、E_8、A_5和F_(11),其培养物上清的ELISA效价为1:20～1:160,腹水效价为1:10~6～1:10~7。该4个细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)与58个不同来源的细条菌都呈阳性反应,而对参试的具有一定代表性的其它13个细菌种,均呈阴性反应。试验还表明,4种McAb是针对同一抗原决定簇的,其亲和力大小为:E_8>A_5>E_5>F_(11)。应用McAb进行种子带菌检验也获得成功。     

单克隆抗-HBe的再检测及进一步鉴定

HBeAg在血清中的浓度很低,难以提纯定量的HBeAg免疫动物,以制备多隆抗血清用于免疫诊断试验。本文报告了将HBeAg和HBsAg阳性血浆经人抗-HBe IgG亲和层析技、Bio-Gel P2柱及蔗糖密度梯度离心,可获得高纯度HBeAg,将其免疫小鼠后经杂交瘤技术得到5H12C81和12H7C161两株杂交瘤,其分泌的单克隆抗体(McAb)均属IgG2a亚型,但结合力研究显示,12H7C161抗体与HBeAg的结合率高于5H12C81McAb和多克隆抗-HBe。作者将这两个单克隆抗-HBe与以前分离     

抗脂联素单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

目的:探讨抗脂联素(adiponectin,APN)单克隆抗体(McAb)的制备方法及其免疫学特性.方法:采用FMP有机化学同相合成法合成APN,用HPLC进行纯化,以此合成抗原免疫BALB/c小鼠,制备McAb,并对抗体的效价、特异性、亚类及位点进行测定.结果:融合后的克隆率为85.4%,阳性率3.2%,腹水效价为1.0×102,与内脂素、瘦素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白无交叉反应,A2、A3、A4、A6、A8为lgG2a,A1、A2、A7为IgG2b.经单抗体相加试验和双抗体竞争试验证实,A1针对一个抗原位点,A3和A3针对另一个抗原位点.结论:利用合成的APN免疫动物可成功制备抗APN McAb,该抗体效价高、特异性强.     

抗脂联素单克隆抗体的制备及免疫学特性分析

目的:探讨抗脂联素(adiponectin,APN)单克隆抗体(McAb)的制备方法及其免疫学特性.方法:采用FMP有机化学同相合成法合成APN,用HPLC进行纯化,以此合成抗原免疫BALB/c小鼠,制备McAb,并对抗体的效价、特异性、亚类及位点进行测定.结果:融合后的克隆率为85.4%,阳性率3.2%,腹水效价为1.0×102,与内脂素、瘦素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白无交叉反应,A2、A3、A4、A6、A8为lgG2a,A1、A2、A7为IgG2b.经单抗体相加试验和双抗体竞争试验证实,A1针对一个抗原位点,A3和A3针对另一个抗原位点.结论:利用合成的APN免疫动物可成功制备抗APN McAb,该抗体效价高、特异性强.     

用半连续无血清无蛋白培养生产单克隆抗体-谷氨酰胺浓度与培养条件对细胞生长和抗体分泌的影响

作者曾报道,将分泌单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞在转瓶中用无血清无蛋白培养基(BDM)进行半连续培养,与含血清培养基静止培养相比,McAb的分泌量可增加2.4倍。为进一步优化细胞在BDM中的生长和分泌McAb的培养条件,作者继续就BDM的成分与培养条件作了更深入的探讨。将杂交瘤细胞株7F11C7(分泌小鼠IgG1)解冻后,置于无血清无蛋白BDM(Eagle's:Ham's F12:NCTC135为5:5:1)中,在饱和湿度及10%CO_2的条件下培养,并经多     

用单克隆抗体分析白喉毒素:Ⅰ.抗原决定簇的定位和细胞毒的中和

用白喉类毒素免疫小鼠,将其脾细胞与NS1骨髓瘤细胞融合,得到43株产生抗白喉毒素单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系.用此McAb对毒素分子的抗原决定簇定位的方法是用固相ELISA和/或Western印染法测定McAb和以下物质的反应情况:(1)分离出的毒素的A片段(Fa)和B片段(Fb);(2)提早终止的tox基因产物;(3)同CNBr结合     

相思子毒素单克隆抗体的制备纯化及鉴定

目的制备相思子毒素单克隆抗体并鉴定其特性。方法以甲醛处理的相思子毒素毒蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果获得了4株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞2D3、4E6、1C8和1E5,诱生的腹水效价分别为1∶1×107、1∶1×106、1∶1×105、1∶1×106,亚类鉴定表明2D3为IgG1,其余3株均为IgG2b;特异性鉴定显示它们与多种毒素均无交叉反应,经过亲和层析,获得了纯化的单抗。结论获得了特异性的相思子毒素单克隆抗体,为建立相思子毒素的检测及纯化方法奠定了基础,其中4E6的效价最高,可作为检测相思子毒素的核心试剂。     

血清Ig、Apo及补体在肾病综合征中的检测及意义

目的 探讨血清免疫球蛋白(Ig)、载脂蛋白(Apo)及补体(C)在肾病综合征(NS)中的检测及意义.方法 选择30例NS患者作为观察组, 30例健康体检者作为对照组.检测并比较两组患者血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白A(IgA)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)以及补体3(C3)、补体4(C4)的含量.结果 观察组患者的血清IgG水平明显低于对照组,IgM、IgE水平明显高于对照组(均P<0.05);两组血清IgA水平比较差异无统计学意义(P>0.05).观察组患者血清ApoA1、ApoB水平明显高于对照组,C3、C4水平明显低于对照组(均P<0.05).结论 NS患者血清中IgM、IgE、ApoA1及ApoB水平明显高于健康者,IgG、C3及C4水平明显低于健康者.临床检测NS患者血清中Ig、Apo以及补体,对NS的诊断、治疗及预后具有重要的意义.     

单克隆抗体的制备、纯化和保存方法对其特异性的影响

将流感病毒NT68株所产生的血凝素作为抗原,通过杂交瘤技术获得38个亚克隆细胞株.其中各有10株分别分泌IgG_1、IgG_(2a)、IgG_(2b)、8株分泌IgM.杂交瘤细胞经组织培养或注入BALB/c小鼠腹腔制备单克隆抗体McAb.用同种病毒作血凝抑制(HI)试验测定抗体效价,用一组非同种病毒株作HI试验测定McAb的特异性和交叉反应性.McAb经以下物理处理:(1)温度:将腹水作1∶500～1∶2000系列稀释后,分别置62℃、10分钟;56℃、30分钟;37℃、1小时;20℃、16小时.并以     

小鼠BMPR-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定的实验研究

目的制备小鼠骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR-Ⅱ)的单克隆抗体并鉴定其活性。方法以BMPR-Ⅱ为抗原免疫BalB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立稳定分泌抗BMPR-Ⅱ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,克隆化培养后接种于小鼠腹腔制备BMPR-Ⅱ的单克隆抗体,通过间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组织化学、免疫荧光技术对其进行鉴定。结果获得一株能稳定分泌抗BMPR-Ⅱ单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为3F6,其腹水效价为105,亚类为IgG1;通过免疫印迹、免疫组织化学、免疫荧光证实制备的BMPR-Ⅱ抗体可与组织和细胞中的BMPR-Ⅱ蛋白特异性结合。结论本实验成功制备了可稳定分泌具有生物活性的BMPR-Ⅱ单克隆抗体的杂交瘤细胞及特异性的BMPR-Ⅱ单克隆抗体,可用于BMPR-Ⅱ免疫检测方法的初步应用。     

抗蜱传脑炎病毒的两种单克隆抗体

本文介绍了KEN和NEK系列两个类型的抗蜱传脑炎(TBE)病毒的单克隆抗体(McAb),在其血清学试验反应范围及与各株TBE病毒的反应能力方面有所不同。KEN系列和NEK系列杂交瘤分别分泌抗4072株和Skalica株McAb。4072毒株是从1例苏联病人血液中分离出来的;Skalica株来源于捷克斯洛伐克的一种田鼠。NEK-9-4、NEK-12-4 及KEN-46-8、KEN-6-4 McAb经抗鼠IgG及IgM血清作琼脂扩散沉淀确定为IgG类。该两组McAb无     

抗汉城病毒荧光单克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备抗汉城病毒（Seoul virus,SEOV）荧光单克隆抗体（单抗）,并初步应用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液的病毒灭活验证。 方法  以SEOV L-99株灭活病毒原液为免疫原,采用小鼠杂交瘤细胞融合技术,筛选抗SEOV特异性单抗杂交瘤;小鼠体内诱生法制备单抗腹水,蛋白A亲和层析纯化单抗,并以蛋白质印迹法鉴定其特异性;间接ELISA测定单抗效价和相对亲和力;纯化单抗采用搅拌法标记异硫氰酸荧光素,并分别采用直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法对Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行病毒灭活验证。结果 共筛选出4株特异性抗SEOV L-99株杂交瘤1D5、2E3、3A4及5B7。蛋白质印迹法鉴定4株单抗均与SEOV L-99株核衣壳蛋白发生特异性反应;间接ELISA测定腹水效价为3.13×10^-8~ 1.25×10^-7;相对亲和力顺序为1D5>3A4>2E3>5B7;纯化抗体纯度>95%;异硫氰酸荧光素标记1D5株单抗的结合比率为3.4;直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法检测盲传3代的Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液,病毒灭活验证结果一致。结论 成功筛选到高效价特异性抗SEOV单抗,并制备成荧光单抗,可用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗生产工艺中的病毒灭活验证。     

抗重组人巨细胞病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得抗人巨细胞病毒(HCMV)单克隆抗体(McAb).采用重组HCMV(rhCMV)gp52蛋白片段免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价,用免疫印迹法进行特异性鉴定.最终获得4株(3E9,5A6,4G12,2H2)能稳定分泌高效价抗rhCMV McAb的杂交瘤细胞.其培养上清的ELISA效价分别为12048,11024,11024,1512;腹水效价分别为1×10-7,1×10-7,1×10-6,2×10-6.它们分别识别gp52蛋白上的2个不同的抗原表位,2H2识别gp52蛋白上的一个表位,3e9,5A6和4G12识别另一个表位.该单抗可作为快速诊断CMV感染的特异性抗体.     

抗Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和性单克隆抗体的产生及其特性

作者分别用Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株、MEF-1及Saukett株作免疫原,通过26次融合,用中和试验筛选出350株能稳定地分泌抗脊髓灰质炎病毒中和性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.其中分泌抗Ⅰ型病毒的McAb55株,Ⅱ型180株、Ⅲ型115株.先用各型的2个参考毒株检测McAb的中和活性,若为阳性,再与每个血清型已知特性的5个类疫苗株(VL)及5个