瘦素和血管内皮生长因子在碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管模型中的表达

目的 观察碱烧伤后不同时期角膜的组织病理学变化,以及瘦素和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VFGF)的表达,探讨它们与角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的关系.方法 使用碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管模型,采用浸润1 mol·L-1 NaOH溶液、直径为3 mm的单片滤纸,准确置于大鼠右眼角膜中央30 s,制作CNV模型.25只SD大鼠右眼为实验眼,随机分成5组,每组5眼,左眼为正常对照眼.每天用裂隙灯显微镜观察角膜新生血管,分别计算新生血管长度和面积.并行HE染色和免疫组织化学检测.结果 碱烧伤后4 d、7 d、14 d、21 d,实验组CNV面积分别为:(2.55±0.15)m2、(4.15±0.36)mm2、(10.21±0.45)mm2、(8.56±0.06)mm2.免疫组织化学检测显示角膜碱烧伤后1 d,实验组瘦素、VEGF的表达开始增高,碱烧伤后14 d达高峰,14 d后瘦素、VEGF的表达下降,21 d后显著下降;其表达部位主要分布在形成的新生血管区域和上皮层;正常对照组瘦素可微弱表达于角膜上皮层和基质层,VEGF没有表达或仅在上皮基底膜有微弱表达.实验组角膜瘦素、VEGF阳性表达率较对照组明显增加(χ2=29.07,P=0.001;χ2=35.51,P=0.001),瘦素与VEGF的表达具有正相关性(r=0.95,P=0.001).结论 瘦素和VEGF表达水平与角膜新生血管的生成具有相关性,瘦素可能成为治疗CNV的靶点.     

角膜碱烧伤后VEGF与新生血管渗漏性的相关性实验研究

目的 研究大鼠角膜碱烧伤后新生血管渗透率的变化并探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对渗透率的影响.方法 建立大鼠角膜碱烧伤模型,于术后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10d伊文兰示踪法检测新生血管渗透率,PCR法检测角膜组织中VEGF-RNA的表达.以正常大鼠角膜作为对照.结果 正常及碱烧伤后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10 d大鼠角膜新生血管渗透率依次为0 mg·L-1·mm-2(1.14±0.17)mg·L-1·mm-2,(0.24±0.08)mg·L-1·mm-2,(0.29±0.16)mg·L-1·mm-2,(0.14±0.10)mg·L-1·mm-2,(0.09±0.06)mg·L-1·mm-2和(0.05±0.04)mg·L-1·mm-2;角膜组织中VEGF-RNA水平依次为(1.09±0.31)×106拷贝·μg-1总RNA,(7.01±1.99)×106拷贝·μg-1总RNA,(1.01±0.59)×106拷贝·μg-1总RNA,(2.43±0.43)×106拷贝·μg-1总RNA,(0.99±1.31)×106拷贝·μg-1总RNA,(0.95±0.03)×106拷贝·μg-1总RNA和(0.17±0.15)×106拷贝·μg-1总RNA,其中7 d和10 d的VEGF-RNA低于正常水平(P7=0.011,P10=0.006).经Pearson相关分析,新生血管渗透率和VEGF-RNA水平呈正相关改变(r=0.866,P＜0.01).结论 VEGF在新生血管渗漏的调节机制中起着重要作用;大鼠角膜碱烧伤后期,新生血管渗漏性增高难以应用VEGF机制进行解释的现象,提示可能存在其他的新生血管渗漏调节机制.[眼科新进展 2009;29(1):18-20]     

贝伐单抗眼液对兔眼角膜新生血管抑制作用的实验研究

目的 探讨贝伐单抗(Avastin)滴眼液对兔眼碱烧伤或缝线诱导角膜新生血管的抑制作用.方法 54只家兔分别以碱烧伤法(27只)和缝线法(27只)诱导角膜新生血管模型,根据治疗方法不同随机再分为3组:Avastin眼液组、复方硫酸新霉素眼液组和生理盐水组.各组均于诱导后第7天给予相应药物滴眼,4次·d-1,共14 d.造模后第7天、第21天、第28天、第56天计算角膜新生血管面积,免疫组织化学法检测角膜组织中VEGF蛋白表达,RT-PCR法检测角膜组织中VEGF mRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测房水内VEGF蛋白表达.结果 碱烧伤后第21天、第28天、第56天Avastin眼液组和复方硫酸新霉素眼液组角膜新生血管面积明显较生理盐水组短而稀疏,其中3个不同时间点Avastin眼液组的角膜新生血管面积分别为(26.16±7.02)mm2、(29.71±10.43)mm2、(26.10±10.72)mm2,均明显小于生理盐水组,差异均有统计学意义(均为P＜0.01);缝线后第21天、第28天、第56天时Avastin眼液组新生血管面积分别为(18.26±3.88)mm2、(37.24±3.16)mm2、(40.16±3.38)mm2,均明显小于复方硫酸新霉素眼液组和生理盐水组,差异均有统计学意义(均为P＜0.01);碱烧伤或缝线诱导后第21天,免疫组织化学结果显示Avastin眼液组角膜上皮层VEGF蛋白表达较生理盐水组均减弱,基质层新生血管较少;RT-PCR显示造模后第21天和第28天时,Avastin眼液组兔角膜组织内VEGF mRNA的表达均明显低于生理盐水组,差异均有统计学意义(均为P＜0.01),而造模后第56天时,Avastin眼液组和复方硫酸新霉素眼液组VEGF mRNA的表达均较生理盐水组高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);ELISA结果显示Avastin眼液组在碱烧伤和缝线诱导后第21天,房水VEGF蛋白含量分别为(81.0±8.7)ng·L-1、(110.0±9.0)ng·L-1,均明显低于复方硫酸新霉素眼液组和生理盐水组,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).结论 Avastin滴眼液能有效地抑制兔眼碱烧伤后和缝线后角膜新生血管的生长,但在停药后1周缝线诱导的角膜新生血管较用药前明显增加,提示不同刺激因素引起的角膜新生血管用药时间应不同.     

As2O3对角膜新生血管中VEGF表达的影响

目的 探讨角膜新生血管形成的不同时期血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在角膜内的表达,研究三氧化二砷(As2O3)对VEGF表达的影响.方法 健康日本大耳白兔48只,碱烧伤法建立兔角膜碱烧伤动物模型,随机分成实验组(1组、2组、3组)和对照组,每个小组各12只.1、2、3组分别给予0.1 mL、0.3 mL、0.5 mL As2O3结膜下注射;对照组给予生理盐水0.3 mL结膜下注射.免疫组织化学法及反转录-聚合酶链反应法检测碱烧伤后第7天、第14天、第28天各组角膜内VEGF的表达.结果 兔角膜碱烧伤后,采用免疫组织化学法检测1组、2组、3组、对照组角膜新生血管中VEGF表达:第7天时阳性细胞所占百分比分别为(1.90±0.64)%、(1.30±0.54)%、(0.60 ±0.59)%、(5.80±0.90)%;第14天时分别为(3.60 ±0.86)%、(2.60 ±0.74)%、(1.60±0.75)%、(8.50±0.83)%;第28天时分别为(1.30±0.75)%、(1.00±0.38)%、(0.30 ±0.59)%、(3.20±0.65)%.反转录-聚合酶链反应法检测1组、2组、3组、对照组角膜新生血管中VEGF表达量:第7天时分别为(168.18 ±11.50)μg、(110.57±11.89)μg、(35.58 ±8.56)μg、(249.58±13.34)μg;第14天时分别为(195.42±11.58)μg、(145.58±12.36)μg、(59.52±5.28)μg、(329.48±11.69)μg;第28天时分别为(111.58±9.56)μg、(87.25±6.06)μg、(25.26±6.54)μg、(194.85±13.24)μg 2种检测结果显示:角膜新生血管中VEGF表达量初期逐渐增加,第14天时达高峰,以后随时间延长逐渐减少,且随As2O3剂量的增加其表达量减少;实验组角膜组织中各时间点VEGF的表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 VEGF是重要的角膜新生血管形成因子,As2O3对碱烧伤后兔VEGF的表达具有抑制作用;抑制VEGF的表达是As2O3抑制角膜新生血管形成的重要机制.     

兔角膜碱烧伤后角膜和房水中VEGF的表达

目的探讨兔角膜碱烧伤后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)的表达。方法用1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤兔角膜建立角膜碱烧伤动物模型,未烧伤眼作为对照;免疫组织化学方法检测正常对照组以及角膜碱烧伤后1d、4d、7d、10d、14d VEGF蛋白在角膜中的表达情况,同时用酶联免疫吸附测定法(enzymelinkedi mmunosorbent assay,ELISA)检测房水中VEGF蛋白的表达量。结果正常对照组中,VEGF蛋白在角膜上皮细胞和内皮细胞仅有弱阳性表达,基质层表达不明显;房水中VEGF表达量为(0.168±0.038)μg·L-1。碱烧伤后,角膜各层组织中VEGF蛋白表达较对照组增强(P<0.05),其中基质层可见大量炎性细胞浸润,伴随有VEGF蛋白在该区域的集中表达。房水中VEGF的表达量于烧伤后1d为(0.336±0.072)μg·L-1,随后持续升高,至14d达(1.294±0.216)μg·L-1,各检测点均较对照组有显著差异(P<0.05)。同时房水中VEGF表达量与角膜中检测结果呈正相关(P<0.01)。结论角膜碱烧伤后早期角膜组织和房水中VEGF蛋白的表达均显著增高,提示VEGF可能在损伤后的早期修复过程中发挥着作用。     

血管内皮生长因子及其受体在大鼠碱烧伤后角膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1在大鼠角膜碱烧伤后新生血管中的表达。方法:应用1mol/LNaOH制作大鼠碱烧伤新生血管模型,随机分为3组,分别于1,4,7及14d处死大鼠取出角膜,免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测大鼠角膜中的VEGF及其受体Flk-1的表达。结果:正常大鼠角膜中VEGF及Flk-1受体弱表达或不表达。二者均在角膜上皮层,基质层、内皮层及新生血管内皮细胞表达;大鼠角膜碱烧伤后各时间点VEGFmRNA和Flk-1mRNA相对表达量具有相关性。结论:大鼠角膜碱烧伤后,VEGF及其受体Flk-1结合诱导内皮细胞分化及角膜新生血管形成。     

血管内皮生长因子与角膜碱烧伤后血管新生

目的　探讨血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管形成中的作用。方法　利用氢氧化钠烧灼大鼠角膜表面,建立大鼠角膜新生血管(CNV)模型,每日裂隙灯下观察角膜新生血管的发展,并分别于烧伤后1、4、7、14、2 1d处死大鼠,摘除角膜作病理切片,多形核白细胞(PMN)计数;免疫组化法检测VEGF的表达;图像分析系统测定该因子的蛋白表达。结果　光镜下显示正常组PMN记数为0 . 5 0 0±0 . 62 9,烧伤后1d角膜缘处的PMN开始增多,7d时增加最明显,此后逐渐减少;免疫组化显示:VEGF在CNV中阳性表达逐渐增加,于7d组表达最明显,2 1d后几乎无表达;图像分析与免疫组化结果一致。结论　碱烧伤后CNV形成中,VEGF的表达增加,并与角膜的炎性反应程度平行,PMN浸润可能是CNV形成的关键因素。     

选择性环氧化酶-2抑制剂在碱烧伤角膜新生血管中的作用

目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398滴眼液对碱烧伤诱导的兔角膜新生血管的抑制效果,探讨其作用机制。方法采用碱烧伤制作兔角膜新生血管模型,随机分为3组:实验Ⅰ组,10μmol/LNS-398滴眼;实验Ⅱ组,50μmol/L NS-398滴眼液滴眼;对照组生理盐水滴眼。伤后每日裂隙灯显微镜观察角膜新生血管生长并计算其面积,并于3d、7d、10d、14d各时段,免疫组化S-P法检测COX-2和VEGF蛋白在角膜组织中的表达,分析其相关性。结果在伤后各时间段,角膜新生血管生长面积实验Ⅰ、Ⅱ组均低于对照组(P<0.05),COX-2和VEGF的表达实验Ⅰ、Ⅱ组均明显低于对照组(P<0.05),实验Ⅰ、Ⅱ组间比较无统计学意义(P>0.05),各组内COX-2和VEGF呈显著正相关(P<0.05)。结论COX-2、VEGF参与角膜新生血管形成,选择性COX-2抑制剂NS-398可明显抑制碱烧伤引起的兔角膜新生血管的生长,其抑制效果呈剂量依赖性。     

地塞米松对碱烧伤后大鼠角膜核转录因子-κB活化的影响

目的 探讨1g·L-1地塞米松对大鼠角膜碱烧伤后核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)活化的影响.方法 24只SD大鼠右眼角膜碱烧伤后随机分为地塞米松组(造模后1g·L-1地塞米松滴眼)和生理盐水组(造模后生理盐水滴眼),每日滴眼4次,连续7d.碱烧伤后7d,裂隙灯观察角膜新生血管、炎症和角膜上皮缺损情况;制备角膜标本,采用苏木精-伊红染色法检测角膜组织病理学变化;免疫荧光染色检测角膜组织中NF-κB活化率,ELISA法测定IL-1β和VEGF蛋白表达水平.结果 碱烧伤后7d,NF-κB活化率比较,角膜基质层地塞米松组为3.81％,生理盐水组为9.58％,差异有统计学意义(P＜0.01);角膜上皮层地塞米松组为14.91％,生理盐水组为15.12％,差异无统计学意义(P=0.70).角膜新生血管面积、炎症指数、IL-1β和VEGF表达水平,地塞米松组分别为(13.15±0.93) mm2、0.27±0.08、(105.71±14.77) ng·L-1和(532.86±74.79)ng·L-1,均低于生理盐水组的(30.07±4.32) mm2、0.65±0.21、(178.17±10.96) ng·L-和(795.01±124.14) ng·L-1,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).碱烧伤后7d,两组角膜上皮细胞均完整覆盖伤区.结论 地塞米松抑制大鼠角膜碱烧伤后炎症和新生血管的作用与抑制角膜基质细胞内NF-κB的活化有关,地塞米松不影响角膜上皮的修复.碱烧伤后1周内,1g·L-1地塞米松眼液滴眼是安全、有效的治疗措施.     

洛伐他汀对大鼠角膜新生血管VEGF和TGF-β1表达的影响

目的:探讨洛伐他汀(lovastatin)对大鼠角膜新生血管(cor-neal neovascularization,CNV)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和转化生长因子-β1(trans-forming growth factor-beta1,TGF-β1)表达的影响。方法:建立碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的动物模型,治疗组和对照组分别给予10-5mol/L洛伐他汀溶液和生理盐水点眼,采用裂隙灯观察新生血管的生长情况,用免疫组织化学方法检测VEGF及TGF-β1的表达,并在基因水平下采用RT-PCR方法检测大鼠角膜VEGF mRNA的表达水平。结果:各时间点角膜新生血管的面积,治疗组均低于对照组,差异有显著性(P<0.05),免疫组化染色显示,治疗组VEGF及TGF-β1的表达量较对照组明显减少,在造模后4d角膜组织中VEGF mRNA的相对表达量,治疗组低于对照组(0.422±0.083vs0.786±0.126,P<0.05)。结论:洛伐他汀通过下调VEGF及TGF-β1的表达,抑制血管内皮细胞增殖,最终可有效抑制碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管形成。     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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